Name: generation of induced neural stem cells from peripheral mononuclear cells and differentiation toward dopaminergic neuron precursors for transplantation studies
Uploaded: 2019-07-11T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generation of Induced Neural Stem Cells from Peripheral Mononuclear Cells and Differentiation Toward Dopaminergic Neuron Precursors for Transplantation Studie

O trabalho foi apoiado pelas seguintes subvenções: célula-tronco e tradução do projeto chave nacional (2016YFA0101403), Fundação Nacional de ciências naturais da China (81661130160, 81422014, 81561138004), Fundação Municipal de ciência natural de Pequim (5142005), Fundação dos talentos de Beijing (2017000021223TD03), projeto da sustentação de professores de nível elevado em universidades municipais de Beijing no período do 13º plano do cinco-ano (CIT & TCD20180333), concessão de talento de nível elevado do sistema médico de Beijing (2015-3-063), Beijing Fundo da Comissão Municipal de saúde (PXM 2018_026283_000002), Pequim 100, mil e 10000 fundo de talentos (2018A03), administração municipal de Pequim de hospitais de medicina clínica desenvolvimento de apoio especial de financiamento (ZYLX201706), e os Royal Society-Newton bolsa avançada (NA150482).

Todos os procedimentos devem seguir as diretrizes do Comitê institucional de ética em pesquisa humana. O consentimento informado deve ser obtido de pacientes ou voluntários saudáveis antes da coleta de sangue. Este protocolo foi aprovado pelo Comitê de ética em pesquisa humana da instituição e foi realizado de acordo com as diretrizes da instituição para o cuidado e uso de animais.
1. recolha, isolamento e expansão de PBMNCs
<ol><li>Coleção de PBMNCs
	<ol>
<li>C...

