Name: generation of induced neural stem cells from peripheral mononuclear cells and differentiation toward dopaminergic neuron precursors for transplantation studies
Uploaded: 2019-07-11T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generation of Induced Neural Stem Cells from Peripheral Mononuclear Cells and Differentiation Toward Dopaminergic Neuron Precursors for Transplantation Studie

Arbetet stöddes av följande bidrag: stamcells-och översättnings nationella nyckelprojekt (2016YFA0101403), Kinas National Natural Science Foundation (81661130160, 81422014, 81561138004), Beijing Municipal Natural Science Foundation (5142005), Peking Talents Foundation (2017000021223TD03), stödprojekt av hög nivå lärare i Peking kommunala universitet under perioden 13: e fem års plan (CIT & TCD20180333), Peking Medical system hög nivå Talent Award (2015-3-063), Peking Kommunal Health Commission Fund (PXM 2018_026283_000002), Peking 100, Thousand, och 10000 talanger Fund (2018A03), Beijing kommunal administration av sjukhus klinisk medicin utveckling av särskilda finansieringsstöd (ZYLX201706), och Royal Society-Newton avancerad gemenskap (NA150482).

Alla förfaranden måste följa riktlinjerna från den institutionella mänskliga forskningsetiska kommittén. Informerat samtycke måste erhållas från patienter eller friska frivilliga före blod insamling. Detta protokoll godkändes av institutionens etikkommitté för mänskliga forskningsfrågor och utfördes i enlighet med institutionens riktlinjer för skötsel och användning av djur.
1. insamling, isolering och expansion av PBMNCs
<ol><li>Samling av PBMNCs
	<ol>
<l...

