Name: generation of induced neural stem cells from peripheral mononuclear cells and differentiation toward dopaminergic neuron precursors for transplantation studies
Uploaded: 2019-07-11T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generation of Induced Neural Stem Cells from Peripheral Mononuclear Cells and Differentiation Toward Dopaminergic Neuron Precursors for Transplantation Studie

Arbeidet ble støttet av følgende tilskudd: Stem Cell og oversettelse nasjonale nøkkel prosjekt (2016YFA0101403), National Natural Science Foundation i Kina (81661130160, 81422014, 81561138004), Beijing Municipal Natural Science Foundation (5142005), Beijing talenter Foundation (2017000021223TD03), support prosjekt av High-Level lærere i Beijing kommunale universiteter i perioden 13th fem-års plan (CIT & TCD20180333), Beijing Medical system High Level talent Award (2015-3-063), Beijing Municipal Health Commission Fund (PXM 2018_026283_000002), Beijing 100, Thousand, og 10000 talenter Fund (2018A03), Beijing kommunale administrasjon av sykehus klinisk medisin utvikling av spesielle finansierings støtte (ZYLX201706), og Royal Society-Newton Advanced Fellowship (NA150482).

Alle prosedyrer må følge retningslinjene for institusjonell menneskelig forskning etikk komiteen. Informert samtykke må innhentes fra pasienter eller friske frivillige før blodoppsamling. Denne protokollen ble godkjent av institusjonens menneskelige forskning etikk komiteen og ble utført i henhold til institusjonens retningslinjer for omsorg og bruk av dyr.
1. innsamling, isolering og utvidelse av PBMNCs
<ol><li>Innsamling av PBMNCs
	<ol>
<li>Samle 10-20 mL av donor per...

