Name: assessment of vascular tone responsiveness using isolated mesenteric arteries with a focus on modulation by perivascular adipose tissues
Uploaded: 2019-06-03T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessment of Vascular Tone Responsiveness using Isolated Mesenteric Arteries with a Focus on Modulation by Perivascular Adipose Tissues at JoVE.com

Este trabalho foi financeiramente apoio pelas subvenções do Conselho de subvenção de investigação de Hong Kong [17124718 e 17121714], Hong Kong Health and Medical Research Fund [13142651 e 13142641], fundo de investigação colaborativa de Hong Kong [C7055-14G], e o National Basic Programa de pesquisa da China [973 Program 2015CB553603].

Todos os animais utilizados para o estudo a seguir foram fornecidos pela unidade de laboratório de animais da faculdade de medicina da Universidade de Hong Kong. A aprovação ética foi obtida do Comitê departamental de uso de animais de laboratório para ensino e pesquisa (CULATR, no.: 4085-16).
1. os preparativos
<ol><li>Preparação de fármacos
	<ol>
<li>Armazene os medicamentos apropriadamente conforme indicado na ficha de dados de segurança de material (MSDS) imedi...

<ol>
	<li>Furchgott, R. F., Zawadzki, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+obligatory+role+of+endothelial+cells+in+the+relaxation+of+arterial+smooth+muscle+by+acetylcholine.">The obligatory role of endothelial cells in the relaxation of arterial smooth muscle by acetylcholine.</a> Nature. 288 (5789), 373-376 (1980).</li><li>Furchgott, R. F., Vanhoutte, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelium-derived+relaxing+and+contracting+factors.">Endothelium-derived relaxing and contracting factors.</a> The FASEB Journal. 3 (9), 2007-2018 (1989).</li><li>Feletou, M., Kohler, R., Vanhoutte, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelium-derived+vasoactive+factors+and+hypertension:+possible+roles+in+pathogenesis+and+as+treatment+targets.">Endothelium-derived vasoactive factors and hypertension: possible roles in pathogenesis and as treatment targets.</a> Current Hypertension Reports. 12 (4), 267-275 (2010).</li><li>Vanhoutte, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+dysfunction:+the+first+step+toward+coronary+arteriosclerosis.">Endothelial dysfunction: the first step toward coronary arteriosclerosis.</a> Circulation Journal. 73 (4), 595-601 (2009).</li><li>Feletou, M., Huang, Y., Vanhoutte, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelium-mediated+control+of+vascular+tone:+COX-1+and+COX-2+products.">Endothelium-mediated control of vascular tone: COX-1 and COX-2 products.</a> British Journal of Pharmacology. 164 (3), 894-912 (2011).</li><li>Harrison, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+and+molecular+mechanisms+of+endothelial+cell+dysfunction.">Cellular and molecular mechanisms of endothelial cell dysfunction.</a> Journal of Clinical Investigation. 100 (9), 2153 (1997).</li><li>Vanhoutte, P. M., Shimokawa, H., Tang, E. H., Feletou, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+dysfunction+and+vascular+disease.">Endothelial dysfunction and vascular disease.</a> Acta physiologica. 196 (2), 193-222 (2009).</li><li>Kl&#246;&#223;, S., Bouloumi&#233;, A., M&#252;lsch, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging+and+chronic+hypertension+decrease+expression+of+rat+aortic+soluble+guanylyl+cyclase.">Aging and chronic hypertension decrease expression of rat aortic soluble guanylyl cyclase.</a> Hypertension. 35 (1), 43-47 (2000).</li><li>Csiszar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging-induced+phenotypic+changes+and+oxidative+stress+impair+coronary+arteriolar+function.">Aging-induced phenotypic changes and oxidative stress impair coronary arteriolar function.</a> Circulation Research. 90 (11), 1159-1166 (2002).</li><li>Guo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+SIRT1+prevents+age-induced+impairment+of+vasodilator+responses+by+enhancing+the+expression+and+activity+of+soluble+guanylyl+cyclase+in+smooth+muscle+cells.">Endothelial SIRT1 prevents age-induced impairment of vasodilator responses by enhancing the expression and activity of soluble guanylyl cyclase in smooth muscle cells.</a> Cardiovascular Research. , (2018).</li><li>Auch-Schwelk, W., Katusic, Z. S., Vanhoutte, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitric+oxide+inactivates+endothelium-derived+contracting+factor+in+the+rat+aorta.">Nitric oxide inactivates endothelium-derived contracting factor in the rat aorta.</a> Hypertension. 19 (5), 442-445 (1992).</li><li>Tang, E. H., Feletou, M., Huang, Y., Man, R. Y., Vanhoutte, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acetylcholine+and+sodium+nitroprusside+cause+long-term+inhibition+of+EDCF-mediated+contractions.">Acetylcholine and sodium nitroprusside cause long-term inhibition of EDCF-mediated contractions.</a> American Journal of Physiology - Heart and Circulation Physiology. 