<ol>
	<li>Williams-Gray, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+distinct+cognitive+syndromes+of+Parkinson's+disease:+5+year+follow-up+of+the+CamPaIGN+cohort.">The distinct cognitive syndromes of Parkinson's disease: 5 year follow-up of the CamPaIGN cohort.</a> Brain. 132, 2958-2969 (2009).</li><li>Dexter, D. T., Jenner, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parkinson+disease:+from+pathology+to+molecular+disease+mechanisms.">Parkinson disease: from pathology to molecular disease mechanisms.</a> Free Radical Biology and Medicine. 62, 132-144 (2013).</li><li>Chen, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+Therapy+for+Parkinson's+Disease:+New+Hope+from+Reprogramming+Technologies.">Cell Therapy for Parkinson's Disease: New Hope from Reprogramming Technologies.</a> Aging and Disease. 6 (6), 499-503 (2015).</li><li>Takahashi, K., Yamanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+Pluripotent+Stem+Cells+from+Mouse+Embryonic+and+Adult+Fibroblast+Cultures+by+Defined+Factors.">Induction of Pluripotent Stem Cells from Mouse Embryonic and Adult Fibroblast Cultures by Defined Factors.</a> Cell. 126 (4), 663-676 (2006).</li><li>Doi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+human+induced+pluripotent+stem+cell-derived+dopaminergic+progenitors+by+cell+sorting+for+successful+transplantation.">Isolation of human induced pluripotent stem cell-derived dopaminergic progenitors by cell sorting for successful transplantation.</a> Stem Cell Reports. 2 (3), 337-350 (2014).</li><li>Kriks, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine+neurons+derived+from+human+ES+cells+efficiently+engraft+in+animal+models+of+Parkinson's+disease.">Dopamine neurons derived from human ES cells efficiently engraft in animal models of Parkinson's disease.</a> Nature. 480 (7378), 547-551 (2011).</li><li>Perrier, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+midbrain+dopamine+neurons+from+human+embryonic+stem+cells.">Derivation of midbrain dopamine neurons from human embryonic stem cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 101 (34), 12543-12548 (2004).</li><li>Kikuchi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+iPS+cell-derived+dopaminergic+neurons+function+in+a+primate+Parkinson's+disease+model.">Human iPS cell-derived dopaminergic neurons function in a primate Parkinson's disease model.</a> Nature. 548 (7669), 592-596 (2017).</li><li>Ma, T., Xie, M., Laurent, T., Ding, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+in+the+reprogramming+of+somatic+cells.">Progress in the reprogramming of somatic cells.</a> Circulation Research. 112 (3), 562-574 (2013).</li><li>Tang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conversion+of+adult+human+peripheral+blood+mononuclear+cells+into+induced+neural+stem+cell+by+using+episomal+vectors.">Conversion of adult human peripheral blood mononuclear cells into induced neural stem cell by using episomal vectors.</a> Stem Cell Research. 16 (2), 236-242 (2016).</li><li>Yuan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopaminergic+precursors+differentiated+from+human+blood-derived+induced+neural+stem+cells+improve+symptoms+of+a+mouse+Parkinson's+disease+model.">Dopaminergic precursors differentiated from human blood-derived induced neural stem cells improve symptoms of a mouse Parkinson's disease model.</a> Theranostics. 8 (17), 4679-4694 (2018).</li><li>Takahashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+Pluripotent+Stem+Cells+from+Adult+Human+Fibroblasts+by+Defined+Factors.">Induction of Pluripotent Stem Cells from Adult Human Fibroblasts by Defined Factors.</a> Cell. 131 (5), 861-872 (2007).</li><li>Aasen, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+and+rapid+generation+of+induced+pluripotent+stem+cells+from+human+keratinocytes.">Efficient and rapid generation of induced pluripotent stem cells from human keratinocytes.</a> Nature Biotechnology. 26 (11), 1276-1284 (2008).</li><li>Thier, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+conversion+of+fibroblasts+into+stably+expandable+neural+stem+cells.">Direct conversion of fibroblasts into stably expandable neural stem cells.</a> Cell Stem Cell. 10 (4), 473-479 (2012).</li><li>Takahashi, K., Okita, K., Nakagawa, M., Yamanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+pluripotent+stem+cells+from+fibroblast+cultures.">Induction of pluripotent stem cells from fibroblast cultures.</a> Nature Protocols. 2 (12), 3081-3089 (2007).</li><li>Seki, T., Yuasa, S., Fukuda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+induced+pluripotent+stem+cells+from+a+small+amount+of+human+peripheral+blood+using+a+combination+of+activated+T+cells+and+Sendai+virus.">Generation of induced pluripotent stem cells from a small amount of human peripheral blood using a combination of activated T cells and Sendai virus.</a> Nature Protocols. 7 (4), 718-728 (2012).</li><li>Bazley, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+Reprogramming+of+Human+Primordial+Germ+Cells+into+Induced+Pluripotent+Stem+Cells:+Efficient+Generation+of+Genetically+Engineered+Germ+Cells.">Direct Reprogramming of Human Primordial Germ Cells into Induced Pluripotent Stem Cells: Efficient Generation of Genetically Engineered Germ Cells.</a> Stem Cells and Development. 24 (22), 2634-2648 (2015).</li><li>Li, H. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+cytoplasmic+RNA+vector+derived+from+nontransmissible+Sendai+virus+with+efficient+gene+transfer+and+expression.">A cytoplasmic RNA vector derived from nontransmissible Sendai virus with efficient gene transfer and expression.</a> Journal of Virology. 74 (14), 6564-6569 (2000).</li><li>Sochacki, J., Devalle, S., Reis, M., Mattos, P., Rehen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+urine+iPS+cell+lines+from+patients+with+Attention+Deficit+Hyperactivity+Disorder+(ADHD)+using+a+non-integrative+method.">Generation of urine iPS cell lines from patients with Attention Deficit Hyperactivity Disorder (ADHD) using a non-integrative method.</a> Stem Cell Research. 17 (1), 102-106 (2016).</li><li>Ban, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+generation+of+transgene-free+human+induced+pluripotent+stem+cells+(iPSCs)+by+temperature-sensitive+Sendai+virus+vectors.">Efficient generation of transgene-free human induced pluripotent stem cells (iPSCs) by temperature-sensitive Sendai virus vectors.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (34), 14234-14239 (2011).</li><li>Cho, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+efficient+and+large-scale+generation+of+functional+dopamine+neurons+from+human+embryonic+stem+cells.">Highly efficient and large-scale generation of functional dopamine neurons from human embryonic stem cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (9), 3392-3397 (2008).</li><li>Dowey, S. N., Huang, X., Chou, B. -. K., Ye, Z., Cheng, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+integration-free+human+induced+pluripotent+stem+cells+from+postnatal+blood+mononuclear+cells+by+plasmid+vector+expression.">Generation of integration-free human induced pluripotent stem cells from postnatal blood mononuclear cells by plasmid vector expression.</a> Nature Protocols. 7 (11), 2013-2021 (2012).</li><li>Zhu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reprogramming+of+human+primary+somatic+cells+by+OCT4+and+chemical+compounds.">Reprogramming of human primary somatic cells by OCT4 and chemical compounds.</a> Cell Stem Cell. 7 (6), 651-655 (2010).</li><li>Ono, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+neurogenic+potential+in+floor+plate+cells+along+an+anteroposterior+location:+midbrain+dopaminergic+neurons+originate+from+mesencephalic+floor+plate+cells.">Differences in neurogenic potential in floor plate cells along an anteroposterior location: midbrain dopaminergic neurons originate from mesencephalic floor plate cells.</a> Development. 134 (17), 3213-3225 (2007).</li><li>Kirkeby, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+regionally+specified+neural+progenitors+and+functional+neurons+from+human+embryonic+stem+cells+under+defined+conditions.">Generation of regionally specified neural progenitors and functional neurons from human embryonic stem cells under defined conditions.</a> Cell Reports. 1 (6), 703-714 (2012).</li><li>Chambers, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+efficient+neural+conversion+of+human+ES+and+iPS+cells+by+dual+inhibition+of+SMAD+signaling.">Highly efficient neural conversion of human ES and iPS cells by dual inhibition of SMAD signaling.</a> Nature Biotechnology. 27 (3), 275-280 (2009).</li><li>Fasano, C. A., Chambers, S. M., Lee, G., Tomishima, M. J., Studer, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+derivation+of+functional+floor+plate+tissue+from+human+embryonic+stem+cells.">Efficient derivation of functional floor plate tissue from human embryonic stem cells.</a> Cell Stem Cell. 6 (4), 336-347 (2010).</li><li>Harvey, B. K., Wang, Y., Hoffer, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+rodent+models+of+Parkinson's+disease.">Transgenic rodent models of Parkinson's disease.</a> Acta Neurochirurgica Supplements. 101, 89-92 (2008).</li><li>Sheng, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+dopaminergic+neurons+directly+from+mouse+fibroblasts+and+fibroblast-derived+neural+progenitors.">Generation of dopaminergic neurons directly from mouse fibroblasts and fibroblast-derived neural progenitors.</a> Cell Research. 22 (4), 769-772 (2012).</li><li>Prasad, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+induced+pluripotent+stem+cell,+direct+conversion+by+trans-differentiation,+direct+reprogramming+and+oligodendrocyte+differentiation.">A review of induced pluripotent stem cell, direct conversion by trans-differentiation, direct reprogramming and oligodendrocyte differentiation.</a> Regenerative Medicine. 11 (2), 181-191 (2016).</li></ol>

