Name: assessment of vascular tone responsiveness using isolated mesenteric arteries with a focus on modulation by perivascular adipose tissues
Uploaded: 2019-06-03T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessment of Vascular Tone Responsiveness using Isolated Mesenteric Arteries with a Focus on Modulation by Perivascular Adipose Tissues at JoVE.com

Detta arbete var finansiellt stöd av bidrag från forsknings bidrag rådet i Hongkong [17124718 och 17121714], Hong Kong Health och Medical forsknings fond [13142651 och 13142641], Collaborative forsknings fonden i Hongkong [C7055-14G], och National Basic Kinas forsknings program [973 program 2015CB553603].

Alla djur som användes för följande studier tillhandahölls av medicinska fakulteten, universitetet i Hong Kong. Etiskt godkännande erhölls från institutions kommittén för användning av försöks djur för undervisning och forskning (CULATR, No.: 4085-16).
1. förberedelser
<ol><li>Beredning av droger
	<ol>
<li>Förvara läkemedel på lämpligt sätt enligt vad som anges i material säkerhets data bladet (MSDS) omedelbart efter att du fått dem. Lös upp läkemedlen...

<ol>
	<li>Furchgott, R. F., Zawadzki, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+obligatory+role+of+endothelial+cells+in+the+relaxation+of+arterial+smooth+muscle+by+acetylcholine.">The obligatory role of endothelial cells in the relaxation of arterial smooth muscle by acetylcholine.</a> Nature. 288 (5789), 373-376 (1980).</li><li>Furchgott, R. F., Vanhoutte, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelium-derived+relaxing+and+contracting+factors.">Endothelium-derived relaxing and contracting factors.</a> The FASEB Journal. 3 (9), 2007-2018 (1989).</li><li>Feletou, M., Kohler, R., Vanhoutte, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelium-derived+vasoactive+factors+and+hypertension:+possible+roles+in+pathogenesis+and+as+treatment+targets.">Endothelium-derived vasoactive factors and hypertension: possible roles in pathogenesis and as treatment targets.</a> Current Hypertension Reports. 12 (4), 267-275 (2010).</li><li>Vanhoutte, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+dysfunction:+the+first+step+toward+coronary+arteriosclerosis.">Endothelial dysfunction: the first step toward coronary arteriosclerosis.</a> Circulation Journal. 73 (4), 595-601 (2009).</li><li>Feletou, M., Huang, Y., Vanhoutte, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelium-mediated+control+of+vascular+tone:+COX-1+and+COX-2+products.">Endothelium-mediated control of vascular tone: COX-1 and COX-2 products.</a> British Journal of Pharmacology. 164 (3), 894-912 (2011).</li><li>Harrison, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+and+molecular+mechanisms+of+endothelial+cell+dysfunction.">Cellular and molecular mechanisms of endothelial cell dysfunction.</a> Journal of Clinical Investigation. 100 (9), 2153 (1997).</li><li>Vanhoutte, P. M., Shimokawa, H., Tang, E. H., Feletou, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+dysfunction+and+vascular+disease.">Endothelial dysfunction and vascular disease.</a> Acta physiologica. 196 (2), 193-222 (2009).</li><li>Kl&#246;&#223;, S., Bouloumi&#233;, A., M&#252;lsch, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging+and+chronic+hypertension+decrease+expression+of+rat+aortic+soluble+guanylyl+cyclase.">Aging and chronic hypertension decrease expression of rat aortic soluble guanylyl cyclase.</a> Hypertension. 35 (1), 43-47 (2000).</li><li>Csiszar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging-induced+phenotypic+changes+and+oxidative+stress+impair+coronary+arteriolar+function.">Aging-induced phenotypic changes and oxidative stress impair coronary arteriolar function.</a> Circulation Research. 90 (11), 1159-1166 (2002).</li><li>Guo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+SIRT1+prevents+age-induced+impairment+of+vasodilator+responses+by+enhancing+the+expression+and+activity+of+soluble+guanylyl+cyclase+in+smooth+muscle+cells.">Endothelial SIRT1 prevents age-induced impairment of vasodilator responses by enhancing the expression and activity of soluble guanylyl cyclase in smooth muscle cells.</a> Cardiovascular Research. , (2018).</li><li>Auch-Schwelk, W., Katusic, Z. S., Vanhoutte, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitric+oxide+inactivates+endothelium-derived+contracting+factor+in+the+rat+aorta.">Nitric oxide inactivates endothelium-derived contracting factor in the rat aorta.</a> Hypertension. 19 (5), 442-445 (1992).</li><li>Tang, E. H., Feletou, M., Huang, Y., Man, R. Y., Vanhoutte, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acetylcholine+and+sodium+nitroprusside+cause+long-term+inhibition+of+EDCF-mediated+contractions.">Acetylcholine and sodium nitroprusside cause long-term inhibition of EDCF-mediated contractions.</a> American Journal of Physiology - Heart and Circulation Physiology. 