Name: a human peripheral blood mononuclear cell (pbmc) engrafted humanized xenograft model for translational immuno-oncology (i-o) research
Uploaded: 2019-08-15T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell PBMC Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology I-O Research at JoVE.com

Yardımcı tartışmalar için laboratuvar üyelerimize teşekkür ederiz. Bu çalışma kısmen Hibe Anlaşması No altında Pekin Belediye Bilim ve Teknoloji Komisyonu Biyomedikal ve Yaşam Bilimi Yenilik ve Yetiştirme Araştırma Programı tarafından desteklenmiştir. Z15110003915070 ("Yeni bir immün onkoloji anti-tümör ilacı BGB-A317 üzerinde klinik öncesi çalışma" projesi) ve aynı zamanda kısmen klinik öncesi araştırmalar için dahili şirket finansmanı tarafından desteklenmiştir.

İnsan katılımcıların katıldığı çalışmalarda gerçekleştirilen tüm prosedürler, BeiGene ve/veya ulusal araştırma komitesinin etik standartlarına ve 1964 Helsinki bildirgesi ve daha sonraki değişikliklere veya karşılaştırılabilir etik standartlara uygun du. Çalışmaya dahil edilen tüm bireysel katılımcılardan bilgilendirilmiş onam alındı. Hayvanlarla ilgili çalışmalarda yapılan tüm işlemler BeiGene'deki İç İnceleme Kurulu tarafından onaylanmıştır. Bu protokol özellikle insanl...