<ol>
	<li>Williams-Gray, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+distinct+cognitive+syndromes+of+Parkinson's+disease:+5+year+follow-up+of+the+CamPaIGN+cohort.">The distinct cognitive syndromes of Parkinson's disease: 5 year follow-up of the CamPaIGN cohort.</a> Brain. 132, 2958-2969 (2009).</li><li>Dexter, D. T., Jenner, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parkinson+disease:+from+pathology+to+molecular+disease+mechanisms.">Parkinson disease: from pathology to molecular disease mechanisms.</a> Free Radical Biology and Medicine. 62, 132-144 (2013).</li><li>Chen, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+Therapy+for+Parkinson's+Disease:+New+Hope+from+Reprogramming+Technologies.">Cell Therapy for Parkinson's Disease: New Hope from Reprogramming Technologies.</a> Aging and Disease. 6 (6), 499-503 (2015).</li><li>Takahashi, K., Yamanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+Pluripotent+Stem+Cells+from+Mouse+Embryonic+and+Adult+Fibroblast+Cultures+by+Defined+Factors.">Induction of Pluripotent Stem Cells from Mouse Embryonic and Adult Fibroblast Cultures by Defined Factors.</a> Cell. 126 (4), 663-676 (2006).</li><li>Doi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+human+induced+pluripotent+stem+cell-derived+dopaminergic+progenitors+by+cell+sorting+for+successful+transplantation.">Isolation of human induced pluripotent stem cell-derived dopaminergic progenitors by cell sorting for successful transplantation.</a> Stem Cell Reports. 2 (3), 337-350 (2014).</li><li>Kriks, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine+neurons+derived+from+human+ES+cells+efficiently+engraft+in+animal+models+of+Parkinson's+disease.">Dopamine neurons derived from human ES cells efficiently engraft in animal models of Parkinson's disease.</a> Nature. 480 (7378), 547-551 (2011).</li><li>Perrier, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+midbrain+dopamine+neurons+from+human+embryonic+stem+cells.">Derivation of midbrain dopamine neurons from human embryonic stem cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 101 (34), 12543-12548 (2004).</li><li>Kikuchi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+iPS+cell-derived+dopaminergic+neurons+function+in+a+primate+Parkinson's+disease+model.">Human iPS cell-derived dopaminergic neurons function in a primate Parkinson's disease model.</a> Nature. 548 (7669), 592-596 (2017).</li><li>Ma, T., Xie, M., Laurent, T., Ding, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+in+the+reprogramming+of+somatic+cells.">Progress in the reprogramming of somatic cells.</a> Circulation Research. 112 (3), 562-574 (2013).</li><li>Tang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conversion+of+adult+human+peripheral+blood+mononuclear+cells+into+induced+neural+stem+cell+by+using+episomal+vectors.">Conversion of adult human peripheral blood mononuclear cells into induced neural stem cell by using episomal vectors.</a> Stem Cell Research. 16 (2), 236-242 (2016).</li><li>Yuan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopaminergic+precursors+differentiated+from+human+blood-derived+induced+neural+stem+cells+improve+symptoms+of+a+mouse+Parkinson's+disease+model.">Dopaminergic precursors differentiated from human blood-derived induced neural stem cells improve symptoms of a mouse Parkinson's disease model.</a> Theranostics. 8 (17), 4679-4694 (2018).</li><li>Takahashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+Pluripotent+Stem+Cells+from+Adult+Human+Fibroblasts+by+Defined+Factors.">Induction of Pluripotent Stem Cells from Adult Human Fibroblasts by Defined Factors.</a> Cell. 131 (5), 861-872 (2007).</li><li>Aasen, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+and+rapid+generation+of+induced+pluripotent+stem+cells+from+human+keratinocytes.">Efficient and rapid generation of induced pluripotent stem cells from human keratinocytes.</a> Nature Biotechnology. 26 (11), 1276-1284 (2008).</li><li>Thier, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+conversion+of+fibroblasts+into+stably+expandable+neural+stem+cells.">Direct conversion of fibroblasts into stably expandable neural stem cells.</a> Cell Stem Cell. 10 (4), 473-479 (2012).</li><li>Takahashi, K., Okita, K., Nakagawa, M., Yamanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+pluripotent+stem+cells+from+fibroblast+cultures.">Induction of pluripotent stem cells from fibroblast cultures.</a> Nature Protocols. 2 (12), 3081-3089 (2007).</li><li>Seki, T., Yuasa, S., Fukuda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+induced+pluripotent+stem+cells+from+a+small+amount+of+human+peripheral+blood+using+a+combination+of+activated+T+cells+and+Sendai+virus.">Generation of induced pluripotent stem cells from a small amount of human peripheral blood using a combination of activated T cells and Sendai virus.</a> Nature Protocols. 7 (4), 718-728 (2012).</li><li>Bazley, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+Reprogramming+of+Human+Primordial+Germ+Cells+into+Induced+Pluripotent+Stem+Cells:+Efficient+Generation+of+Genetically+Engineered+Germ+Cells.">Direct Reprogramming of Human Primordial Germ Cells into Induced Pluripotent Stem Cells: Efficient Generation of Genetically Engineered Germ Cells.</a> Stem Cells and Development. 24 (22), 2634-2648 (2015).</li><li>Li, H. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+cytoplasmic+RNA+vector+derived+from+nontransmissible+Sendai+virus+with+efficient+gene+transfer+and+expression.">A cytoplasmic RNA vector derived from nontransmissible Sendai virus with efficient gene transfer and expression.</a> Journal of Virology. 74 (14), 6564-6569 (2000).</li><li>Sochacki, J., Devalle, S., Reis, M., Mattos, P., Rehen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+urine+iPS+cell+lines+from+patients+with+Attention+Deficit+Hyperactivity+Disorder+(ADHD)+using+a+non-integrative+method.">Generation of urine iPS cell lines from patients with Attention Deficit Hyperactivity Disorder (ADHD) using a non-integrative method.</a> Stem Cell Research. 17 (1), 102-106 (2016).</li><li>Ban, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+generation+of+transgene-free+human+induced+pluripotent+stem+cells+(iPSCs)+by+temperature-sensitive+Sendai+virus+vectors.">Efficient generation of transgene-free human induced pluripotent stem cells (iPSCs) by temperature-sensitive Sendai virus vectors.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (34), 14234-14239 (2011).</li><li>Cho, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+efficient+and+large-scale+generation+of+functional+dopamine+neurons+from+human+embryonic+stem+cells.">Highly efficient and large-scale generation of functional dopamine neurons from human embryonic stem cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (9), 3392-3397 (2008).</li><li>Dowey, S. N., Huang, X., Chou, B. -. K., Ye, Z., Cheng, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+integration-free+human+induced+pluripotent+stem+cells+from+postnatal+blood+mononuclear+cells+by+plasmid+vector+expression.">Generation of integration-free human induced pluripotent stem cells from postnatal blood mononuclear cells by plasmid vector expression.</a> Nature Protocols. 7 (11), 2013-2021 (2012).</li><li>Zhu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reprogramming+of+human+primary+somatic+cells+by+OCT4+and+chemical+compounds.">Reprogramming of human primary somatic cells by OCT4 and chemical compounds.</a> Cell Stem Cell. 7 (6), 651-655 (2010).</li><li>Ono, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+neurogenic+potential+in+floor+plate+cells+along+an+anteroposterior+location:+midbrain+dopaminergic+neurons+originate+from+mesencephalic+floor+plate+cells.">Differences in neurogenic potential in floor plate cells along an anteroposterior location: midbrain dopaminergic neurons originate from mesencephalic floor plate cells.</a> Development. 134 (17), 3213-3225 (2007).</li><li>Kirkeby, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+regionally+specified+neural+progenitors+and+functional+neurons+from+human+embryonic+stem+cells+under+defined+conditions.">Generation of regionally specified neural progenitors and functional neurons from human embryonic stem cells under defined conditions.</a> Cell Reports. 1 (6), 703-714 (2012).</li><li>Chambers, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+efficient+neural+conversion+of+human+ES+and+iPS+cells+by+dual+inhibition+of+SMAD+signaling.">Highly efficient neural conversion of human ES and iPS cells by dual inhibition of SMAD signaling.</a> Nature Biotechnology. 27 (3), 275-280 (2009).</li><li>Fasano, C. A., Chambers, S. M., Lee, G., Tomishima, M. J., Studer, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+derivation+of+functional+floor+plate+tissue+from+human+embryonic+stem+cells.">Efficient derivation of functional floor plate tissue from human embryonic stem cells.</a> Cell Stem Cell. 6 (4), 336-347 (2010).</li><li>Harvey, B. K., Wang, Y., Hoffer, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+rodent+models+of+Parkinson's+disease.">Transgenic rodent models of Parkinson's disease.</a> Acta Neurochirurgica Supplements. 101, 89-92 (2008).</li><li>Sheng, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+dopaminergic+neurons+directly+from+mouse+fibroblasts+and+fibroblast-derived+neural+progenitors.">Generation of dopaminergic neurons directly from mouse fibroblasts and fibroblast-derived neural progenitors.</a> Cell Research. 22 (4), 769-772 (2012).</li><li>Prasad, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+induced+pluripotent+stem+cell,+direct+conversion+by+trans-differentiation,+direct+reprogramming+and+oligodendrocyte+differentiation.">A review of induced pluripotent stem cell, direct conversion by trans-differentiation, direct reprogramming and oligodendrocyte differentiation.</a> Regenerative Medicine. 11 (2), 181-191 (2016).</li></ol>