289 (6), H2434-H2440 (2005).</li><li>Ghiadoni, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+function+and+common+carotid+artery+wall+thickening+in+patients+with+essential+hypertension.">Endothelial function and common carotid artery wall thickening in patients with essential hypertension.</a> Hypertension. 32 (1), 25-32 (1998).</li><li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+Impairment+of+Vascular+Structure+and+Functions.">Age-related Impairment of Vascular Structure and Functions.</a> Aging and Disease. 8 (5), 590-610 (2017).</li><li>Tabit, C. E., Chung, W. B., Hamburg, N. M., Vita, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+dysfunction+in+diabetes+mellitus:+Molecular+mechanisms+and+clinical+implications.">Endothelial dysfunction in diabetes mellitus: Molecular mechanisms and clinical implications.</a> Reviews in Endocrine &amp; Metabolic Disorders. 11 (1), 61-74 (2010).</li><li>Tanaka, K., Sata, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Roles+of+perivascular+adipose+tissue+in+the+pathogenesis+of+atherosclerosis.">Roles of perivascular adipose tissue in the pathogenesis of atherosclerosis.</a> Frontiers in Physiology. 9, 3 (2018).</li><li>Brown, N. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perivascular+adipose+tissue+in+vascular+function+and+disease:+a+review+of+current+research+and+animal+models.">Perivascular adipose tissue in vascular function and disease: a review of current research and animal models.</a> Arteriosclerosis Thrombosis and Vascular Biology. 34 (8), 1621-1630 (2014).</li><li>Lohn, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Periadventitial+fat+releases+a+vascular+relaxing+factor.">Periadventitial fat releases a vascular relaxing factor.</a> The FASEB Journal. 16 (9), 1057-1063 (2002).</li><li>G&#225;lvez-Prieto, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+reduction+in+the+amount+and+anti-contractile+effect+of+periadventitial+mesenteric+adipose+tissue+precedes+hypertension+development+in+spontaneously+hypertensive+rats.">A reduction in the amount and anti-contractile effect of periadventitial mesenteric adipose tissue precedes hypertension development in spontaneously hypertensive rats.</a> Hypertension research. 31 (7), 1415 (2008).</li><li>Gao, Y. J., Lu, C., Su, L. Y., Sharma, A., Lee, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+vascular+function+by+perivascular+adipose+tissue:+the+role+of+endothelium+and+hydrogen+peroxide.">Modulation of vascular function by perivascular adipose tissue: the role of endothelium and hydrogen peroxide.</a> British Journal of Pharmacology. 151 (3), 323-331 (2007).</li><li>Gao, Y. -. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perivascular+adipose+tissue+promotes+vasoconstriction:+the+role+of+superoxide+anion.">Perivascular adipose tissue promotes vasoconstriction: the role of superoxide anion.</a> Cardiovascular Research. 71 (2), 363-373 (2006).</li><li>Szasz, T., Webb, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perivascular+adipose+tissue:+more+than+just+structural+support.">Perivascular adipose tissue: more than just structural support.</a> Clinical Science (London). 122 (1), 1-12 (2012).</li><li>Ramirez, J. G., O'Malley, E. J., Ho, W. S. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pro-contractile+effects+of+perivascular+fat+in+health+and+disease.">Pro-contractile effects of perivascular fat in health and disease.</a> Brish Journal of Pharmacology. 174 (20), 3482-3495 (2017).</li><li>Hajer, G. R., van Haeften, T. W., Visseren, F. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose+tissue+dysfunction+in+obesity,+diabetes,+and+vascular+diseases.">Adipose tissue dysfunction in obesity, diabetes, and vascular diseases.</a> European Heart Journal. 29 (24), 2959-2971 (2008).</li><li>Mulvany, M. J., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contractile+properties+of+small+arterial+resistance+vessels+in+spontaneously+hypertensive+and+normotensive+rats.">Contractile properties of small arterial resistance vessels in spontaneously hypertensive and normotensive rats.</a> Circulation Research. 41 (1), 19-26 (1977).</li><li>Mulvany, M. J., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+properties+of+vascular+smooth+muscle+cells+in+situ.">Mechanical properties of vascular smooth muscle cells in situ.</a> Nature. 260 (5552), 617-619 (1976).</li><li>del Campo, L., Ferrer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wire+myography+to+study+vascular+tone+and+vascular+structure+of+isolated+mouse+arteries.">Wire myography to study vascular tone and vascular structure of isolated mouse arteries.</a> Methods in Molecular Biology. 1339, 255-276 (2015).</li><li>Dobrin, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+initial+length+on+length-tension+relationship+of+vascular+smooth+muscle.">Influence of initial length on length-tension relationship of vascular smooth muscle.