289 (6), H2434-H2440 (2005).</li><li>Ghiadoni, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+function+and+common+carotid+artery+wall+thickening+in+patients+with+essential+hypertension.">Endothelial function and common carotid artery wall thickening in patients with essential hypertension.</a> Hypertension. 32 (1), 25-32 (1998).</li><li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+Impairment+of+Vascular+Structure+and+Functions.">Age-related Impairment of Vascular Structure and Functions.</a> Aging and Disease. 8 (5), 590-610 (2017).</li><li>Tabit, C. E., Chung, W. B., Hamburg, N. M., Vita, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+dysfunction+in+diabetes+mellitus:+Molecular+mechanisms+and+clinical+implications.">Endothelial dysfunction in diabetes mellitus: Molecular mechanisms and clinical implications.</a> Reviews in Endocrine &amp; Metabolic Disorders. 11 (1), 61-74 (2010).</li><li>Tanaka, K., Sata, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Roles+of+perivascular+adipose+tissue+in+the+pathogenesis+of+atherosclerosis.">Roles of perivascular adipose tissue in the pathogenesis of atherosclerosis.</a> Frontiers in Physiology. 9, 3 (2018).</li><li>Brown, N. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perivascular+adipose+tissue+in+vascular+function+and+disease:+a+review+of+current+research+and+animal+models.">Perivascular adipose tissue in vascular function and disease: a review of current research and animal models.</a> Arteriosclerosis Thrombosis and Vascular Biology. 34 (8), 1621-1630 (2014).</li><li>Lohn, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Periadventitial+fat+releases+a+vascular+relaxing+factor.">Periadventitial fat releases a vascular relaxing factor.</a> The FASEB Journal. 16 (9), 1057-1063 (2002).</li><li>G&#225;lvez-Prieto, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+reduction+in+the+amount+and+anti-contractile+effect+of+periadventitial+mesenteric+adipose+tissue+precedes+hypertension+development+in+spontaneously+hypertensive+rats.">A reduction in the amount and anti-contractile effect of periadventitial mesenteric adipose tissue precedes hypertension development in spontaneously hypertensive rats.</a> Hypertension research. 31 (7), 1415 (2008).</li><li>Gao, Y. J., Lu, C., Su, L. Y., Sharma, A., Lee, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+vascular+function+by+perivascular+adipose+tissue:+the+role+of+endothelium+and+hydrogen+peroxide.">Modulation of vascular function by perivascular adipose tissue: the role of endothelium and hydrogen peroxide.</a> British Journal of Pharmacology. 151 (3), 323-331 (2007).</li><li>Gao, Y. -. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perivascular+adipose+tissue+promotes+vasoconstriction:+the+role+of+superoxide+anion.">Perivascular adipose tissue promotes vasoconstriction: the role of superoxide anion.</a> Cardiovascular Research. 71 (2), 363-373 (2006).</li><li>Szasz, T., Webb, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perivascular+adipose+tissue:+more+than+just+structural+support.">Perivascular adipose tissue: more than just structural support.</a> Clinical Science (London). 122 (1), 1-12 (2012).</li><li>Ramirez, J. G., O'Malley, E. J., Ho, W. S. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pro-contractile+effects+of+perivascular+fat+in+health+and+disease.">Pro-contractile effects of perivascular fat in health and disease.</a> Brish Journal of Pharmacology. 174 (20), 3482-3495 (2017).</li><li>Hajer, G. R., van Haeften, T. W., Visseren, F. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose+tissue+dysfunction+in+obesity,+diabetes,+and+vascular+diseases.">Adipose tissue dysfunction in obesity, diabetes, and vascular diseases.</a> European Heart Journal. 29 (24), 2959-2971 (2008).</li><li>Mulvany, M. J., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contractile+properties+of+small+arterial+resistance+vessels+in+spontaneously+hypertensive+and+normotensive+rats.">Contractile properties of small arterial resistance vessels in spontaneously hypertensive and normotensive rats.</a> Circulation Research. 41 (1), 19-26 (1977).</li><li>Mulvany, M. J., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+properties+of+vascular+smooth+muscle+cells+in+situ.">Mechanical properties of vascular smooth muscle cells in situ.</a> Nature. 260 (5552), 617-619 (1976).</li><li>del Campo, L., Ferrer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wire+myography+to+study+vascular+tone+and+vascular+structure+of+isolated+mouse+arteries.">Wire myography to study vascular tone and vascular structure of isolated mouse arteries.</a> Methods in Molecular Biology. 1339, 255-276 (2015).</li><li>Dobrin, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+initial+length+on+length-tension+relationship+of+vascular+smooth+muscle.">Influence of initial length on length-tension relationship of vascular smooth muscle.