Name: generation of induced neural stem cells from peripheral mononuclear cells and differentiation toward dopaminergic neuron precursors for transplantation studies
Uploaded: 2019-07-11T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generation of Induced Neural Stem Cells from Peripheral Mononuclear Cells and Differentiation Toward Dopaminergic Neuron Precursors for Transplantation Studie

העבודה הייתה נתמכת על ידי המענקים הבאים: תא גזע ותרגום מפתח לאומי (2016YFA0101403), הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (81661130160, 81422014, 81561138004), הקרן העירונית למדעי הטבע של בייג (5142005), קרן הכשרונות של בייג (2017000021223TD03), פרויקט תמיכה של מורים ברמה גבוהה ב בייג האוניברסיטאות העירוניות בתקופה של חמש עשרה-שנה תוכנית (CIT & TCD20180333), בייג מערכת רפואית ברמה גבוהה פרס כישרון (2015-3-063), בייג המועצה העירונית לבריאות העירייה (pxm 2018_026283_ 000002), בייג 100, אלף, ו 10000 כשרונות קרן (2018a03), המינהל העירוני של בייג של בתי חולים לפיתוח רפואה קלינית של תמיכה במימון מיוחד (ZYLX201706), וה האגודה המלכותית-ניוטון (NA150482).

על כל ההליכים לפעול לפי ההנחיות של ועדת האתיקה של המחקר האנושי המוסדי. הסכמה מושכלת חייבת להתקבל מחולים או מתנדבים בריאים לפני איסוף הדם. פרוטוקול זה אושר על ידי ועדת האתיקה של המחקר האנושי של המוסד ובוצע על פי הנחיות המוסד לטיפול ולשימוש בבעלי חיים.
1. איסוף, בידוד והתרחבות מ?...