</a> American Journal of Physiology. 225 (3), 664-670 (1973).</li><li>Xu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calorie+restriction+prevents+metabolic+aging+caused+by+abnormal+SIRT1+function+in+adipose+tissues.">Calorie restriction prevents metabolic aging caused by abnormal SIRT1 function in adipose tissues.</a> Diabetes. 64 (5), 1576-1590 (2015).</li><li>Sheykhzade, M., Nyborg, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caliber+dependent+calcitonin+gene-related+peptide-induced+relaxation+in+rat+coronary+arteries:+effect+of+K++on+the+tachyphylaxis.">Caliber dependent calcitonin gene-related peptide-induced relaxation in rat coronary arteries: effect of K+ on the tachyphylaxis.</a> European Journal of Pharmacology. 351 (1), 53-59 (1998).</li><li>Soltis, E. E., Cassis, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+perivascular+adipose+tissue+on+rat+aortic+smooth+muscle+responsiveness.">Influence of perivascular adipose tissue on rat aortic smooth muscle responsiveness.</a> Clinical and Experimental Hypertension A. 13 (2), 277-296 (1991).</li><li>Lohn, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Periadventitial+fat+releases+a+vascular+relaxing+factor.">Periadventitial fat releases a vascular relaxing factor.</a> FASEB Journal. 16 (9), 1057-1063 (2002).</li><li>Fesus, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adiponectin+is+a+novel+humoral+vasodilator.">Adiponectin is a novel humoral vasodilator.</a> Cardiovascular Research. 75 (4), 719-727 (2007).</li><li>Greenstein, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+inflammation+and+hypoxia+abolish+the+protective+anticontractile+properties+of+perivascular+fat+in+obese+patients.">Local inflammation and hypoxia abolish the protective anticontractile properties of perivascular fat in obese patients.</a> Circulation. 119 (12), 1661-1670 (2009).</li><li>Yudkin, J. S., Eringa, E., Stehouwer, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term="Vasocrine"+signalling+from+perivascular+fat:+a+mechanism+linking+insulin+resistance+to+vascular+disease.">"Vasocrine" signalling from perivascular fat: a mechanism linking insulin resistance to vascular disease.</a> Lancet. 365 (9473), 1817-1820 (2005).</li><li>Xia, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uncoupling+of+endothelial+nitric+oxide+synthase+in+perivascular+adipose+tissue+of+diet-induced+obese+mice.">Uncoupling of endothelial nitric oxide synthase in perivascular adipose tissue of diet-induced obese mice.</a> Arteriosclerosis Thrombosis and Vascular Biology. 36 (1), 78-85 (2016).</li><li>Xia, N., Forstermann, U., Li, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+resveratrol+on+eNOS+in+the+endothelium+and+the+perivascular+adipose+tissue.">Effects of resveratrol on eNOS in the endothelium and the perivascular adipose tissue.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1403 (1), 132-141 (2017).</li><li>Schinzari, F., Tesauro, M., Cardillo, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+and+perivascular+adipose+tissue+abnormalities+in+obesity-related+vascular+dysfunction:+novel+targets+for+treatment.">Endothelial and perivascular adipose tissue abnormalities in obesity-related vascular dysfunction: novel targets for treatment.</a> Journal of Cardiovascular Pharmacology. 69 (6), 360-368 (2017).</li><li>Liu, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipocalin-2+deficiency+prevents+endothelial+dysfunction+associated+with+dietary+obesity:+role+of+cytochrome+P450+2C+inhibition.">Lipocalin-2 deficiency prevents endothelial dysfunction associated with dietary obesity: role of cytochrome P450 2C inhibition.</a> British Journal of Pharmacology. 165 (2), 520-531 (2012).</li><li>Martinez-Quinones, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypertension+induced+morphological+and+physiological+changes+in+cells+of+the+arterial+wall.">Hypertension induced morphological and physiological changes in cells of the arterial wall.</a> American Journal of Hypertension. 31 (10), 1067-1078 (2018).</li><li>Outzen, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translational+value+of+mechanical+and+vasomotor+properties+of+mouse+isolated+mesenteric+resistance-sized+arteries.">Translational value of mechanical and vasomotor properties of mouse isolated mesenteric resistance-sized arteries.</a> Pharmacology Research and Perspectives. 3 (6), e00200 (2015).</li><li>Sheykhzade, M., Simonsen, A. H., Boonen, H. C., Outzen, E. M., Nyborg, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+ageing+on+the+passive+and+active+tension+and+pharmacodynamic+characteristics+of+rat+coronary+arteries:+age-dependent+increase+in+sensitivity+to+5-HT+and+K+.">Effect of ageing on the passive and active tension and pharmacodynamic characteristics of rat coronary arteries: age-dependent increase in sensitivity to 5-HT and K+.</a> Pharmacology. 90 (3-4), 160-168 (2012).</li></ol>

