Name: assessment of vascular tone responsiveness using isolated mesenteric arteries with a focus on modulation by perivascular adipose tissues
Uploaded: 2019-06-03T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessment of Vascular Tone Responsiveness using Isolated Mesenteric Arteries with a Focus on Modulation by Perivascular Adipose Tissues at JoVE.com

Dette arbejde blev ydet økonomisk støtte gennem tilskud fra Rådet for forskning i Hongkong [17124718 og 17121714], Hongkongs fond for sundhed og medicinsk forskning [13142651 og 13142641], den kollaborative forskningsfond i Hongkong [C7055-14G] og den nationale grundlæggende Forskningsprogram i Kina [973 program 2015CB553603].

Alle dyr, der blev anvendt til følgende undersøgelse, blev leveret af laboratoriet for det medicinske fakultet, universitetet i Hong Kong. Der blev indhentet etisk godkendelse fra afdelings udvalget for brug af forsøgsdyr til undervisning og forskning (CULATR, nr.: 4085-16).
1. præparater
<ol><li>Forberedelse af lægemidler
	<ol>
<li>Opbevar lægemidler korrekt som angivet i sikkerheds data bladet (MSDS) umiddelbart efter modtagelsen. Stofferne opløses i pulverform i op...

<ol>
	<li>Furchgott, R. F., Zawadzki, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+obligatory+role+of+endothelial+cells+in+the+relaxation+of+arterial+smooth+muscle+by+acetylcholine.">The obligatory role of endothelial cells in the relaxation of arterial smooth muscle by acetylcholine.</a> Nature. 288 (5789), 373-376 (1980).</li><li>Furchgott, R. F., Vanhoutte, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelium-derived+relaxing+and+contracting+factors.">Endothelium-derived relaxing and contracting factors.</a> The FASEB Journal. 3 (9), 2007-2018 (1989).</li><li>Feletou, M., Kohler, R., Vanhoutte, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelium-derived+vasoactive+factors+and+hypertension:+possible+roles+in+pathogenesis+and+as+treatment+targets.">Endothelium-derived vasoactive factors and hypertension: possible roles in pathogenesis and as treatment targets.</a> Current Hypertension Reports. 12 (4), 267-275 (2010).</li><li>Vanhoutte, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+dysfunction:+the+first+step+toward+coronary+arteriosclerosis.">Endothelial dysfunction: the first step toward coronary arteriosclerosis.</a> Circulation Journal. 73 (4), 595-601 (2009).</li><li>Feletou, M., Huang, Y., Vanhoutte, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelium-mediated+control+of+vascular+tone:+COX-1+and+COX-2+products.">Endothelium-mediated control of vascular tone: COX-1 and COX-2 products.</a> British Journal of Pharmacology. 164 (3), 894-912 (2011).</li><li>Harrison, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+and+molecular+mechanisms+of+endothelial+cell+dysfunction.">Cellular and molecular mechanisms of endothelial cell dysfunction.</a> Journal of Clinical Investigation. 100 (9), 2153 (1997).</li><li>Vanhoutte, P. M., Shimokawa, H., Tang, E. H., Feletou, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+dysfunction+and+vascular+disease.">Endothelial dysfunction and vascular disease.</a> Acta physiologica. 196 (2), 193-222 (2009).</li><li>Kl&#246;&#223;, S., Bouloumi&#233;, A., M&#252;lsch, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging+and+chronic+hypertension+decrease+expression+of+rat+aortic+soluble+guanylyl+cyclase.">Aging and chronic hypertension decrease expression of rat aortic soluble guanylyl cyclase.</a> Hypertension. 35 (1), 43-47 (2000).</li><li>Csiszar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging-induced+phenotypic+changes+and+oxidative+stress+impair+coronary+arteriolar+function.">Aging-induced phenotypic changes and oxidative stress impair coronary arteriolar function.</a> Circulation Research. 90 (11), 1159-1166 (2002).</li><li>Guo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+SIRT1+prevents+age-induced+impairment+of+vasodilator+responses+by+enhancing+the+expression+and+activity+of+soluble+guanylyl+cyclase+in+smooth+muscle+cells.">Endothelial SIRT1 prevents age-induced impairment of vasodilator responses by enhancing the expression and activity of soluble guanylyl cyclase in smooth muscle cells.</a> Cardiovascular Research. , (2018).</li><li>Auch-Schwelk, W., Katusic, Z. S., Vanhoutte, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitric+oxide+inactivates+endothelium-derived+contracting+factor+in+the+rat+aorta.">Nitric oxide inactivates endothelium-derived contracting factor in the rat aorta.</a> Hypertension. 19 (5), 442-445 (1992).</li><li>Tang, E. H., Feletou, M., Huang, Y., Man, R. Y., Vanhoutte, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acetylcholine+and+sodium+nitroprusside+cause+long-term+inhibition+of+EDCF-mediated+contractions.">Acetylcholine and sodium nitroprusside cause long-term inhibition of EDCF-mediated contractions.</a> American Journal of Physiology - Heart and Circulation Physiology. 