Name: generation of induced neural stem cells from peripheral mononuclear cells and differentiation toward dopaminergic neuron precursors for transplantation studies
Uploaded: 2019-07-11T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generation of Induced Neural Stem Cells from Peripheral Mononuclear Cells and Differentiation Toward Dopaminergic Neuron Precursors for Transplantation Studie

Arbejdet blev støttet af følgende tilskud: stamcelle og Translation National Key Project (2016YFA0101403), National Natural Science Foundation i Kina (81661130160, 81422014, 81561138004), Beijing Municipal Natural Science Foundation (5142005), Beijing Talents Foundation (2017000021223TD03), støtteprojekt af højt niveau lærere i Beijing kommunale universiteter i perioden 13:5-årige plan (CIT & TCD20180333), Beijing Medical system højt niveau talent Award (2015-3-063), Beijing Kommunale sundhed provision fond (PXM 2018_026283_000002), Beijing 100, tusind, og 10000 talenter Fund (2018A03), Beijing kommunale administration af hospitaler klinisk medicin udvikling af særlig støtte (ZYLX201706), og Royal Society-Newton Advanced Fellowship (NA150482).

Alle procedurer skal følge retningslinjerne i den institutionelle etiske komité for human forskning. Informeret samtykke skal indhentes fra patienter eller raske frivillige før blod opsamling. Denne protokol blev godkendt af instituttets etiske komité for human forskning og blev udført i overensstemmelse med institutionens retningslinjer for pasning og anvendelse af dyr.
1. indsamling, isolering og udvidelse af Pbmn'er
<ol><li>Samling af Pbmn'er
	<ol>
<li>Saml 10-20 mL ...