Bortsett från endotelcellerna, signaler som härrör från pvat spelar en viktig roll i regleringen av smidig muskeltonus reaktivitet30. Friska pvat befriar ingen och antiinflammatoriska adiponectin att utöva en anti-kontraktila effekt på artärerna, som går förlorad under sjukdoms tillstånd såsom fetma och metabola syndromet31,32. I sjukdoms tillstånd, pvat bidrar till utvecklingen av endotelial dysfunktion och andra kardiovaskul?...

Dilatationer och sammandragningar av artärer uppnås genom lättnader och kontraktioner, respektive, av deras vaskulära glatt muskel celler. Förändringar i vaskulär respons hos små artärer bidrar till homeostatiska regleringen av arteriellt blod tryck genom autonoma nerver och hormoner som finns i blodet (t. ex. katekolaminer, angiotensin II, serotonin, vasopressin). På lokal nivå, de vaskulära Svaren av glatt muskel celler moduleras av signaler från både endotelcellerna i intima och fett vävnad som omger artärerna (figur 1).
Endotelet är inte bara en passiv barriär, men fungerar också som en yta för att utbyta signaler mellan blodet och de underliggande vaskulära glatt muskel celler. Genom att släppa olika vasoaktiva ämnen, endotelet spelar en kritisk roll i den lokala kontrollen av vaskulär tonen svar1. Till exempel, som svar på acetylkolin, endotelceller kväve oxid syntas (Enos) aktive ras i endotelet att producera kväve oxid (no), som inducerar avslappning av den underliggande vaskulär glatt mus kula tur genom att aktivera lösliga guanylyl guanylatcyklas (SGC) 2. andra vasoaktiva substanser inkluderar produkter av cyklooxygenaser (t. ex. prostacyklin och tromboxan2), lipoxygenas (t. ex. 12-hydroxyeicosatetraenoic syror, 12-hete) och cytokrom P450 Monooxygenaser (hetes och epoxyeicosatrienoic syror, EETs), reaktiva syreradikaler (ROS), och vasoaktiva peptider (t. ex. endotelin-1 och angiotensin II), och endotel-derived hyperpolariserande faktorer (EDHF)3. En delikat balans mellan endotel-härledda vasodilatorer och vasoconstrictors bibehålla den lokala vasomotoriska tonen4,5.
Endotelial dysfunktion kännetecknas av nedskrivning i endotel-beroende vasodilatation6, ett kännetecken för vaskulär åldrande7. Med åldern, förmågan hos endotelet att främja vasodilatation reduceras successivt, beror till stor del på en minskad ingen bio tillgänglighet, liksom onormal uttryck och funktion av eNOS i endotelet och sGC i den vaskulära glatt muskel celler8 , 9 för att , 10. reducerad ingen bio tillgänglighet potentierar produktionen av endotelium-beroende vasoconstrictors11,12. I åldern artärer, endotelial dysfunktion orsakar hyperplasi i media, som återspeglas av den markerade ökningar i vägg tjock lek, antal mediala kärnor, som påminner om den arteriella förtjockning i hypertoni och ateroskleros observerats i mänskliga patienter13,14. Dessutom, patofysiologiska tillstånd såsom fetma, diabetes eller hypertoni påskynda utvecklingen av endotelial dysfunktion15,16.
Perivaskulär fett vävnad (PVAT) frigör många adipokines att reglera vaskulär struktur och funktion17. Den anti-kontraktila effekten av pvat medieras av avslappnande faktorer, såsom adiponectin, no, väteperoxid och svavelväte18,19,20. Emellertid, beroende på plats och patofysiologiska tillstånd, PVAT också kan öka kontraktila svar i olika artärer21. De Pro contractile ämnen som produceras av pvat inkluderar angiotensin-II, leptin, resistin, och ros22,23.  I de flesta av studierna på isolerade blod kärl, har PVAT ansetts som ett enkelt strukturellt stöd för kärl teckning och därmed avlägsnas under beredningen av blod kärl ring segment. Eftersom fett dysfunktion representerar en oberoende riskfaktor för hypertoni och associerade kardiovaskulära komplikationer24, bör den pvat som omger blod kärlen övervägas när man undersöker den vaskulära responsen hos olika artärer.
Multi Wire myograph system har använts i stor utsträckning för att undersöka vasomotoriska funktioner i en mängd olika blod kärl, inklusive aorta, mesenteric, renal, femoral, cerebral och kranskärl25,26. De protokoll som beskrivs häri kommer att använda trådmyografi för att utvärdera vaskulär reaktionsförmåga i mesenteriala artärer isolerade från genetiskt modifierade mus modeller, med särskilt fokus på modulering av PVAT.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acetylcholine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A6625</td>
			<td>Stock concentration: 10-1 M 
			Working concentration: 10-10 to 10-5 M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-NAME (N&#969;-nitro-L-arginine methyl ester)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N5751</td>
			<td>Stock concentration: 3 x 10-2 M 
			Working concentration: 10-4 M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenylephrine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P6126</td>
			<td>Stock concentration: 10-2 M 
			Working concentration: 10-10 to 10-5 M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>U46619 (9,11-dideoxy-9&#945;,11&#945;methanoepoxy prostaglandin F2&#945;)</td>
			<td>Enzo</td>
			<td>BML-PG023-0001</td>
			<td>Stock concentration: 10-5 M 
			Working concentration: 1-3 x 10-8 M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiwire myograph</td>
			<td>Danish MyoTechnology (DMT)</td>
			<td>620M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PowerLab 4/26</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>ML848</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labchart7</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adipo-SIRT1 wild type mice</td>
			<td>Laboratory Animal Unit, The University of Hong Kong</td>
			<td>CULATR NO.: 4085-16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon-coated Petri dishes</td>
			<td>Danish MyoTechnology (DMT)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tungsten wires</td>
			<td>Danish MyoTechnology (DMT)</td>
			<td>300331</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical tools</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessment of vascular tone responsiveness using isolated mesenteric arteries with a focus on modulation by perivascular adipose tissues