<ol>
	<li>Pardoll, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+blockade+of+immune+checkpoints+in+cancer+immunotherapy.">The blockade of immune checkpoints in cancer immunotherapy.</a> Nature Reviews Cancer. 12 (4), 252-264 (2012).</li><li>Postow, M. A., Callahan, M. K., Wolchok, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+Checkpoint+Blockade+in+Cancer+Therapy.">Immune Checkpoint Blockade in Cancer Therapy.</a> Journal of Clinical Oncology. 33 (17), 1974-1982 (2015).</li><li>Li, Z., Kang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+therapeutic+targets+in+metastatic+progression:+A+focus+on+breast+cancer.">Emerging therapeutic targets in metastatic progression: A focus on breast cancer.</a> Pharmacology &amp; Therapeutics. 161, 79-96 (2016).</li><li>Li, Q. X., Feuer, G., Ouyang, X., An, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+animal+modeling+for+immuno-oncology.">Experimental animal modeling for immuno-oncology.</a> Pharmacology &amp; Therapeutics. 173, 34-46 (2017).</li><li>Fisher, T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+of+4-1BB+by+monoclonal+antibody+PF-05082566+enhances+T-cell+function+and+promotes+anti-tumor+activity.">Targeting of 4-1BB by monoclonal antibody PF-05082566 enhances T-cell function and promotes anti-tumor activity.</a> Cancer Immunology, Immunotherapy. 61 (10), 1721-1733 (2012).</li><li>McCormack, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bi-specific+TCR-anti+CD3+redirected+T-cell+targeting+of+NY-ESO-1-+and+LAGE-1-positive+tumors.">Bi-specific TCR-anti CD3 redirected T-cell targeting of NY-ESO-1- and LAGE-1-positive tumors.</a> Cancer Immunology, Immunotherapy. 62 (4), 773-785 (2013).</li><li>Rongvaux, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+hemato-lymphoid+system+mice:+current+use+and+future+potential+for+medicine.">Human hemato-lymphoid system mice: current use and future potential for medicine.</a> Annual Review of Immunology. 31, 635-674 (2013).</li><li>Matsumura, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+CD5++B+cells+develop+predominantly+in+the+spleen+of+NOD/SCID/gammac(null)+(NOG)+mice+transplanted+either+with+human+umbilical+cord+blood,+bone+marrow,+or+mobilized+peripheral+blood+CD34++cells.">Functional CD5+ B cells develop predominantly in the spleen of NOD/SCID/gammac(null) (NOG) mice transplanted either with human umbilical cord blood, bone marrow, or mobilized peripheral blood CD34+ cells.</a> Experimental Hematology. 31 (9), 789-797 (2003).</li><li>Zhang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+binding+of+an+anti-PD-1+antibody+to+FcgammaRIota+has+a+profound+impact+on+its+biological+functions.">The binding of an anti-PD-1 antibody to FcgammaRIota has a profound impact on its biological functions.</a> Cancer Immunology, Immunotherapy. 67 (7), 1079-1090 (2018).</li><li>Gamelli, R. L., Ershler, W. B., Hacker, M. P., Foster, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+disulfiram+on+cyclophosphamide-mediated+myeloid+toxicity.">The effect of disulfiram on cyclophosphamide-mediated myeloid toxicity.</a> Cancer Chemotherapy and Pharmacology. 16 (2), 153-155 (1986).</li><li>Dunay, I. R., Fuchs, A., Sibley, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+monocytes+but+not+neutrophils+are+necessary+to+control+infection+with+Toxoplasma+gondii+in+mice.">Inflammatory monocytes but not neutrophils are necessary to control infection with Toxoplasma gondii in mice.</a> Infection and Immunity. 78 (4), 1564-1570 (2010).</li><li>Ghasemlou, N., Chiu, I. M., Julien, J. P., Woolf, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD11b+Ly6G-+myeloid+cells+mediate+mechanical+inflammatory+pain+hypersensitivity.">CD11b+Ly6G- myeloid cells mediate mechanical inflammatory pain hypersensitivity.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (49), 6808-6817 (2015).</li><li>Takao, K., Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+responses+in+mouse+models+greatly+mimic+human+inflammatory+diseases.">Genomic responses in mouse models greatly mimic human inflammatory diseases.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (4), 1167-1172 (2015).</li><li>Payne, K. J., Crooks, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune-cell+lineage+commitment:+translation+from+mice+to+humans.">Immune-cell lineage commitment: translation from mice to humans.</a> Immunity. 26 (6), 674-677 (2007).</li><li>Mestas, J., Hughes, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+mice+and+not+men:+differences+between+mouse+and+human+immunology.">Of mice and not men: differences between mouse and human immunology.</a> Journal of Immunology. 172 (5), 2731-2738 (2004).</li><li>von Herrath, M. G., Nepom, G. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lost+in+translation:+barriers+to+implementing+clinical+immunotherapeutics+for+autoimmunity.">Lost in translation: barriers to implementing clinical immunotherapeutics for autoimmunity.</a> Journal of Experimental Medicine. 202 (9), 1159-1162 (2005).</li><li>Mahdi, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+glow+of+HLA+typing+in+organ+transplantation.">A glow of HLA typing in organ transplantation.</a> Clinical and Translational Medicine. 2 (1), 6 (2013).</li><li>Shultz, L. D., Brehm, M. A., Garcia-Martinez, J. V., Greiner, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+for+immune+system+investigation:+progress,+promise+and+challenges.">Humanized mice for immune system investigation: progress, promise and challenges.</a> Nature Reviews Immunolog. 12 (11), 786-798 (2012).</li><li>Brehm, M. A., Shultz, L. D., Luban, J., Greiner, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overcoming+current+limitations+in+humanized+mouse+research.">Overcoming current limitations in humanized mouse research.</a> Journal of Infectious Diseases. 208, 125-130 (2013).</li><li>Walsh, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+Mouse+Models+of+Clinical+Disease.">Humanized Mouse Models of Clinical Disease.</a> Annual Review of Pathology. 12, 187-215 (2017).</li><li>Shultz, L. D., Ishikawa, F., Greiner, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+in+translational+biomedical+research.">Humanized mice in translational biomedical research.</a> Nature Reviews Immunolog. 7 (2), 118-130 (2007).</li><li>Brehm, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD-scid+IL2rgnull+(NSG)+mice+deficient+in+murine+MHC+Class+I+and+Class+II+expression+support+engraftment+of+functional+human+T+cells+in+the+absence+of+acute+xenogeneic+GVHD+following+injection+of+PBMC.">NOD-scid IL2rgnull (NSG) mice deficient in murine MHC Class I and Class II expression support engraftment of functional human T cells in the absence of acute xenogeneic GVHD following injection of PBMC.</a> The Journal of Immunology. 200, 57 (2018).</li><li>King, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+Hu-PBL+model+for+the+study+of+human+islet+alloreactivity+based+on+NOD-scid+mice+bearing+a+targeted+mutation+in+the+IL-2+receptor+gamma+chain+gene.">A new Hu-PBL model for the study of human islet alloreactivity based on NOD-scid mice bearing a targeted mutation in the IL-2 receptor gamma chain gene.</a> Clinical Immunology. 126 (3), 303-314 (2008).</li><li>Ito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD/SCID/gamma(c)(null)+mouse:+an+excellent+recipient+mouse+model+for+engraftment+of+human+cells.">NOD/SCID/gamma(c)(null) mouse: an excellent recipient mouse model for engraftment of human cells.</a> Blood. 100 (9), 3175-3182 (2002).</li><li>Shultz, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+lymphoid+and+myeloid+cell+development+in+NOD/LtSz-scid+IL2R+gamma+null+mice+engrafted+with+mobilized+human+hemopoietic+stem+cells.">Human lymphoid and myeloid cell development in NOD/LtSz-scid IL2R gamma null mice engrafted with mobilized human hemopoietic stem cells.</a> Journal of Immunology. 174 (10), 6477-6489 (2005).</li><li>Sasaki, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+preclinical+humanized+mouse+model+to+evaluate+acute+toxicity+of+an+influenza+vaccine.">Development of a preclinical humanized mouse model to evaluate acute toxicity of an influenza vaccine.</a> Oncotarget. 9 (40), 25751-25763 (2018).</li><li>Tobin, L. M., Healy, M. E., English, K., Mahon, B. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+mesenchymal+stem+cells+suppress+donor+CD4(+)+T+cell+proliferation+and+reduce+pathology+in+a+humanized+mouse+model+of+acute+graft-versus-host+disease.">Human mesenchymal stem cells suppress donor CD4(+) T cell proliferation and reduce pathology in a humanized mouse model of acute graft-versus-host disease.</a> Clinical and Experimental Immunology. 172 (2), 333-348 (2013).</li></ol>

