Name: assessment of vascular tone responsiveness using isolated mesenteric arteries with a focus on modulation by perivascular adipose tissues
Uploaded: 2019-06-03T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessment of Vascular Tone Responsiveness using Isolated Mesenteric Arteries with a Focus on Modulation by Perivascular Adipose Tissues at JoVE.com

この作品は、香港の研究助成金評議会 [17124718 と 17121714]、香港の健康・医療研究基金 [13142651 と 13142641]、香港の共同研究資金 [C7055-14G]、および国家の基本的な助成金によって財政的支援を受けました中国研究プログラム [973 プログラム 2015CB553603].

以下の研究のために使用されるすべての動物は、医学の学部の実験動物ユニットによって提供されました, 香港大学.教育と研究のための実験動物の使用に関する部門委員会から倫理的な承認が得られました (CULATR, no.: 4085-16)。
1. 準備
<ol><li>薬の調製
	<ol>
<li>それらを受けた直後に、物質安全データシート (MSDS) に記載されているように適切に医薬品を保管し?...

<ol>
	<li>Furchgott, R. F., Zawadzki, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+obligatory+role+of+endothelial+cells+in+the+relaxation+of+arterial+smooth+muscle+by+acetylcholine.">The obligatory role of endothelial cells in the relaxation of arterial smooth muscle by acetylcholine.</a> Nature. 288 (5789), 373-376 (1980).</li><li>Furchgott, R. F., Vanhoutte, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelium-derived+relaxing+and+contracting+factors.">Endothelium-derived relaxing and contracting factors.</a> The FASEB Journal. 3 (9), 2007-2018 (1989).</li><li>Feletou, M., Kohler, R., Vanhoutte, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelium-derived+vasoactive+factors+and+hypertension:+possible+roles+in+pathogenesis+and+as+treatment+targets.">Endothelium-derived vasoactive factors and hypertension: possible roles in pathogenesis and as treatment targets.</a> Current Hypertension Reports. 12 (4), 267-275 (2010).</li><li>Vanhoutte, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+dysfunction:+the+first+step+toward+coronary+arteriosclerosis.">Endothelial dysfunction: the first step toward coronary arteriosclerosis.</a> Circulation Journal. 73 (4), 595-601 (2009).</li><li>Feletou, M., Huang, Y., Vanhoutte, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelium-mediated+control+of+vascular+tone:+COX-1+and+COX-2+products.">Endothelium-mediated control of vascular tone: COX-1 and COX-2 products.</a> British Journal of Pharmacology. 164 (3), 894-912 (2011).</li><li>Harrison, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+and+molecular+mechanisms+of+endothelial+cell+dysfunction.">Cellular and molecular mechanisms of endothelial cell dysfunction.</a> Journal of Clinical Investigation. 100 (9), 2153 (1997).</li><li>Vanhoutte, P. M., Shimokawa, H., Tang, E. H., Feletou, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+dysfunction+and+vascular+disease.">Endothelial dysfunction and vascular disease.</a> Acta physiologica. 196 (2), 193-222 (2009).</li><li>Kl&#246;&#223;, S., Bouloumi&#233;, A., M&#252;lsch, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging+and+chronic+hypertension+decrease+expression+of+rat+aortic+soluble+guanylyl+cyclase.">Aging and chronic hypertension decrease expression of rat aortic soluble guanylyl cyclase.</a> Hypertension. 35 (1), 43-47 (2000).</li><li>Csiszar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging-induced+phenotypic+changes+and+oxidative+stress+impair+coronary+arteriolar+function.">Aging-induced phenotypic changes and oxidative stress impair coronary arteriolar function.</a> Circulation Research. 90 (11), 1159-1166 (2002).</li><li>Guo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+SIRT1+prevents+age-induced+impairment+of+vasodilator+responses+by+enhancing+the+expression+and+activity+of+soluble+guanylyl+cyclase+in+smooth+muscle+cells.">Endothelial SIRT1 prevents age-induced impairment of vasodilator responses by enhancing the expression and activity of soluble guanylyl cyclase in smooth muscle cells.