Förändrad vaskulär tonen lyhördhet för patofysiologiska stimuli bidrar till utvecklingen av ett brett spektrum av kardiovaskulära och metabola sjukdomar. Endotelial dysfunktion representerar en stor skyldige för minskad vasodilatation och förbättrad vasokonstriktion av artärer. Adipose (fett) vävnader som omger artärerna spela viktiga roller i regleringen av endotel-beroende avslappning och/eller sammandragning av de vaskulära glatt muskel celler. Kors samtalen mellan endotelet och perivaskulär fett vävnad kan bedömas ex vivo med hjälp av monterade blod kärl genom ett trådmyografisystem. Dock bör optimala inställningar fastställas för artärer som härrör från djur av olika arter, åldrar, genetiska bakgrunder och/eller patofysiologiska tillstånd.

Undersökning av längd/spännings förhållanden för att erhålla normaliserings faktorn k
Den sträcka som appliceras på ett fartygs segment påverkar omfattningen av aktin-myosins interaktion och därmed den maximala aktiva kraft som utvecklas. Således, för varje typ av blod kärl, bestämma mängden stretch som behövs för maximal aktiv kraft krävs för ordentlig myography studier. Här, norma...

Watch this Scientific Journal Video about Assessment of Vascular Tone Responsiveness using Isolated Mesenteric Arteries with a Focus on Modulation by Perivascular Adipose Tissues at JoVE.com

Assessment of Vascular Tone Responsiveness using Isolated Mesenteric Arteries with a Focus on Modulation by Perivascular Adipose Tissues

Bedömning av vaskulär tonen respons med isolerade mesenteric artärer med fokus på modulering av perivaskulär adipose vävnader

Protokollet beskriver användningen av tråd myography att utvärdera transmural ISO metrisk spänning av mesenteriala artärer isolerade från möss, med särskild hänsyn till modulering av faktorer som frigörs från endotelceller och perivaskulär fett vävnad.

Altered vascular tone responsiveness to pathophysiological stimuli contributes to the development of a wide range of cardiovascular and metabolic ...