<ol>
	<li>Williams-Gray, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+distinct+cognitive+syndromes+of+Parkinson's+disease:+5+year+follow-up+of+the+CamPaIGN+cohort.">The distinct cognitive syndromes of Parkinson's disease: 5 year follow-up of the CamPaIGN cohort.</a> Brain. 132, 2958-2969 (2009).</li><li>Dexter, D. T., Jenner, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parkinson+disease:+from+pathology+to+molecular+disease+mechanisms.">Parkinson disease: from pathology to molecular disease mechanisms.</a> Free Radical Biology and Medicine. 62, 132-144 (2013).</li><li>Chen, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+Therapy+for+Parkinson's+Disease:+New+Hope+from+Reprogramming+Technologies.">Cell Therapy for Parkinson's Disease: New Hope from Reprogramming Technologies.</a> Aging and Disease. 6 (6), 499-503 (2015).</li><li>Takahashi, K., Yamanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+Pluripotent+Stem+Cells+from+Mouse+Embryonic+and+Adult+Fibroblast+Cultures+by+Defined+Factors.">Induction of Pluripotent Stem Cells from Mouse Embryonic and Adult Fibroblast Cultures by Defined Factors.</a> Cell. 126 (4), 663-676 (2006).</li><li>Doi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+human+induced+pluripotent+stem+cell-derived+dopaminergic+progenitors+by+cell+sorting+for+successful+transplantation.">Isolation of human induced pluripotent stem cell-derived dopaminergic progenitors by cell sorting for successful transplantation.</a> Stem Cell Reports. 2 (3), 337-350 (2014).</li><li>Kriks, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine+neurons+derived+from+human+ES+cells+efficiently+engraft+in+animal+models+of+Parkinson's+disease.">Dopamine neurons derived from human ES cells efficiently engraft in animal models of Parkinson's disease.</a> Nature. 480 (7378), 547-551 (2011).</li><li>Perrier, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+midbrain+dopamine+neurons+from+human+embryonic+stem+cells.">Derivation of midbrain dopamine neurons from human embryonic stem cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 101 (34), 12543-12548 (2004).</li><li>Kikuchi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+iPS+cell-derived+dopaminergic+neurons+function+in+a+primate+Parkinson's+disease+model.">Human iPS cell-derived dopaminergic neurons function in a primate Parkinson's disease model.</a> Nature. 548 (7669), 592-596 (2017).</li><li>Ma, T., Xie, M., Laurent, T., Ding, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+in+the+reprogramming+of+somatic+cells.">Progress in the reprogramming of somatic cells.</a> Circulation Research. 112 (3), 562-574 (2013).</li><li>Tang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conversion+of+adult+human+peripheral+blood+mononuclear+cells+into+induced+neural+stem+cell+by+using+episomal+vectors.">Conversion of adult human peripheral blood mononuclear cells into induced neural stem cell by using episomal vectors.</a> Stem Cell Research. 16 (2), 236-242 (2016).</li><li>Yuan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopaminergic+precursors+differentiated+from+human+blood-derived+induced+neural+stem+cells+improve+symptoms+of+a+mouse+Parkinson's+disease+model.">Dopaminergic precursors differentiated from human blood-derived induced neural stem cells improve symptoms of a mouse Parkinson's disease model.</a> Theranostics. 8 (17), 4679-4694 (2018).</li><li>Takahashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+Pluripotent+Stem+Cells+from+Adult+Human+Fibroblasts+by+Defined+Factors.">Induction of Pluripotent Stem Cells from Adult Human Fibroblasts by Defined Factors.</a> Cell. 131 (5), 861-872 (2007).</li><li>Aasen, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+and+rapid+generation+of+induced+pluripotent+stem+cells+from+human+keratinocytes.">Efficient and rapid generation of induced pluripotent stem cells from human keratinocytes.</a> Nature Biotechnology. 26 (11), 1276-1284 (2008).</li><li>Thier, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+conversion+of+fibroblasts+into+stably+expandable+neural+stem+cells.">Direct conversion of fibroblasts into stably expandable neural stem cells.</a> Cell Stem Cell. 10 (4), 473-479 (2012).</li><li>Takahashi, K., Okita, K., Nakagawa, M., Yamanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+pluripotent+stem+cells+from+fibroblast+cultures.">Induction of pluripotent stem cells from fibroblast cultures.</a> Nature Protocols. 2 (12), 3081-3089 (2007).</li><li>Seki, T., Yuasa, S., Fukuda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+induced+pluripotent+stem+cells+from+a+small+amount+of+human+peripheral+blood+using+a+combination+of+activated+T+cells+and+Sendai+virus.">Generation of induced pluripotent stem cells from a small amount of human peripheral blood using a combination of activated T cells and Sendai virus.</a> Nature Protocols. 7 (4), 718-728 (2012).</li><li>Bazley, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+Reprogramming+of+Human+Primordial+Germ+Cells+into+Induced+Pluripotent+Stem+Cells:+Efficient+Generation+of+Genetically+Engineered+Germ+Cells.">Direct Reprogramming of Human Primordial Germ Cells into Induced Pluripotent Stem Cells: Efficient Generation of Genetically Engineered Germ Cells.</a> Stem Cells and Development. 24 (22), 2634-2648 (2015).</li><li>Li, H. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+cytoplasmic+RNA+vector+derived+from+nontransmissible+Sendai+virus+with+efficient+gene+transfer+and+expression.">A cytoplasmic RNA vector derived from nontransmissible Sendai virus with efficient gene transfer and expression.</a> Journal of Virology. 74 (14), 6564-6569 (2000).</li><li>Sochacki, J., Devalle, S., Reis, M., Mattos, P., Rehen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+urine+iPS+cell+lines+from+patients+with+Attention+Deficit+Hyperactivity+Disorder+(ADHD)+using+a+non-integrative+method.">Generation of urine iPS cell lines from patients with Attention Deficit Hyperactivity Disorder (ADHD) using a non-integrative method.</a> Stem Cell Research. 17 (1), 102-106 (2016).</li><li>Ban, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+generation+of+transgene-free+human+induced+pluripotent+stem+cells+(iPSCs)+by+temperature-sensitive+Sendai+virus+vectors.">Efficient generation of transgene-free human induced pluripotent stem cells (iPSCs) by temperature-sensitive Sendai virus vectors.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (34), 14234-14239 (2011).</li><li>Cho, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+efficient+and+large-scale+generation+of+functional+dopamine+neurons+from+human+embryonic+stem+cells.">Highly efficient and large-scale generation of functional dopamine neurons from human embryonic stem cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (9), 3392-3397 (2008).</li><li>Dowey, S. N., Huang, X., Chou, B. -. K., Ye, Z., Cheng, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+integration-free+human+induced+pluripotent+stem+cells+from+postnatal+blood+mononuclear+cells+by+plasmid+vector+expression.">Generation of integration-free human induced pluripotent stem cells from postnatal blood mononuclear cells by plasmid vector expression.</a> Nature Protocols. 7 (11), 2013-2021 (2012).</li><li>Zhu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reprogramming+of+human+primary+somatic+cells+by+OCT4+and+chemical+compounds.">Reprogramming of human primary somatic cells by OCT4 and chemical compounds.</a> Cell Stem Cell. 7 (6), 651-655 (2010).</li><li>Ono, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+neurogenic+potential+in+floor+plate+cells+along+an+anteroposterior+location:+midbrain+dopaminergic+neurons+originate+from+mesencephalic+floor+plate+cells.">Differences in neurogenic potential in floor plate cells along an anteroposterior location: midbrain dopaminergic neurons originate from mesencephalic floor plate cells.</a> Development. 134 (17), 3213-3225 (2007).</li><li>Kirkeby, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+regionally+specified+neural+progenitors+and+functional+neurons+from+human+embryonic+stem+cells+under+defined+conditions.">Generation of regionally specified neural progenitors and functional neurons from human embryonic stem cells under defined conditions.</a> Cell Reports. 1 (6), 703-714 (2012).</li><li>Chambers, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+efficient+neural+conversion+of+human+ES+and+iPS+cells+by+dual+inhibition+of+SMAD+signaling.">Highly efficient neural conversion of human ES and iPS cells by dual inhibition of SMAD signaling.</a> Nature Biotechnology. 27 (3), 275-280 (2009).</li><li>Fasano, C. A., Chambers, S. M., Lee, G., Tomishima, M. J., Studer, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+derivation+of+functional+floor+plate+tissue+from+human+embryonic+stem+cells.">Efficient derivation of functional floor plate tissue from human embryonic stem cells.</a> Cell Stem Cell. 6 (4), 336-347 (2010).</li><li>Harvey, B. K., Wang, Y., Hoffer, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+rodent+models+of+Parkinson's+disease.">Transgenic rodent models of Parkinson's disease.</a> Acta Neurochirurgica Supplements. 101, 89-92 (2008).</li><li>Sheng, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+dopaminergic+neurons+directly+from+mouse+fibroblasts+and+fibroblast-derived+neural+progenitors.">Generation of dopaminergic neurons directly from mouse fibroblasts and fibroblast-derived neural progenitors.</a> Cell Research. 22 (4), 769-772 (2012).</li><li>Prasad, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+induced+pluripotent+stem+cell,+direct+conversion+by+trans-differentiation,+direct+reprogramming+and+oligodendrocyte+differentiation.">A review of induced pluripotent stem cell, direct conversion by trans-differentiation, direct reprogramming and oligodendrocyte differentiation.</a> Regenerative Medicine. 11 (2), 181-191 (2016).</li></ol>