</a> Cardiovascular Research. , (2018).</li><li>Auch-Schwelk, W., Katusic, Z. S., Vanhoutte, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitric+oxide+inactivates+endothelium-derived+contracting+factor+in+the+rat+aorta.">Nitric oxide inactivates endothelium-derived contracting factor in the rat aorta.</a> Hypertension. 19 (5), 442-445 (1992).</li><li>Tang, E. H., Feletou, M., Huang, Y., Man, R. Y., Vanhoutte, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acetylcholine+and+sodium+nitroprusside+cause+long-term+inhibition+of+EDCF-mediated+contractions.">Acetylcholine and sodium nitroprusside cause long-term inhibition of EDCF-mediated contractions.</a> American Journal of Physiology - Heart and Circulation Physiology. 289 (6), H2434-H2440 (2005).</li><li>Ghiadoni, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+function+and+common+carotid+artery+wall+thickening+in+patients+with+essential+hypertension.">Endothelial function and common carotid artery wall thickening in patients with essential hypertension.</a> Hypertension. 32 (1), 25-32 (1998).</li><li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+Impairment+of+Vascular+Structure+and+Functions.">Age-related Impairment of Vascular Structure and Functions.</a> Aging and Disease. 8 (5), 590-610 (2017).</li><li>Tabit, C. E., Chung, W. B., Hamburg, N. M., Vita, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+dysfunction+in+diabetes+mellitus:+Molecular+mechanisms+and+clinical+implications.">Endothelial dysfunction in diabetes mellitus: Molecular mechanisms and clinical implications.</a> Reviews in Endocrine &amp; Metabolic Disorders. 11 (1), 61-74 (2010).</li><li>Tanaka, K., Sata, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Roles+of+perivascular+adipose+tissue+in+the+pathogenesis+of+atherosclerosis.">Roles of perivascular adipose tissue in the pathogenesis of atherosclerosis.</a> Frontiers in Physiology. 9, 3 (2018).</li><li>Brown, N. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perivascular+adipose+tissue+in+vascular+function+and+disease:+a+review+of+current+research+and+animal+models.">Perivascular adipose tissue in vascular function and disease: a review of current research and animal models.</a> Arteriosclerosis Thrombosis and Vascular Biology. 34 (8), 1621-1630 (2014).</li><li>Lohn, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Periadventitial+fat+releases+a+vascular+relaxing+factor.">Periadventitial fat releases a vascular relaxing factor.</a> The FASEB Journal. 16 (9), 1057-1063 (2002).</li><li>G&#225;lvez-Prieto, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+reduction+in+the+amount+and+anti-contractile+effect+of+periadventitial+mesenteric+adipose+tissue+precedes+hypertension+development+in+spontaneously+hypertensive+rats.">A reduction in the amount and anti-contractile effect of periadventitial mesenteric adipose tissue precedes hypertension development in spontaneously hypertensive rats.</a> Hypertension research. 31 (7), 1415 (2008).</li><li>Gao, Y. J., Lu, C., Su, L. Y., Sharma, A., Lee, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+vascular+function+by+perivascular+adipose+tissue:+the+role+of+endothelium+and+hydrogen+peroxide.">Modulation of vascular function by perivascular adipose tissue: the role of endothelium and hydrogen peroxide.</a> British Journal of Pharmacology. 151 (3), 323-331 (2007).</li><li>Gao, Y. -. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perivascular+adipose+tissue+promotes+vasoconstriction:+the+role+of+superoxide+anion.">Perivascular adipose tissue promotes vasoconstriction: the role of superoxide anion.</a> Cardiovascular Research. 71 (2), 363-373 (2006).</li><li>Szasz, T., Webb, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perivascular+adipose+tissue:+more+than+just+structural+support.">Perivascular adipose tissue: more than just structural support.</a> Clinical Science (London). 122 (1), 1-12 (2012).</li><li>Ramirez, J. G., O'Malley, E. J., Ho, W. S. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pro-contractile+effects+of+perivascular+fat+in+health+and+disease.">Pro-contractile effects of perivascular fat in health and disease.</a> Brish Journal of Pharmacology. 174 (20), 3482-3495 (2017).</li><li>Hajer, G. R., van Haeften, T. W., Visseren, F. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose+tissue+dysfunction+in+obesity,+diabetes,+and+vascular+diseases.">Adipose tissue dysfunction in obesity, diabetes, and vascular diseases.</a> European Heart Journal. 29 (24), 2959-2971 (2008).</li><li>Mulvany, M. J., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contractile+properties+of+small+arterial+resistance+vessels+in+spontaneously+hypertensive+and+normotensive+rats.">Contractile properties of small arterial resistance vessels in spontaneously hypertensive and normotensive rats.</a> Circulation Research. 41 (1), 19-26 (1977).</li><li>Mulvany, M. J., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+properties+of+vascular+smooth+muscle+cells+in+situ.">Mechanical properties of vascular smooth muscle cells in situ.</a> Nature. 260 (5552), 617-619 (1976).</li><li>del Campo, L., Ferrer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wire+myography+to+study+vascular+tone+and+vascular+structure+of+isolated+mouse+arteries.">Wire myography to study vascular tone and vascular structure of isolated mouse arteries.</a> Methods in Molecular Biology. 1339, 255-276 (2015).</li><li>Dobrin, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+initial+length+on+length-tension+relationship+of+vascular+smooth+muscle.">Influence of initial length on length-tension relationship of vascular smooth muscle.</a> American Journal of Physiology. 225 (3), 664-670 (1973).</li><li>Xu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calorie+restriction+prevents+metabolic+aging+caused+by+abnormal+SIRT1+function+in+adipose+tissues.">Calorie restriction prevents metabolic aging caused by abnormal SIRT1 function in adipose tissues.</a> Diabetes. 64 (5), 1576-1590 (2015).</li><li>Sheykhzade, M., Nyborg, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caliber+dependent+calcitonin+gene-related+peptide-induced+relaxation+in+rat+coronary+arteries:+effect+of+K++on+the+tachyphylaxis.">Caliber dependent calcitonin gene-related peptide-induced relaxation in rat coronary arteries: effect of K+ on the tachyphylaxis.</a> European Journal of Pharmacology. 351 (1), 53-59 (1998).</li><li>Soltis, E. E., Cassis, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+perivascular+adipose+tissue+on+rat+aortic+smooth+muscle+responsiveness.">Influence of perivascular adipose tissue on rat aortic smooth muscle responsiveness.</a> Clinical and Experimental Hypertension A. 13 (2), 277-296 (1991).</li><li>Lohn, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Periadventitial+fat+releases+a+vascular+relaxing+factor.">Periadventitial fat releases a vascular relaxing factor.</a> FASEB Journal. 16 (9), 1057-1063 (2002).