Her har vi presentert en protokoll som dekket ulike stadier av iNSC-DA celle terapi for PD-modeller. Kritiske aspekter ved denne protokollen inkluderer: (1) isolering og utvidelse av PBMNCs og omprogrammering av PBMNCs i iNSCs av SeV infeksjon, (2) differensiering av iNSCs til DA neurons, (3) etablering av ensidig 6-OHDA-lesioned PD mus modeller og atferdsmessige vurdering, og (4) celle transplantasjon av DA forløpere og atferdsdata vurdering.
I denne protokollen involverer den første delen ...

Parkinsons sykdom (PD) er en vanlig nevrodegenerative lidelse, forårsaket av degenerasjon av dopaminerg (DA) neurons ved substantia Nigra Pars compacta (SNpc) i ventrale mesencephalon (VM), med en prevalens på mer enn 1% i befolkning over 60 år 1 den andre , 2. i løpet av det siste tiåret, celle terapi, som tar sikte på enten å erstatte den degenerative eller skadede celler, eller nærende mikromiljøet rundt degenereres neurons, har vist potensial i behandling av PD3. I mellomtiden har omprogrammering teknologi gjort betydelige fremskritt4, som gir en lovende mobil kilde for erstatning terapi. Human indusert Pluripotent stamceller (iPSCs) og embryonale stamceller (ESCs) har vist seg å være i stand til å differensiere i DA nevrale celler, som kunne overleve, maturate, og forbedre motoriske funksjoner når podet inn rotte og ikke-menneskelige primater PD modeller5 ,6,7,8. iPSCs representerer en milepæl i cellulære omprogrammering teknologier og har et stort potensial i celle transplantasjon; Det er imidlertid fortsatt en bekymring for risikoen for tumor dannelse fra ufullstendig differensiert celler. En alternativ mobil kilde for celle transplantasjon er avstamning-begått voksen stamceller innhentet gjennom direkte omprogrammering, slik som indusert nevrale stamceller (iNSCs), som kan utledes fra den ustabile mellom produkter, omgåelsen pluripotency trinn9,10,11.
Både iPSCs og iNSCs kan være omprogrammeres fra autologous cellulære kilder, for eksempel fibroblaster, perifert blod mononukleære celler (PBMNCs) og ulike andre typer celler12,13,14, og dermed redusere immunogenisitet av transplanterte celler i stor grad. Videre, sammenlignet med iPSCs, iNSCs er iboende med redusert risiko for tumor dannelse og avstamning-begått plastisitet, bare i stand til å differensiere til neurons og glia11. I den innledende studier, menneskelig eller mus iPSCs og iNSCs ble generert fra fibroblaster innhentet fra huden biopsier, som er en invasiv prosedyre14,15. Med denne respekten, PBMNCs er en tiltalende for rett celle kilde på grunn av mindre invasiv prøvetaking prosessen, og enkelt å få et stort antall celler innen en kort periode med utvidelse tid16. Initial omprogrammering studier ansatt integrerende levering systemer, for eksempel lentiviral eller retroviral vektorer, som er effektiv og enkel å implementere i mange typer celler17; disse leveringssystemene kan imidlertid forårsake mutasjoner og reaktivering av gjenværende transgenes, som utgjør sikkerhetsproblemer for kliniske terapeutiske formål12. Sendai virus (SeV) er en ikke-integrerende RNA virus med en negativ-Sense, Single-strandet Genova som ikke integreres ikke i verten Genova, men bare replikerer i cytoplasma av infiserte celler, og tilbyr en effektiv og trygg bil for omprogrammering18 ,19. Rekombinant SeV vektorer er tilgjengelige som inneholder omprogrammering faktorer, inkludert menneskelige OCT3/4, SOX2, KLF4 og c-myC i sine åpne Reading rammer. I tillegg kan SeV viral vektorer bli ytterligere forbedret ved å innføre temperaturfølsomme mutasjoner, slik at de kunne bli raskt fjernet når kulturen temperaturen er hevet til 39 ° c20. I denne artikkelen beskriver vi en protokoll for å programmere PBMNCs til iNSCs ved hjelp av SeV-systemet.
Mange studier har rapportert avledning av da neurons fra humant ESCs eller iPSCs ved hjelp av ulike metoder6,8,21. Det er imidlertid en mangel på protokoller som beskriver differensiering av DA neurons fra iNSCs i detaljer. I denne protokollen vil vi beskrive den effektive generasjonen av DA neurons fra iNSCs ved hjelp av en to-trinns metode. DA neuronal prekursorer kan bli transplantert inn i striatum av PD mus modeller for sikkerhet og effekt evalueringer. Denne artikkelen vil presentere en detaljert protokoll som dekker ulike stadier fra generering av indusert nevrale stamceller ved Sendai virus, differensiering av iNSCs i DA neurons, etablering av mus PD modeller, til transplantasjon av DA forløpere i striatum av PD-modellene. Ved hjelp av denne protokollen, kan man generere iNSCs fra pasienter og sunne donorer og utlede DA neurons som er trygge, standardizable, skalerbar og homogen for celle transplantasjon formål, eller for modellering PD i en tallerken og etterforskning av mekanismene underliggende sykdomsutbruddet og utviklingen.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:828px;" width="827">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">15-ml conical tube</td>
			<td style="width:183px;">Corning</td>
			<td style="width:153px;">430052</td>
			<td style="width:215px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">1-Thioglycerol</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">M6145</td>
			<td>Toxic for inhalation and skin contact</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">24-well plate</td>
			<td style="width:183px;">Corning</td>
			<td style="width:153px;">3337</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">50-ml conical tube&#160;</td>
			<td style="width:183px;">Corning</td>
			<td style="width:153px;">430828</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">6-OHDA</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">H4381</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">6-well plate</td>
			<td style="width:183px;">Corning</td>
			<td style="width:153px;">3516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Accutase</td>
			<td style="width:183px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">A11105-01</td>
			<td>Cell dissociation reagent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Apomorphine</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">A4393</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Ascorbic acid</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">A92902</td>
			<td>Toxic with skin contact&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">B27 supplement&#160;</td>
			<td style="width:183px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">17504044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">BDNF</td>
			<td style="width:183px;">Peprotech</td>
			<td style="width:153px;">450-02</td>
			<td>Brain derived neurotrophic factor</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:277px;">Blood collection tubes containing sodium heparin</td>
			<td style="width:183px;">BD</td>
			<td style="width:153px;">367871</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">BSA</td>
			<td style="width:183px;">yisheng</td>
			<td style="width:153px;">36106es60</td>