Kanser gelişimi ve ilerlemesi hakkındaki bilgimiz son yıllarda hem tümör hücrelerinin hem de ilişkili stromanın kapsamlı bir şekilde anlaşılmasına odaklanarak önemli ölçüde ilerlemiştir. Konak bağışıklık mekanizmaları harnessing kanser hücrelerine karşı daha büyük bir etkiye neden olabilir, umut verici bir tedavi stratejisi temsil eden. Singenik ve GEM modelleri gibi sağlam fare bağışıklık sistemlerine sahip murine modelleri, kontrol noktası aracılı bağışıklığı incelemek için...

İmmüno-onkoloji (I-O) hızla genişleyen bir kanser tedavisi alanıdır. Araştırmacılar son zamanlarda tümörlere saldırmak için bağışıklık sisteminin fonksiyonlarını modüle terapötik potansiyelini takdir etmeye başladı. Bağışıklık kontrol noktası blokajları melanom, böbrek hücreli karsinom, baş ve boyun, akciğer, mesane ve prostat kanserleri 1 dahil olmak üzere kanser türleri, çeşitli teşvik edici faaliyetleri göstermiştir1,2. Doğrudan kanser hücrelerini öldürmek hedefli tedavilerin aksine, I-O tedaviler tümörler3saldırmak için vücudun bağışıklık sistemini güçlendirmek .
Bugüne kadar, çok sayıda ilgili I-O hayvan modelleri kurulmuştur. Bunlar şunlardır: 1) singenekik farelerde fare tümör hücre hatları veya tümör homogreft; 2) genetik olarak tasarlanmış fare (GEM) veya kanserojen indüksiyon elde edilen spontan tümörler; Fonksiyonel bir murine bağışıklık sisteminde insan ilaç hedef knock-in ile 3) şeymerik GEMs(ler); ve 4) insan kanser hücreleri veya hasta kaynaklı ksenogreftler (PDXs) ile nakledilen insan bağışıklık yeniden oluşturulan fareler. Bu modellerin her biri açık avantajları yanı sıra sınırlamalar, hangi açıklanan ve kapsamlı başka bir yerde gözden geçirilmiştir4.
İmmün eksik farelerde insan bağışıklığının yeniden yapılandırılması, çevirici I-O araştırmaları için klinik olarak uygun bir yaklaşım olarak giderek daha fazla takdir edilmektedir. Bu genellikle ya yoluyla elde edilir 1) yetişkin bağışıklık hücrelerinin engraftment (örneğin, periferik kan mononükleer hücreler (PMBC))5,6, veya 2) hematopoetik kök hücrelerin ingraftment (HSC) gelen, örneğin, göbek kordon kanı veya fetal karaciğer7,8. Bu insanlaşmış fareler insan tümörlerinin büyümesini destekleyebilir, böylece hem insan bağışıklığı hem de insan kanserleri bağlamında I-O terapilerinin değerlendirilmesini sağlar. Avantajlarına rağmen, I-O araştırmainsanlaşmış farelerin uygulamaları genellikle uzun model geliştirme süresi ve önemli ölçüde yüksek maliyet gibi çeşitli endişeler tarafından engellendi.
Burada, yaygın çeviri I-O çalışmaları için uygulanabilir bir insan PBMC tabanlı modeli açıklar. Bu model, etkinlik çalışmalarında yüksek tekrarlanabilirlik ile nispeten zaman ve maliyet-etkindir. Şu anda preklinik ve klinik gelişim altında olan birçok I-O terapötiklerinin değerlendirilmesi için şirket içinde kullanılmaktadır. BGB-A317 (Tislelizumab), bir araştırma insanlaştırılmış anti-PD-1 antikor9, model gelişimi tartışmak için örnek olarak kullanılır, karakterizasyon, ve anti-tümör etkinliği analizleri için olası uygulamalar.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:955px;" width="955">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">PBMC separation /cell culture</td>
			<td style="width:211px;"></td>
			<td style="width:193px;"></td>
			<td style="width:143px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Histopaque-1077</td>
			<td style="width:211px;">Sigma</td>
			<td style="width:193px;">10771</td>
			<td style="width:143px;">Cell isolation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">DMEM</td>
			<td style="width:211px;">Corning</td>
			<td style="width:193px;">10-013-CVR</td>
			<td style="width:143px;">Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">DPBS</td>
			<td style="width:211px;">Corning</td>
			<td style="width:193px;">21-031-CVR</td>
			<td style="width:143px;">Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">FBS</td>
			<td style="width:211px;">Corning</td>
			<td style="width:193px;">35-076-CV</td>
			<td style="width:143px;">Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Penicillin-Streptomycin, Liquid</td>
			<td style="width:211px;">Gibco</td>
			<td style="width:193px;">15140-163</td>
			<td style="width:143px;">Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red</td>
			<td style="width:211px;">Gibco</td>
			<td style="width:193px;">25200-114</td>
			<td style="width:143px;">Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">Matrigel</td>
			<td style="width:211px;">Corning</td>
			<td style="width:193px;">356237</td>
			<td style="width:143px;">CDX inoculation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">FACS analysis</td>
			<td style="width:211px;"></td>
			<td style="width:193px;"></td>
			<td style="width:143px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Deoxyribonuclease I from bovine pancreas</td>