</li><li>Fesus, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adiponectin+is+a+novel+humoral+vasodilator.">Adiponectin is a novel humoral vasodilator.</a> Cardiovascular Research. 75 (4), 719-727 (2007).</li><li>Greenstein, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+inflammation+and+hypoxia+abolish+the+protective+anticontractile+properties+of+perivascular+fat+in+obese+patients.">Local inflammation and hypoxia abolish the protective anticontractile properties of perivascular fat in obese patients.</a> Circulation. 119 (12), 1661-1670 (2009).</li><li>Yudkin, J. S., Eringa, E., Stehouwer, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term="Vasocrine"+signalling+from+perivascular+fat:+a+mechanism+linking+insulin+resistance+to+vascular+disease.">"Vasocrine" signalling from perivascular fat: a mechanism linking insulin resistance to vascular disease.</a> Lancet. 365 (9473), 1817-1820 (2005).</li><li>Xia, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uncoupling+of+endothelial+nitric+oxide+synthase+in+perivascular+adipose+tissue+of+diet-induced+obese+mice.">Uncoupling of endothelial nitric oxide synthase in perivascular adipose tissue of diet-induced obese mice.</a> Arteriosclerosis Thrombosis and Vascular Biology. 36 (1), 78-85 (2016).</li><li>Xia, N., Forstermann, U., Li, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+resveratrol+on+eNOS+in+the+endothelium+and+the+perivascular+adipose+tissue.">Effects of resveratrol on eNOS in the endothelium and the perivascular adipose tissue.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1403 (1), 132-141 (2017).</li><li>Schinzari, F., Tesauro, M., Cardillo, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+and+perivascular+adipose+tissue+abnormalities+in+obesity-related+vascular+dysfunction:+novel+targets+for+treatment.">Endothelial and perivascular adipose tissue abnormalities in obesity-related vascular dysfunction: novel targets for treatment.</a> Journal of Cardiovascular Pharmacology. 69 (6), 360-368 (2017).</li><li>Liu, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipocalin-2+deficiency+prevents+endothelial+dysfunction+associated+with+dietary+obesity:+role+of+cytochrome+P450+2C+inhibition.">Lipocalin-2 deficiency prevents endothelial dysfunction associated with dietary obesity: role of cytochrome P450 2C inhibition.</a> British Journal of Pharmacology. 165 (2), 520-531 (2012).</li><li>Martinez-Quinones, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypertension+induced+morphological+and+physiological+changes+in+cells+of+the+arterial+wall.">Hypertension induced morphological and physiological changes in cells of the arterial wall.</a> American Journal of Hypertension. 31 (10), 1067-1078 (2018).</li><li>Outzen, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translational+value+of+mechanical+and+vasomotor+properties+of+mouse+isolated+mesenteric+resistance-sized+arteries.">Translational value of mechanical and vasomotor properties of mouse isolated mesenteric resistance-sized arteries.</a> Pharmacology Research and Perspectives. 3 (6), e00200 (2015).</li><li>Sheykhzade, M., Simonsen, A. H., Boonen, H. C., Outzen, E. M., Nyborg, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+ageing+on+the+passive+and+active+tension+and+pharmacodynamic+characteristics+of+rat+coronary+arteries:+age-dependent+increase+in+sensitivity+to+5-HT+and+K+.">Effect of ageing on the passive and active tension and pharmacodynamic characteristics of rat coronary arteries: age-dependent increase in sensitivity to 5-HT and K+.</a> Pharmacology. 90 (3-4), 160-168 (2012).</li></ol>