			<td>Fetal bovine serum</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">cAMP</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">D0627</td>
			<td>Dibutyryladenosine cyclic monophosphate</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">CellBanker 2</td>
			<td style="width:183px;">ZENOAQ</td>
			<td style="width:153px;">100ml</td>
			<td>Used as freezing medium for PBMNCs</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Chemically defined lipid concentrate</td>
			<td style="width:183px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">11905031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">CHIR99021</td>
			<td style="width:183px;">Gene Operation</td>
			<td style="width:153px;">04-0004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Coverslip</td>
			<td style="width:183px;">Fisher</td>
			<td style="width:153px;">25*25-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">DAPI</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">D8417-10mg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">DAPT</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">D5942</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Dexamethasone</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">D2915-100MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">DMEM-F12</td>
			<td style="width:183px;">Gibco</td>
			<td style="width:153px;">11330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">DMEM-F12</td>
			<td style="width:183px;">Gibco</td>
			<td style="width:153px;">11320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Donkey serum</td>
			<td style="width:183px;">Jackson</td>
			<td style="width:153px;">017-000-121</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">EPO</td>
			<td style="width:183px;">Peprotech</td>
			<td style="width:153px;">100-64-50UG</td>
			<td>Human Erythropoietin</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">FGF8b</td>
			<td style="width:183px;">Peprotech</td>
			<td style="width:153px;">100-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Ficoll-Paque Premium</td>
			<td style="width:183px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:153px;">17-5442-02</td>
			<td>P=1.077, density gradient medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">GDNF</td>
			<td style="width:183px;">Peprotech</td>
			<td style="width:153px;">450-10</td>
			<td>Glial derived neurotrophic factor</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">GlutaMAX</td>
			<td style="width:183px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">21051024</td>
			<td>100 &#215; Glutamine stock solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Ham&#39;s-F12</td>
			<td style="width:183px;">Gibco</td>
			<td style="width:153px;">11765-054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">HBSS</td>
			<td style="width:183px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">14175079</td>
			<td>Balanced salt solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Human leukemia inhibitory factor</td>
			<td style="width:183px;">Millpore</td>
			<td style="width:153px;">LIF1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Human recombinant SCF</td>
			<td style="width:183px;">Peprotech</td>
			<td style="width:153px;">300-07-100UG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">IGF-1</td>
			<td style="width:183px;">Peprotech</td>
			<td style="width:153px;">100-11-100UG</td>
			<td>Human insulin-like growth factor&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">IL-3</td>
			<td style="width:183px;">Peprotech</td>
			<td style="width:153px;">200-03-10UG</td>
			<td>Human interleukin 3</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">IMDM</td>
			<td style="width:183px;">Gibco</td>
			<td style="width:153px;">215056-023</td>
			<td>Iscove&#39;s modified Dulbecco&#39;s medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Insulin</td>
			<td style="width:183px;">Roche&#160;</td>
			<td style="width:153px;">12585014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">ITS-X</td>
			<td style="width:183px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">51500-056</td>
			<td>Insulin-transferrin-selenium-X supplement</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Knockout serum replacement</td>
			<td style="width:183px;">Gibco</td>
			<td style="width:153px;">10828028</td>
			<td>Serum free basal medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Laminin</td>
			<td style="width:183px;">Roche&#160;</td>
			<td style="width:153px;">11243217001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Microsyringe</td>
			<td style="width:183px;">Hamilton</td>
			<td style="width:153px;">7653-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">N2 supplement&#160;</td>
			<td style="width:183px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">17502048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">NEAA</td>
			<td style="width:183px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">11140050</td>
			<td>Non-essential amino acid</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Neurobasal</td>
			<td style="width:183px;">Gibco</td>
			<td style="width:153px;">10888</td>
			<td>Basic medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">PDL</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">P7280</td>
			<td>Poly-D-lysine</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">SAG1</td>
			<td style="width:183px;">Enzo</td>
			<td style="width:153px;">ALX-270-426-M01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">SB431542</td>
			<td style="width:183px;">Gene Operation</td>
			<td style="width:153px;">04-0010-10mg</td>
			<td>Store from light at -20&#8451;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Sendai virus</td>
			<td style="width:183px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:153px;">MAN0009378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Sucrose</td>
			<td style="width:183px;">baiaoshengke</td>
			<td style="width:153px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">TGF&#946;&#8546;</td>
			<td style="width:183px;">Peprotech</td>
			<td style="width:153px;">100-36E</td>
			<td>Transforming growth factor&#160; &#946;&#8546;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Transferrin</td>
			<td style="width:183px;">R&#38;D Systems</td>
			<td style="width:153px;">2914-HT-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Triton X 100</td>
			<td style="width:183px;">baiaoshengke</td>
			<td style="width:153px;"></td>
			<td>Nonionic surfactant</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Trypan blue</td>
			<td style="width:183px;">Gibco</td>
			<td style="width:153px;">T10282</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Xylazine</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">X1126</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generation of induced neural stem cells from peripheral mononuclear cells and differentiation toward dopaminergic neuron precursors for transplantation studies