Aqui nós apresentamos um protocolo que cobria estágios diferentes da terapia da pilha de iNSC-DA para modelos do paládio. Os aspectos críticos deste protocolo incluem: (1) isolação e expansão de pbmncs e reprogramação de pbmncs em inscs pela infecção de Sev, (2) diferenciação de inscs aos neurônios de da, (3) estabelecimento de modelos unilaterais do rato do PD 6-OHDA-lesioned e comportamento avaliação e (4) transplante celular de precursores DA DA e avaliação comportamental.
<p class="jove_content"...

A doença de Parkinson (DP) é uma desordem neurodegenerativa comum, causada pela degeneração dos neurônios dopaminérgicos (da) no substância negra nigra pars compacta (SNPC) no mesencéfalo ventral (VM), com uma prevalência de mais de 1% na população acima de 60 anos de idade 1. º , 2. ao longo da década passada, a terapia celular, destinada a substituir as células degenerativas ou danificadas, ou Nutrir o microambiente em torno dos neurônios degenerativos, mostrou potencial no tratamento de PD3. Enquanto isso, a tecnologia de reprogramação fez progressos significativos4, que fornece uma fonte celular promissora para a terapia de reposição. As pilhas de haste pluripotentes induzidas humanas (iPSCs) e as pilhas de haste embrionário (ESCS) foram provadas ser capazes de diferenciar-se em pilhas neural de da, que poderiam sobreviver, maturate, e melhorar as funções de motor quando enxertadas em ratos e em modelos não-humanos do PD do primata5 ,6,7,8. os iPSCs representam um marco nas tecnologias de reprogramação celular e têm um grande potencial de transplante celular; Entretanto, há ainda uma preocupação sobre o risco de formação tumoral a partir das células incompletamente diferenciadas. Uma fonte celular alternativa para o transplante de células é células-tronco adultas comprometidas por linhagem obtidas por meio de reprogramação direta, como células-tronco neurais induzidas (iNSCs), que podem ser derivadas dos intermediários instáveis, ignorando a pluripotência etapa9,10,11.
Tanto o iPSCs quanto o inscs podem ser reprogramados a partir de fontes celulares autólogas, como fibroblastos, células mononucleares do sangue periférico (pbmncs) e vários outros tipos de células12,13,14, reduzindo assim a imunogenicidade das células transplantadas em grande grau. Além disso, comparado com iPSCs, os iNSCs são inerentes com risco reduzido da formação do tumor e da plasticidade linhagem-comprometida, somente capaz de diferenciar-se em neurônios e em glia11. Nos estudos iniciais, os iPSCs humano ou camundongo e os inscs foram gerados a partir de fibroblastos obtidos a partir de biópsias cutâneas, o que é um procedimento invasivo14,15. Com este respeito, os PBMNCs são uma fonte de célula de partida atraente por causa do processo de amostragem menos invasivo, e a facilidade de obter um grande número de células dentro de um curto período de tempo de expansão16. Os estudos de reprogramação inicial empregaram sistemas integrativos de entrega, como vetores lentivirais ou anti-retrovirais, que são eficientes e fáceis de implementar em muitos tipos de células17; no entanto, esses sistemas de parto podem causar mutações e reativação de transgenes residuais, que apresentam problemas de segurança para fins terapêuticos clínicos12. O vírus de Sendai (SeV) é um vírus de RNA não integrativo com um genoma de sentido negativo, único que não se integra no genoma do hospedeiro, mas apenas Replica no citoplasma de células infectadas, oferecendo um veículo eficiente e seguro para reprogramar18 ,19. Os vetores de SeV recombinantes estão disponíveis que contêm fatores de reprogramação, incluindo OCT3/4, SOX2, KLF4 e c-Myc humanos em seus quadros de leitura abertos. Além disso, os vetores virais SeV podem ser melhorados através da introdução de mutações sensíveis à temperatura, para que possam ser rapidamente removidas quando a temperatura da cultura é aumentada para 39 ° c20. Neste artigo, descrevemos um protocolo para reprogramar PBMNCs para iNSCs usando o sistema SeV.
Muitos estudos relataram a derivação dos neurônios da ESCS humana ou iPSCs usando vários métodos6,8,21. No entanto, há uma escassez de protocolos descrevendo a diferenciação de neurônios da da iNSCs em detalhes. Neste protocolo, descreveremos a geração eficiente de neurônios da do iNSCs usando um método de dois estágios. Os precursores neuronais DA DA podem ser transplantados para o estriado de modelos de mouse PD para avaliações de segurança e eficácia. Este artigo apresentará um protocolo detalhado que cubra vários estágios da geração de pilhas de haste neural induzidas pelo vírus de Sendai, diferenciação de inscs em neurônios da da, estabelecimento de modelos do PD do rato, à transplantação de precursores do da no estriado dos modelos de PD. Usando este protocolo, pode-se gerar iNSCs de pacientes e doadores saudáveis e derivar neurônios DA DA que são seguros, padronáveis, escalonáveis e homogêneos para fins de transplante celular, ou para modelar PD em um prato e investigação dos mecanismos início e desenvolvimento da doença subjacente.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:828px;" width="827">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">15-ml conical tube</td>
			<td style="width:183px;">Corning</td>
			<td style="width:153px;">430052</td>
			<td style="width:215px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">1-Thioglycerol</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">M6145</td>
			<td>Toxic for inhalation and skin contact</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">24-well plate</td>
			<td style="width:183px;">Corning</td>
			<td style="width:153px;">3337</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">50-ml conical tube&#160;</td>
			<td style="width:183px;">Corning</td>
			<td style="width:153px;">430828</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">6-OHDA</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">H4381</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">6-well plate</td>
			<td style="width:183px;">Corning</td>
			<td style="width:153px;">3516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Accutase</td>
			<td style="width:183px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">A11105-01</td>
			<td>Cell dissociation reagent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Apomorphine</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">A4393</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Ascorbic acid</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">A92902</td>
			<td>Toxic with skin contact&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">B27 supplement&#160;</td>
			<td style="width:183px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">17504044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">BDNF</td>
			<td style="width:183px;">Peprotech</td>
			<td style="width:153px;">450-02</td>
			<td>Brain derived neurotrophic factor</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:277px;">Blood collection tubes containing sodium heparin</td>
			<td style="width:183px;">BD</td>
			<td style="width:153px;">367871</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">BSA</td>