Mycket strikt protokoll krävs så att vi kan giltigt jämföra preparat från samma djur eller från olika djur eller artärer i närvaro eller frånvaro av det fett som omger dem eller i närvaro eller frånvaro av endotelet. Den största fördelen med denna experimentella teknik är att vi kan jämföra ringar av samma artär under isometriskt tillstånd och därmed på ett giltigt sätt dra slutsatser rörande påverkan av de experimentella faktorer som vi undersöker. Detta protokoll ger insikter i modulering av vaskulär lyhördhet genom perivaskulära fettvävnader av olika genetiskt modifierade djur.Fettvävnad dysfunktioner utgör en oberoende riskfaktor för högt blodtryck och dess associerade kardiovaskulära komplikationer. Vår myograph involverar flera komplicerade steg som kräver extrem försiktighet vid varje punkt för att undvika att skada kärlet, särskilt under montering, och för att säkerställa att kärlet reagerar på lämpligt sätt på olika stimuli. Inled detta förfarande med preparat och dissektion av de mesenteriala artärringarna enligt beskrivningen i textprotokollet.Slå på datorn och öppna datainspelningsprogrammet. Spara experimentet som en labbdiagramdatafil med ett nytt namn för att undvika att den ursprungliga inställningsfilen skrivs över. Öppna fönstret för normaliseringsinställningar och ställ in K-faktorn på en.Acceptera standardvärdena för IPs-kalibrering, måltryck, online medelvärde tid och fördröjningstid. Klicka på okej för att spara inställningarna. Välj kanaler av intresse och mata in tråddiametern, vävnadsändpunkterna och den initiala mikrometeravläsningen i normaliseringsfönstret.För att starta normaliseringsproceduren, applicera den första passiva sträckning på blodkärlet genom att vrida mikrometerskruven moturs. Efter att ha väntat tre minuter på att kärlet ska stabiliseras, mata in den nya mikrometeravläsningen i normaliseringsfönstret. Väggspänningen beräknas automatiskt och visas som en punkt på grafen.Efter varje passiv sträckning, byt ut kontroll-krebs-bufferten mot en iso-osmotisk hög kalium-krebs som innehåller 150 millimol kaliumklorid. När kontraktionen når en platå på cirka tre minuter, registrera den aktiva kraften genom att subtrahera den passiva kraften vid varje sträcka från den kaliumaktiverade kraften. Beräkna väggspänningen, samt de interna omkretsens värden.Avlägsna det höga kaliumtillståndet genom att ersätta den höga kaliumbufferten med färsk krebsbuffert. Upprepa tvätt i tre gånger under fem minuter. Upprepa normaliseringsstegen genom att inducera passiva sträckor följt av aktiv kontraktion i alternativa varv tills den aktiva spänningen börjar minska.Tvätta noggrant bort den höga kaliumsporbbufferten och jämvikt preparaten i ytterligare 30 till 45 minuter. Återställ basala spänningarna till noll så att endast aktiva kontraktila svar kommer att registreras under det efterföljande experimentet. Förbered och montera ihopparade arteriella ringar enligt beskrivningen i textprotokollet från de intilliggande sektionerna av varje artär.Förbered en arteriell ring med PVAT intakt och den andra med PVAT bort. Efter normalisering, precontract de arteriella segmenten med hög kalium krebs buffert genom att lägga 115 millimolar kaliumklorid lösning till kammaren som innehåller krebs. Efter kontraktion till platåperioden, tvätta ur det höga kalium och ersätta bufferten med färsk luftad