<ol>
	<li>Williams-Gray, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+distinct+cognitive+syndromes+of+Parkinson's+disease:+5+year+follow-up+of+the+CamPaIGN+cohort.">The distinct cognitive syndromes of Parkinson's disease: 5 year follow-up of the CamPaIGN cohort.</a> Brain. 132, 2958-2969 (2009).</li><li>Dexter, D. T., Jenner, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parkinson+disease:+from+pathology+to+molecular+disease+mechanisms.">Parkinson disease: from pathology to molecular disease mechanisms.</a> Free Radical Biology and Medicine. 62, 132-144 (2013).</li><li>Chen, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+Therapy+for+Parkinson's+Disease:+New+Hope+from+Reprogramming+Technologies.">Cell Therapy for Parkinson's Disease: New Hope from Reprogramming Technologies.</a> Aging and Disease. 6 (6), 499-503 (2015).</li><li>Takahashi, K., Yamanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+Pluripotent+Stem+Cells+from+Mouse+Embryonic+and+Adult+Fibroblast+Cultures+by+Defined+Factors.">Induction of Pluripotent Stem Cells from Mouse Embryonic and Adult Fibroblast Cultures by Defined Factors.</a> Cell. 126 (4), 663-676 (2006).</li><li>Doi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+human+induced+pluripotent+stem+cell-derived+dopaminergic+progenitors+by+cell+sorting+for+successful+transplantation.">Isolation of human induced pluripotent stem cell-derived dopaminergic progenitors by cell sorting for successful transplantation.</a> Stem Cell Reports. 2 (3), 337-350 (2014).</li><li>Kriks, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine+neurons+derived+from+human+ES+cells+efficiently+engraft+in+animal+models+of+Parkinson's+disease.">Dopamine neurons derived from human ES cells efficiently engraft in animal models of Parkinson's disease.</a> Nature. 480 (7378), 547-551 (2011).</li><li>Perrier, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+midbrain+dopamine+neurons+from+human+embryonic+stem+cells.">Derivation of midbrain dopamine neurons from human embryonic stem cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 101 (34), 12543-12548 (2004).</li><li>Kikuchi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+iPS+cell-derived+dopaminergic+neurons+function+in+a+primate+Parkinson's+disease+model.">Human iPS cell-derived dopaminergic neurons function in a primate Parkinson's disease model.</a> Nature. 548 (7669), 592-596 (2017).</li><li>Ma, T., Xie, M., Laurent, T., Ding, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+in+the+reprogramming+of+somatic+cells.">Progress in the reprogramming of somatic cells.</a> Circulation Research. 112 (3), 562-574 (2013).</li><li>Tang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conversion+of+adult+human+peripheral+blood+mononuclear+cells+into+induced+neural+stem+cell+by+using+episomal+vectors.">Conversion of adult human peripheral blood mononuclear cells into induced neural stem cell by using episomal vectors.</a> Stem Cell Research. 16 (2), 236-242 (2016).</li><li>Yuan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopaminergic+precursors+differentiated+from+human+blood-derived+induced+neural+stem+cells+improve+symptoms+of+a+mouse+Parkinson's+disease+model.">Dopaminergic precursors differentiated from human blood-derived induced neural stem cells improve symptoms of a mouse Parkinson's disease model.</a> Theranostics. 8 (17), 4679-4694 (2018).</li><li>Takahashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+Pluripotent+Stem+Cells+from+Adult+Human+Fibroblasts+by+Defined+Factors.">Induction of Pluripotent Stem Cells from Adult Human Fibroblasts by Defined Factors.</a> Cell. 131 (5), 861-872 (2007).</li><li>Aasen, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+and+rapid+generation+of+induced+pluripotent+stem+cells+from+human+keratinocytes.">Efficient and rapid generation of induced pluripotent stem cells from human keratinocytes.</a> Nature Biotechnology. 26 (11), 1276-1284 (2008).</li><li>Thier, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+conversion+of+fibroblasts+into+stably+expandable+neural+stem+cells.">Direct conversion of fibroblasts into stably expandable neural stem cells.</a> Cell Stem Cell. 10 (4), 473-479 (2012).</li><li>Takahashi, K., Okita, K., Nakagawa, M., Yamanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+pluripotent+stem+cells+from+fibroblast+cultures.">Induction of pluripotent stem cells from fibroblast cultures.</a> Nature Protocols. 2 (12), 3081-3089 (2007).</li><li>Seki, T., Yuasa, S., Fukuda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+induced+pluripotent+stem+cells+from+a+small+amount+of+human+peripheral+blood+using+a+combination+of+activated+T+cells+and+Sendai+virus.">Generation of induced pluripotent stem cells from a small amount of human peripheral blood using a combination of activated T cells and Sendai virus.</a> Nature Protocols. 7 (4), 718-728 (2012).</li><li>Bazley, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+Reprogramming+of+Human+Primordial+Germ+Cells+into+Induced+Pluripotent+Stem+Cells:+Efficient+Generation+of+Genetically+Engineered+Germ+Cells.">Direct Reprogramming of Human Primordial Germ Cells into Induced Pluripotent Stem Cells: Efficient Generation of Genetically Engineered Germ Cells.</a> Stem Cells and Development. 24 (22), 2634-2648 (2015).</li><li>Li, H. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+cytoplasmic+RNA+vector+derived+from+nontransmissible+Sendai+virus+with+efficient+gene+transfer+and+expression.">A cytoplasmic RNA vector derived from nontransmissible Sendai virus with efficient gene transfer and expression.</a> Journal of Virology. 74 (14), 6564-6569 (2000).</li><li>Sochacki, J., Devalle, S., Reis, M., Mattos, P., Rehen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+urine+iPS+cell+lines+from+patients+with+Attention+Deficit+Hyperactivity+Disorder+(ADHD)+using+a+non-integrative+method.">Generation of urine iPS cell lines from patients with Attention Deficit Hyperactivity Disorder (ADHD) using a non-integrative method.</a> Stem Cell Research. 17 (1), 102-106 (2016).</li><li>Ban, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+generation+of+transgene-free+human+induced+pluripotent+stem+cells+(iPSCs)+by+temperature-sensitive+Sendai+virus+vectors.">Efficient generation of transgene-free human induced pluripotent stem cells (iPSCs) by temperature-sensitive Sendai virus vectors.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (34), 14234-14239 (2011).</li><li>Cho, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+efficient+and+large-scale+generation+of+functional+dopamine+neurons+from+human+embryonic+stem+cells.">Highly efficient and large-scale generation of functional dopamine neurons from human embryonic stem cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (9), 3392-3397 (2008).</li><li>Dowey, S. N., Huang, X., Chou, B. -. K., Ye, Z., Cheng, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+integration-free+human+induced+pluripotent+stem+cells+from+postnatal+blood+mononuclear+cells+by+plasmid+vector+expression.">Generation of integration-free human induced pluripotent stem cells from postnatal blood mononuclear cells by plasmid vector expression.</a> Nature Protocols. 7 (11), 2013-2021 (2012).</li><li>Zhu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reprogramming+of+human+primary+somatic+cells+by+OCT4+and+chemical+compounds.">Reprogramming of human primary somatic cells by OCT4 and chemical compounds.</a> Cell Stem Cell. 7 (6), 651-655 (2010).</li><li>Ono, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+neurogenic+potential+in+floor+plate+cells+along+an+anteroposterior+location:+midbrain+dopaminergic+neurons+originate+from+mesencephalic+floor+plate+cells.">Differences in neurogenic potential in floor plate cells along an anteroposterior location: midbrain dopaminergic neurons originate from mesencephalic floor plate cells.</a> Development. 134 (17), 3213-3225 (2007).</li><li>Kirkeby, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+regionally+specified+neural+progenitors+and+functional+neurons+from+human+embryonic+stem+cells+under+defined+conditions.">Generation of regionally specified neural progenitors and functional neurons from human embryonic stem cells under defined conditions.</a> Cell Reports. 1 (6), 703-714 (2012).</li><li>Chambers, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+efficient+neural+conversion+of+human+ES+and+iPS+cells+by+dual+inhibition+of+SMAD+signaling.">Highly efficient neural conversion of human ES and iPS cells by dual inhibition of SMAD signaling.</a> Nature Biotechnology. 27 (3), 275-280 (2009).</li><li>Fasano, C. A., Chambers, S. M., Lee, G., Tomishima, M. J., Studer, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+derivation+of+functional+floor+plate+tissue+from+human+embryonic+stem+cells.">Efficient derivation of functional floor plate tissue from human embryonic stem cells.</a> Cell Stem Cell. 6 (4), 336-347 (2010).</li><li>Harvey, B. K., Wang, Y., Hoffer, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+rodent+models+of+Parkinson's+disease.">Transgenic rodent models of Parkinson's disease.</a> Acta Neurochirurgica Supplements. 101, 89-92 (2008).</li><li>Sheng, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+dopaminergic+neurons+directly+from+mouse+fibroblasts+and+fibroblast-derived+neural+progenitors.">Generation of dopaminergic neurons directly from mouse fibroblasts and fibroblast-derived neural progenitors.</a> Cell Research. 22 (4), 769-772 (2012).</li><li>Prasad, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+induced+pluripotent+stem+cell,+direct+conversion+by+trans-differentiation,+direct+reprogramming+and+oligodendrocyte+differentiation.">A review of induced pluripotent stem cell, direct conversion by trans-differentiation, direct reprogramming and oligodendrocyte differentiation.</a> Regenerative Medicine. 11 (2), 181-191 (2016).</li></ol>