Her præsenterede vi en protokol, der dækkede forskellige stadier af iNSC-DA celleterapi for PD-modeller. Kritiske aspekter af denne protokol omfatter: (1) isolering og udvidelse af Pbmn'er og omprogrammering af Pbmn'er til iNSCs ved en infektion, (2) differentiering af iNSCs til DA neuroner, (3) etablering af ensidige 6-OHDA-lesioned PD-musemodeller og adfærdsmæssige vurdering og (4) celletransplantation af DA-prækursorer og adfærds vurdering.
I denne protokol omfatter den første del in...

Parkinsons sygdom (PD) er en almindelig neurodegenerativ lidelse, forårsaget af degeneration af dopaminerge (DA) neuroner på substantia nigra pars Compacta (SNpc) i ventrale mesencephalon (VM), med en prævalens på mere end 1% i populationen over 60 år 1 , 2. i løbet af det seneste årti, celleterapi, der har til formål enten at erstatte de degenerative eller beskadigede celler, eller nærende mikromiljø omkring degenererede neuroner, har vist potentiale i behandling af PD3. I mellemtiden har omprogrammering teknologi gjort betydelige fremskridt4, som giver en lovende cellulære kilde til substitutionsterapi. Humane inducerede pluripotente stamceller (iPSCs) og embryonale stamceller (ESCs) har vist sig at være i stand til at differentiere sig i DA neurale celler, som kunne overleve, modnes, og forbedre motoriske funktioner, når podet i rotte og ikke-humane primat PD modeller5 ,6,7,8. iPSCs repræsenterer en milepæl i cellulære omprogrammering teknologier og har et stort potentiale i celletransplantation; Men, der er stadig en bekymring over risikoen for tumordannelse fra ufuldstændigt differentierede celler. En alternativ cellulær kilde til celletransplantation er Lineage-forpligtede voksne stamceller opnået gennem direkte omprogrammering, såsom inducerede neurale stamceller (iNSCs), som kan udledes af de ustabile mellemprodukter, uden om pluripotens etape9,10,11.
Både ipscs og inscs kan omprogrammeres fra autologt cellulære kilder, såsom fibroblaster, mononukleære celler i perifert blod (pbmncs) og forskellige andre typer af celler12,13,14, hvilket reducerer immunogenicitet af transplanterede celler i stor grad. Desuden, sammenlignet med iPSCs, iNSCs er iboende med reduceret risiko for tumordannelse og Lineage-engageret plasticitet, kun i stand til at skelne til neuroner og glia11. I de indledende undersøgelser, humane eller mus ipscs og inscs blev genereret fra fibroblaster opnået fra hudbiopsier, som er en invasiv procedure14,15. Med denne respekt, PBMNCs er en tiltalende starter celle kilde på grund af den mindre invasive prøvetagning proces, og den lethed at opnå et stort antal celler inden for en kort periode med ekspansion tid16. Indledende omprogrammering undersøgelser ansat Integrative levering systemer, såsom lentiviral eller antiretroviral vektorer, som er effektive og nemme at implementere i mange typer af celler17; disse leveringssystemer kan dog forårsage mutationer og reaktivering af rest transgener, som frembyder sikkerhedsproblemer til kliniske terapeutiske formål12. Sendai virus (SeV) er en ikke-Integrativ RNA-virus med en negativ fornuft, enkelt-strandede genom, der ikke integreres i Host genom, men kun replikater i cytoplasmaet af inficerede celler, tilbyder et effektivt og sikkert køretøj til omprogrammering18 ,19. Rekombinant SeV vektorer er tilgængelige, der indeholder omprogrammering faktorer, herunder Human OCT3/4, SOX2, KLF4 og c-MYC i deres åbne læse rammer. Desuden kan de virale vektorer forbedres yderligere ved at indføre temperaturfølsomme mutationer, så de hurtigt kan fjernes, når dyrknings temperaturen hæves til 39 °C20. I denne artikel beskriver vi en protokol til at omprogrammere PBMNCs til iNSCs ved hjælp af SeV-systemet.
Mange undersøgelser har rapporteret afberegning af da neuroner fra humane esc'er eller ipscs ved hjælp af forskellige metoder6,8,21. Der er imidlertid mangel på protokoller, som beskriver differentieringen af DA-neuroner fra iNSCs i detaljer. I denne protokol vil vi beskrive den effektive generation af DA neuroner fra iNSCs ved hjælp af en to-trins metode. DA neuronal prækursorer kan transplanteres i striatum af PD musemodeller for sikkerhed og effektivitet evalueringer. Denne artikel vil præsentere en detaljeret protokol, der dækker forskellige stadier fra generation af induceret neurale stamceller af Sendai virus, differentiering af iNSCs ind i DA neuroner, etablering af mus PD modeller, til transplantation af DA prækursorer i striatum af PD-modellerne. Ved hjælp af denne protokol kan man generere iNSCs fra patienter og raske donorer og udlede DA neuroner, der er sikre, standardiserbare, skalerbare og homogene til celletransplantation formål, eller til modellering PD i en skål og undersøgelse af mekanismerne underliggende sygdomsudbrud og-udvikling.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:828px;" width="827">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">15-ml conical tube</td>
			<td style="width:183px;">Corning</td>
			<td style="width:153px;">430052</td>
			<td style="width:215px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">1-Thioglycerol</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">M6145</td>
			<td>Toxic for inhalation and skin contact</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">24-well plate</td>
			<td style="width:183px;">Corning</td>
			<td style="width:153px;">3337</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">50-ml conical tube&#160;</td>
			<td style="width:183px;">Corning</td>
			<td style="width:153px;">430828</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">6-OHDA</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">H4381</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">6-well plate</td>
			<td style="width:183px;">Corning</td>
			<td style="width:153px;">3516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Accutase</td>
			<td style="width:183px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">A11105-01</td>
			<td>Cell dissociation reagent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Apomorphine</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">A4393</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Ascorbic acid</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">A92902</td>
			<td>Toxic with skin contact&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">B27 supplement&#160;</td>
			<td style="width:183px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">17504044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">BDNF</td>
			<td style="width:183px;">Peprotech</td>
			<td style="width:153px;">450-02</td>
			<td>Brain derived neurotrophic factor</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:277px;">Blood collection tubes containing sodium heparin</td>
			<td style="width:183px;">BD</td>
			<td style="width:153px;">367871</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">BSA</td>
			<td style="width:183px;">yisheng</td>
			<td style="width:153px;">36106es60</td>