Parkinsons sykdom (PD) er forårsaket av degenerasjon av dopaminerg (DA) neurons på substantia Nigra Pars compacta (SNpc) i ventrale mesencephalon (VM). Celle erstatning terapi har store løftet for behandling av PD. nylig induserte nevrale stamceller (iNSCs) har dukket opp som en potensiell kandidat for celle erstatning terapi på grunn av redusert risiko for tumor dannelse og plastisitet å gi opphav til områdespesifikke neurons og glia. iNSCs kan omprogrammeres fra autologous somatiske Cellular kilder, som fibroblaster, perifert blod mononukleære celler (PBMNCs) og forskjellige annet typer av celler. Sammenlignet med andre typer somatiske celler, PBMNCs er en tiltalende Start celle type på grunn av det enkle å få tilgang til og utvide i kultur. Sendai virus (SeV), en RNA ikke-integrerende virus, koding omprogrammering faktorer, inkludert humant OCT3/4, SOX2, KLF4 og c-myC, har en negativ-Sense, Single-strandet, ikke-segmentert Genova som ikke integreres i vert Genova, men bare replikerer i cytoplasma av infiserte celler, og tilbyr en effektiv og trygg bil for omprogrammering. I denne studien, beskriver vi en protokoll der iNSCs er innhentet av omprogrammering PBMNCs, og differensiert i spesialiserte VM DA neurons av en to-trinns metode. Da prekursorer er transplantert inn ensidig 6-hyroxydopamine (6-OHDA)-lesioned PD mus modeller for å evaluere sikkerhet og effekt for behandling av PD. Denne metoden gir en plattform for å undersøke funksjoner og terapeutiske effekter av pasientspesifikke DA nevrale celler in vitro og in vivo.

Her rapporterer vi en protokoll som dekker ulike stadier av iNSC-DA celle terapi for å behandle PD-modeller. For det første ble PBMNCs isolert og utvidet, og omprogrammeres inn iNSCs av SeV infeksjon. En skjematisk fremstilling av prosedyrene med PBMNC ekspansjon og iNSC induksjon er vist i figur 1. På dag-14, PBMNCs ble isolert ved hjelp av en tetthet gradient medium (tabell av materialer). Før sentrifugering ble blodet fortynnet med PBS og graderings mediet med tetthet...