<ol>
	<li>Williams-Gray, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+distinct+cognitive+syndromes+of+Parkinson's+disease:+5+year+follow-up+of+the+CamPaIGN+cohort.">The distinct cognitive syndromes of Parkinson's disease: 5 year follow-up of the CamPaIGN cohort.</a> Brain. 132, 2958-2969 (2009).</li><li>Dexter, D. T., Jenner, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parkinson+disease:+from+pathology+to+molecular+disease+mechanisms.">Parkinson disease: from pathology to molecular disease mechanisms.</a> Free Radical Biology and Medicine. 62, 132-144 (2013).</li><li>Chen, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+Therapy+for+Parkinson's+Disease:+New+Hope+from+Reprogramming+Technologies.">Cell Therapy for Parkinson's Disease: New Hope from Reprogramming Technologies.</a> Aging and Disease. 6 (6), 499-503 (2015).</li><li>Takahashi, K., Yamanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+Pluripotent+Stem+Cells+from+Mouse+Embryonic+and+Adult+Fibroblast+Cultures+by+Defined+Factors.">Induction of Pluripotent Stem Cells from Mouse Embryonic and Adult Fibroblast Cultures by Defined Factors.</a> Cell. 126 (4), 663-676 (2006).</li><li>Doi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+human+induced+pluripotent+stem+cell-derived+dopaminergic+progenitors+by+cell+sorting+for+successful+transplantation.">Isolation of human induced pluripotent stem cell-derived dopaminergic progenitors by cell sorting for successful transplantation.</a> Stem Cell Reports. 2 (3), 337-350 (2014).</li><li>Kriks, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine+neurons+derived+from+human+ES+cells+efficiently+engraft+in+animal+models+of+Parkinson's+disease.">Dopamine neurons derived from human ES cells efficiently engraft in animal models of Parkinson's disease.</a> Nature. 480 (7378), 547-551 (2011).</li><li>Perrier, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+midbrain+dopamine+neurons+from+human+embryonic+stem+cells.">Derivation of midbrain dopamine neurons from human embryonic stem cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 101 (34), 12543-12548 (2004).</li><li>Kikuchi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+iPS+cell-derived+dopaminergic+neurons+function+in+a+primate+Parkinson's+disease+model.">Human iPS cell-derived dopaminergic neurons function in a primate Parkinson's disease model.</a> Nature. 548 (7669), 592-596 (2017).</li><li>Ma, T., Xie, M., Laurent, T., Ding, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+in+the+reprogramming+of+somatic+cells.">Progress in the reprogramming of somatic cells.</a> Circulation Research. 112 (3), 562-574 (2013).</li><li>Tang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conversion+of+adult+human+peripheral+blood+mononuclear+cells+into+induced+neural+stem+cell+by+using+episomal+vectors.">Conversion of adult human peripheral blood mononuclear cells into induced neural stem cell by using episomal vectors.</a> Stem Cell Research. 16 (2), 236-242 (2016).</li><li>Yuan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopaminergic+precursors+differentiated+from+human+blood-derived+induced+neural+stem+cells+improve+symptoms+of+a+mouse+Parkinson's+disease+model.">Dopaminergic precursors differentiated from human blood-derived induced neural stem cells improve symptoms of a mouse Parkinson's disease model.</a> Theranostics. 8 (17), 4679-4694 (2018).</li><li>Takahashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+Pluripotent+Stem+Cells+from+Adult+Human+Fibroblasts+by+Defined+Factors.">Induction of Pluripotent Stem Cells from Adult Human Fibroblasts by Defined Factors.</a> Cell. 131 (5), 861-872 (2007).</li><li>Aasen, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+and+rapid+generation+of+induced+pluripotent+stem+cells+from+human+keratinocytes.">Efficient and rapid generation of induced pluripotent stem cells from human keratinocytes.</a> Nature Biotechnology. 26 (11), 1276-1284 (2008).</li><li>Thier, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+conversion+of+fibroblasts+into+stably+expandable+neural+stem+cells.">Direct conversion of fibroblasts into stably expandable neural stem cells.</a> Cell Stem Cell. 10 (4), 473-479 (2012).</li><li>Takahashi, K., Okita, K., Nakagawa, M., Yamanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+pluripotent+stem+cells+from+fibroblast+cultures.">Induction of pluripotent stem cells from fibroblast cultures.</a> Nature Protocols. 2 (12), 3081-3089 (2007).</li><li>Seki, T., Yuasa, S., Fukuda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+induced+pluripotent+stem+cells+from+a+small+amount+of+human+peripheral+blood+using+a+combination+of+activated+T+cells+and+Sendai+virus.">Generation of induced pluripotent stem cells from a small amount of human peripheral blood using a combination of activated T cells and Sendai virus.</a> Nature Protocols. 7 (4), 718-728 (2012).</li><li>Bazley, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+Reprogramming+of+Human+Primordial+Germ+Cells+into+Induced+Pluripotent+Stem+Cells:+Efficient+Generation+of+Genetically+Engineered+Germ+Cells.">Direct Reprogramming of Human Primordial Germ Cells into Induced Pluripotent Stem Cells: Efficient Generation of Genetically Engineered Germ Cells.</a> Stem Cells and Development. 24 (22), 2634-2648 (2015).</li><li>Li, H. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+cytoplasmic+RNA+vector+derived+from+nontransmissible+Sendai+virus+with+efficient+gene+transfer+and+expression.">A cytoplasmic RNA vector derived from nontransmissible Sendai virus with efficient gene transfer and expression.</a> Journal of Virology. 74 (14), 6564-6569 (2000).</li><li>Sochacki, J., Devalle, S., Reis, M., Mattos, P., Rehen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+urine+iPS+cell+lines+from+patients+with+Attention+Deficit+Hyperactivity+Disorder+(ADHD)+using+a+non-integrative+method.">Generation of urine iPS cell lines from patients with Attention Deficit Hyperactivity Disorder (ADHD) using a non-integrative method.</a> Stem Cell Research. 17 (1), 102-106 (2016).</li><li>Ban, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+generation+of+transgene-free+human+induced+pluripotent+stem+cells+(iPSCs)+by+temperature-sensitive+Sendai+virus+vectors.">Efficient generation of transgene-free human induced pluripotent stem cells (iPSCs) by temperature-sensitive Sendai virus vectors.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (34), 14234-14239 (2011).</li><li>Cho, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+efficient+and+large-scale+generation+of+functional+dopamine+neurons+from+human+embryonic+stem+cells.">Highly efficient and large-scale generation of functional dopamine neurons from human embryonic stem cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (9), 3392-3397 (2008).</li><li>Dowey, S. N., Huang, X., Chou, B. -. K., Ye, Z., Cheng, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+integration-free+human+induced+pluripotent+stem+cells+from+postnatal+blood+mononuclear+cells+by+plasmid+vector+expression.">Generation of integration-free human induced pluripotent stem cells from postnatal blood mononuclear cells by plasmid vector expression.</a> Nature Protocols. 7 (11), 2013-2021 (2012).</li><li>Zhu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reprogramming+of+human+primary+somatic+cells+by+OCT4+and+chemical+compounds.">Reprogramming of human primary somatic cells by OCT4 and chemical compounds.</a> Cell Stem Cell. 7 (6), 651-655 (2010).</li><li>Ono, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+neurogenic+potential+in+floor+plate+cells+along+an+anteroposterior+location:+midbrain+dopaminergic+neurons+originate+from+mesencephalic+floor+plate+cells.">Differences in neurogenic potential in floor plate cells along an anteroposterior location: midbrain dopaminergic neurons originate from mesencephalic floor plate cells.</a> Development. 134 (17), 3213-3225 (2007).</li><li>Kirkeby, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+regionally+specified+neural+progenitors+and+functional+neurons+from+human+embryonic+stem+cells+under+defined+conditions.">Generation of regionally specified neural progenitors and functional neurons from human embryonic stem cells under defined conditions.</a> Cell Reports. 1 (6), 703-714 (2012).</li><li>Chambers, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+efficient+neural+conversion+of+human+ES+and+iPS+cells+by+dual+inhibition+of+SMAD+signaling.">Highly efficient neural conversion of human ES and iPS cells by dual inhibition of SMAD signaling.</a> Nature Biotechnology. 27 (3), 275-280 (2009).</li><li>Fasano, C. A., Chambers, S. M., Lee, G., Tomishima, M. J., Studer, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+derivation+of+functional+floor+plate+tissue+from+human+embryonic+stem+cells.">Efficient derivation of functional floor plate tissue from human embryonic stem cells.</a> Cell Stem Cell. 6 (4), 336-347 (2010).</li><li>Harvey, B. K., Wang, Y., Hoffer, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+rodent+models+of+Parkinson's+disease.">Transgenic rodent models of Parkinson's disease.</a> Acta Neurochirurgica Supplements. 101, 89-92 (2008).</li><li>Sheng, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+dopaminergic+neurons+directly+from+mouse+fibroblasts+and+fibroblast-derived+neural+progenitors.">Generation of dopaminergic neurons directly from mouse fibroblasts and fibroblast-derived neural progenitors.</a> Cell Research. 22 (4), 769-772 (2012).</li><li>Prasad, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+induced+pluripotent+stem+cell,+direct+conversion+by+trans-differentiation,+direct+reprogramming+and+oligodendrocyte+differentiation.">A review of induced pluripotent stem cell, direct conversion by trans-differentiation, direct reprogramming and oligodendrocyte differentiation.</a> Regenerative Medicine. 11 (2), 181-191 (2016).</li></ol>