</a> American Journal of Physiology. 225 (3), 664-670 (1973).</li><li>Xu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calorie+restriction+prevents+metabolic+aging+caused+by+abnormal+SIRT1+function+in+adipose+tissues.">Calorie restriction prevents metabolic aging caused by abnormal SIRT1 function in adipose tissues.</a> Diabetes. 64 (5), 1576-1590 (2015).</li><li>Sheykhzade, M., Nyborg, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caliber+dependent+calcitonin+gene-related+peptide-induced+relaxation+in+rat+coronary+arteries:+effect+of+K++on+the+tachyphylaxis.">Caliber dependent calcitonin gene-related peptide-induced relaxation in rat coronary arteries: effect of K+ on the tachyphylaxis.</a> European Journal of Pharmacology. 351 (1), 53-59 (1998).</li><li>Soltis, E. E., Cassis, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+perivascular+adipose+tissue+on+rat+aortic+smooth+muscle+responsiveness.">Influence of perivascular adipose tissue on rat aortic smooth muscle responsiveness.</a> Clinical and Experimental Hypertension A. 13 (2), 277-296 (1991).</li><li>Lohn, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Periadventitial+fat+releases+a+vascular+relaxing+factor.">Periadventitial fat releases a vascular relaxing factor.</a> FASEB Journal. 16 (9), 1057-1063 (2002).</li><li>Fesus, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adiponectin+is+a+novel+humoral+vasodilator.">Adiponectin is a novel humoral vasodilator.</a> Cardiovascular Research. 75 (4), 719-727 (2007).</li><li>Greenstein, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+inflammation+and+hypoxia+abolish+the+protective+anticontractile+properties+of+perivascular+fat+in+obese+patients.">Local inflammation and hypoxia abolish the protective anticontractile properties of perivascular fat in obese patients.</a> Circulation. 119 (12), 1661-1670 (2009).</li><li>Yudkin, J. S., Eringa, E., Stehouwer, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term="Vasocrine"+signalling+from+perivascular+fat:+a+mechanism+linking+insulin+resistance+to+vascular+disease.">"Vasocrine" signalling from perivascular fat: a mechanism linking insulin resistance to vascular disease.</a> Lancet. 365 (9473), 1817-1820 (2005).</li><li>Xia, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uncoupling+of+endothelial+nitric+oxide+synthase+in+perivascular+adipose+tissue+of+diet-induced+obese+mice.">Uncoupling of endothelial nitric oxide synthase in perivascular adipose tissue of diet-induced obese mice.</a> Arteriosclerosis Thrombosis and Vascular Biology. 36 (1), 78-85 (2016).</li><li>Xia, N., Forstermann, U., Li, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+resveratrol+on+eNOS+in+the+endothelium+and+the+perivascular+adipose+tissue.">Effects of resveratrol on eNOS in the endothelium and the perivascular adipose tissue.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1403 (1), 132-141 (2017).</li><li>Schinzari, F., Tesauro, M., Cardillo, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+and+perivascular+adipose+tissue+abnormalities+in+obesity-related+vascular+dysfunction:+novel+targets+for+treatment.">Endothelial and perivascular adipose tissue abnormalities in obesity-related vascular dysfunction: novel targets for treatment.</a> Journal of Cardiovascular Pharmacology. 69 (6), 360-368 (2017).</li><li>Liu, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipocalin-2+deficiency+prevents+endothelial+dysfunction+associated+with+dietary+obesity:+role+of+cytochrome+P450+2C+inhibition.">Lipocalin-2 deficiency prevents endothelial dysfunction associated with dietary obesity: role of cytochrome P450 2C inhibition.</a> British Journal of Pharmacology. 165 (2), 520-531 (2012).</li><li>Martinez-Quinones, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypertension+induced+morphological+and+physiological+changes+in+cells+of+the+arterial+wall.">Hypertension induced morphological and physiological changes in cells of the arterial wall.</a> American Journal of Hypertension. 31 (10), 1067-1078 (2018).</li><li>Outzen, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translational+value+of+mechanical+and+vasomotor+properties+of+mouse+isolated+mesenteric+resistance-sized+arteries.">Translational value of mechanical and vasomotor properties of mouse isolated mesenteric resistance-sized arteries.</a> Pharmacology Research and Perspectives. 3 (6), e00200 (2015).</li><li>Sheykhzade, M., Simonsen, A. H., Boonen, H. C., Outzen, E. M., Nyborg, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+ageing+on+the+passive+and+active+tension+and+pharmacodynamic+characteristics+of+rat+coronary+arteries:+age-dependent+increase+in+sensitivity+to+5-HT+and+K+.">Effect of ageing on the passive and active tension and pharmacodynamic characteristics of rat coronary arteries: age-dependent increase in sensitivity to 5-HT and K+.</a> Pharmacology. 90 (3-4), 160-168 (2012).</li></ol>