			<td>Fetal bovine serum</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">cAMP</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">D0627</td>
			<td>Dibutyryladenosine cyclic monophosphate</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">CellBanker 2</td>
			<td style="width:183px;">ZENOAQ</td>
			<td style="width:153px;">100ml</td>
			<td>Used as freezing medium for PBMNCs</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Chemically defined lipid concentrate</td>
			<td style="width:183px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">11905031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">CHIR99021</td>
			<td style="width:183px;">Gene Operation</td>
			<td style="width:153px;">04-0004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Coverslip</td>
			<td style="width:183px;">Fisher</td>
			<td style="width:153px;">25*25-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">DAPI</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">D8417-10mg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">DAPT</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">D5942</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Dexamethasone</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">D2915-100MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">DMEM-F12</td>
			<td style="width:183px;">Gibco</td>
			<td style="width:153px;">11330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">DMEM-F12</td>
			<td style="width:183px;">Gibco</td>
			<td style="width:153px;">11320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Donkey serum</td>
			<td style="width:183px;">Jackson</td>
			<td style="width:153px;">017-000-121</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">EPO</td>
			<td style="width:183px;">Peprotech</td>
			<td style="width:153px;">100-64-50UG</td>
			<td>Human Erythropoietin</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">FGF8b</td>
			<td style="width:183px;">Peprotech</td>
			<td style="width:153px;">100-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Ficoll-Paque Premium</td>
			<td style="width:183px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:153px;">17-5442-02</td>
			<td>P=1.077, density gradient medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">GDNF</td>
			<td style="width:183px;">Peprotech</td>
			<td style="width:153px;">450-10</td>
			<td>Glial derived neurotrophic factor</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">GlutaMAX</td>
			<td style="width:183px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">21051024</td>
			<td>100 &#215; Glutamine stock solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Ham&#39;s-F12</td>
			<td style="width:183px;">Gibco</td>
			<td style="width:153px;">11765-054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">HBSS</td>
			<td style="width:183px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">14175079</td>
			<td>Balanced salt solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Human leukemia inhibitory factor</td>
			<td style="width:183px;">Millpore</td>
			<td style="width:153px;">LIF1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Human recombinant SCF</td>
			<td style="width:183px;">Peprotech</td>
			<td style="width:153px;">300-07-100UG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">IGF-1</td>
			<td style="width:183px;">Peprotech</td>
			<td style="width:153px;">100-11-100UG</td>
			<td>Human insulin-like growth factor&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">IL-3</td>
			<td style="width:183px;">Peprotech</td>
			<td style="width:153px;">200-03-10UG</td>
			<td>Human interleukin 3</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">IMDM</td>
			<td style="width:183px;">Gibco</td>
			<td style="width:153px;">215056-023</td>
			<td>Iscove&#39;s modified Dulbecco&#39;s medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Insulin</td>
			<td style="width:183px;">Roche&#160;</td>
			<td style="width:153px;">12585014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">ITS-X</td>
			<td style="width:183px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">51500-056</td>
			<td>Insulin-transferrin-selenium-X supplement</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Knockout serum replacement</td>
			<td style="width:183px;">Gibco</td>
			<td style="width:153px;">10828028</td>
			<td>Serum free basal medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Laminin</td>
			<td style="width:183px;">Roche&#160;</td>
			<td style="width:153px;">11243217001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Microsyringe</td>
			<td style="width:183px;">Hamilton</td>
			<td style="width:153px;">7653-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">N2 supplement&#160;</td>
			<td style="width:183px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">17502048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">NEAA</td>
			<td style="width:183px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">11140050</td>
			<td>Non-essential amino acid</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Neurobasal</td>
			<td style="width:183px;">Gibco</td>
			<td style="width:153px;">10888</td>
			<td>Basic medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">PDL</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">P7280</td>
			<td>Poly-D-lysine</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">SAG1</td>
			<td style="width:183px;">Enzo</td>
			<td style="width:153px;">ALX-270-426-M01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">SB431542</td>
			<td style="width:183px;">Gene Operation</td>
			<td style="width:153px;">04-0010-10mg</td>
			<td>Store from light at -20&#8451;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Sendai virus</td>
			<td style="width:183px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:153px;">MAN0009378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Sucrose</td>
			<td style="width:183px;">baiaoshengke</td>
			<td style="width:153px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">TGF&#946;&#8546;</td>
			<td style="width:183px;">Peprotech</td>
			<td style="width:153px;">100-36E</td>
			<td>Transforming growth factor&#160; &#946;&#8546;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Transferrin</td>
			<td style="width:183px;">R&#38;D Systems</td>
			<td style="width:153px;">2914-HT-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Triton X 100</td>
			<td style="width:183px;">baiaoshengke</td>
			<td style="width:153px;"></td>
			<td>Nonionic surfactant</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Trypan blue</td>
			<td style="width:183px;">Gibco</td>
			<td style="width:153px;">T10282</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Xylazine</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">X1126</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generation of induced neural stem cells from peripheral mononuclear cells and differentiation toward dopaminergic neuron precursors for transplantation studies