כאן הצגנו פרוטוקול שכיסה בשלבים שונים של טיפול בתאי iNSC-DA עבור דגמי PD. היבטים קריטיים של פרוטוקול זה כוללים: (1) בידוד והתרחבות של PBMNCs ותכנות משנה של PBMNCs לתוך iNSCs על-ידי זיהום צב, (2) הבחנה של iNSCs כדי הנוירונים DA, (3) הקמתה של 6-OHDA-לישה מודל העכבר מודלים התנהגותיים הערכה, ו (4) השתלת תאים של הערכה מראש ...

מחלת פרקינסון (PD) היא הפרעה ניווניות הנפוצה, הנגרמת על ידי ניוון של דואמנרכולינרגיות (DA) נוירונים ב-compacta הכושי pars (SNpc) בבית mesencephalon (VM), עם שכיחות של יותר מ 1% באוכלוסיה על 60 שנים של גיל מיכל בן , 2. בעשור האחרון, טיפול בתאים, מכוון או מחליף את התאים ניווניות או פגומים, או הזנה מיקרואקולוגיה סביב הנוירונים המתנוונת, הראו פוטנציאל לטיפול של PD3. בינתיים, טכנולוגיה התיכנות מחודש עשה התקדמות משמעותית4, אשר מספק מקור הסלולר מבטיח טיפול חלופי. האדם המושרה pluripotent תאי גזע (iPSCs) ותאי גזע עובריים (ESCs) הוכחו להיות מסוגלים להבדיל לתאי העצבים של DA, אשר יכול לשרוד, מורעד, ולשפר את הפונקציות מנוע כאשר מושתל לתוך החולדה ומודלים שאינם אנושיים משטרת הפרימטים5 ,6,7,8. iPSCs מייצגים אבן דרך בטכנולוגיות תכנות הסלולר יש פוטנציאל גדול השתלת תא; עם זאת, יש עדיין חשש לגבי הסיכון של היווצרות הגידול מן התאים הבדיל לחלוטין. מקור הסלולר חלופה עבור השתלת תא היא השושלת מחויבת תאי גזע מבוגרים שהתקבלו באמצעות תכנות ישיר, כגון תאי גזע עצביים המושרה (iNSCs), אשר ניתן נגזר מintermediates לא יציב, עוקף את pluripotency . שלב9,10,11
ניתן לiPSCs גם ממקורות סלולריים באופן אוטוולוגי, כגון פיברותקיעות, תאי דם היקפיים (pbmncs) וסוגים שונים של תאים12,13,14, ובכך להקטין את ה חיסוני של תאים מושתלים במידה רבה. יתר על כן, לעומת iPSCs, iNSCs הם הטבועה בסיכון של היווצרות הגידול השושלת מחויבת פלסטיות, רק מסוגל להבדיל לנוירונים ו glia11. במחקרים הראשוניים, האדם או העכבר iPSCs ו iNSCs נוצרו מפיברופיצוצים שהתקבלו ביופסיה העור, שהוא הליך פולשני14,15. עם כבוד זה, PBMNCs הם מקור מושך התא המתנע בגלל תהליך הדגימה פחות פולשנית, ואת הקלות להשיג מספר גדול של תאים בתוך תקופה קצרה של זמן ההרחבה16. מחקרים ראשוניים התחלתיים מועסקים מערכות מסירה אינטגרטיבית, כגון וקטורים לנטינגיי או retroviral יעיל, אשר יעילים וקל ליישם בסוגים רבים של תאים17; עם זאת, מערכות משלוח אלה עלול לגרום מוטציות וההפעלה מראש של שיורית טרנסגנים, אשר מציגים בעיות בטיחות למטרות טיפוליות קליני12. וירוס סנדאי (צב) הוא וירוס בלתי אינטגרטיבי RNA עם תחושה שלילית, יחיד תקוע הגנום שאינו משתלב לתוך הגנום המארח, אבל רק משכפל את הציטופלסמה של תאים נגועים, המציע רכב יעיל ובטוח עבור תכנות מחודש18 ,19. וקטורים רקומביננטי צב זמינים המכילים גורמים הניתנים לתיכנות כולל האדם OCT3/4, SOX2, KLF4 ו -c-myc במסגרות הקריאה פתוח שלהם. בנוסף, ניתן לשפר היתר וקטורים ויראליים על-ידי החדרת מוטציות רגישות לטמפרטורה, כך שניתן יהיה להסירו במהירות כאשר טמפרטורת התרבות מורמת ל-39 ° c20. במאמר זה, אנו מתארים פרוטוקול כדי לתכנת מיתכנת PBMNCs לiNSCs באמצעות מערכת צב.
מחקרים רבים דיווחו על הנגזרת של הנוירונים DA של האדם escs או iPSCs באמצעות שיטות שונות6,8,21. עם זאת, יש מחסור של פרוטוקולים המתארים את הבידול של הנוירונים DA מ iNSCs בפרטים. בפרוטוקול זה, נתאר את הדור היעיל של נוירונים DA מ iNSCs באמצעות שיטה דו-שלבית. הסמנים העצביים של DA יכולים להיות מושתלים לתוך הסטריאטום של מודלים של עכבר PD עבור הערכות בטיחות ויעילות. מאמר זה יציג פרוטוקול מפורט המכסה שלבים שונים מדור של תאי גזע עצביים המושרה על ידי וירוס סנדאי, הבידול של iNSCs לתוך הנוירונים DA, הקמת מודלים של משטרת העכבר, להשתלה של הקדם-סמנים של DA לתוך הסטריאטום של דגמי המשטרה. באמצעות פרוטוקול זה, ניתן ליצור iNSCs מפני חולים ותורמים בריאים ולהפיק הנוירונים DA כי הם בטוחים, standardizable, מדרגי והומוגנית עבור מטרות השתלת תאים, או עבור מידול המשטרה בצלחת וחקירה של המנגנונים התפתחות המחלה הבסיסית ופיתוח.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:828px;" width="827">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">15-ml conical tube</td>
			<td style="width:183px;">Corning</td>
			<td style="width:153px;">430052</td>
			<td style="width:215px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">1-Thioglycerol</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">M6145</td>
			<td>Toxic for inhalation and skin contact</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">24-well plate</td>
			<td style="width:183px;">Corning</td>
			<td style="width:153px;">3337</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">50-ml conical tube&#160;</td>
			<td style="width:183px;">Corning</td>
			<td style="width:153px;">430828</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">6-OHDA</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">H4381</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">6-well plate</td>
			<td style="width:183px;">Corning</td>
			<td style="width:153px;">3516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Accutase</td>
			<td style="width:183px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">A11105-01</td>
			<td>Cell dissociation reagent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Apomorphine</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">A4393</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Ascorbic acid</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">A92902</td>
			<td>Toxic with skin contact&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">B27 supplement&#160;</td>
			<td style="width:183px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">17504044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">BDNF</td>
			<td style="width:183px;">Peprotech</td>
			<td style="width:153px;">450-02</td>
			<td>Brain derived neurotrophic factor</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:277px;">Blood collection tubes containing sodium heparin</td>
			<td style="width:183px;">BD</td>
			<td style="width:153px;">367871</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">BSA</td>
			<td style="width:183px;">yisheng</td>
			<td style="width:153px;">36106es60</td>
			<td>Fetal bovine serum</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">cAMP</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">D0627</td>
			<td>Dibutyryladenosine cyclic monophosphate</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">CellBanker 2</td>
			<td style="width:183px;">ZENOAQ</td>
			<td style="width:153px;">100ml</td>
			<td>Used as freezing medium for PBMNCs</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Chemically defined lipid concentrate</td>
			<td style="width:183px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">11905031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">CHIR99021</td>