			<td style="width:211px;">Sigma</td>
			<td style="width:193px;">DN25</td>
			<td style="width:143px;">Sample preparation</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Collagenase Type I</td>
			<td style="width:211px;">Sigma</td>
			<td style="width:193px;">C0130</td>
			<td style="width:143px;">Sample preparation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-mouse/human CD11b (M1/70) antibody</td>
			<td style="width:211px;">BioLegend</td>
			<td style="width:193px;">101206</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-mouse Ly-6C (HK1.4) antibody</td>
			<td style="width:211px;">BioLegend</td>
			<td style="width:193px;">128008</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-mouse Ly-6G (1A8) antibody</td>
			<td style="width:211px;">BioLegend</td>
			<td style="width:193px;">127614</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human CD8 (OKT8) antibody</td>
			<td style="width:211px;">Sungene Biotech</td>
			<td style="width:193px;">H10082-11H</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human CD279 (MIH4) antibody</td>
			<td style="width:211px;">eBioscience</td>
			<td style="width:193px;">12-9969-42</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human CD3 (HIT3a) antibody</td>
			<td style="width:211px;">4A Biotech</td>
			<td style="width:193px;">--</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">Guava easyCyte 8HT Benchtop Flow Cytometer</td>
			<td style="width:211px;">Millipore</td>
			<td style="width:193px;">0500-4008</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">Tumor/PDX implantation /dosing / measurement</td>
			<td style="width:211px;"></td>
			<td style="width:193px;"></td>
			<td style="width:143px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Cyclophosphamide</td>
			<td style="width:211px;">J&#38;K</td>
			<td style="width:193px;">Cat#419656, CAS#6055-19-2</td>
			<td style="width:143px;">In vivo efficacy</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Disulfiram</td>
			<td style="width:211px;">J&#38;K</td>
			<td style="width:193px;">Cat#591123, CAS#97-77-8</td>
			<td style="width:143px;">In vivo efficacy</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Syringe</td>
			<td style="width:211px;">BD</td>
			<td style="width:193px;">300841</td>
			<td style="width:143px;">CDX inoculation</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Hypodermic needles (14G)</td>
			<td style="width:211px;">Shanghai SA Mediciall &#38; Plastic Instruments Co., Ltd.</td>
			<td style="width:193px;">0.7*32 TW SB</td>
			<td style="width:143px;">PDX inoculation</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Vernier Caliper (MarCal)</td>
			<td style="width:211px;">Mahr</td>
			<td style="width:193px;">16ER</td>
			<td style="width:143px;">Tumor measurement</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">IVC individual ventilated cages</td>
			<td style="width:211px;">Lingyunboji Ltd.</td>
			<td style="width:193px;">IVC-128</td>
			<td style="width:143px;">Animal facility</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">IHC</td>
			<td style="width:211px;"></td>
			<td style="width:193px;"></td>
			<td style="width:143px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Leica ASP200 Vacuum tissue processor</td>
			<td style="width:211px;">Leica</td>
			<td style="width:193px;">ASP200</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Leica RM2235 Manual Rotary Microtome for Routine Sectioning</td>
			<td style="width:211px;">Leica</td>
			<td style="width:193px;">RM2235</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Leica EG1150 H Heated Paraffin Embedding Module</td>
			<td style="width:211px;">Leica</td>
			<td style="width:193px;">EG1150 H</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Ariol-Clinical IHC and FISH Scanner</td>
			<td style="width:211px;">Leica</td>
			<td style="width:193px;">Ariol</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human CD8 (EP334) antibody</td>
			<td style="width:211px;">ZSGB-Bio</td>
			<td style="width:193px;">ZA-0508</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human PD1 [NAT105] antibody</td>
			<td style="width:211px;">Abcam</td>
			<td style="width:193px;">ab52587</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human PD-L1 (E1L3N) antibody</td>
			<td style="width:211px;">Cell Signaling Technology</td>
			<td style="width:193px;">13684S</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">Polink-2 plus Polymer HRP Detection System</td>
			<td style="width:211px;">ZSGB-Bio</td>
			<td style="width:193px;">PV-9001/9002</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a human peripheral blood mononuclear cell (pbmc) engrafted humanized xenograft model for translational immuno-oncology (i-o) research