Aparte das pilhas endothelial, os sinais derivados do PVAT jogam um papel importante na regulação da reactividade do Tom de músculo liso30. O pvat saudável libera o não e o Adiponectina anti-inflammatory para exercer um efeito anticontractile nas artérias, que é perdida circunstâncias patológicas tais como a obesidade e a síndrome metabólica31,32. Nos Estados de doença, o pvat contribui para o desenvolvimento da disfunção end...

As dilatações e constrições das artérias são alcançadas por relaxações e contrações, respectivamente, de suas células musculares lisas vasculares. As alterações na responsividade vascular das pequenas artérias contribuem para a regulação homeostática da pressão arterial por nervos autonômicos e hormônios presentes no sangue (por exemplo, catecolaminas, angiotensina II, serotonina, vasopressina). No nível local, as respostas vasculares das células musculares lisas são moduladas por sinais de ambas as células endoteliais da íntima e do tecido adiposo em torno das artérias (Figura 1).
O endotélio não é apenas uma barreira passiva, mas também serve como uma superfície para trocar sinais entre o sangue e as células musculares lisas vasculares subjacentes. Ao liberar várias substâncias vasoativas, o endotélio desempenha um papel crítico no controle local das respostas do tônus vascular1. Por exemplo, em resposta à acetilcolina, o óxido nítrico sintase endotelial (Enos) é ativado no endotélio para produzir óxido nítrico (no), o que induz o relaxamento do músculo liso vascular subjacente ativando a guanil ciclase solúvel (SGC) 2. outras substâncias vasoativas incluem os produtos de ciclooxigenases (por exemplo, prostaciclina e tromboxano a2), lipoxigenase (por exemplo, ácidos 12-hidroxieticosatetraenoico, 12-Hete) e monooxigenases do citocromo P450 (hetes e ácidos epoxyeicosatrienoic, Eets), espécies reativas do oxigênio (ROS), e peptídeos vasoativas (por exemplo, endothelin-1 e angiotensina II), e fatores hiperpolarizante derivados do endothelium (edhf)3. Um delicado equilíbrio entre vasodilatadores derivados do endotélio e vasoconstritores mantém o Tom vasomotores local4,5.
A disfunção endotelial caracteriza-se pelo comprometimento da vasodilatação endotélio-dependente6, uma marca registrada do envelhecimento vascular7. Com a idade, a capacidade do endotélio de promover vasodilatação é progressivamente reduzida, devido em grande parte à diminuição da biodisponibilidade do no, bem como à expressão e função anormais de eNOS no endotélio e no sGC nas células musculares lisas vasculares8 , 9 anos de , 10. a redução da BIODISPONIBILIDADE não potenciou a produção de vasoconstritores dependentes do endotélio11,12. Nas artérias envelhecidas, a disfunção endotelial provoca hiperplasia nos meios de comunicação, como refletido pelos aumentos acentuados da espessura da parede, número de núcleos medial, que lembram o espessamento arterial na hipertensão e aterosclerose observada em humanos pacientes13,14. Além disso, condições fisiopatológicas como obesidade, diabetes ou hipertensão aceleram o desenvolvimento da disfunção endotelial15,16.
O tecido adiposo perivascular (PVAT) libera numerosas adipocinas para regular a estrutura vascular e a função17. O efeito anticontrátil do pvat é mediado por fatores relaxantes, como a adiponectina, não, o peróxido de hidrogênio e o sulfeto de hidrogênio18,19,20. No entanto, dependendo da localização e da condição fisiopatológica, o PVAT também pode aprimorar as respostas contráctil em várias artérias21. As substâncias pró-contrátil produzidas pelo pvat incluem a angiotensina II, a leptina, a resistina e as Ros22,23.  Na maioria dos estudos sobre vasos sanguíneos isolados, o PVAT tem sido considerado como um simples suporte estrutural para a vasculatura e, assim, removido durante a preparação dos segmentos de anel de vasos sanguíneos. Uma vez que a disfunção adiposa representa um fator de risco independente para hipertensão e complicações cardiovasculares associadas24, o pvat em torno dos vasos sanguíneos deve ser considerado ao investigar a responsividade vascular de diferentes artérias.
Os sistemas de múltiplos fios miográficos têm sido amplamente utilizados para investigar as funções vasomotoras de uma variedade de vasos sanguíneos, incluindo as artérias aorta, mesentérica, renal, femoral, cerebral e coronária25,26. Os protocolos aqui descritos utilizarão a miografia de arame para avaliar a responsividade vascular em artérias mesentéricas isoladas de modelos de camundongo geneticamente modificados, com foco especial na modulação por PVAT.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acetylcholine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A6625</td>
			<td>Stock concentration: 10-1 M 
			Working concentration: 10-10 to 10-5 M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-NAME (N&#969;-nitro-L-arginine methyl ester)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N5751</td>
			<td>Stock concentration: 3 x 10-2 M 
			Working concentration: 10-4 M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenylephrine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P6126</td>
			<td>Stock concentration: 10-2 M 
			Working concentration: 10-10 to 10-5 M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>U46619 (9,11-dideoxy-9&#945;,11&#945;methanoepoxy prostaglandin F2&#945;)</td>
			<td>Enzo</td>
			<td>BML-PG023-0001</td>
			<td>Stock concentration: 10-5 M 
			Working concentration: 1-3 x 10-8 M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiwire myograph</td>
			<td>Danish MyoTechnology (DMT)</td>
			<td>620M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PowerLab 4/26</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>ML848</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labchart7</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adipo-SIRT1 wild type mice</td>
			<td>Laboratory Animal Unit, The University of Hong Kong</td>
			<td>CULATR NO.: 4085-16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon-coated Petri dishes</td>
			<td>Danish MyoTechnology (DMT)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tungsten wires</td>
			<td>Danish MyoTechnology (DMT)</td>
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assessment of vascular tone responsiveness using isolated mesenteric arteries with a focus on modulation by perivascular adipose tissues