			<td style="width:183px;">Gene Operation</td>
			<td style="width:153px;">04-0004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Coverslip</td>
			<td style="width:183px;">Fisher</td>
			<td style="width:153px;">25*25-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">DAPI</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">D8417-10mg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">DAPT</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">D5942</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Dexamethasone</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">D2915-100MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">DMEM-F12</td>
			<td style="width:183px;">Gibco</td>
			<td style="width:153px;">11330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">DMEM-F12</td>
			<td style="width:183px;">Gibco</td>
			<td style="width:153px;">11320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Donkey serum</td>
			<td style="width:183px;">Jackson</td>
			<td style="width:153px;">017-000-121</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">EPO</td>
			<td style="width:183px;">Peprotech</td>
			<td style="width:153px;">100-64-50UG</td>
			<td>Human Erythropoietin</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">FGF8b</td>
			<td style="width:183px;">Peprotech</td>
			<td style="width:153px;">100-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Ficoll-Paque Premium</td>
			<td style="width:183px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:153px;">17-5442-02</td>
			<td>P=1.077, density gradient medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">GDNF</td>
			<td style="width:183px;">Peprotech</td>
			<td style="width:153px;">450-10</td>
			<td>Glial derived neurotrophic factor</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">GlutaMAX</td>
			<td style="width:183px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">21051024</td>
			<td>100 &#215; Glutamine stock solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Ham&#39;s-F12</td>
			<td style="width:183px;">Gibco</td>
			<td style="width:153px;">11765-054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">HBSS</td>
			<td style="width:183px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">14175079</td>
			<td>Balanced salt solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Human leukemia inhibitory factor</td>
			<td style="width:183px;">Millpore</td>
			<td style="width:153px;">LIF1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Human recombinant SCF</td>
			<td style="width:183px;">Peprotech</td>
			<td style="width:153px;">300-07-100UG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">IGF-1</td>
			<td style="width:183px;">Peprotech</td>
			<td style="width:153px;">100-11-100UG</td>
			<td>Human insulin-like growth factor&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">IL-3</td>
			<td style="width:183px;">Peprotech</td>
			<td style="width:153px;">200-03-10UG</td>
			<td>Human interleukin 3</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">IMDM</td>
			<td style="width:183px;">Gibco</td>
			<td style="width:153px;">215056-023</td>
			<td>Iscove&#39;s modified Dulbecco&#39;s medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Insulin</td>
			<td style="width:183px;">Roche&#160;</td>
			<td style="width:153px;">12585014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">ITS-X</td>
			<td style="width:183px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">51500-056</td>
			<td>Insulin-transferrin-selenium-X supplement</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Knockout serum replacement</td>
			<td style="width:183px;">Gibco</td>
			<td style="width:153px;">10828028</td>
			<td>Serum free basal medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Laminin</td>
			<td style="width:183px;">Roche&#160;</td>
			<td style="width:153px;">11243217001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Microsyringe</td>
			<td style="width:183px;">Hamilton</td>
			<td style="width:153px;">7653-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">N2 supplement&#160;</td>
			<td style="width:183px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">17502048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">NEAA</td>
			<td style="width:183px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">11140050</td>
			<td>Non-essential amino acid</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Neurobasal</td>
			<td style="width:183px;">Gibco</td>
			<td style="width:153px;">10888</td>
			<td>Basic medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">PDL</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">P7280</td>
			<td>Poly-D-lysine</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">SAG1</td>
			<td style="width:183px;">Enzo</td>
			<td style="width:153px;">ALX-270-426-M01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">SB431542</td>
			<td style="width:183px;">Gene Operation</td>
			<td style="width:153px;">04-0010-10mg</td>
			<td>Store from light at -20&#8451;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Sendai virus</td>
			<td style="width:183px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:153px;">MAN0009378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Sucrose</td>
			<td style="width:183px;">baiaoshengke</td>
			<td style="width:153px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">TGF&#946;&#8546;</td>
			<td style="width:183px;">Peprotech</td>
			<td style="width:153px;">100-36E</td>
			<td>Transforming growth factor&#160; &#946;&#8546;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Transferrin</td>
			<td style="width:183px;">R&#38;D Systems</td>
			<td style="width:153px;">2914-HT-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Triton X 100</td>
			<td style="width:183px;">baiaoshengke</td>
			<td style="width:153px;"></td>
			<td>Nonionic surfactant</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Trypan blue</td>
			<td style="width:183px;">Gibco</td>
			<td style="width:153px;">T10282</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Xylazine</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">X1126</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generation of induced neural stem cells from peripheral mononuclear cells and differentiation toward dopaminergic neuron precursors for transplantation studies