Watch this Scientific Journal Video about Generation of Induced Neural Stem Cells from Peripheral Mononuclear Cells and Differentiation Toward Dopaminergic Neuron Precursors for Transplantation Studie

Generation of Induced Neural Stem Cells from Peripheral Mononuclear Cells and Differentiation Toward Dopaminergic Neuron Precursors for Transplantation Studies

Generering av indusert nevrale stamceller fra perifere mononukleære celler og differensiering mot Dopaminerg Nevron forløpere for transplantasjon Studies

Protokollen presenterer omprogrammering av perifere blod mononukleære celler for å indusere nevrale stamceller ved Sendai virus infeksjon, differensiering av iNSCs inn dopaminerg neurons, transplantasjon av DA forløpere til ensidig-lesioned Musemodeller for Parkinsons sykdom, og evaluering av sikkerhet og effekt av iNSC-avledede DA forløpere for PD-behandling.

Parkinson&#39;s disease (PD) is caused by degeneration of dopaminergic (DA) neurons at the substantia nigra pars compacta (SNpc) in the ventral ...

Denne protokollen beskriver en metode for å omprogrammere blod og mononukleære celler til nevrale stamceller som kan brukes til å behandle nevrodegenerative sykdommer, som Parkinsons sykdom. Det tilbyr en autolog cellekilde for å behandle nevrodegenerative sykdommer. Også tidsrammen som kreves for konvertering til induserte nevrale stamceller og differensiering til ønskede celletyper er kortere enn for induserte pluripotente stamceller.Induserte nevrale stamceller har en god proliferativ kapasitet og kan skaleres opp før påføring. Siden iNSCene kan spesifiseres i forskjellige regionspesifikke nevrale celler, for eksempel ryggmargsnevroner eller motornevroner, kan denne metoden utvides for behandling av andre nevrologiske sykdommer. Hele prosedyren tar lang tid, med alle trinnene relaterte og kritiske, så visuell demonstrasjon gir en ide om hvordan cellene ser ut og gir noen tips for å sikre en vellykket generasjon av de ønskede cellene.Til å begynne med overfører du tidligere isolert perifert venøst blod til et konisk rør på 50 milliliter, og fortynne det med like mye sterilt Dulbeccos PBS. I en annen 50-milliliter konisk rør, forberede 15 milliliter sterilisert tetthet gradient medium. Vipp røret i en 45-graders vinkel, og legg sakte og forsiktig 30 milliliter fortynnet perifert blod på tetthetsgradientmediet.Sentrifuger røret ved 800 ganger g i 15 minutter ved romtemperatur med sentrifugebremsen satt i av-stilling. Aspirer det gule, øvre plasmalaget, og kast det. Bruk en 10-milliliter pipette til å overføre det hvite, overskyede tynnfilmlaget som inneholder mononukleære celler til et nytt konisk rør på 50 milliliter.Tilsett 30 milliliter D-PBS i røret med MNCer, og sentrifuge ved 600 ganger g i 10 minutter ved fire grader Celsius. Etter å ha kastet det overnaturlige, tilsett 45 milliliter D-PBS og gjenoppuss cellene. Etter å ha sentrifugert røret på 400 ganger g i 10 minutter ved fire grader Celsius, kast supernatanten.Gjenoppusser cellene med fem milliliter D-PBS, telle de levende cellene med trypan blå ekskluderingsmetoden, sett til side MNCs som trengs for utvidelse, og fryse de resterende cellene for fremtidig bruk. På dag minus 14, frø MNC med en tetthet på to til tre millioner celler per milliliter per brønn på seks-brønns plate med 1,5 milliliter på 37-graders Celsius, pre-oppvarmet MNC medium. Inkuber ved 37 grader Celsius, 5% karbondioksid i to dager.På dag minus 11, bruk en sterilisert pipette for å samle cellene med mediet og overføre til et nytt 15-milliliter konisk rør. Sentrifuge ved 250 ganger g i fem minutter ved romtemperatur, kast supernatanten og gjenoppstår cellene i en milliliter forhåndsoppvarmet MNC-medium. Etter å ha talt de levedyktige cellene med trypan blå, frø MNCs med en tetthet på en million celler per milliliter i pre-oppvarmet MNC medium i en seks-brønns plate.Inkuber ved 37 grader Celsius, 5% karbondioksid i tre dager, og gjenta celleoppsamling, sentrifugering og plating i MNC medium på dager minus åtte og minus fire. Sendai-viruset i denne prosedyren er farlig, og alle prosedyrer som involverer Sendai-virus må utføres i et sikkerhetsskap. Og alle tips og rør utsatt for Sendai-virus bør behandles med etanol eller blekemiddel før avhending.På dag null, samle cellene i MNC medium og overføre til en 15-milliliter konisk rør. Etter å ha sentrifugert cellene ved 200 ganger g i fem minutter, aspirerer de overnaturante og gjenbruker cellene med en milliliter forhåndsoppvarmet MNC-medium. Tell de levedyktige cellene med trypan blå, og deretter gjenbruke dem med forvarmet MNC medium til en konsentrasjon på 200,000 celler per brønn i 24-brønn plater.Tin rørene fjernet fra minus 80-graders Celsius lagring som inneholder Sendai virus i en 37-graders Celsius vannbad i fem til 10 sekunder, og deretter la dem tine ved romtemperatur. Når de er tint, legg dem umiddelbart på is. Tilsett det tinte Sendai-viruset i brønnene på 24-brønnplaten med MNCer ved et mangfold av infeksjon på 10.For å lette vedlegget av celler, sentrifuger platene ved 1000 ganger g i 30 minutter, og deretter plasserer platene i inkubatoren ved 37 grader Celsius, 5% karbondioksid. På dag én overfører du cellene med mediet til et 15-milliliter sentrifugerør. For ytterligere å løsne de gjenværende