289 (6), H2434-H2440 (2005).</li><li>Ghiadoni, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+function+and+common+carotid+artery+wall+thickening+in+patients+with+essential+hypertension.">Endothelial function and common carotid artery wall thickening in patients with essential hypertension.</a> Hypertension. 32 (1), 25-32 (1998).</li><li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+Impairment+of+Vascular+Structure+and+Functions.">Age-related Impairment of Vascular Structure and Functions.</a> Aging and Disease. 8 (5), 590-610 (2017).</li><li>Tabit, C. E., Chung, W. B., Hamburg, N. M., Vita, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+dysfunction+in+diabetes+mellitus:+Molecular+mechanisms+and+clinical+implications.">Endothelial dysfunction in diabetes mellitus: Molecular mechanisms and clinical implications.</a> Reviews in Endocrine &amp; Metabolic Disorders. 11 (1), 61-74 (2010).</li><li>Tanaka, K., Sata, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Roles+of+perivascular+adipose+tissue+in+the+pathogenesis+of+atherosclerosis.">Roles of perivascular adipose tissue in the pathogenesis of atherosclerosis.</a> Frontiers in Physiology. 9, 3 (2018).</li><li>Brown, N. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perivascular+adipose+tissue+in+vascular+function+and+disease:+a+review+of+current+research+and+animal+models.">Perivascular adipose tissue in vascular function and disease: a review of current research and animal models.</a> Arteriosclerosis Thrombosis and Vascular Biology. 34 (8), 1621-1630 (2014).</li><li>Lohn, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Periadventitial+fat+releases+a+vascular+relaxing+factor.">Periadventitial fat releases a vascular relaxing factor.</a> The FASEB Journal. 16 (9), 1057-1063 (2002).</li><li>G&#225;lvez-Prieto, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+reduction+in+the+amount+and+anti-contractile+effect+of+periadventitial+mesenteric+adipose+tissue+precedes+hypertension+development+in+spontaneously+hypertensive+rats.">A reduction in the amount and anti-contractile effect of periadventitial mesenteric adipose tissue precedes hypertension development in spontaneously hypertensive rats.</a> Hypertension research. 31 (7), 1415 (2008).</li><li>Gao, Y. J., Lu, C., Su, L. Y., Sharma, A., Lee, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+vascular+function+by+perivascular+adipose+tissue:+the+role+of+endothelium+and+hydrogen+peroxide.">Modulation of vascular function by perivascular adipose tissue: the role of endothelium and hydrogen peroxide.</a> British Journal of Pharmacology. 151 (3), 323-331 (2007).</li><li>Gao, Y. -. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perivascular+adipose+tissue+promotes+vasoconstriction:+the+role+of+superoxide+anion.">Perivascular adipose tissue promotes vasoconstriction: the role of superoxide anion.</a> Cardiovascular Research. 71 (2), 363-373 (2006).</li><li>Szasz, T., Webb, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perivascular+adipose+tissue:+more+than+just+structural+support.">Perivascular adipose tissue: more than just structural support.</a> Clinical Science (London). 122 (1), 1-12 (2012).</li><li>Ramirez, J. G., O'Malley, E. J., Ho, W. S. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pro-contractile+effects+of+perivascular+fat+in+health+and+disease.">Pro-contractile effects of perivascular fat in health and disease.</a> Brish Journal of Pharmacology. 174 (20), 3482-3495 (2017).</li><li>Hajer, G. R., van Haeften, T. W., Visseren, F. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose+tissue+dysfunction+in+obesity,+diabetes,+and+vascular+diseases.">Adipose tissue dysfunction in obesity, diabetes, and vascular diseases.</a> European Heart Journal. 29 (24), 2959-2971 (2008).</li><li>Mulvany, M. J., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contractile+properties+of+small+arterial+resistance+vessels+in+spontaneously+hypertensive+and+normotensive+rats.">Contractile properties of small arterial resistance vessels in spontaneously hypertensive and normotensive rats.</a> Circulation Research. 41 (1), 19-26 (1977).</li><li>Mulvany, M. J., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+properties+of+vascular+smooth+muscle+cells+in+situ.">Mechanical properties of vascular smooth muscle cells in situ.</a> Nature. 260 (5552), 617-619 (1976).</li><li>del Campo, L., Ferrer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wire+myography+to+study+vascular+tone+and+vascular+structure+of+isolated+mouse+arteries.">Wire myography to study vascular tone and vascular structure of isolated mouse arteries.</a> Methods in Molecular Biology. 1339, 255-276 (2015).</li><li>Dobrin, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+initial+length+on+length-tension+relationship+of+vascular+smooth+muscle.">Influence of initial length on length-tension relationship of vascular smooth muscle.