מחלת פרקינסון (PD) נגרמת על ידי התנוונות של הנוירונים הדוגיים (DA) של הספסטיה הכושי pars (SNpc) ב mesencephalon הגחוני (VM). טיפול החלפת תאים מבטיח הבטחה גדולה לטיפול במשטרה. לאחרונה, המושרה תאי גזע עצביים (iNSCs) התפתחה כמועמד פוטנציאלי לטיפול החלפת תאים בשל הסיכון מופחת של היווצרות הגידול הפלסטיות כדי להצמיח אזור מסוים נוירונים ו גליה. iNSCs ניתן לתכנתו ממקורות סלולריים באופן אוטוולוגי, כגון פיברותקיעות, תאי דם היקפיים (PBMNCs) וסוגים שונים של תאים. בהשוואה לסוגים אחרים של תאים סומטיים, PBMNCs הם סוג של תא starter מושך בשל הקלות לגישה ולהתרחב בתרבות. וירוס סנדאי (צב), וירוס RNA non-אינטגרטיבי, קידוד גורמים מתכנות כולל האדם OCT3/4, SOX2, KLF4 ו c-myc, יש הגיון שלילי, יחיד תקועים, הגנום הלא מקוטע שאינו משתלב לתוך גנום מארח, אבל רק משכפל את הציטופלסמה של תאים נגועים, המציע רכב יעיל ובטוח לתיכנות מראש. במחקר זה, אנו מתארים פרוטוקול שבו iNSCs מתקבלים על ידי מתיכנות מחודש PBMNCs, והבדיל לתוך הנוירונים מיוחדים VM DA על ידי שיטה דו-שלבית. ואז DA-סמנים מושתלים לתוך באופן חד-צדדי 6-הידרודופאמין (6-OHDA)-לגירסה מודלים עכבר המשטרה כדי להעריך את הבטיחות והיעילות לטיפול במשטרה. שיטה זו מספקת פלטפורמה לחקור את הפונקציות וההשפעות הטיפוליות של תאי העצבים הספציפיים של החולה, בתוך מבחנה ובvivo.

כאן, אנו מדווחים על פרוטוקול המכסה בשלבים שונים של טיפול בתאי iNSC-DA לטיפול במודלים PD. ראשית, PBMNCs היו מבודדים והתרחבו, ו מתוכנת מתכנתו לתוך iNSCs על ידי זיהום צב. ייצוג סכמטי של ההליכים עם הרחבת PBMNC ואינדוקציה iNSC מוצג באיור 1. ביום 14, PBMNCs היו מבודדים באמצעות צפיפות מעבר צבע בינונית ...

Watch this Scientific Journal Video about Generation of Induced Neural Stem Cells from Peripheral Mononuclear Cells and Differentiation Toward Dopaminergic Neuron Precursors for Transplantation Studie

Generation of Induced Neural Stem Cells from Peripheral Mononuclear Cells and Differentiation Toward Dopaminergic Neuron Precursors for Transplantation Studies

דור של תאי גזע עצביים מתוך היקפי תאים מונמונומנט ובידול לכיוון תא העצב הפראמינרגיים ללימודי השתלות

הפרוטוקול מציג את התיכנות מראש של תאים היקפיים דם מונפקוף כדי לגרום לתאי גזע עצביים על ידי זיהום וירוס סנדאי, הבידול של iNSCs לתוך הנוירונים הפראים, השתלת ה-DA מקדים לתוך מגירסה חד צדדית מחלת פרקינסון מודלים העכבר, והערכה של הבטיחות והיעילות של הקדם-הלאומית של התובע המחוזי עבור טיפול PD.