Parkinsons sygdom (PD) er forårsaget af degeneration af dopaminerge (DA) neuroner på substantia nigra pars Compacta (SNpc) i ventrale mesencephalon (VM). Celle substitutionsterapi har stor løfte om behandling af PD. for nylig er inducerede neurale stamceller (iNSCs) dukket op som en potentiel kandidat til celle substitutionsbehandling på grund af den reducerede risiko for tumordannelse og plasticiteten til at give anledning til Regionspecifikke neuroner og glia. iNSCs kan omprogrammeres fra autologt somatiske cellulære kilder, såsom fibroblaster, mononukleære celler i perifert blod (PBMNCs) og forskellige andre typer celler. Sammenlignet med andre typer af somatiske celler, PBMNCs er en tiltalende starter celletype på grund af den lethed at få adgang til og udvide i kulturen. Sendai virus (SeV), en RNA ikke-Integrativ virus, kodning omprogrammering faktorer, herunder Human OCT3/4, SOX2, KLF4 og c-MYC, har en negativ-Sense, enkelt-strandede, ikke-segmenteret genom, der ikke integreres i Host Genome, men kun replikater i cytoplasmaet af inficerede celler, der tilbyder et effektivt og sikkert køretøj til omprogrammering. I denne undersøgelse beskriver vi en protokol, hvor iNSCs opnås ved at omprogrammere PBMNCs, og differentieret til specialiserede VM DA neuroner ved en totrins metode. Så DA prækursorer er transplanteres i ensidigt 6-hyroxydopamin (6-OHDA)-lesioned PD musemodeller til at evaluere sikkerheden og effekten for behandling af PD. Denne metode giver en platform til at undersøge de funktioner og terapeutiske virkninger af patientspecifikke DA neurale celler in vitro og in vivo.

Her rapporterer vi en protokol, der dækker forskellige stadier af iNSC-DA celleterapi til behandling af PD-modeller. For det første, Pbmn'er blev isoleret og udvidet, og omprogrammeret i iNSCs af SeV infektion. En skematisk gengivelse af procedurerne med PBMNC ekspansion og iNSC induktion er vist i figur 1. På dag-14, blev Pbmn'er isoleret ved hjælp af en tæthed gradient medium (tabel over materialer). Før centrifugering, blod fortyndet med PBS og tætheden gradient me...