cellene, skyll brønnene med en milliliter MNC medium per brønn og legg cellene med middels til røret.Etter å ha sentrifugert cellefjæringen på 200 ganger g i fem minutter, aspirerer de overnaturante, gjenoppuspend cellene med 500 mikroliter med friske forhåndsoppvarmede MNC-medium, og legg til en brønn av en 24-brønns plate. På dag to bruker du én milliliter per brønn av tidligere fortynnede 50 mikrogram per mikroliter poly-D-lysin i D-PBS for å belegge seksbrønnplater i minst to timer ved romtemperatur. Aspirer poly-D-lysin fra seksbrønnplatene, og tørk på den vertikale rene benken i ca. 10 minutter.Tilsett deretter en milliliter per brønn av en tidligere fortynnet fem mikrogram per milliliter laminin til seksbrønnsplatene, og inkuber i fire til seks timer ved 37 grader Celsius å belegge. Vask platene med D-PBS før bruk. På dag tre, plate alle Sendai virus-transdusert MNCs i indusert nevrale stamcelle medium på poly-D-lysin / laminin-belagt seks-brønn plater.På dag fem og syv, legg forsiktig til en milliliter 37-graders Celsius, forvarmet iNSC medium til hver brønn av de seks-brønnsplatene. Fra dag ni til dag 28 erstatter du mediet med friskt forvarmet iNSC-medium daglig. Overvåk fremveksten av iNSC kolonier, og i ca to til tre uker plukke kolonier med passende morfologi ved hjelp av brent glass pipetter og overføre hver koloni til en egen brønn av en seks-brønns plate for ekspansjon.For å etablere ensidige 6-hyroxydopamine-lesjonerte musemodeller, barber hodet til en bedøvet, voksen, mannlig, SCID-beige mus, og bruk erytromycin øyesalve. Plasser musen på stereotaksisk apparat, og fest musen med fortent stenger. Sett inn øreklokkene riktig for å feste og plassere musehodet på riktig måte.Steriliser hodet med povidon jod og isopropylalkohol, og bruk deretter et skalpellblad for å lage et ca. 1,5 centimeter sagittalt snitt på hodehuden, og eksponerer skallen. Juster fortenn bar og ørebarer for å redusere høydeforskjellen mellom bregma og lambda til mindre enn 0,1 millimeter. Sakte flytte og senke spissen av microsyringe nålen mot bregma, og behandle bregma som nullpunkt.Flytt spissen til en posisjon med koordinater av fremre 0,5 millimeter og lateral 2,1 millimeter i forhold til bregma. Trekk spissen tilbake, merk punktet med en markørpenn, og med en elektronisk drill burr et lite hull i skallen. Trekk ut to mikroliter på fem mikrogram per milliliter 6-hyroxydopaminoppløsning i mikrosyringen.Sett nålen tilbake til det punktet som er merket, og sett nålen inn i dorsal/ventral 3,2 millimeter. Injiser 6-hyroxydopaminoppløsningen fra sprøyten med en hastighet på en mikroliter per minutt, la injeksjonsnålen være på plass i ytterligere fem minutter, og trekk den deretter sakte tilbake. Etter å ha lukket snittet med suturer, bruk erytromycin øyesalve på øynene igjen.Fjern musen fra det stereotoksiske apparatet, legg den i gjenopprettingsburet, og gi tilgang til mat og vann til den gjenvinner bevisstheten. Etter at PBMNCs ble smittet med SeV, endret deres morfologi seg og cellene gjennomgikk en drastisk død til dag fem. INSC kolonier dukket opp på dag 12.Etter å ha plukket og overført iNSC kloner for utvidelse for en rekke passasjer, viste de en god morfologi og kunne selvfornye stabilt i iNSC medium, enten i en monolayer form eller som kuler. Etter 24 dager med differensiering ble iNSC-er identifisert som dopaminerge nevroner som et flertall av dem uttrykte tyrosinhydroksylase, gaffelthodeboks A2 og nevronspesifikke klasse III beta-tubulinmarkører. Etter etablering av ensidige 6-hyroxydopamine-lesjonerte Parkinsons sykdom mus modeller, atferdsvurdering ble utført for å estimere Parkinsons sykdom symptomer.Musene som hadde fått celletransplantasjon viste signifikant forbedring i motorisk funksjon. Omfanget av 6-hyroxydopamine-indusert lesjoner ble verifisert av post-mortem immunofluorescent farging for TH på striatum, medial forebrain bunt, og substantia nigra pars compacta. De TH-positive signalene ble sterkt gjenopprettet i striatum hvor cellene ble implantert og også mildt gjenopprettet ved SN. Tre måneder etter transplantasjon, blant overlevende celler, var ca 13,84% TH-positive dopaminerge nevroner.Omtrent 91,72% av de TH-positive cellene uttrykte foreldreløse kjernefysiske reseptor, ca 86,76% uttrykte FOXA2, og ca 98,77% ble co-merket med G-protein-drevet innover likeretter kalium. Når du legger 30 mils fortynnet perifert blod på tetthetsgradientmediet, gjør du det sakte og forsiktig, for ikke å forstyrre gradientgrensesnittet. Forsiktighet bør tas for å unngå gjentatt tining og frysing av Sendai virus for å sikre en høy virusaktivitet.Når du omprogrammerer perifere blod mononukleære celler til induserte nevrale stamceller, vennligst følg cellenes morfologi hver dag. 6-hydroksydopamin er også lys- og temperaturfølsom. Vær forsiktig med å beskytte løsningen mot lys, og hold den på is før bruk.Etter denne prosedyren kan man fortsette å studere sykdomsmekanismene ved hjelp av familiære PD-pasientavledede dopaminerge nevroner i kulturen. Man kan også fortsette å undersøke hvordan de transplanterte cellene påvirker de skadede nevronale kretsene.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Direct Induction of Human Neural Stem Cells from Peripheral Blood Hematopoietic Progenitor Cells