			<td style="width:183px;">yisheng</td>
			<td style="width:153px;">36106es60</td>
			<td>Fetal bovine serum</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">cAMP</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">D0627</td>
			<td>Dibutyryladenosine cyclic monophosphate</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">CellBanker 2</td>
			<td style="width:183px;">ZENOAQ</td>
			<td style="width:153px;">100ml</td>
			<td>Used as freezing medium for PBMNCs</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Chemically defined lipid concentrate</td>
			<td style="width:183px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">11905031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">CHIR99021</td>
			<td style="width:183px;">Gene Operation</td>
			<td style="width:153px;">04-0004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Coverslip</td>
			<td style="width:183px;">Fisher</td>
			<td style="width:153px;">25*25-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">DAPI</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">D8417-10mg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">DAPT</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">D5942</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Dexamethasone</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">D2915-100MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">DMEM-F12</td>
			<td style="width:183px;">Gibco</td>
			<td style="width:153px;">11330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">DMEM-F12</td>
			<td style="width:183px;">Gibco</td>
			<td style="width:153px;">11320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Donkey serum</td>
			<td style="width:183px;">Jackson</td>
			<td style="width:153px;">017-000-121</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">EPO</td>
			<td style="width:183px;">Peprotech</td>
			<td style="width:153px;">100-64-50UG</td>
			<td>Human Erythropoietin</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">FGF8b</td>
			<td style="width:183px;">Peprotech</td>
			<td style="width:153px;">100-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Ficoll-Paque Premium</td>
			<td style="width:183px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:153px;">17-5442-02</td>
			<td>P=1.077, density gradient medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">GDNF</td>
			<td style="width:183px;">Peprotech</td>
			<td style="width:153px;">450-10</td>
			<td>Glial derived neurotrophic factor</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">GlutaMAX</td>
			<td style="width:183px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">21051024</td>
			<td>100 &#215; Glutamine stock solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Ham&#39;s-F12</td>
			<td style="width:183px;">Gibco</td>
			<td style="width:153px;">11765-054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">HBSS</td>
			<td style="width:183px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">14175079</td>
			<td>Balanced salt solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Human leukemia inhibitory factor</td>
			<td style="width:183px;">Millpore</td>
			<td style="width:153px;">LIF1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Human recombinant SCF</td>
			<td style="width:183px;">Peprotech</td>
			<td style="width:153px;">300-07-100UG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">IGF-1</td>
			<td style="width:183px;">Peprotech</td>
			<td style="width:153px;">100-11-100UG</td>
			<td>Human insulin-like growth factor&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">IL-3</td>
			<td style="width:183px;">Peprotech</td>
			<td style="width:153px;">200-03-10UG</td>
			<td>Human interleukin 3</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">IMDM</td>
			<td style="width:183px;">Gibco</td>
			<td style="width:153px;">215056-023</td>
			<td>Iscove&#39;s modified Dulbecco&#39;s medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Insulin</td>
			<td style="width:183px;">Roche&#160;</td>
			<td style="width:153px;">12585014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">ITS-X</td>
			<td style="width:183px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">51500-056</td>
			<td>Insulin-transferrin-selenium-X supplement</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Knockout serum replacement</td>
			<td style="width:183px;">Gibco</td>
			<td style="width:153px;">10828028</td>
			<td>Serum free basal medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Laminin</td>
			<td style="width:183px;">Roche&#160;</td>
			<td style="width:153px;">11243217001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Microsyringe</td>
			<td style="width:183px;">Hamilton</td>
			<td style="width:153px;">7653-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">N2 supplement&#160;</td>
			<td style="width:183px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">17502048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">NEAA</td>
			<td style="width:183px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">11140050</td>
			<td>Non-essential amino acid</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Neurobasal</td>
			<td style="width:183px;">Gibco</td>
			<td style="width:153px;">10888</td>
			<td>Basic medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">PDL</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">P7280</td>
			<td>Poly-D-lysine</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">SAG1</td>
			<td style="width:183px;">Enzo</td>
			<td style="width:153px;">ALX-270-426-M01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">SB431542</td>
			<td style="width:183px;">Gene Operation</td>
			<td style="width:153px;">04-0010-10mg</td>
			<td>Store from light at -20&#8451;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Sendai virus</td>
			<td style="width:183px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:153px;">MAN0009378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Sucrose</td>
			<td style="width:183px;">baiaoshengke</td>
			<td style="width:153px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">TGF&#946;&#8546;</td>
			<td style="width:183px;">Peprotech</td>
			<td style="width:153px;">100-36E</td>
			<td>Transforming growth factor&#160; &#946;&#8546;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Transferrin</td>
			<td style="width:183px;">R&#38;D Systems</td>
			<td style="width:153px;">2914-HT-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Triton X 100</td>
			<td style="width:183px;">baiaoshengke</td>
			<td style="width:153px;"></td>
			<td>Nonionic surfactant</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Trypan blue</td>
			<td style="width:183px;">Gibco</td>
			<td style="width:153px;">T10282</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Xylazine</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">X1126</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generation of induced neural stem cells from peripheral mononuclear cells and differentiation toward dopaminergic neuron precursors for transplantation studies