</a> American Journal of Physiology. 225 (3), 664-670 (1973).</li><li>Xu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calorie+restriction+prevents+metabolic+aging+caused+by+abnormal+SIRT1+function+in+adipose+tissues.">Calorie restriction prevents metabolic aging caused by abnormal SIRT1 function in adipose tissues.</a> Diabetes. 64 (5), 1576-1590 (2015).</li><li>Sheykhzade, M., Nyborg, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caliber+dependent+calcitonin+gene-related+peptide-induced+relaxation+in+rat+coronary+arteries:+effect+of+K++on+the+tachyphylaxis.">Caliber dependent calcitonin gene-related peptide-induced relaxation in rat coronary arteries: effect of K+ on the tachyphylaxis.</a> European Journal of Pharmacology. 351 (1), 53-59 (1998).</li><li>Soltis, E. E., Cassis, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+perivascular+adipose+tissue+on+rat+aortic+smooth+muscle+responsiveness.">Influence of perivascular adipose tissue on rat aortic smooth muscle responsiveness.</a> Clinical and Experimental Hypertension A. 13 (2), 277-296 (1991).</li><li>Lohn, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Periadventitial+fat+releases+a+vascular+relaxing+factor.">Periadventitial fat releases a vascular relaxing factor.</a> FASEB Journal. 16 (9), 1057-1063 (2002).</li><li>Fesus, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adiponectin+is+a+novel+humoral+vasodilator.">Adiponectin is a novel humoral vasodilator.</a> Cardiovascular Research. 75 (4), 719-727 (2007).</li><li>Greenstein, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+inflammation+and+hypoxia+abolish+the+protective+anticontractile+properties+of+perivascular+fat+in+obese+patients.">Local inflammation and hypoxia abolish the protective anticontractile properties of perivascular fat in obese patients.</a> Circulation. 119 (12), 1661-1670 (2009).</li><li>Yudkin, J. S., Eringa, E., Stehouwer, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term="Vasocrine"+signalling+from+perivascular+fat:+a+mechanism+linking+insulin+resistance+to+vascular+disease.">"Vasocrine" signalling from perivascular fat: a mechanism linking insulin resistance to vascular disease.</a> Lancet. 365 (9473), 1817-1820 (2005).</li><li>Xia, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uncoupling+of+endothelial+nitric+oxide+synthase+in+perivascular+adipose+tissue+of+diet-induced+obese+mice.">Uncoupling of endothelial nitric oxide synthase in perivascular adipose tissue of diet-induced obese mice.</a> Arteriosclerosis Thrombosis and Vascular Biology. 36 (1), 78-85 (2016).</li><li>Xia, N., Forstermann, U., Li, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+resveratrol+on+eNOS+in+the+endothelium+and+the+perivascular+adipose+tissue.">Effects of resveratrol on eNOS in the endothelium and the perivascular adipose tissue.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1403 (1), 132-141 (2017).</li><li>Schinzari, F., Tesauro, M., Cardillo, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+and+perivascular+adipose+tissue+abnormalities+in+obesity-related+vascular+dysfunction:+novel+targets+for+treatment.">Endothelial and perivascular adipose tissue abnormalities in obesity-related vascular dysfunction: novel targets for treatment.</a> Journal of Cardiovascular Pharmacology. 69 (6), 360-368 (2017).</li><li>Liu, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipocalin-2+deficiency+prevents+endothelial+dysfunction+associated+with+dietary+obesity:+role+of+cytochrome+P450+2C+inhibition.">Lipocalin-2 deficiency prevents endothelial dysfunction associated with dietary obesity: role of cytochrome P450 2C inhibition.</a> British Journal of Pharmacology. 165 (2), 520-531 (2012).</li><li>Martinez-Quinones, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypertension+induced+morphological+and+physiological+changes+in+cells+of+the+arterial+wall.">Hypertension induced morphological and physiological changes in cells of the arterial wall.</a> American Journal of Hypertension. 31 (10), 1067-1078 (2018).</li><li>Outzen, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translational+value+of+mechanical+and+vasomotor+properties+of+mouse+isolated+mesenteric+resistance-sized+arteries.">Translational value of mechanical and vasomotor properties of mouse isolated mesenteric resistance-sized arteries.</a> Pharmacology Research and Perspectives. 3 (6), e00200 (2015).</li><li>Sheykhzade, M., Simonsen, A. H., Boonen, H. C., Outzen, E. M., Nyborg, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+ageing+on+the+passive+and+active+tension+and+pharmacodynamic+characteristics+of+rat+coronary+arteries:+age-dependent+increase+in+sensitivity+to+5-HT+and+K+.">Effect of ageing on the passive and active tension and pharmacodynamic characteristics of rat coronary arteries: age-dependent increase in sensitivity to 5-HT and K+.</a> Pharmacology. 90 (3-4), 160-168 (2012).</li></ol>