内皮細胞とは別に、PVAT 由来のシグナルは、平滑筋緊張反応性30の調節において重要な役割を果たす。健康な PVAT は、肥満およびメタボリックシンドローム31,32などの病的状態下で失われる動脈に対する抗収縮効果を発揮する NO および抗炎症性アディポネクチンを放出する。疾患状態において、PVAT は、内皮機能不全および他の心?...

動脈の肥大および収縮は、それぞれ、血管平滑筋細胞のリラクゼーションおよび短縮によって達成される。小さな動脈の血管応答性の変化は、血液中に存在する自律神経およびホルモン (例えば、カテコールアミン、アンジオテンシン II、セロトニン、バソプレシン) によって動脈血圧の恒常性調節に寄与する。局所レベルでは、平滑筋細胞の血管応答は、内膜の内皮細胞と動脈を取り囲む脂肪組織の両方からのシグナルによって変調される (図 1)。
内皮は、受動的な障壁だけでなく、血液と下層の血管平滑筋細胞との間の信号を交換する表面としても機能する。様々な血管作動性物質を放出することにより、内皮は血管トーン応答1の局所制御において重要な役割を果たす。例えば、アセチルコリンに応答して、内皮一酸化窒素合成酵素 (エノス) は、一酸化窒素 (NO) を産生する内皮に活性化され、これは可溶性グアニリルシクラーゼ酸シクラーゼ (sGC)を活性化することによって下層の血管平滑筋の弛緩を誘発する2. その他の血管作動性物質としては、シクロオキシゲナーゼ (例えば、プロスタサイクリン及びトロンボキサン a2)、リポキシゲナーゼ (例えば、12-hydroxyeicosatetraenoic 酸、12-HETE)、およびシトクロム P450 monooxygenases (HETEs 及びepoxyeicosatrienoic 酸、EETs)、活性酸素種 (ROS)、および血管作動性ペプチド (例えば、エンドセリン-1 およびアンジオテンシン II)、および内皮由来 hyperpolarizing 因子 (EDHF)3。内皮由来の血管拡張薬と血管収縮剤の微妙なバランスは、局所血管運動トーン4,5を維持する。
内皮機能不全は、内皮依存性血管拡張6における障害を特徴とする、血管老化7の顕著な特徴である。年齢と共に、血管拡張を促進する内皮の能力は、主として、生物学的利用能の低下、ならびに血管平滑筋細胞における内皮および sGC におけるエノスの異常な発現および機能に起因して徐々に減少している8,9,10. バイオアベイラビリティを低下させることは、内皮依存性血管収縮剤の産生を増強する。高齢の動脈では、内皮機能不全が培地で過形成を引き起こし、壁厚の顕著な増加によって反射されるように、ヒトにおいて認められる高血圧およびアテローム性動脈硬化において血管肥厚を連想する中間核の数患者13、14。加えて、肥満、糖尿病または高血圧のような病態生理学的条件は、内皮機能障害の発症を加速する15,16.
血管周囲脂肪組織 (PVAT) は、血管構造および機能17を調節するために多数のアディポカインを放出する。PVAT の抗収縮効果は、アディポネクチン、NO、過酸化水素、硫化水素18、19、20などの弛緩因子によって媒介される。しかし、場所および病態生理学的条件に応じて、PVAT はまた、様々な動脈21における収縮反応を増強することができる。PVAT によって産生されるプロ収縮物質には、アンジオテンシン-II、レプチン、レジスチン、および ROS22,23が含まれる。 孤立した血管の研究のほとんどでは、PVAT は、血管系のための単純な構造的なサポートとして考えられているため、血管のリングセグメントの調製中に除去しました。脂肪機能障害は高血圧および関連した心血管合併症24のための独立した危険因子を表すので、血管の応答性を調査するとき、血管を取り巻く PVAT は考慮されるべきである異なる動脈。
多線 myograph システムは大動脈、腸間膜、腎臓、大腿骨、大脳および冠状動脈25,26を含むいろいろな血管の血管運動機能を調査するのに広く利用された。本明細書に記載されるプロトコールは、PVAT による変調に特に重点をおいて、遺伝子組み換えマウスモデルから単離された腸間膜動脈における血管応答性を評価するためにワイヤ myography を使用する。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acetylcholine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A6625</td>
			<td>Stock concentration: 10-1 M 
			Working concentration: 10-10 to 10-5 M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-NAME (N&#969;-nitro-L-arginine methyl ester)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N5751</td>
			<td>Stock concentration: 3 x 10-2 M 
			Working concentration: 10-4 M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenylephrine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P6126</td>
			<td>Stock concentration: 10-2 M 
			Working concentration: 10-10 to 10-5 M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>U46619 (9,11-dideoxy-9&#945;,11&#945;methanoepoxy prostaglandin F2&#945;)</td>
			<td>Enzo</td>
			<td>BML-PG023-0001</td>
			<td>Stock concentration: 10-5 M 
			Working concentration: 1-3 x 10-8 M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiwire myograph</td>
			<td>Danish MyoTechnology (DMT)</td>
			<td>620M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PowerLab 4/26</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>ML848</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labchart7</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adipo-SIRT1 wild type mice</td>
			<td>Laboratory Animal Unit, The University of Hong Kong</td>
			<td>CULATR NO.: 4085-16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon-coated Petri dishes</td>
			<td>Danish MyoTechnology (DMT)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tungsten wires</td>
			<td>Danish MyoTechnology (DMT)</td>
			<td>300331</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical tools</td>
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assessment of vascular tone responsiveness using isolated mesenteric arteries with a focus on modulation by perivascular adipose tissues