Son yıllarda immüno-onkoloji (I-O) tedavisinin keşfi ve geliştirilmesi kanser tedavisinde bir kilometre taşını temsil ediyor. Ancak, tedavi zorlukları devam etmektedir. Sağlam ve hastalıkla ilgili hayvan modelleri, bir dizi ek bağışıklık kontrol noktasını ele almak için klinik öncesi araştırma ve geliştirmenin sürdürülmesi için hayati kaynaklardır. Burada insan periferik kan mononükleer hücre (PBMC) - insanlaşmış ksenogreft modeli tabanlı açıklar. BGB-A317 (Tislelizumab), geç evre klinik gelişimde insanlaşmış bir anti-PD-1 antikor, platform kurulumu, model karakterizasyonu ve ilaç etkinliği değerlendirmelerini tartışmak için örnek olarak kullanılır. Bu insanlaşmış fareler test edilen çoğu insan tümörü büyümesini destekleyerek, i-O terapilerinin hem insan bağışıklığı hem de insan kanserleri bağlamında değerlendirilmesini sağlar. Kurulduktan sonra, bizim model nispeten zaman ve maliyet-etkin, ve genellikle son derece tekrarlanabilir sonuçlar verim. Bu makalede özetlenen protokolün, insan PBMC ve I-O araştırmaları için tümörlerle yeniden oluşturulmuş fare modellerinin oluşturulmasıiçin genel bir kılavuz görevi görebildiğini önermekteyiz.