A responsividade do tônus vascular alterada aos estímulos fisiopatológicos contribui para o desenvolvimento de uma ampla gama de doenças cardiovasculares e metabólicas. A disfunção endotelial representa um grande culpado para a redução da vasodilatação e aumento da vasoconstrição das artérias. Tecidos adiposo (gordura) que cercam as artérias desempenham papéis importantes na regulação do relaxamento dependente do endotélio e/ou contração das células musculares lisas vasculares. As conversações cruzadas entre o endotélio e os tecidos adiposos perivasculares podem ser avaliadas ex vivo usando vasos sanguíneos montados por um sistema de miografia de arame. No entanto, devem ser estabelecidas definições ideais para as artérias derivadas de animais de diferentes espécies, idades, origens genéticas e/ou condições fisiopatológicas.

Exame das relações comprimento/tensão para obtenção do fator de normalização k
A quantidade de estiramento aplicada a um segmento do vaso influencia a extensão da interação da actina-miosina e, consequentemente, a força ativa máxima desenvolvida. Assim, para cada tipo de vaso sanguíneo, é necessário determinar a quantidade de estiramento necessária para a força ativa máxima para estudo...

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Assessment of Vascular Tone Responsiveness using Isolated Mesenteric Arteries with a Focus on Modulation by Perivascular Adipose Tissues

Avaliação da responsividade do tônus vascular usando artérias mesentéricas isoladas com foco na modulação por tecidos adiposos perivasculares

O protocolo descreve o uso de miografia de arame para avaliar a tensão isométrica transmural de artérias mesentéricas isoladas de camundongos, com especial consideração da modulação por fatores liberados das células endoteliais e dos tecidos adiposos perivasculares.

Altered vascular tone responsiveness to pathophysiological stimuli contributes to the development of a wide range of cardiovascular and metabolic ...