病態生理学的刺激に対する血管の色調の反応性の変化は、広範囲の心血管および代謝疾患の発症に寄与する。内皮機能不全は、減少した血管拡張および動脈の血管収縮の亢進の主要な原因を表す。脂肪 (脂肪) 動脈を取り巻く組織は、内皮依存性弛緩および/または血管平滑筋細胞の収縮の調節において重要な役割を果たす。内皮と血管周囲脂肪組織との間のクロストークは、ワイヤー myography システムによって取り付けられた血管を使用して、ex vivo で評価することができる。しかし、最適な設定は、異なる種の動物、年齢、遺伝的背景および/または病態生理学的条件に由来する動脈について確立されるべきである。

正規化係数kを得るための長さ/張力関係の検討
血管セグメントに適用される伸張の量は、アクチン-ミオシン相互作用の程度に影響を与え、したがって最大の活性力が発達した。したがって、血管のすべてのタイプのために、最大の活性力に必要なストレッチ量を決定することは、適切な myography 研究の?...

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Assessment of Vascular Tone Responsiveness using Isolated Mesenteric Arteries with a Focus on Modulation by Perivascular Adipose Tissues

血管周囲脂肪組織による変調に焦点を当てた孤立腸間膜動脈を用いた血管緊張応答性の評価

このプロトコルは、マウスから単離された腸間膜動脈の貫壁性等角張力を評価するためのワイヤ myography の使用を説明し、内皮細胞および血管周囲脂肪組織から放出される因子による変調を特別に考慮する。

Altered vascular tone responsiveness to pathophysiological stimuli contributes to the development of a wide range of cardiovascular and metabolic ...