A doença de Parkinson (DP) é causada pela degeneração dos neurônios dopaminérgicos (da) no substância negra nigra pars compacta (SNPC) no mesencon ventral (VM). A terapia da recolocação da pilha prende a grande promessa para o tratamento do paládio. recentemente, as pilhas de haste neural induzidas (iNSCs) emergiram como um candidato potencial para a terapia da recolocação da pilha devido ao risco reduzido da formação do tumor e da plasticidade para dar o aumento neurônios específicos da região e glia. os iNSCs podem ser reprogramados a partir de fontes celulares somáticas autólogas, como fibroblastos, células mononucleares do sangue periférico (PBMNCs) e vários outros tipos de células. Comparado com outros tipos de células somáticas, PBMNCs são um tipo de célula iniciante atraente por causa da facilidade de acesso e expansão na cultura. O vírus de Sendai (SeV), um vírus não integrativo do RNA, codificando fatores de reprogramação que incluem o OCT3/4humano, SOX2, KLF4 e c-Myc, tem um genoma negativo-sentido, único-encalhado, não-segmentado que não integre em genoma do hospedeiro, mas apenas Replica no citoplasma de células infectadas, oferecendo um veículo eficiente e seguro para a reprogramação. Neste estudo, nós descrevemos um protocolo em que o iNSCs é obtido reprogramando PBMNCs, e diferenciado em neurônios especializados DA VM DA por um método Two-stage. Então os precursores são transplantados em modelos unilateralmente 6-hyroxydopamine (6-OHDA)-lesioned do rato do paládio para avaliar a segurança e a eficácia para o tratamento do paládio. Este método fornece uma plataforma para investigar as funções e os efeitos terapêuticos de células neurais DA DA do paciente-específicas in vitro e in vivo.