Burada sunulan prosedürlerin ardından PBMC tabanlı insanlaştırılmış ksenogreft modeli başarıyla oluşturulmuştur. Kısaca, NOD/SCID farelerde CP miyeloablasyon etkileri, CP ve DS tedavisi sonrası nötrofil ve monosit popülasyonlarınınakış sitometri analizi ile saptandı (Şekil 1). 100 mg/kg CP artı 125 mg/kg DS optimal doz olarak belirlendi ve daha sonraki çalışmalarda kullanılan rejim, fareleriçin ciddi toksisiteye neden olmadan nötrofillerin ve monositlerin maksimu...

Watch this Scientific Journal Video about A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell PBMC Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology I-O Research at JoVE.com

A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell PBMC Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology I-O Research

Çevirisel İmmüno-onkoloji (I-O) Araştırma için İnsani Periferik Kan Mononükleer Hücre (PBMC) Engrafted Humanized Xenograft Modeli

Biz bir insan periferik kan mononükleer hücre (PBMC) - çeviriimmün-onkoloji araştırma için insanlaşmış ksenogreft fare modeli dayalı açıklar. Bu protokol, I-O terapi değerlendirmesi için benzer modellerin oluşturulması ve karakterizasyonu için genel bir kılavuz görevi görebılabilir.

The discovery and development of immuno-oncology (I-O) therapy in recent years represents a milestone in the treatment of cancer. However, treatment ...