Protocolo muito rigoroso é necessário para que possamos comparar validamente os preparativos dos mesmos animais ou de diferentes animais ou artérias na presença ou ausência da gordura que os cerca ou na presença ou ausência do endotélio. A principal vantagem desta técnica experimental é que podemos comparar anéis da mesma artéria sob condição isométrica e, assim, validamente tirar conclusões sobre o impacto dos fatores experimentais que investigamos. Este protocolo fornece insights sobre a modulação da responsividade vascular por tecidos adiposos perivasculares de diferentes animais geneticamente modificados.Disfunções teciduais adiposas representam um fator de risco independente para a hipertensão arterial e suas complicações cardiovasculares associadas. Nosso miógrafo envolve múltiplas etapas complicadas que requerem extrema cautela em cada ponto para evitar danificar o vaso, especialmente durante a montagem, e para garantir que a nave responda adequadamente a vários estímulos. Inicie este procedimento com preparações e dissecção dos anéis arteriais mesenéricos descritos no protocolo de texto.Ligue o computador e abra o software de gravação de dados. Salve o experimento como um arquivo de dados de gráfico de laboratório com um novo nome para evitar substituir o arquivo de configuração original. Abra a janela de configurações de normalização e ajuste o fator K para um.Aceite os valores padrão para calibração de IPs, pressão de destino, tempo médio on-line e tempo de atraso. Clique bem para salvar as configurações. Selecione canais de interesse e insira o diâmetro do fio, os pontos finais do tecido e a leitura inicial do micrômetro na janela de normalização.Para iniciar o procedimento de normalização, aplique o primeiro estiramento passivo no vaso sanguíneo girando o parafuso do micrometro no sentido anti-horário. Depois de esperar três minutos para que a embarcação se estabilize, insira a nova leitura de micrômetro na janela de normalização. A tensão da parede é calculada automaticamente e mostrada como um ponto no gráfico.Após cada estiramento passivo, substitua o tampão de krebs de controle por um krebs de potássio alto iso-osmótico contendo 150 mililitros de potássio. Quando a contração atingir um platô em cerca de três minutos, registre a força ativa subtraindo a força passiva em cada trecho da força ativada do potássio. Calcule a tensão da parede, bem como os valores de circunferência interna.Remova a condição de potássio alto substituindo o tampão de potássio alto por um tampão de krebs fresco. Repita a lavagem por três vezes ao longo de cinco minutos. Repita as etapas de normalização induzindo trechos passivos seguidos de contração ativa em curvas alternativas até que a tensão ativa comece a diminuir.Lave bem o tampão de krebs de potássio alto e equilibre os preparos por mais 30 a 45 minutos. Redefinir as tensões basais a zero para que apenas as respostas ativas contratuais sejam registradas durante o experimento subsequente. Prepare e monte anéis arteriais emparelhados conforme descrito no protocolo de texto das seções adjacentes de cada artéria.Prepare um anel arterial com PVAT intacto e o outro com PVAT removido. Após a normalização, pré-contrate os segmentos arteriais com tampão de krebs de potássio alto adicionando 115 milialares de cloreto de potássio à câmara contendo krebs. Após a contração ao período do planalto, lave o potássio alto e substitua o tampão por um tampão de krebs aerado fresco.Repita a lavagem três vezes ao longo de cinco minutos. Repita