Watch this Scientific Journal Video about Generation of Induced Neural Stem Cells from Peripheral Mononuclear Cells and Differentiation Toward Dopaminergic Neuron Precursors for Transplantation Studie

Generation of Induced Neural Stem Cells from Peripheral Mononuclear Cells and Differentiation Toward Dopaminergic Neuron Precursors for Transplantation Studies

Generation af inducerede neurale stamceller fra perifere mononukleære celler og differentiering mod dopaminerge neuron-prækursorer til transplantations studier

Protokollen præsenterer omprogrammering af mononukleære celler i perifert blod for at inducere neurale stamceller ved Sendai-virus infektion, differentiering af iNSCs i dopaminerge neuroner, transplantation af DA-prækursorer til den ensidigt læsionerede Parkinsons sygdom-musemodeller og evaluering af sikkerheden og effekten af iNSC-afledte DA-prækursorer til PD-behandling.

Parkinson&#39;s disease (PD) is caused by degeneration of dopaminergic (DA) neurons at the substantia nigra pars compacta (SNpc) in the ventral ...

Denne protokol beskriver en metode til at omprogrammere blod og mononukleare celler til neurale stamceller, der kan bruges til behandling af neurodegenerative sygdomme, såsom Parkinsons sygdom. Det tilbyder en autolog celle kilde til behandling af neurodegenerative sygdomme. Også, den tidsramme, der kræves for konvertering til induceret neurale stamceller og differentiering til ønskede celletyper er kortere end for induceret pluripotente stamceller.Inducerede neurale stamceller har en god proliferative kapacitet og kan skaleres op før ansøgning. Da iNSCs kan specificeres i forskellige region-specifikke neurale celler, såsom rygmarvsneuroner eller motoriske neuroner, denne metode kan udvides til behandling af andre neurologiske sygdomme. Hele proceduren tager lang tid, med alle trin relateret og kritisk, så visuel demonstration giver en idé om, hvordan cellerne ser ud og giver nogle tips til at sikre en vellykket generation af de ønskede celler.Til at begynde overføre tidligere isolerede perifere venøse blod i en 50-milliliter konisk rør, og fortyndes det med en tilsvarende mængde sterile Dulbecco's PBS. I et andet konisk rør med 50 milliliter forberedes 15 milliliter steriliseret tæthedsgradientmedium. Vip røret i en vinkel på 45 grader, og læg langsomt og forsigtigt 30 milliliter fortyndet perifert blod på tæthedens gradientmedium.Centrifuge røret ved 800 gange g i 15 minutter ved stuetemperatur med centrifugebremsen indstillet på off position. Aspirere det gule, øverste plasmalag, og kassér det. Brug en 10-milliliter pipette til at overføre det hvide, overskyede tynde filmlag, der indeholder mononukleare celler, til et nyt 50-milliliter konisk rør.Tilsæt 30 milliliter D-PBS til røret med MNCs, og centrifuge ved 600 gange g i 10 minutter ved fire grader Celsius. Efter udsmid af supernatanten tilsættes der 45 milliliter D-PBS, og cellerne skal opsbruges igen. Efter centrifugering røret ved 400 gange g i 10 minutter ved fire grader Celsius, kassér supernatanten.Resuspend cellerne med fem milliliter D-PBS, tælle de levende celler med trypan blå udelukkelse metode, der er afsat de MNCs er nødvendige for ekspansion, og fryse de resterende celler til fremtidig brug. På dag minus 14, frø MNC'er på en massevis af to til tre millioner celler pr. milliliter pr. brønd af seks-brøndplade med 1,5 milliliter 37 grader Celsius, forvarmt MNC-medium. Inkubere ved 37 grader Celsius, 5% kuldioxid i to dage.På dag minus 11 skal du bruge en steriliseret pipette til at indsamle cellerne med mediet og overføre til et nyt 15-milliliter konisk rør. Centrifuge ved 250 gange g i fem minutter ved stuetemperatur, kassér supernatanten og resuspend cellerne i en milliliter forvarmt MNC-medium. Efter at have talt de levedygtige celler med trypan blå, frø MNCs på en tæthed på en million celler pr milliliter i forvarmme MNC medium i en seks-brønd plade.Inkuberes ved 37 grader Celsius, 5% kuldioxid i tre dage, og gentag celle indsamling, centrifugering, og plating i MNC medium på dage minus otte og minus fire. Sendai virus i denne procedure er farligt, og alle procedurer, der involverer Sendai virus skal udføres i et sikkerhedsskab. Og alle spidser og rør, der udsættes for Sendai-virus, skal behandles med ethanol eller blegemiddel før bortskaffelse.På dag nul, indsamle cellerne i MNC medium og overføre til en 15-milliliter konisk rør. Efter centrifugering af cellerne ved 200 gange g i fem minutter, aspirere supernatant og resuspend cellerne med en milliliter forvarmt MNC medium. Tæl de levedygtige celler med trypan blå, og derefter resuspend dem med forvarperede MNC medium til en koncentration på 200, 000 celler pr brønd i 24-brønd plader.Tø rørene fjernet fra minus 80-graders Celsius opbevaring indeholder Sendai virus i en 37-graders Celsius vandbad i fem til 10 sekunder, og derefter lade dem tø ved stuetemperatur. Når optøet, læg dem straks på is. Tilsæt optøet Sendai virus til brøndene af 24-brønd plade med MNCs ved en mangfoldighed af infektion på 10.For at lette fastgørelsen af celler, centrifuge pladerne på 1, 000 gange g i 30 minutter, og efter at placere pladerne i inkubatoren ved 37 grader Celsius, 5% kuldioxid. På dag ét overføres cellerne med mediet til et centrifugerør på 15 milliliter. For yderligere at løsne de resterende