Protokolümüz, immüno-onkoloji araştırmaları için insan PBMC ve tümörlerle yeniden oluşturulmuş fare modellerinin oluşturulmasında genel bir kılavuz görevi görebilir. Bu prosedürler, insan tümör taşıyan farelerde insan bağışıklığını kısmen deri altı ve insan PBMC'sinin kanser ksenogreftleri ile karıştırma yoluyla kısmen yeniden oluşturmada uygun maliyetli ve son derece tekrarlanabilir bir yaklaşım sağlar. Benimle prosedürleri gösteren Xinxin Cui, Yanjuan Zhang, Huichen Bai ve Xiaolong Yang, Farmakoloji Bölümü bize gönderdi.Miyeloid hücre tükenmesi için intraperatal siklofosfamid kilogram başına 100mg teslim ve sözlü disulfiram kilogram başına 125mg teslim altı ila sekiz haftalık NOD / SCID dişi fareler iki gün boyunca günde bir kez. Siklofosfamid ve disülfiramın ikinci dozundan 24 saat sonra, altı taze izole edilmiş insan PBMC'sinin beş katı 10'u ve altı insan tümör hücre hattı hücresinin 2,5 katı ve hayvan başına 200 mikrolitre PBS artı %50 metrogel ve tüm hacmi subkutan olarak her deney hayvanının sağ kanadına enjekte edin. Dört ila altı hafta boyunca haftada iki kez primer tümör hacmini ölçün ve kaydedin.Tümörler 200 ila 500 milimetre küp ortalama hacmine ulaştığında, her hayvandan tüm tümör hasat için optomik makas kullanın. PBMC donörleri tümör hücre hatları ve nispeten yüksek PD-1, PD-L1 ve CD8 ekspresyonu ile ılımlı tümör büyümesi ile sonuçlanan hasta türetilmiş ksenogreftler sonraki analizler için kullanılmalıdır. Hasat edilen tümör dokularının immünohistokimyasal analizi için, dehidratasyon dan 24 ila 72 saat önce örnekleri ve formalini düzeltin ve dokuların parafine gömülmesi.Polilizin kaplı slaytlar üzerinde gömülü dokuların üç mikrometre bölümlerini edinin ve üç yedi dakikalık ksilen daldırma ile örnekleri deparafinize. Üçüncü tedaviden sonra, üç dakikalık dereceli alkol daldırma ile bölümleri nemlendirin. Daha sonra deiyonize suda slaytı üç kez durulayın ve fazla sıvıyı slaytlardan çıkarın.Antijen alma gerçekleştirmek için, bir kap ta slaytlar yerleştirin ve 10 milimolar sodiyoitrat tampon ile slaytlar kapağı. Slaytları, kabı mikrodalgafırında 95 derecelik su banyosuna yerleştirmeden önce üç dakika ısıtın. Oda sıcaklığına kadar soğuttuktan sonra, deiyonize suda üç kez slaytları durulayın ve slaytlardan fazla sıvı aspire edin.Endojen peroksidaz aktivitesini engellemek için 10 dakika boyunca %0.3 hidrojen peroksit ile inkübatve ardından %3 BSA ve PBS ile bir saat boyunca bloke edilir. Hidrojen peroksit kuluçka sonunda, bir gecede dört derece santigrat uygun birincil antikorlar ile slaytlar etiket. Ertesi sabah, kahverengi boyama uygun bir düzeyde ışık mikroskopisi tarafından gözlenene kadar slaytlar üzerine substrat dropwise uygulamadan önce oda sıcaklığında bir saat boyunca horseradish peroksidaz konjuge ikincil antikor ile slaytlar tedavi.Sonra, hematoksilin ile örnekleri leke. Bir dakika sonra, distile su ile reaksiyonu durdurmak sonra% 0.5 hidroklorik asit alkol beş saniye daldırma ve% 0.5 amonya su beş saniye. Sonra üç artan üç dakika etanol ve üç, beş dakika ksilen daldırma ile örnekleri dehydrate.İlgi çekici bir ilacın antitümör aktivitesini değerlendirmek için, planlanan deneysel protokole göre hücre aşısı gününde tedaviye başlamak ve dört ila altı hafta boyunca haftada iki kez primer tümör hacmini izlemek. PharmaCODE dinamik analiz için tümör bağışıklık hücreleri sızmış, küçük parçalar halinde tümör dokuları kıyma ve kollajenaz tip bir ve DNase I ve RPMI-1640 orta artı 5% FBS ile parçaları sindirmek 37 santigrat derece 30 dakika. Sindirim sonunda, tek bir hücre süspansiyon elde etmek ve santrifüj ile hücreleri toplamak için 40 mikrometre hücre süzgeci ile sindirilmiş doku filtre.Buz gibi faks tampon konsantrasyonunun mililitre başına yedinci hücrelerin bir kez 10'u peleti yeniden askıya alın ve eşit miktardaki hücreyi 96 kuyulu yuvarlak alt plakadaki uygun sayıdaki kuyuya aktarın. Hücreleri santrifüj ile toplayın ve spesifik olmayan bağlanmayı engellemek için 30 dakika boyunca insan IGG mililitre başına 20 mikrogram pelet leri yeniden askıya alın. Daha sonra hücreleri standart protokollere göre akış sitometrisi ile analizetmeden önce 4 santigrat derecede 30 dakika boyunca uygun primer antikorlarla lekeleyin.Gösterildiği gibi, kilogram siklofosfamid başına 100 miligram ve kilogram disülfüram miyeloablasyon başına 125 miligram nötrofiller ve monositlerin tedavi sonrası dört gün önemli bir tükenmesi ile sonuçlanır. İnsan PBMC ve tümör naklinden sonra, immünohistokimya ile tümör mikroortamında insan immün hücre infiltratlarının varlığı doğrulanabilir. PBMC donörlerinden oluşan bir panelin in vivo taraması, tümör mikroortamına kabul edilebilir bir tümör büyüme hızında nispeten yüksek immün hücre infiltrasyonunun varlığını doğrulamak için yapılabilir.Farklı kanser türlerinin hasta kaynaklı ksenogreftlerinde insan kanser hücresi hatları da tümör büyüme hızı ve immün hücre infiltrasyonu değerlendirmek için değerlendirilebilir. Bu temsili deneyde PBMC ve aşılı insanlaşmış insanlaştırılmış anti-PD1 antikorlu farelerin tedavisi önemli antitümör aktiviteleri ile sonuçlandı. Disulfiram siklofosfamidin ürotoksisitesini azaltır, kombinasyon farelerde daha uzun süreli nötropeni etkileri uygulayabilir.Siklofosfamid ve disülfiramın tam doz rejiminin önceden belirlenmesi gerekebilir. Daha kolay insan bağışıklığı reconstitution ve azalmış ksenojenik GvHD etkisi için daha immünofiksli farelerin yeni suşları tespit edilmiştir ve belgelenmiş protokol ile daha fazla araştırma bekliyor. Modelimiz T-hücre çekici kanser immün tedavileri değerlendirmek için yararlıdır, özellikle kısa zaman çizelgeleri üzerinde çalışırken veya daha karmaşık bir multilineage bağışıklık modeli geçmeden önce ajanları seçmek için.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell (PBMC) Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology (I-O) Research