非常に厳格なプロトコルは、同じ動物、またはそれらを取り囲む脂肪の有無または内皮の有無において異なる動物または動脈からの準備を有効に比較できるように必要です。この実験手法の主な利点は、同一の動脈の環を等角条件下で比較し、調査する実験因子の影響について有効に結論を出すことができる点である。このプロトコルは、異なる遺伝子組み換え動物の血管内脂肪組織による血管応答性の変調に関する洞察を提供する。脂肪組織機能不全は、高血圧および関連する心血管合併症の独立した危険因子を表す。当社のミオグラフには、特に取り付け時に船舶に損傷を与えることを避け、容器が様々な刺激に適切に反応することを確実にするために、各ポイントで細心の注意が必要な複数の複雑なステップが含まれます。テキストプロトコルに記載されているように、腸間膜動脈リングの準備と解剖でこの手順を開始します。コンピュータの電源を入れ、データ記録ソフトウェアを開きます。実験を新しい名前でラボ グラフ データ ファイルとして保存し、元の設定ファイルが上書きされないようにします。正規化設定ウィンドウを開き、K 係数を 1 に設定します。IP キャリブレーション、目標圧力、オンライン平均時間、遅延時間のデフォルト値を受け入れます。[問題] をクリックして設定を保存します。目的のチャンネルを選択し、ワイヤ径、組織エンドポイント、および初期マイクロメータの測定値を正規化ウィンドウに入力します。正規化手順を開始するには、マイクロメーターのネジを反時計回りに回して、血管に最初の受動的ストレッチを適用します。容器が安定するまで3分待った後、新しいマイクロメーターの測定値を正規化ウィンドウに入力します。壁張力は自動的に計算され、グラフ上のポイントとして表示されます。各パッシブストレッチの後、コントロールクレブスバッファーを150ミリモル塩化カリウムを含む等浸透性高カリウムクレブに交換します。収縮が約3分で高原に達したら、活性化力のカリウムから各ストレッチで受動力を差し引いて活動力を記録する。壁張力と内部円周値を計算します。高カリウムバッファーを新鮮なクレブバッファーに置き換えることによって、高カリウム条件を除去します。5分間に3回洗濯を繰り返します。アクティブな張力が減少し始めるまで、受動ストレッチを誘発し、その後、交互にアクティブな収縮を誘発することによって正規化ステップを繰り返します。高カリウムクレブバッファーを十分に洗い流し、さらに30〜45分間の準備を平衡化します。基底のテンションをゼロにリセットして、その後の実験中にアクティブな収縮応答のみが記録されるようにします。各動脈の隣接するセクションからのテキストプロトコルに記載されているように、対の動脈リングを準備し、取り付ける。PVATをそのままにして1つの動脈リングを準備し、もう一方の動脈リングをPVATを取り外します。正常化後、クレブを含むチャンバーに115ミリモルの塩化カリウム溶液を添加することにより、高カリウムクレブスバッファーで動脈セグメントを事前に委託します。高原期に収縮した後、高カリウムを洗い流し、新鮮な通気クレブスバッファーにバッファーを交換します。5分間に3回洗濯を繰り返します。塩化カリウム刺激と洗浄を3回繰り返し、塩化カリウム刺激による張力からベースライン張力を差し引いて塩化カリウムに対する最大の収縮応答を記録します。最後の収縮と洗浄の後、温かい、気泡状のクレブスバッファーでチャンバーを補充し、動脈が次のタスクを実行する前に約30分間回復することを許可します。各チャンバに、フェニレフリンの累積量を加えて、静止製剤の濃度依存性の増加と等角張りを誘導する。アゴニストの最後の用量を追加した後、徹底的に薬物を洗い流し、新鮮なクレブバッファーでチャンバーを補充します。濃度依存応答を、塩化カリウム誘導最大収縮の割合の増加としてプロットします。一酸化窒素の寄与を評価するために、フェニレフリンを添加する前に30分間、一酸化窒素合成酵素阻害剤L-NAMEで調製物をインキュベートする。第2濃度応答曲線を順次に行う場合は、チャンバーを完全に繰り返し洗浄し、トーンのさらなる変化が見られないまで以前のアゴニストのすべてを除去する。長さと緊張関係の正常化は、標準的なチャウまたは高脂肪食を与えられたマウスモデルから分離された腸間膜動脈に対して行われた。100ミリメートルの水銀経壁圧(IC100)に対応する内部円周が得られるまで、動脈セグメントの増分延伸によって受動的な長さ-張力関係が確立された。各ストレッチの後、115ミリモルの塩化カリウムを適用して収縮を刺激した。アクティブな長さの張力曲線は、アクティブな力データからY軸にプロットし、計算されたIC値をX軸上のマイクロメートルデータからプロットした。ピーク高原内にあるIC値はIC1です。正規化係数Kは、IC1とIC100の比として計算し、その後の実験で同じ容器タイプのサンプルに適用することができる。ここに示されているのは、PVATを取り巻く有無にかかわらず、腸間膜動脈におけるフェニレフリンに対する血管収縮剤応答の出力記録である。フェニレフリンの累積濃度は、16週齢のアディポセット1匹のマウスから採取された腸間膜動脈の収縮を刺激するために適用された。収縮応答を記録し、150ミリモルの塩化カリウム誘導最大収縮の割合として計算した。収縮曲線の下の領域は、比較のためにプロットされました。なお、1匹のマウスがアディポセットからPVATはフェニレフリンに対する応答に対する抗収縮作用を引き出した。KCLによる収縮を得るとき、応答は安定し、安定している必要があります。KCLの3回の段階的投与後も応答が増加している場合、KCL刺激が必要となる可能性がある。緊張の最適な条件を達成するために、正常化ステップは、これが血管を開く力を決定するように、非常に重要である。それが正しく行われていない場合、それは全体の実験に影響を与えます。このプロトコルは、フェニレフリン誘発収縮または弛緩に加えて、他の設定に適用することができる。例えば、血管内脂肪組織の有無、自律神経、または内皮の存在下で。このプロトコルを使用すると、研究者は肥満、糖尿病、心血管疾患などの異なる病態生理学的状態下で病気の動物モデルから小さな血管を調べることができます。