Bortset fra de endotelceller, spiller signaler fra pvat en vigtig rolle i reguleringen af glatte muskeltonus reaktivitet30. Sunde pvat frigiver ingen og anti-inflammatorisk adiponectin at udøve en anti-contractile effekt på arterier, som er tabt under patologiske tilstande såsom fedme og metabolisk syndrom31,32. I sygdomstilstande bidrager pvat til udviklingen af endotel dysfunktion og andre kardiovaskulære abnormiteter<sup class="xref...

Dilatationer og konstriktioner af arterier opnås ved relaxationer og sammentrækninger, henholdsvis af deres vaskulære glatte muskelceller. Ændringer i vaskulære reaktionsevne af små arterier bidrager til den homeostatiske regulering af arteriel blodtryk ved autonome nerver og hormoner til stede i blodet (f. eks catecholaminer, angiotensin II, serotonin, vasopressin). På lokalt plan er de vaskulære reaktioner af glatte muskelceller moduleret af signaler fra både endotelcellerne i intima og fedtvæv omkring arterierne (figur 1).
Endotelet er ikke kun en passiv barriere, men fungerer også som en overflade til at udveksle signaler mellem blodet og de underliggende vaskulære glatte muskelceller. Ved at frigive forskellige vasoaktive stoffer, endotelet spiller en afgørende rolle i den lokale kontrol af vaskulære tone svar1. For eksempel, som reaktion på acetylcholin, endotel nitrogenoxid syntase (eNOS) er aktiveret i endotelet at producere nitrogenoxid (Nej), som inducerer afslapning af den underliggende vaskulære glatte muskulatur ved at aktivere opløselige guanylylcyclasekoblede cyclase (SGC) 2. andre vasoaktive stoffer omfatter produkter af cyclooxygenaser (f. eks. prostacyclin og thromboxan2), lipoxygenase (f. eks. 12-hydroxyeicosatetraenoinsyre, 12-HETE) og cytokrom P450 Monooxygenaser (hetes og epoxyeicosatrienoic syrer, EETs), reaktive oxygenarter (ROS) og vasoaktive peptider (f. eks. endothelin-1 og angiotensin II) og endothelium-afledte hyperpolariserende faktorer (EDHF)3. En hårfin balance mellem endothelium-afledte vasodilatorer og vasokonstriktorer opretholde den lokale vasomotoriske tone4,5.
Endothelial dysfunktion er karakteriseret ved svækkelse i endothelium-afhængige vasodilatation6, et kendetegn for vaskulær aldring7. Med alderen reduceres evnen af endotelet til at fremme vasodilatation gradvist, hvilket i høj grad skyldes en nedsat biotilgængelighed, samt det unormale udtryk for og funktion af Enosh i endotelet og SGC i de vaskulære glatte muskelceller8 , 9 ud af , 10. nedsat biotilgængelighed potentiates produktion af endothelium-afhængige vasokonstriktorer11,12. I alderen arterier, endotel dysfunktion forårsager hyperplasi i medierne, som afspejles af de markante stigninger i vægtykkelse, antallet af mediale kerner, som minder om den arterielle fortykkelse i hypertension og aterosklerose observeret i humane patienter13,14. Derudover accelererer patofysiologiske tilstande som fedme, diabetes eller hypertension udviklingen af endotel dysfunktion15,16.
Perivaskulære fedtvæv (PVAT) frigiver talrige adipokiner til at regulere vaskulær struktur og funktion17. Den anti-contractile effekt af pvat er medieret af afslappende faktorer, såsom adiponectin, nej, hydrogenperoxid og hydrogensulfid18,19,20. Men afhængigt af placeringen og patofysiologiske tilstand, pvat kan også forbedre kontraktile responser i forskellige arterier21. De Pro-contractile stoffer produceret af pvat omfatter angiotensin-II, leptin, resistin, og ros22,23.  I de fleste undersøgelser af isolerede blodkar er PVAT blevet betragtet som en simpel strukturel støtte til Vaskulaturen og dermed fjernet under tilberedningen af blodkar ring segmenter. Da fedtfri dysfunktion udgør en uafhængig risikofaktor for hypertension og tilknyttede kardiovaskulære komplikationer24, bør pvat omkring blodkarrene tages i betragtning ved undersøgelse af den vaskulære reaktionsevne hos forskellige arterier.
Multi wire myograph systemer er blevet almindeligt anvendt til at undersøge vasomotoriske funktioner af en række blodkar, herunder aorta, mesenterisk, renal, femoral, cerebral og koronar arterier25,26. De protokoller, der er beskrevet heri, vil bruge trådmyografi til at evaluere vaskulær reaktionsevne i mesenteriske arterier isoleret fra genetisk modificerede musemodeller, med særligt fokus på modulering af PVAT.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acetylcholine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A6625</td>
			<td>Stock concentration: 10-1 M 
			Working concentration: 10-10 to 10-5 M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-NAME (N&#969;-nitro-L-arginine methyl ester)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N5751</td>
			<td>Stock concentration: 3 x 10-2 M 
			Working concentration: 10-4 M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenylephrine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P6126</td>
			<td>Stock concentration: 10-2 M 
			Working concentration: 10-10 to 10-5 M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>U46619 (9,11-dideoxy-9&#945;,11&#945;methanoepoxy prostaglandin F2&#945;)</td>
			<td>Enzo</td>
			<td>BML-PG023-0001</td>
			<td>Stock concentration: 10-5 M 
			Working concentration: 1-3 x 10-8 M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiwire myograph</td>
			<td>Danish MyoTechnology (DMT)</td>
			<td>620M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PowerLab 4/26</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>ML848</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labchart7</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adipo-SIRT1 wild type mice</td>
			<td>Laboratory Animal Unit, The University of Hong Kong</td>
			<td>CULATR NO.: 4085-16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon-coated Petri dishes</td>
			<td>Danish MyoTechnology (DMT)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tungsten wires</td>
			<td>Danish MyoTechnology (DMT)</td>
			<td>300331</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical tools</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessment of vascular tone responsiveness using isolated mesenteric arteries with a focus on modulation by perivascular adipose tissues