krebs buffert.Upprepa tvätt tre gånger under fem minuter. Upprepa kaliumkloridstimuleringen och tvättningen tre gånger och registrera maximal kontraktil svar på kaliumklorid genom att subtrahera baslinjen spänningen från spänningen på grund av kaliumklorid stimulering. Efter den sista sammandragning och tvättning, fylla på kammaren med varm, luftade krebs buffert och låta artären att återhämta sig i ca 30 minuter innan du utför nästa uppgift.Till varje kammare, lägga till kumulativa mängder av fenylefat för att inducera den koncentrationsberoende ökar och isometrisk spänning av de quiescent preparaten. Efter att ha lagt den sista dosen av agonist, tvätta ut läkemedlet noggrant och fylla på kammaren med färsk krebs buffert. Rita koncentrationen beroende svar som ökande procentsatser av kaliumklorid inducerad maximal sammandragningar.För att bedöma bidraget av kväveoxid, inkubera preparaten med kväveoxidsyntashämmaren L-NAME i 30 minuter före tillsats av fenylefrin. För att utföra en andra koncentrationsresponskurva sekventiellt, tvätta kammaren helt och upprepade gånger för att ta bort alla tidigare agonister tills inga ytterligare förändringar i tonen observeras. Normalisering av längd-spänning förhållandet utfördes för mesenteriala artärer isolerade från mus modeller matas med standard chow eller en fettrik kost.En passiv längd-spänning relation fastställdes genom stegvis sträckning av segmenten artär tills en inre omkrets som motsvarar 100 millimeter kvicksilver transmural tryck, eller IC100, erhölls. Efter varje sträckning applicerades 115 millimol kaliumklorid för att stimulera sammandragningar. De aktiva längdspänningskurvorna ritades från den aktiva kraftdatan på Y-axeln och de beräknade IC-värdena från mikrometerdata på X-axeln.Ett IC-värde som ligger inom toppplatån är IC1. Normaliseringsfaktorn, K, beräknades som förhållandet mellan IC1 och IC100, som sedan kunde tillämpas på prover av samma kärltyp i det efterföljande försöket. Visas här är utgångsinspelningar av kärlsammandragande svaren till fenyleefrin i mesenteriala artärer med eller utan omgivande PVAT.Kumulativa koncentrationer av fenylephrine tillämpades för att stimulera sammandragningar av mesenteriala artärer som samlats in från 16 veckor gamla adiposet en möss. De kontraktila svaren registrerades och beräknades som en procentandel av 150 millimolar kaliumklorid inducerad maximal kontraktion. Området under kontraktionskurvorna ritades för jämförelse.Observera att PVAT från adiposet en möss framkallat en anti-kontraktil effekt på svaret på fenylefrin. Vid erhållande av KCL-inducerade sammandragningar måste svaren vara stabila och stadiga. Om svaret fortfarande ökar efter tre stegvisa administrering av KCL, kan KCL-stimulering behövas.För att uppnå optimala förhållanden av spänningarna är normaliseringssteget mycket viktigt, eftersom detta bestämmer kraften för att öppna blodkärlen. Om det inte görs på rätt sätt, kommer det att påverka hela experimentet. Detta protokoll kan tillämpas på andra inställningar utöver fenylefrin-inducerad sammandragning eller avkoppling.Till exempel, i närvaro eller frånvaro av perivaskulär fettvävnad, autonoma nerver, eller endotel. Med detta protokoll kan forskare undersöka små blodkärl från sjuka djurmodeller under olika patofysiologiska tillstånd, såsom fetma, diabetes och hjärt-kärlsjukdomar.