celler, skyl brøndene med en milliliter MNC-medium pr. brønd og tilsæt cellerne med medium til røret.Efter centrifugering af celleaffjedringen ved 200 gange g i fem minutter, aspirere supernatanten, resuspend cellerne med 500 mikroliter frisk forvarmet MNC-medium, og tilsæt til en brønd af en 24-brønd plade. På dag to anvendes en milliliter pr. brønd af tidligere fortyndede 50 mikrogram pr. mikroliter poly-D-lysin i D-PBS til at belægge seks-brønds plader i mindst to timer ved stuetemperatur. Aspirere poly-D-lysin fra de seks-brøndplader, og tør på den lodrette rene bænk i ca 10 minutter.Derefter tilsættes en milliliter pr. brønd af en tidligere fortyndet fem mikrogram pr. milliliter laminin til de seks-brøndplader, og inkuberes i fire til seks timer ved 37 grader Celsius til pels. Pladerne vaskes med D-PBS før brug. På dag tre, plade alle Sendai virus-transduced MNCs i induceret neurale stamceller medium på poly-D-lysin/laminin-belagt seks-brønd plader.På dag fem og syv, tilsæt forsigtigt en milliliter 37-graders Celsius, forvarmt iNSC medium til hver brønd af de seks-brønd plader. Fra dag ni til dag 28 skal mediet udskiftes med frisk forvarperede iNSC-mediet dagligt. Overvåg fremkomsten af iNSC kolonier, og i omkring to til tre uger pick kolonier med passende morfologi ved hjælp af brændte glas pipetter og overføre hver koloni til en separat brønd af en seks-brønd plade til ekspansion.At etablere ensidige 6-hyroxydopamin-læsioned mus modeller, barbere hovedet af en bedøvet, voksen, mand, SCID-beige mus, og anvende erythromycin øjensal. Placer musen på stereotaxic apparatet, og fastgør musen med fortænder. Sæt ørekopperne korrekt i, så musehovedet placeres sikkert og korrekt.Steriliser hovedet med povidone jod og isopropylalkohol, og brug derefter en skalpelkling til at lave et ca. 1,5 centimeter sagittal snit på hovedhuden og udsætte kraniet. Juster fortænder bar og øre barer for at reducere højdeforskellen mellem bregma og lambda til mindre end 0,1 millimeter. Langsomt bevæge sig og sænke spidsen af microsyringe nål mod bregma, og behandle bregma som nulpunkt.Flyt spidsen til en position med koordinater på anterior 0,5 millimeter og lateral 2,1 millimeter i forhold til bregma. Træk spidsen tilbage, marker punktet med en markørpen, og med en elektronisk boremaskine, grat et lille hul ind i kraniet. Ekstrakt to mikroliter af fem mikrogram pr. milliliter 6-hyroxydopaminopløsning i mikrosyringe.Sæt nålen tilbage til det markerede punkt, og sæt nålen i stand til at bruge 3,2 millimeter. Indsprøjt 6-hyroxydopaminopløsningen fra sprøjten med en hastighed på en mikroliter pr. minut, lad injektionsnålen være på plads i yderligere fem minutter, og træk den derefter langsomt tilbage. Efter lukning af snittet med suturer, anvende erythromycin øjenlæde på øjnene igen.Fjern musen fra det stereotaxiske apparat, læg den i bjærgningsburet, og giv adgang til mad og vand, indtil det kommer til bevidsthed. Efter PBMNCs blev inficeret med SeV, deres morfologi var ved at ændre sig, og cellerne gennemgik en drastisk død indtil dag fem. INSC kolonier opstod på dag 12.Efter plukning og overførsel af iNSC-kloner til udvidelse for en række passager viste de en god morfologi og kunne selv forny stabilt i iNSC-medie, enten i monolagsform eller som kugler. Efter 24 dages differentiering blev iNSCs identificeret som dopaminerge neuroner, da de fleste af dem udtrykte tyrosinhydrxylase, gaffelkasse A2 og neuronspecifikke klasse III beta-tubulinmarkører. Efter etablering af ensidige 6-hyroxydopamin-læsioned Parkinsons sygdom musemodeller, adfærdsmæssige vurdering blev gennemført for at vurdere Parkinsons sygdom symptomer.De mus, der havde modtaget celletransplantation, viste signifikant forbedring i motorisk funktion. Omfanget af 6-hyroxydopamin-induceret læsion blev verificeret ved post mortem immunofluorescerende farvning for TH på striatum, mediale forhjernen bundt, og substantia nigra pars compacta. De TH-positive signaler blev i høj grad genvundet i striatum, hvor cellerne blev implanteret og også mildt genvundet på SN. Tre måneder efter transplantation, blandt overlevende celler, om 13.84% var TH-positive dopaminerge neuroner.Omkring 91,72% af de TH-positive celler udtrykt sjældne nukleare receptor, omkring 86,76% udtrykt FOXA2, og omkring 98,77% blev co-mærket med G-protein-koblet indadgående ensretter kalium. Når derlægges 30 mil fortyndet perifert blod på tætheden gradient medium, skal du gøre det langsomt og omhyggeligt, ikke at forstyrre gradient interface. Der skal sørges for at undgå gentagen optøning og frysning af Sendai-virus for at sikre en høj virusaktivitet.Når omprogrammering perifere blod mononukleare celler til induceret neurale stamceller, skal du nøje observere morfologi af celler hver dag. Også, 6-hydroxydopamin er lys-og temperatur-følsomme. Vær omhyggelig med at beskytte opløsningen mod lys, og hold den på is før brug.Efter denne procedure, man kan fortsætte med at studere sygdommen mekanismer ved hjælp af familiær PD patient-afledte dopaminerge neuroner i kultur. Man kan også fortsætte med at undersøge, hvordan de transplanterede celler påvirker de beskadigede neuronale kredsløb.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Direct Induction of Human Neural Stem Cells from Peripheral Blood Hematopoietic Progenitor Cells