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

Periferik Radyasyonla Bağlı Yorgunluk A Fare Modeli

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

Tumor Engraftment in a Xenograft Mouse Model of Human Mantle Cell Lymphoma

Tümör Engraftment insan Mantle hücreli lenfoma, Xenograft fare modeli

B lymphocytes are key players in immune cell circulation and they mainly home to and reside in lymphoid organs. While normal B cells only proliferate when ...

Development of a Human Preclinical Model of Osteoclastogenesis from Peripheral Blood Monocytes Co-cultured with Breast Cancer Cell Lines

Osteoclastogenesis periferik kan monosit kültürlü meme kanseri hücre hatları ile birlikte gelen bir insan preklinik modelinin geliştirilmesi

The crosstalk between tumor cells and bone cells in the bone microenvironment is crucial to understanding the mechanism of bone metastasis formation. We ...

Automated Multiplex Immunofluorescence Panel for Immuno-oncology Studies on Formalin-fixed Carcinoma Tissue Specimens

IMMUNO-Onkoloji araştırmalar Formalin sabit Karsinomu doku örnekleri Multiplex ayirt Panel otomatik

Continued developments in immuno-oncology require an increased understanding of the mechanisms of cancer immunology. The immunoprofiling analysis of ...

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis

Insan Üromotorial Hücre Karsinomu ve kolorektal kanser tümörü büyüme ve spontan Metasrik için hasta türevi Ortootopik xenograft modelleri

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and ...

Patient-derived Heterogeneous Xenograft Model of Pancreatic Cancer Using Zebrafish Larvae as Hosts for Comparative Drug Assessment

Karşılaştırmalı Ilaç değerlendirmesi için ev sahipleri olarak zebrafish larvaları kullanarak pankreas kanserinin hasta türevi heterojen xenograft modeli

Patient-derived tumor xenograft (PDX) and cell-derived tumor xenograft (CDX) are important techniques for preclinical assessment, medication guidance and ...

A Melanoma Patient-Derived Xenograft Model

Bir melanom hasta-türetilen xenograft model

Accumulating evidence suggests that molecular and biological properties differ in melanoma cells grown in traditional two-dimensional tissue culture ...

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

Mide kanseri hasta-türetilen xenograft modelleri ve primer hücre hatları kurulması

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Isolating Human Peripheral Blood Mononuclear Cells and CD4+ T cells from S&#233;zary Syndrome Patients for Transcriptomic Profiling

Isolating Human Peripheral Blood Mononuclear Cells and CD4+ T cells from SÃƒÆ’Ã‚Â©zary Syndrome Patients for Transcriptomic Profiling

Transkriptomik Profilleme için İnsan Periferik Kan Mononükleer Hücrelerinin ve CD4 + T hücrelerinin Sézary Sendromu Hastalarından İzole Edilmesi

Cutaneous T-cell lymphomas (CTCL) are derived from the transformation and uncontrolled proliferation of mature skin-homing T cells, and mycosis fungoides ...

Circulating Tumor Cell Lines: an Innovative Tool for Fundamental and Translational Research

Dolaşımdaki Tümör Hücre Hatları: Temel ve Çevirisel Araştırmalar için Yenilikçi Bir Araç

Metastasis is a leading cause of cancer death. Despite improvements in treatment strategies, metastatic cancer has a poor prognosis. We thus face an ...