Aqui, nós relatamos um protocolo que cubra estágios diferentes da terapia da pilha de iNSC-DA para tratar modelos do paládio. Primeiramente, os PBMNCs foram isolados e expandidos, e reprogramados em iNSCs pela infecção de SeV. Uma representação esquemática dos procedimentos com expansão de PBMNC e indução de iNSC é mostrada na Figura 1. No dia-14, os PBMNCs foram isolados usando um meio de gradiente de densidade (tabela de materiais). Antes da centrifugação, o ...

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Generation of Induced Neural Stem Cells from Peripheral Mononuclear Cells and Differentiation Toward Dopaminergic Neuron Precursors for Transplantation Studies

Geração de células-tronco neurais induzidas de células mononucleares periféricas e diferenciação para precursores de neurónios dopaminérgicos para estudos de transplante

O protocolo apresenta a reprogramação de células mononucleares do sangue periférico para induzir células-tronco neurais por infecção pelo vírus de Sendai, diferenciação de iNSCs em neurônios dopaminérgicos, transplante de precursores da DA na unilateralmente lesionada Modelos do rato da doença de Parkinson, e avaliação da segurança e da eficácia de precursores DA DA do iNSC-derivados para o tratamento do paládio.

Parkinson&#39;s disease (PD) is caused by degeneration of dopaminergic (DA) neurons at the substantia nigra pars compacta (SNpc) in the ventral ...