Direkte Induktion af humane neurale stamceller fra perifert blod hæmatopoietiske stamceller

Human disease specific neuronal cultures are essential for generating in vitro models for human neurological diseases. However, the lack of access to ...

Generation of Induced Pluripotent Stem Cells from Human Peripheral T Cells Using Sendai Virus in Feeder-free Conditions

Generering af induceret pluripotente stamceller fra humane perifere T-celler Brug af Sendai Virus i Feeder-fri Betingelser

Recently, iPSCs have attracted attention as a new source of cells for regenerative therapies. Although the initial method for generating iPSCs relied on ...

Generation of Integration-free Induced Pluripotent Stem Cells from Human Peripheral Blood Mononuclear Cells Using Episomal Vectors

Generation af Integration-fri induceret pluripotente stamceller fra humane perifere mononucleære blodceller Brug episomale vektorer

Induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs) hold great promise for disease modeling and regenerative therapies. We previously reported the use of Episomal ...

Differentiating Chondrocytes from Peripheral Blood-derived Human Induced Pluripotent Stem Cells

Differentierende chondrocytter fra perifert blodafledte humane inducerede pluripotente stamceller

In this study, we used peripheral blood cells (PBCs) as seed cells to produce chondrocytes via induced pluripotent stem cells (iPSCs) in an ...

Horizontal Whole Mount: A Novel Processing and Imaging Protocol for Thick, Three-dimensional Tissue Cross-sections of Skin

Horisontal Hel Mount: En Novel Processing and Imaging Protocol for Tykke, Tredimensionale Tissue Tværsnit af Skin

Processing a tissue of interest to generate a microscopic image that supports a scientific argument can be challenging. The acquisition of high-quality ...

Rapid, Directed Differentiation of Retinal Pigment Epithelial Cells from Human Embryonic or Induced Pluripotent Stem Cells

Hurtig, instrueret differentiering af retinale Pigment epitel celler fra menneskelige embryonale eller induceret pluripotente stamceller

We describe a robust method to direct the differentiation of pluripotent stem cells into retinal pigment epithelial cells (RPE). The purpose of providing ...

Single-cell Photoconversion in Living Intact Zebrafish

Encellede Photoconversion i levende intakt zebrafisk

Animal and plant tissue is composed of distinct populations of cells. These cells interact over time to build and maintain the tissue and can cause ...

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Beregningsmæssige analyse af Caenorhabditis elegans kønscelleoverførsel at studere Distribution kerner, proteiner og cytoskelettet

The Caenorhabditis elegans (C. elegans) germline is used to study several biologically important processes including stem cell development, apoptosis, and ...

Derivation and Differentiation of Canine Ovarian Mesenchymal Stem Cells

Afledning og differentiering af Canine æggestokkene mesenkymale stamceller

Interest in mesenchymal stem cells (MSCs) has increased over the past decade due to their ease of isolation, expansion, and culture. Recently, studies ...

Generation of 3D Skin Organoid from Cord Blood-derived Induced Pluripotent Stem Cells

Generation af 3D hud Organoid fra ledningen blod-afledte induceret pluripotente stamceller

The skin is the body&#8217;s largest organ and has many functions. The skin acts as a physical barrier and protector of the body and regulates bodily ...