Research

JoVE Journal

Biology

Right Hemihepatectomy by Suprahilar Intrahepatic Transection of the Right Hemipedicle using a Vascular Stapler

血管ホッチキスを使って右HemipedicleのSuprahilar肝内切除により右Hemihepatectomy

Successful hepatic resection requires profound anatomical knowledge and delicate surgical technique. Hemihepatectomies are mostly performed after ...

The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity

The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity

ザ ex vivoで</em血管反応性の調査のために>隔離された骨格微小血管の準備

The isolated  microvessel preparation is an ex vivo preparation that allows for examination of the different contributions of  factors that control vessel ...

Using Digital Image Correlation to Characterize Local Strains on Vascular Tissue Specimens

デジタル画像相関を使用すると、血管の組織標本のローカル株を特徴づけるために、

Characterization of the mechanical behavior of biological and engineered soft tissues is a central component of fundamental biomedical research and ...

Analysis of Cell Suspensions Isolated from Solid Tissues by Spectral Flow Cytometry

スペクトラルフローサイトメトリーにより固形組織から単離された細胞懸濁液の分析

Flow cytometry has been used for the past 40 years to define and analyze the phenotype of lymphoid and other hematopoietic cells. Initially restricted to ...

Differentiation Capacity of Human Aortic Perivascular Adipose Progenitor Cells

ヒト大動脈血管周囲脂肪前駆細胞の分化能力

Adipose tissue is a rich source of multi-potent mesenchymal stem cells (MSC) capable of differentiating into osteogenic, adipogenic, and chondrogenic ...

Preparation of Adipose Progenitor Cells from Mouse Epididymal Adipose Tissues

マウス上端体脂肪組織からの脂肪前駆細胞の調製

Obesity and metabolic disorders such as diabetes, heart disease, and cancer, are all associated with dramatic adipose tissue remodeling. Tissue-resident ...

Visualization and Quantification of Brown and Beige Adipose Tissues in Mice using [18F]FDG Micro-PET/MR Imaging

Visualization and Quantification of Brown and Beige Adipose Tissues in Mice using [18F]FDG Micro-PET/MR Imaging

[18F]FDGマイクロPET/MRイメージングを用いたマウスの褐色およびベージュ色の脂肪組織の可視化と定量化

Brown and beige adipocytes are now recognized as potential therapeutic targets for obesity and metabolic syndromes. Non-invasive molecular imaging methods ...

Mouse Abdominal Aortic Aneurysm Model Induced by Perivascular Application of Elastase

エラスターゼの血管周囲適用により誘導されるマウス腹部大動脈瘤モデル

Abdominal aortic aneurysm (AAA), although primarily asymptomatic, is potentially life-threatening as the rupture of AAA usually has a devastating outcome. ...

Semi-Automated Isolation of Murine White Adipose Tissue

Semi-Automated Isolation of the Stromal Vascular Fraction from Murine White Adipose Tissue Using a Tissue Dissociator

Semi-Automated Isolation of the Stromal Vascular Fraction from Murine White Adipose Tissue Using a Tissue Dissociator (Video) | JoVE 

組織解離剤を用いたマウス白色脂肪組織からの間質血管画分の半自動単離(英語)

The in vitro study of white, brown, and beige adipocyte differentiation enables the investigation of cell-autonomous functions of adipocytes and their ...