Research

JoVE Journal

Biology

Right Hemihepatectomy by Suprahilar Intrahepatic Transection of the Right Hemipedicle using a Vascular Stapler

Rätt Hemihepatectomy av Suprahilar Intrahepatisk transection av Right Hemipedicle med en vaskulär häftapparat

Successful hepatic resection requires profound anatomical knowledge and delicate surgical technique. Hemihepatectomies are mostly performed after ...

The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity

The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity

Den Ex vivo Isolerad Skeletal mikrokärlsbildning Förberedelse för undersökning av vaskulär reaktivitet

The isolated  microvessel preparation is an ex vivo preparation that allows for examination of the different contributions of  factors that control vessel ...

Using Digital Image Correlation to Characterize Local Strains on Vascular Tissue Specimens

Med hjälp av digital bild Korrelation att karaktärisera lokala stammar på Kärlvävnadsprover

Characterization of the mechanical behavior of biological and engineered soft tissues is a central component of fundamental biomedical research and ...

Analysis of Cell Suspensions Isolated from Solid Tissues by Spectral Flow Cytometry

Analys av cellsuspensioner Isolerade från fasta vävnader från Spectral flödescytometri

Flow cytometry has been used for the past 40 years to define and analyze the phenotype of lymphoid and other hematopoietic cells. Initially restricted to ...

Differentiation Capacity of Human Aortic Perivascular Adipose Progenitor Cells

Differentiering kapacitet av mänskliga aorta perivaskulär Adipose stamceller

Adipose tissue is a rich source of multi-potent mesenchymal stem cells (MSC) capable of differentiating into osteogenic, adipogenic, and chondrogenic ...

Preparation of Adipose Progenitor Cells from Mouse Epididymal Adipose Tissues

Beredning av fett stamceller från mus epididymal fettvävnader

Obesity and metabolic disorders such as diabetes, heart disease, and cancer, are all associated with dramatic adipose tissue remodeling. Tissue-resident ...

Visualization and Quantification of Brown and Beige Adipose Tissues in Mice using [18F]FDG Micro-PET/MR Imaging

Visualization and Quantification of Brown and Beige Adipose Tissues in Mice using [18F]FDG Micro-PET/MR Imaging

Visualisering och kvantifiering av bruna och beige fettvävnader hos möss med [18F]FDG Micro-PET/MR Imaging

Brown and beige adipocytes are now recognized as potential therapeutic targets for obesity and metabolic syndromes. Non-invasive molecular imaging methods ...

Mouse Abdominal Aortic Aneurysm Model Induced by Perivascular Application of Elastase

Mus abdominal aortaaneurysm modell inducerad av perivaskulär applicering av elastas

Abdominal aortic aneurysm (AAA), although primarily asymptomatic, is potentially life-threatening as the rupture of AAA usually has a devastating outcome. ...

Semi-Automated Isolation of Murine White Adipose Tissue

Semi-Automated Isolation of the Stromal Vascular Fraction from Murine White Adipose Tissue Using a Tissue Dissociator

Semi-Automated Isolation of the Stromal Vascular Fraction from Murine White Adipose Tissue Using a Tissue Dissociator (Video) | JoVE 

Halvautomatisk isolering av den stromala vaskulära fraktionen från murin vit fettvävnad med användning av en vävnadsdissociator

The in vitro study of white, brown, and beige adipocyte differentiation enables the investigation of cell-autonomous functions of adipocytes and their ...