Parkinson&#39;s disease (PD) is caused by degeneration of dopaminergic (DA) neurons at the substantia nigra pars compacta (SNpc) in the ventral ...

פרוטוקול זה מתאר שיטה לתכנת מחדש תאים דם ומונונוקלר לתאי גזע עצביים שניתן להשתמש בהם לטיפול במחלות ניווניות, כגון מחלת פרקינסון. הוא מציע מקור תאים אוטולוגי לטיפול במחלות ניווניות. כמו כן, מסגרת הזמן הנדרשת להמרה לתאי גזע עצביים המושרים וההתמדה לסוגי התאים הרצויים קצרה יותר מאשר לתאי גזע פלוריפוטנטיים המושרים.תאי גזע עצביים המושרה בעלי יכולת התפשטות טובה ו ניתן לשנות את קנה המידה שלהם לפני היישום. מאז iNSCs ניתן לציין לתוך תאים עצביים שונים ספציפיים לאזור, כגון נוירונים בחוט השדרה או נוירונים מוטוריים, שיטה זו עשויה להיות מורחבת לטיפול במחלות נוירולוגיות אחרות. ההליך כולו לוקח זמן רב, עם כל השלבים הקשורים וקריטי, כך הדגמה חזותית נותן מושג על איך התאים נראים ומספק כמה טיפים כדי להבטיח דור מוצלח של התאים הרצויים.כדי להתחיל, להעביר דם הווריה היקפי מבודד בעבר לתוך צינור חרוט 50 מיליליטר, ולדלל אותו עם נפח שווה של PBS של דולבקו סטרילי. בצינור חרוט נוסף של 50 מיליליטר, הכינו 15 מיליליטר של מדיום שיפוע צפיפות מעוקר. להטות את הצינור בזווית של 45 מעלות, לאט ובזהירות להניח 30 מיליליטר של דם היקפי מדולל על המדיום שיפוע צפיפות.צנטריפוגה הצינור ב 800 פעמים g במשך 15 דקות בטמפרטורת החדר עם בלם צנטריפוגה להגדיר בתדר כבוי. שאף את שכבת הפלזמה הצהובה העליונה והשליך אותה. השתמש פיפיטה 10 מיליליטר להעביר את לבן, שכבת סרט דק מעונן המכיל תאים mononuclear לצינור חרוט חדש 50 מיליליטר.הוסף 30 מיליליטר של D-PBS לצינור עם MNCs, וצנטריפוגה ב 600 פעמים g במשך 10 דקות בארבע מעלות צלזיוס. לאחר השלכת supernatant, להוסיף 45 מיליליטר של D-PBS ו לעשות שימוש חוזר בתאים. לאחר צנטריפוגה הצינור ב 400 פעמים g במשך 10 דקות בארבע מעלות צלזיוס, להשליך את העל טבעי.השתמש מחדש בתאים עם חמישה מיליליטר של D-PBS, ספור את התאים החיים בשיטת ההדרה הכחולה trypan, להפריש את MNCs הדרושים להרחבה, ולהקפיא את התאים הנותרים לשימוש עתידי. ביום מינוס 14, זרע MNCs בצפיפות של שניים עד שלושה מיליון תאים למיליליטר ל הבאר של צלחת שש באר עם 1.5 מיליליטר של 37 מעלות צלזיוס, בינוני MNC מחומם מראש. דגירה ב 37 מעלות צלזיוס, 5% פחמן דו חמצני במשך יומיים.ביום מינוס 11, להשתמש פיפטה מעוקרת כדי לאסוף את התאים עם המדיום ולהעביר צינור חרוט חדש 15 מיליליטר. צנטריפוגה ב 250 פעמים g במשך חמש דקות בטמפרטורת החדר, להשליך את supernatant, ו resuspend התאים במיליליטר אחד של מדיום MNC מחומם מראש. לאחר ספירת התאים קיימא עם כחול trypan, זרע MNCs בצפיפות של מיליון תאים למיליליטר במדיום MNC מחומם מראש בצלחת שש באר.דגירה ב 37 מעלות צלזיוס, 5% פחמן דו חמצני במשך שלושה ימים, ואיסוף תאים חוזרים, צנטריפוגה, וציפוי בינוני MNC בימים מינוס שמונה ומינוס ארבעה. וירוס סנדאי בהליך זה הוא מסוכן, וכל ההליכים מעורבים וירוס סנדאי חייב להתבצע בקבינט בטיחות. וכל הטיפים והצינורות שנחשפו לנגיף סנדאי צריכים להיות מטופלים באתנול או באקונומיקה לפני ההשלכה.ביום אפס, לאסוף את התאים במדיום MNC ולהעביר צינור חרוט 15 מיליליטר. לאחר צנטריפוגה התאים ב 200 פעמים g במשך חמש דקות, שאפו את supernatant ו resuspend התאים עם מיליליטר אחד של מדיום MNC מחומם מראש. לספור את התאים קיימא עם כחול trypan, ולאחר מכן resuspend אותם עם מדיום MNC מחומם מראש לריכוז של 200, 000 תאים לגם בצלחות 24 באר.להפשיר את הצינורות הוסרו מאחסון מינוס 80 מעלות צלזיוס המכיל וירוס סנדאי באמבט מים 37 מעלות צלזיוס במשך חמש עד 10 שניות, ולאחר מכן להשאיר אותם להפשיר בטמפרטורת החדר. לאחר הפשרתם, מניחים אותם מיד על קרח. הוסף את וירוס סנדאי המופשר ל הבארות של צלחת 24 באר עם MNCs בריבוי של זיהום של 10.כדי להקל על ההחזקה של תאים, צנטריפוגה הצלחות ב 1, 000 פעמים גרם במשך 30 דקות ואחרי זה למקם את הצלחות באינקובטור ב 37 מעלות צלזיוס, 5% פחמן דו חמצני. ביום הראשון, להעביר את התאים עם המדיום לצינור צנטריפוגה 15 מיליליטר. כדי לנתק עוד יותר את התאים הנותרים, לשטוף את בארות עם מיליליטר אחד של מדיום MNC לגם ולהוסיף את התאים עם בינוני לצינור.לאחר צנטריפוגה השעיית התא ב 200 פעמים g במשך חמש דקות, לשאוף את supernatant, resuspend התאים עם 500 microliters של מדיום MNC מחומם מראש טרי, ולהוסיף באר של צלחת 24 באר. ביום השני, השתמש במיליליטר אחד לגם של 50 מיקרוגרם מדוללים בעבר לכל מיקרוליטר פולי-D-ליסין ב- D-PBS כדי לצפות שש צלחות בארות לפחות שעתיים בטמפרטורת החדר. שאף פולי-D-לינזין מצלחות שש בארות, ויבש על הספסל הנקי האנכי במשך כ -10 דקות.