Ændret vaskulær tone reaktionsevne til patofysiologiske stimuli bidrager til udviklingen af en bred vifte af kardiovaskulære og metaboliske sygdomme. Endothelial dysfunktion repræsenterer en stor synder for den reducerede vasodilatation og øget vasokonstriktion af arterier. Fedtvæv omkring arterierne spiller en vigtig rolle i reguleringen af endothelium-afhængig afslapning og/eller sammentrækning af de vaskulære glatte muskelceller. Kryds samtalerne mellem endotelet og perivaskulære fedtvæv kan vurderes ex vivo ved anvendelse af monterede blodkar ved hjælp af et trådmyografi system. Der bør dog fastsættes optimale indstillinger for arterier, der stammer fra dyr af forskellige arter, aldre, genetiske baggrunde og/eller patofysiologiske forhold.

Undersøgelse af længden/spændingsforholdet for at opnå normaliserings faktoren k
Den mængde strækning, der anvendes på et fartøjs segment, påvirker omfanget af interaktionen mellem aktin og myosin og dermed den maksimale aktive styrke, der er udviklet. Således, for hver type af blodkar, bestemmelse af mængden af stretch er nødvendig for maksimal aktiv kraft er nødvendig for korrekt myograph...

Watch this Scientific Journal Video about Assessment of Vascular Tone Responsiveness using Isolated Mesenteric Arteries with a Focus on Modulation by Perivascular Adipose Tissues at JoVE.com

Assessment of Vascular Tone Responsiveness using Isolated Mesenteric Arteries with a Focus on Modulation by Perivascular Adipose Tissues

Vurdering af vaskulær tone reaktionsevne ved hjælp af isolerede Mesenteriske arterier med fokus på graduering af Perivaskulære fedtvæv

Protokollen beskriver brugen af trådmyografi til at evaluere den transmural isometriske spænding af mesenteriske arterier isoleret fra mus, med særlig hensyntagen til graduering af faktorer frigivet fra endotelceller og perivaskulære fedtvæv.

Altered vascular tone responsiveness to pathophysiological stimuli contributes to the development of a wide range of cardiovascular and metabolic ...