a estimulação do cloreto de potássio e a lavagem três vezes e registre a resposta contracil máxima ao cloreto de potássio subtraindo a tensão da linha de base da tensão devido à estimulação do cloreto de potássio. Após a última contração e lavagem, reabasteca a câmara com tampão de krebs morno e aerado e deixe a artéria se recuperar por cerca de 30 minutos antes de realizar a próxima tarefa.A cada câmara, adicione quantidades cumulativas de fenilefrina para induzir os aumentos dependentes da concentração e a tensão isométrica das preparações quiescentes. Depois de adicionar a última dose de agonista, lave a droga completamente e reabasteça a câmara com tampão de krebs fresco. Plote as respostas dependentes da concentração como percentuais crescentes das contrações máximas induzidas pelo cloreto de potássio.Para avaliar a contribuição do óxido nítrico, incubar as preparações com o inibidor de sinthase de óxido nítrico L-NAME por 30 minutos antes da adição de fenilefrina. Para realizar uma segunda curva de resposta de concentração sequencialmente, lave a câmara completamente e repetidamente para remover todos os agonistas anteriores até que não sejam observadas mais alterações de tom. A normalização da relação comprimento-tensão foi realizada para artérias mesentéricas isoladas de modelos de camundongos alimentados com chow padrão ou uma dieta rica em gordura.Uma relação passivo de comprimento-tensão foi estabelecida pelo alongamento incremental dos segmentos da artéria até que uma circunferência interna correspondente a 100 milímetros de pressão transmural de mercúrio, ou IC100, foi obtida. Após cada trecho, 115 cloreto de potássio milimila foram aplicados para estimular contrações. As curvas de tensão de comprimento ativo foram traçadas a partir dos dados de força ativa no eixo Y e dos valores calculados de IC a partir dos dados do micrometro no eixo X.Um valor ic situado dentro do planalto máximo é IC1. O fator de normalização, K, foi calculado como a razão de IC1 e IC100, que poderia então ser aplicada a amostras do mesmo tipo de vaso no experimento subsequente. Aqui são mostradas gravações de saída das respostas vasoconstritores à fenilefrina em artérias mesentéricas com ou sem PVAT circundante.Concentrações cumulativas de fenilefrina foram aplicadas para estimular as contrações de artérias mesentéricas coletadas de um camundongo de 16 semanas. As respostas contratuais foram registradas e calculadas como uma porcentagem de 150 milimônios cloreto de potássio induzido contração máxima. A área sob as curvas de contração foi traçada para comparação.Note que pvat de adipose um camundongo provocou um efeito anticontile na resposta à fenilefrina. Ao obter contrações induzidas pelo KCL, as respostas devem ser estáveis e estáveis. Se a resposta ainda estiver aumentando após três administrações incrementais de KCL, a estimulação kcl pode ser necessária.Para alcançar as condições ideais das tensões, o passo de normalização é muito importante, pois determina a força para abrir os vasos sanguíneos. Se não for feito corretamente, afetará todo o experimento. Este protocolo pode ser aplicado a outras configurações, além de contração ou relaxamento induzido por fenilefrina.Por exemplo, na presença ou ausência de tecido adiposo perivascular, nervos autônomos ou endotélio. Com este protocolo, os pesquisadores podem examinar pequenos vasos sanguíneos de modelos animais doentes em diferentes condições fisiopatológicas, como obesidade, diabetes e doenças cardiovasculares.