לאחר מכן מוסיפים מיליליטר אחד ל באר של חמישה מיקרוגרם מדולל בעבר לכל למינין מיליליטר לצלחות שש בארות, ודגירה במשך ארבע עד שש שעות ב 37 מעלות צלזיוס לציפוי. לשטוף את הצלחות עם D-PBS לפני השימוש. ביום השלישי, צלחת כל MNCs סנדאי התמורמים וירוס במדיום תאי גזע עצביים המושרה על צלחות פולי-D-ליסין / למינין מצופה שש בארות.בימים 5 ו-7, מוסיפים בעדינות מיליליטר אחד של 37 מעלות צלזיוס, מדיום iNSC מחומם מראש לכל באר של צלחות שש בארות. מהיום התשיעי עד היום ה-28, החליפו את המדיום במדיום iNSC טרי וחם מדי יום. לפקח על הופעת מושבות iNSC, ובמשך כשבועיים עד שלושה שבועות לבחור מושבות עם מורפולוגיה מתאימה באמצעות פיפטים זכוכית שרוף ולהעביר כל מושבה ל באר נפרדת של צלחת שש בארות להתרחבות.כדי להקים מודלים חד-צדדיים של עכברים עם 6 ירוקסידופאמין, גילחו את ראשו של עכבר הרדמה, מבוגר, זכר, SCID-בז', והחל משחת עיניים אריתרומיצין. מניחים את העכבר על המנגנון הסטריאוטקסי, ולתקן את העכבר עם פסים חותכים. הכנס את כוסות האוזן כראוי כדי למקם את ראש העכבר בצורה מאובטחת ומתאימה.לעקר את הראש עם povidone יוד ואלכוהול isopropyl, ולאחר מכן להשתמש בלהב אזמל לעשות חתך קשת כ 1.5 ס"מ על עור הראש, חושף את הגולגולת. כווננו את הסורג החותך ואת האוזן כדי להפחית את הפרש הגובה בין ברגמה ללמדה לפחות מ-0.1 מילימטרים. לאט לנוע ולהוריד את קצה מחט microsyringe לכיוון bregma, ולהתייחס ברגמה כנקודת האפס.הזז את הקצה למיקום עם קואורדינטות של 0.5 מילימטרים לפנים ו- 2.1 מילימטרים או יותר ביחס לבריגמה. לסגת מהטיפ, לסמן את הנקודה עם עט סמן, ו, עם מקדחה אלקטרונית, burr חור קטן לתוך הגולגולת. לחלץ שני microliters של חמישה מיקרוגרם לכל מיליליטר 6-יתד פתרון לתוך microsyringe.מחזירים את המחט לנקודה המסומנת, ומכניסים את המחט ל-3.2 מילימטרים. להזריק את פתרון 6-hyroxydopamine מהמזרק בקצב של מיקרוליטר אחד לדקה, להשאיר את מחט ההזרקה במקום עוד חמש דקות, ולאחר מכן לחזור בו לאט. לאחר סגירת החתך עם תפרים, להחיל משחת עיניים אריתרומיצין על העיניים שוב.מוציאים את העכבר מהמנגנונים הסטריאוטוקסיים, מכניסים אותו לכלוב ההחלמה ומאפשרים גישה למזון ומים עד שהוא חוזר להכרה. לאחר PBMNCs נדבקו SEV, המורפולוגיה שלהם השתנתה ותאים עברו מוות דרסטי עד היום החמישי. מושבות INSC הופיעו ביום ה-12.לאחר קטיף והעברת שיבוטים iNSC להתרחבות עבור מספר קטעים, הם הראו מורפולוגיה טובה יכול לחדש את עצמו באופן הדוק במדיום iNSC, או בצורת monolayer או כמו כדורים. לאחר 24 ימים של בידול, iNSCs זוהו נוירונים דופאמין כמו רובם הביעו טירוסין hydroxylase, תיבת forkhead A2, ו נוירון ספציפי סוג III בטא-tubulin סמנים. לאחר הקמת חד צדדי 6-hyroxydopamine-נפגע פרקינסון מודלים עכבר, הערכה התנהגותית נערכה כדי להעריך את הסימפטומים של מחלת פרקינסון.העכברים שקיבלו השתלת תאים הראו שיפור משמעותי בתפקוד המוטורי. היקף הנגע 6-hyroxydopamine-induced אומת על ידי כתמים immunofluorescent פוסט-מורטם עבור TH בסטריאטום, חבילת forebrain המדיה, ו substantia ניגרה pars compacta. האותות החיוביים TH נמצאו מאוד בסטריאטום שבו תאים הושתלו וגם התאוששו קלות ב SN. שלושה חודשים לאחר ההשתלה, בקרב תאים ששרדו, כ -13.84% היו נוירונים דופאמין חיוביים TH.כ-91.72% מהתאים החיוביים ל-TH הביעו קולטן גרעיני יתום, כ-86.76% באו לידי ביטוי FOXA2 וכ-98.77% מתויגים במשותף באשלגן מתקן ג'י-חלבון. בעת הנחת 30 מיל של דם היקפי מדולל על המדיום שיפוע צפיפות, אנא עשה זאת לאט ובזהירות, לא להפריע ממשק הדרגתי. יש לדאוג כדי למנוע הפשרה והקפאה חוזרות ונשנות של וירוס סנדאי כדי להבטיח פעילות וירוס גבוהה.בעת תכנות מחדש של תאי מונונוקלאר דם היקפיים לתאי גזע עצביים המושרים, אנא התבונן מקרוב במורפולוגיה של תאים מדי יום. כמו כן, 6-הידרוקסידופמין הוא רגיש לאור וטמפרטורה. הקפד להגן על הפתרון מפני אור, ולשמור אותו על קרח לפני השימוש.בעקבות הליך זה, ניתן להמשיך לחקור את מנגנוני המחלה באמצעות נוירונים דופאמינרגיים משפחתיים שמקורם בחולה בתרבות. אפשר גם להמשיך לחקור כיצד התאים המושתלים משפיעים על המעגלים העצביים הפגומים.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Direct Induction of Human Neural Stem Cells from Peripheral Blood Hematopoietic Progenitor Cells