Meget streng protokol er påkrævet, så vi gyldigt kan sammenligne præparater fra de samme dyr eller fra forskellige dyr eller arterier i nærvær eller fravær af fedt, der omgiver dem eller i nærvær eller fravær af endotel. Den største fordel ved denne eksperimentelle teknik er, at vi kan sammenligne ringe af samme arterie under isometrisk tilstand og dermed gyldigt drage konklusioner om virkningen af de eksperimentelle faktorer, som vi undersøger. Denne protokol giver indsigt i modulering af vaskulær lydhørhed ved perivascular fedtvæv af forskellige genetisk modificerede dyr.Fedtvæv dysfunktioner repræsenterer en uafhængig risikofaktor for hypertension og dens tilknyttede hjerte-kar-komplikationer. Vores myograf indebærer flere komplicerede trin, der kræver ekstrem forsigtighed på hvert punkt for at undgå at beskadige fartøjet, især under montering, og for at sikre, at fartøjet reagerer hensigtsmæssigt på forskellige stimuli. Begynd denne procedure med præparater og dissektion af de mesenteriære arterielle ringe som beskrevet i tekstprotokollen.Tænd computeren, og åbn dataoptagelsessoftwaren. Gem eksperimentet som en laboratoriediagramdatafil med et nyt navn for at undgå at overskrænke den oprindelige indstillingsfil. Åbn vinduet med normaliseringsindstillinger, og angiv K-faktoren til én.Accepter standardværdierne for IPs-kalibrering, måltryk, onlinegennemstænkningstid og forsinkelsestid. Klik på okay for at gemme indstillingerne. Vælg kanaler af interesse og input tråddiameteren, væv endepunkter, og indledende mikrometer læsning i normalisering vinduet.For at starte normaliseringsproceduren skal du anvende den første passive strækning på blodkarret ved at dreje mikrometerskruen mod uret. Efter at have ventet tre minutter på, at fartøjet stabiliserer sig, indtastes den nye mikrometeraflæsning i normaliseringsvinduet. Vægspændingen beregnes automatisk og vises som et punkt på grafen.Efter hver passiv strækning erstattes kontrolb krebsbufferen med en iso-osmotisk høj kalium krebs indeholdende 150 millimolar kaliumchlorid. Når sammentrækningen når et plateau på omkring tre minutter, skal du registrere den aktive kraft ved at trække den passive kraft på hver strækning fra kaliumaktiveret kraft. Beregn vægspændingen samt de interne omkredsværdier.Fjern den høje kaliumtilstand ved at erstatte den høje kaliumbuffer med frisk krebsbuffer. Vask i tre gange over fem minutter. Gentag normaliseringstrinene ved at fremkalde passive strækninger efterfulgt af aktiv sammentrækning i alternative sving, indtil den aktive spænding begynder at falde.Vask den høje kaliumbøgbuffer grundigt ud og udjævnning af præparaterne i yderligere 30 til 45 minutter. Nulstil de basale spændinger til nul, så der kun registreres aktive kontraktile svar under det efterfølgende eksperiment. Forbered og monter parrede arteriske ringe som beskrevet i tekstprotokollen fra de tilstødende dele af hver arterie.Forbered den ene arteriel ring med PVAT intakt og den anden med PVAT fjernet. Efter normaliseringen forudkontraheres arteriele segmenter med høj kalium krebs buffer ved at tilføje 115 millimolar kaliumchlorid opløsning til kammeret indeholder krebs. Efter sammentrækning til plateauet periode, vaskes den høje kalium og erstatte buffer med frisk luftet krebs buffer.Gentag vask tre gange over fem minutter. Kaliumchloridstimulering