Research

JoVE Journal

Biology

Right Hemihepatectomy by Suprahilar Intrahepatic Transection of the Right Hemipedicle using a Vascular Stapler

Hemihepatectomy direito por Transecção intra-hepática Suprahilar do Hemipedicle direito usando um grampeador Vascular

Successful hepatic resection requires profound anatomical knowledge and delicate surgical technique. Hemihepatectomies are mostly performed after ...

Biologia

The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity

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O Ex vivo Preparação microvasos isolada esquelético de Investigação da reatividade vascular

The isolated  microvessel preparation is an ex vivo preparation that allows for examination of the different contributions of  factors that control vessel ...

Using Digital Image Correlation to Characterize Local Strains on Vascular Tissue Specimens

Usando Correlação Digital de Imagem para caracterizar as cepas de locais vasculares amostras de tecido

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Analysis of Cell Suspensions Isolated from Solid Tissues by Spectral Flow Cytometry

Análise de suspensões celulares isoladas de tecidos sólidos por citometria de fluxo espectral

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Preparation of Adipose Progenitor Cells from Mouse Epididymal Adipose Tissues

Preparação de células progenitoras adiposas adiposas de tecidos adiposos epidímicos do rato

Obesity and metabolic disorders such as diabetes, heart disease, and cancer, are all associated with dramatic adipose tissue remodeling. Tissue-resident ...

Visualization and Quantification of Brown and Beige Adipose Tissues in Mice using [18F]FDG Micro-PET/MR Imaging

Visualization and Quantification of Brown and Beige Adipose Tissues in Mice using [18F]FDG Micro-PET/MR Imaging

Visualização e Quantificação de Tecidos Adiposos Marrons e Bege em Camundongos usando [18F]FDG Micro-PET/MR Imaging

Brown and beige adipocytes are now recognized as potential therapeutic targets for obesity and metabolic syndromes. Non-invasive molecular imaging methods ...

Mouse Abdominal Aortic Aneurysm Model Induced by Perivascular Application of Elastase

Modelo de Aneurisma De aootico Abdominal do Rato Induzido pela Aplicação Perivascular do Elastase

Abdominal aortic aneurysm (AAA), although primarily asymptomatic, is potentially life-threatening as the rupture of AAA usually has a devastating outcome. ...

Semi-Automated Isolation of Murine White Adipose Tissue

Semi-Automated Isolation of the Stromal Vascular Fraction from Murine White Adipose Tissue Using a Tissue Dissociator

Semi-Automated Isolation of the Stromal Vascular Fraction from Murine White Adipose Tissue Using a Tissue Dissociator (Video) | JoVE 

Isolamento Semi-Automatizado da Fração Vascular Estromal do Tecido Adiposo Branco Murino Usando um Dissociador de Tecido

The in vitro study of white, brown, and beige adipocyte differentiation enables the investigation of cell-autonomous functions of adipocytes and their ...