אינדוקציה ישירה של תאי גזע עצביים אדם מתאי הדם היקפי Hematopoietic אב

Human disease specific neuronal cultures are essential for generating in vitro models for human neurological diseases. However, the lack of access to ...

Generation of Induced Pluripotent Stem Cells from Human Peripheral T Cells Using Sendai Virus in Feeder-free Conditions

דור של גזע תאים המושרה pluripotent מתאי T ההיקפיים אנושיים באמצעות וירוס סנדאי בתנאים ללא מזין

Recently, iPSCs have attracted attention as a new source of cells for regenerative therapies. Although the initial method for generating iPSCs relied on ...

Generation of Integration-free Induced Pluripotent Stem Cells from Human Peripheral Blood Mononuclear Cells Using Episomal Vectors

דור של תאי גזע מושרים אינטגרציה נטולה מן אדם הדם ההיקפי mononuclear תאי שימוש וקטורי Episomal

Induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs) hold great promise for disease modeling and regenerative therapies. We previously reported the use of Episomal ...

Differentiating Chondrocytes from Peripheral Blood-derived Human Induced Pluripotent Stem Cells

הבדל Chondrocytes מ היקפי דם הנגזרות האדם תאים Pluripotent Pluripotent Induced

In this study, we used peripheral blood cells (PBCs) as seed cells to produce chondrocytes via induced pluripotent stem cells (iPSCs) in an ...

Horizontal Whole Mount: A Novel Processing and Imaging Protocol for Thick, Three-dimensional Tissue Cross-sections of Skin

אופקי הר שלם: עיבוד רומן פרוטוקול הדמיה על רקמה עבה, תלת מימדי חתכים של העור

Processing a tissue of interest to generate a microscopic image that supports a scientific argument can be challenging. The acquisition of high-quality ...

Rapid, Directed Differentiation of Retinal Pigment Epithelial Cells from Human Embryonic or Induced Pluripotent Stem Cells

הבידול מהירה, מכוונת של תאים אפיתל הפיגמנט ברשתית מתאי גזע Pluripotent האנושי עובריים או מושרה

We describe a robust method to direct the differentiation of pluripotent stem cells into retinal pigment epithelial cells (RPE). The purpose of providing ...

Single-cell Photoconversion in Living Intact Zebrafish

Photoconversion תא בודד בהמחיה שלם דג זברה

Animal and plant tissue is composed of distinct populations of cells. These cells interact over time to build and maintain the tissue and can cause ...

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

ניתוח חישובית של Germline Caenorhabditis elegans ללמוד הפצה של גרעינים, חלבונים ו את שלד התא

The Caenorhabditis elegans (C. elegans) germline is used to study several biologically important processes including stem cell development, apoptosis, and ...

Derivation and Differentiation of Canine Ovarian Mesenchymal Stem Cells

גזירת ובידול של הכלבים השחלות בתאי גזע Mesenchymal

Interest in mesenchymal stem cells (MSCs) has increased over the past decade due to their ease of isolation, expansion, and culture. Recently, studies ...

Generation of 3D Skin Organoid from Cord Blood-derived Induced Pluripotent Stem Cells

דור של תא צורב עור תלת-ממד של כבל דם-derived המושרה בתאי גזע Pluripotent

The skin is the body&#8217;s largest organ and has many functions. The skin acts as a physical barrier and protector of the body and regulates bodily ...