og vask gentages tre gange, og den maksimale kontraktile reaktion på kaliumchlorid registreres ved at trække baselinespændingen fra spændingen som følge af kaliumchloridstimulation. Efter den sidste sammentrækning og vask, genopfylde kammeret med varm, luftet krebs buffer og lad arterien til at inddrive i ca 30 minutter, før du udfører den næste opgave.Til hvert kammer tilsættes kumulative mængder phenylephrin for at fremkalde koncentrationsafhængige stigninger og isometrisk spænding i de quiescent præparater. Efter at have tilføjet den sidste dosis af agonist, vaske stoffet grundigt og genopfylde kammeret med frisk krebs buffer. De koncentrationsafhængige reaktioner afbildes som stigende procentdele af kaliumchloridforårsagede maksimale sammentrækninger.For at vurdere nitrogenoxidens bidrag inkuberes præparaterne med nitrogenoxidsyntasehæmmeren L-NAME i 30 minutter før tilsætning af phenylephrin. For at udføre en anden koncentrationsresponskurve fortløbende vaskes kammeret helt og gentagne gange for at fjerne alle de tidligere agonister, indtil der ikke observeres yderligere toneændringer. Normalisering af længde-spænding forholdet blev udført for mesenteriiske arterier isoleret fra musemodeller fodret med standard chow eller et højt fedtindhold kost.En passiv længde-spænding forhold blev etableret ved trinvis strækning af arteriesegmenterne, indtil en intern omkreds svarende til 100 millimeter kviksølv transmural tryk, eller IC100, blev opnået. Efter hver strækning blev der anvendt 115 millimolar kaliumchlorid til stimulering af sammentrækninger. De aktive længdespændingskurver blev afbildet ud fra de aktive kraftdata på Y-aksen og de beregnede IC-værdier ud fra mikrometerdataene på X-aksen.En IC-værdi, der ligger inden for topplateauet, er IC1. Normaliseringsfaktoren K blev beregnet som forholdet mellem IC1 og IC100, som derefter kunne anvendes på prøver af samme fartøjstype i det efterfølgende forsøg. Vist her er output optagelser af vasokonstrictor svar på phenylephrin i mesenteriiske arterier med eller uden omgivende PVAT.Kumulative koncentrationer af phenylephrine blev anvendt til at stimulere sammentrækninger af mesenteriiske arterier indsamlet fra 16 uger gamle fedtede en mus. Kontraktiletsvar blev registreret og beregnet som en procentdel på 150 millimolar kaliumchlorid induceret maksimal sammentrækning. Området under sammentrækningskurverne blev plottet til sammenligning.Bemærk, at PVAT fra fedt et mus fremkaldte en anti-kontraktile effekt på reaktionen på phenylephrin. Når du opnår KCL-inducerede sammentrækninger, skal reaktionerne være stabile og stabile. Hvis responsen stadig er stigende efter tre trinvise administrationer af KCL, kan det være nødvendigt at stimulere KCL.For at opnå optimale betingelser for spændingerne, normalisering trin er meget vigtigt, da dette bestemmer kraft til at åbne blodkarrene. Hvis det ikke gøres ordentligt, vil det påvirke hele eksperimentet. Denne protokol kan anvendes på andre indstillinger ud over phenylephrin-induceret sammentrækning eller afslapning.For eksempel, i nærvær eller fravær af perivascular fedtvæv, autonome nerver, eller endotel. Med denne protokol, forskere kan undersøge små blodkar fra syge dyremodeller under forskellige patofysiologiske tilstande, såsom fedme, diabetes, og hjerte-kar-sygdomme.