Este protocolo descreve um método para reprogramar células sanguíneas e mononucleares para células-tronco neurais que podem ser usadas para tratar doenças neurodegenerativas, como a doença de Parkinson. Oferece uma fonte celular autóloga para tratar doenças neurodegenerativas. Além disso, o prazo necessário para a conversão para células-tronco neurais induzidas e a diferenciação para os tipos de células desejadas é menor do que para células-tronco pluripotentes induzidas.As células-tronco neurais induzidas possuem uma boa capacidade proliferativa e podem ser ampliadas antes da aplicação. Uma vez que os iNSCs podem ser especificados em diferentes células neurais específicas da região, como neurônios da medula espinhal ou neurônios motores, este método pode ser estendido para o tratamento de outras doenças neurológicas. Todo o procedimento leva muito tempo, com todas as etapas relacionadas e críticas, então a demonstração visual dá uma ideia de como as células se parecem e fornece algumas dicas para garantir uma geração bem sucedida das células desejadas.Para começar, transfira sangue venoso periférico previamente isolado em um tubo cônico de 50 mililitros, e dilui-o com um volume igual de PBS estéril de Dulbecco. Em outro tubo cônico de 50 mililitros, prepare 15 mililitros de gradiente de densidade esterilizada. Incline o tubo em um ângulo de 45 graus, e lentamente e cuidadosamente coloque 30 mililitros de sangue periférico diluído no meio gradiente de densidade.Centrifugar o tubo a 800 vezes g por 15 minutos em temperatura ambiente com o freio centrífuga definido na posição desligada. Aspire a camada amarela de plasma superior e descarte-a. Use uma pipeta de 10 mililitros para transferir a camada de filme fina branca e nublada contendo células mononucleares para um novo tubo cônico de 50 mililitros.Adicione 30 mililitros de D-PBS ao tubo com MNCs, e centrífuga a 600 vezes g por 10 minutos a quatro graus Celsius. Depois de descartar o supernasce, adicione 45 mililitros de D-PBS e resuspenque as células. Depois de centrifugar o tubo a 400 vezes g por 10 minutos a quatro graus Celsius, descarte o supernasce.Resuspend as células com cinco mililitros de D-PBS, conte as células vivas com o método de exclusão azul trypan, reserve os MNCs necessários para expansão e congele as células restantes para uso futuro. No dia menos 14, mNCs sementes a uma densidade de dois a três milhões de células por mililitro por poço de placa de seis poços com 1,5 mililitros de 37 graus Celsius, meio MNC pré-aquecido. Incubar a 37 graus Celsius, 5% de dióxido de carbono por dois dias.No dia menos 11, use uma pipeta esterilizada para coletar as células com o meio e transferir para um novo tubo cônico de 15 mililitros. Centrifugar a 250 vezes g por cinco minutos à temperatura ambiente, descartar o supernaspeuta e resuspensar as células em um mililitro de meio MNC pré-aquecido. Depois de contar as células viáveis com azul trypan, semente os MNCs a uma densidade de um milhão de células por mililitro em meio MNC pré-aquecido em uma placa de seis poços.Incubar a 37 graus Celsius, 5% de dióxido de carbono por três dias, e repetir a coleta de células, centrifugação e revestimento em mnc médio em dias menos oito e menos quatro. O vírus Sendai neste procedimento é perigoso, e todos os procedimentos envolvendo o vírus Sendai devem ser realizados em um gabinete de segurança. E todas as pontas e tubos expostos ao vírus Sendai devem ser tratados com etanol ou alvejante antes do descarte.No dia zero, colete as células em meio MNC e transfira para um tubo cônico de 15 mililitros. Depois de centrifugar as células a 200 vezes g por cinco minutos, aspire o supernaspe e resuspenda as células com um mililitro de meio MNC pré-aquecido. Conte as células viáveis com azul trypan, e depois resuspenque-as com meio MNC pré-aquecido para uma concentração de 200.000 células por poço em placas de 24 poços.Descongele os tubos removidos do armazenamento Celsius de menos 80 graus contendo o vírus Sendai em um banho de água Celsius de 37 graus por cinco a 10 segundos, e depois deixe-os descongelar à temperatura ambiente. Uma vez descongelado, coloque-os imediatamente no gelo. Adicione o vírus Sendai descongelado aos poços da placa de 24 poços com MNCs em uma multiplicidade de infecção de 10.Para facilitar a fixação das células, centrifugar as placas a 1.000 vezes g por 30 minutos e depois colocar as placas na incubadora a 37 graus Celsius, 5% de dióxido de carbono. No primeiro dia, transfira as células com o tubo médio para uma centrífuga de 15 mililitros. Para desprender ainda mais as células restantes, enxágue os poços com um mililitro de mnc médio por poço e adicione as células com médio ao tubo.Depois de centrifugar a suspensão celular a 200 vezes g por cinco minutos, aspirar o supernascer, resuspensar as células com 500 microliters de meio MNC pré-aquecido fresco, e adicionar a um poço de uma placa de 24 poços. No segundo dia, use um mililitro por poço de 50 microgramas previamente diluídos por microliter poli-D-lysine em D-PBS para revestir placas de seis poços por pelo menos duas horas em temperatura ambiente. Aspire poli-D-lysine a partir das placas de seis poços, e seque no banco vertical limpo por cerca de 10 minutos.Em seguida, adicione um mililitro por poço de um anteriormente diluído cinco microgramas por mililitro laminina às placas de seis poços, e incubar por quatro a seis horas a 37 graus Celsius para revestir. Lave as placas com D-PBS antes de usar. No terceiro dia, todos os MNCs transduzidos pelo vírus Sendai em meio de células-tronco neurais induzidas nas placas de seis poços revestidas de poli-D/laminina.Nos dias cinco e sete, adicione suavemente um mililitro de 37 graus Celsius, meio iNSC pré-aquecido para cada poço das placas de seis poços. Do dia 9 ao dia 28, substitua o meio por meio iNSC pré-aquecido fresco diariamente. Monitore o surgimento de colônias iNSC, e em cerca de duas a três semanas escolha colônias com morfologia apropriada usando pipetas de vidro queimados e transfira cada colônia para um poço separado de uma placa de seis poços para expansão.Para estabelecer modelos unilaterais de camundongos com lesão de 6-hiroxidopamina, raspe a cabeça de um camundongo anestoizado, adulto, masculino, scid-bege, e aplique pomada ocular de eritromicina. Coloque o mouse no aparelho estereotax e conserte o mouse com barras incisivos. Insira os copos de ouvido corretamente para posicionar a cabeça do mouse de forma segura e adequada.Esterilize a cabeça com iodo povidone e álcool isopropílico, e depois use uma lâmina de bisturi para fazer uma incisão sagital de aproximadamente 1,5 centímetros na pele da cabeça, expondo o crânio. Ajuste a barra incisora e as barras de ouvido para reduzir a diferença de altura entre bregma e lambda para menos de 0,1 milímetros. Mova-se lentamente e abaixe a ponta da agulha de microsinga em direção ao bregma, e trate a bregma como o ponto zero.Mova a ponta para uma posição com coordenadas de 0,5 milímetros anteriores e 2,1 milímetros laterais em relação ao bregma. Retraia a ponta, marque o ponto com uma caneta marcadora e, com uma broca eletrônica, faça um pequeno buraco no crânio. Extraia dois microlitros de cinco microgramas por solução mililitro 6-hyroxydopamina na microsiringe.Volte a agulha para o ponto marcado e insira a agulha em dorsais/ventral 3,2 milímetros. Injete a solução de 6-hyroxidopamina a partir da seringa a uma taxa de um microliter por minuto, deixe a agulha de injeção no lugar por mais cinco minutos e, em seguida, retraia-a lentamente. Depois de fechar a incisão com suturas, aplique pomada ocular de eritromicina nos olhos novamente.Remova o mouse do aparelho estereotaxista, coloque-o na gaiola de recuperação e permita o acesso à comida e água até que ele recupere a consciência. Depois que os PBMNCs foram infectados com SeV, sua morfologia estava mudando e as células sofreram uma morte drástica até o quinto dia. As colônias do INSC surgiram no dia 12.Depois de colher e transferir clones iNSC para expansão para uma série de passagens, eles mostraram uma boa morfologia e puderam se auto-renovar no meio iNSC, seja em uma forma monocamada ou como esferas. Após 24 dias de diferenciação, os iNSCs foram identificados como neurônios dopaminérgicos como a maioria deles expressos de hidroxilase de tyrosina, caixa de garfo A2 e marcadores beta-tubulin classe III específicos para neurônios. Após o estabelecimento de modelos unilaterais de parkinson com lesão de Parkinson, foi realizada avaliação comportamental para estimar os sintomas da doença de Parkinson.Os camundongos que receberam transplante celular apresentaram melhora significativa na função motora. A extensão da lesão induzida por 6-hiroxidopamina foi verificada por coloração imunofluorescente pós-morte para TH no estriado, feixe de cérebro medial e substantia nigra pars compacta. Os sinais TH-positivos foram muito recuperados no estriado onde as células foram implantadas e também levemente recuperadas no SN. Três meses após o transplante, entre as células sobreviventes, cerca de 13,84% eram neurônios dopaminérgicos th positivos.Cerca de 91,72% das células TH-positive expressaram receptor nuclear órfão, cerca de 86,76% expressaram FOXA2, e cerca de 98,77% foram co-rotuladas com potássio retificador para dentro acoplado à proteína G. Ao colocar 30 mil de sangue periférico diluído no meio gradiente de densidade, por favor, faça-o lentamente e cuidadosamente, para não perturbar a interface gradiente. Deve-se tomar cuidado para evitar o descongelamento repetido e o congelamento do vírus Sendai para garantir uma alta atividade do vírus.Ao reprogramar células mononucleares de sangue periféricos para células-tronco neurais induzidas, observe de perto a morfologia das células todos os dias. Além disso, 6-hidroxidopamina é sensível à luz e temperatura. Tenha cuidado para proteger a solução da luz e mantê-la no gelo antes de usar.Após este procedimento, pode-se continuar a estudar os mecanismos da doença usando neurônios dopaminérgicos derivados da DP na cultura. Pode-se também continuar a investigar como as células transplantadas influenciam os circuitos neuronais danificados.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Direct Induction of Human Neural Stem Cells from Peripheral Blood Hematopoietic Progenitor Cells