Direkte Induction of Human Neural stamceller fra perifert blod Hematopoietiske stamceller

Human disease specific neuronal cultures are essential for generating in vitro models for human neurological diseases. However, the lack of access to ...

Generation of Induced Pluripotent Stem Cells from Human Peripheral T Cells Using Sendai Virus in Feeder-free Conditions

Generering av Induced Pluripotent stamceller fra menneske perifere T-celler Bruke Sendai Virus i Feeder-free betingelser

Recently, iPSCs have attracted attention as a new source of cells for regenerative therapies. Although the initial method for generating iPSCs relied on ...

Generation of Integration-free Induced Pluripotent Stem Cells from Human Peripheral Blood Mononuclear Cells Using Episomal Vectors

Generasjon Integrerings--frie Utførte Pluripotent stamceller fra menneskelige perifere mononukleære blodceller Bruke episomale vektorer

Induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs) hold great promise for disease modeling and regenerative therapies. We previously reported the use of Episomal ...

Differentiating Chondrocytes from Peripheral Blood-derived Human Induced Pluripotent Stem Cells

Differensiering av kondrocytter fra perifert blod-avledede humane inducerte pluripotente stamceller

In this study, we used peripheral blood cells (PBCs) as seed cells to produce chondrocytes via induced pluripotent stem cells (iPSCs) in an ...

Horizontal Whole Mount: A Novel Processing and Imaging Protocol for Thick, Three-dimensional Tissue Cross-sections of Skin

Horisontal helmontering: En romanbehandlings- og bildeprotokoll for tykke, tredimensjonale vev Tverrsnitt av huden

Processing a tissue of interest to generate a microscopic image that supports a scientific argument can be challenging. The acquisition of high-quality ...

Rapid, Directed Differentiation of Retinal Pigment Epithelial Cells from Human Embryonic or Induced Pluripotent Stem Cells

Rask, rettet differensiering av netthinnens Pigment epitelceller fra menneskelige embryonale eller indusert Pluripotent stamceller

We describe a robust method to direct the differentiation of pluripotent stem cells into retinal pigment epithelial cells (RPE). The purpose of providing ...

Single-cell Photoconversion in Living Intact Zebrafish

Encellede Photoconversion i levende intakt sebrafisk

Animal and plant tissue is composed of distinct populations of cells. These cells interact over time to build and maintain the tissue and can cause ...

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Beregningsorientert analyse av Caenorhabditis elegans Germline å studere distribusjon av kjerner, proteiner og Cytoskeleton

The Caenorhabditis elegans (C. elegans) germline is used to study several biologically important processes including stem cell development, apoptosis, and ...

Derivation and Differentiation of Canine Ovarian Mesenchymal Stem Cells

Avledning og differensiering av hjørnetann Ovarian Mesenchymal stamceller

Interest in mesenchymal stem cells (MSCs) has increased over the past decade due to their ease of isolation, expansion, and culture. Recently, studies ...

Generation of 3D Skin Organoid from Cord Blood-derived Induced Pluripotent Stem Cells

Generasjon 3D huden Organoid fra ledningen blod-avledet indusert Pluripotent stamceller

The skin is the body&#8217;s largest organ and has many functions. The skin acts as a physical barrier and protector of the body and regulates bodily ...