Research

JoVE Journal

Biology

Right Hemihepatectomy by Suprahilar Intrahepatic Transection of the Right Hemipedicle using a Vascular Stapler

Successful hepatic resection requires profound anatomical knowledge and delicate surgical technique. Hemihepatectomies are mostly performed after ...

The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity

The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity

Den Ex vivo Isoleret Skeletal mikrokardannelse Forberedelse til undersøgelse af vaskulær reaktivitet

The isolated  microvessel preparation is an ex vivo preparation that allows for examination of the different contributions of  factors that control vessel ...

Using Digital Image Correlation to Characterize Local Strains on Vascular Tissue Specimens

Brug Digital Image Korrelation til Karakterisere Lokale Stammer på Vaskulære vævsprøver

Characterization of the mechanical behavior of biological and engineered soft tissues is a central component of fundamental biomedical research and ...

Analysis of Cell Suspensions Isolated from Solid Tissues by Spectral Flow Cytometry

Analyse af Cellesuspensioner isoleret fra Solid Væv af Spectral flowcytometri

Flow cytometry has been used for the past 40 years to define and analyze the phenotype of lymphoid and other hematopoietic cells. Initially restricted to ...

Differentiation Capacity of Human Aortic Perivascular Adipose Progenitor Cells

Differentiering kapacitet af menneskelige aorta Perivascular fedt stamceller

Adipose tissue is a rich source of multi-potent mesenchymal stem cells (MSC) capable of differentiating into osteogenic, adipogenic, and chondrogenic ...

Preparation of Adipose Progenitor Cells from Mouse Epididymal Adipose Tissues

Forberedelse af Adipose Stamfader celler fra Mouse Epididymal fedtvæv

Obesity and metabolic disorders such as diabetes, heart disease, and cancer, are all associated with dramatic adipose tissue remodeling. Tissue-resident ...

Visualization and Quantification of Brown and Beige Adipose Tissues in Mice using [18F]FDG Micro-PET/MR Imaging

Visualization and Quantification of Brown and Beige Adipose Tissues in Mice using [18F]FDG Micro-PET/MR Imaging

Visualisering og kvantificering af brunt og beige fedtvæv hos mus ved hjælp af [18F]FDG Micro-PET/MR Imaging

Brown and beige adipocytes are now recognized as potential therapeutic targets for obesity and metabolic syndromes. Non-invasive molecular imaging methods ...

Mouse Abdominal Aortic Aneurysm Model Induced by Perivascular Application of Elastase

Mus abdominal aortaaneurismemodel induceret af perivaskulær anvendelse af elastase

Abdominal aortic aneurysm (AAA), although primarily asymptomatic, is potentially life-threatening as the rupture of AAA usually has a devastating outcome. ...

Semi-Automated Isolation of Murine White Adipose Tissue

Semi-Automated Isolation of the Stromal Vascular Fraction from Murine White Adipose Tissue Using a Tissue Dissociator

Semi-Automated Isolation of the Stromal Vascular Fraction from Murine White Adipose Tissue Using a Tissue Dissociator (Video) | JoVE 

Halvautomatisk isolering af den stromale vaskulære fraktion fra murine hvidt fedtvæv ved hjælp af en vævsdissociator

The in vitro study of white, brown, and beige adipocyte differentiation enables the investigation of cell-autonomous functions of adipocytes and their ...