Indução direta de Neurais Human células-tronco de sangue periférico células progenitoras hematopoéticas

Human disease specific neuronal cultures are essential for generating in vitro models for human neurological diseases. However, the lack of access to ...

Biologia do Desenvolvimento

Generation of Induced Pluripotent Stem Cells from Human Peripheral T Cells Using Sendai Virus in Feeder-free Conditions

Geração de pluripotentes induzidas a partir de células-tronco periférico humano T células usando Sendai Virus em condições livres de Alimentador

Recently, iPSCs have attracted attention as a new source of cells for regenerative therapies. Although the initial method for generating iPSCs relied on ...

Generation of Integration-free Induced Pluripotent Stem Cells from Human Peripheral Blood Mononuclear Cells Using Episomal Vectors

Geração de Integração-livres induzidas células-tronco pluripotentes a partir de células mononucleares de sangue periférico humano Usando epissï¿½ica Vectors

Induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs) hold great promise for disease modeling and regenerative therapies. We previously reported the use of Episomal ...

Differentiating Chondrocytes from Peripheral Blood-derived Human Induced Pluripotent Stem Cells

Condrócitos diferenciadores de células-tronco pluripotentes induzidas por humanos derivadas de sangue periférico

In this study, we used peripheral blood cells (PBCs) as seed cells to produce chondrocytes via induced pluripotent stem cells (iPSCs) in an ...

Horizontal Whole Mount: A Novel Processing and Imaging Protocol for Thick, Three-dimensional Tissue Cross-sections of Skin

Horizontal Whole Mount: um protocolo de processamento e imagem de Novel para secções transversais grossas de tecidos tridimensionais

Processing a tissue of interest to generate a microscopic image that supports a scientific argument can be challenging. The acquisition of high-quality ...

Rapid, Directed Differentiation of Retinal Pigment Epithelial Cells from Human Embryonic or Induced Pluripotent Stem Cells

Rápida, dirigida a diferenciação de células epiteliais de pigmento Retinal de células-tronco humanas embrionárias ou induzida de Pluripotent

We describe a robust method to direct the differentiation of pluripotent stem cells into retinal pigment epithelial cells (RPE). The purpose of providing ...

Single-cell Photoconversion in Living Intact Zebrafish

Photoconversion de célula única no Zebrafish intacta vida

Animal and plant tissue is composed of distinct populations of cells. These cells interact over time to build and maintain the tissue and can cause ...

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Análise computacional do Germline Caenorhabditis elegans , para estudar a distribuição de núcleos, as proteínas e o citoesqueleto

The Caenorhabditis elegans (C. elegans) germline is used to study several biologically important processes including stem cell development, apoptosis, and ...

Derivation and Differentiation of Canine Ovarian Mesenchymal Stem Cells

Derivação e diferenciação de células-tronco mesenquimais ovário canina

Interest in mesenchymal stem cells (MSCs) has increased over the past decade due to their ease of isolation, expansion, and culture. Recently, studies ...

Generation of 3D Skin Organoid from Cord Blood-derived Induced Pluripotent Stem Cells

Geração de organoides pele 3D do cordão hemoderivados induzida por células-tronco pluripotentes

The skin is the body&#8217;s largest organ and has many functions. The skin acts as a physical barrier and protector of the body and regulates bodily ...