Här presenterade vi ett protokoll som täckte olika stadier av iNSC-DA cellterapi för PD-modeller. Kritiska aspekter av detta protokoll inkluderar: (1) isolering och expansion av PBMNCs och omprogrammering av PBMNCs till iNSCs av SeV infektion, (2) differentiering av iNSCs till DA neuroner, (3) inrättande av ensidiga 6-OHDA-lesioned PD musmodeller och beteendemässiga bedömning och (4) celltransplantation av DA-prekursorer och beteendemässig bedömning.
I detta protokoll, den första dele...

Parkinsons sjukdom (PD) är en vanlig neurodegenerativ sjukdom, orsakad av degeneration av dopaminerga (DA) nervceller vid substantia nigra pars compacta (SNpc) i ventrala mesencephalon (VM), med en prevalens av mer än 1% i befolkningen över 60 års ålder 1 , 2. under det senaste decenniet, cellterapi, som syftar till att antingen ersätta de degenerativa eller skadade celler, eller näring mikromiljön runt degenererade neuroner, har visat potential i behandling av PD3. Samtidigt har omprogrammeringsteknik gjort betydande framsteg4, vilket ger en lovande cellulär källa för substitutionsterapi. Humana inducerade pluripotenta stamceller (iPSCs) och embryonala stamceller (ESCs) har visat sig kunna differentiera till DA neurala celler, som kan överleva, mognad, och förbättra motoriska funktioner när ympas till råtta och icke-mänskliga primater PD-modeller5 ,6,7,8. iPSCs utgör en milstolpe i cellulära omprogrammeringstekniker och har en stor potential vid celltransplantation. emellertid, det finns fortfarande en oro över risken för tumör bildning från ofullständigt differentierade celler. En alternativ cellulär källa för celltransplantation är härstamning-engagerade adulta stamceller erhållna genom direkt omprogrammering, såsom inducerade neurala stamceller (iNSCs), som kan härledas från de instabila intermediaterna, som förbigår pluripotensen etapp9,10,11.
Både iPSCs och inscs kan omprogrammeras från autolodiga cellulära källor, såsom fibroblaster, perifera mononukleära blodceller (pbmncs) och olika andra typer av celler12,13,14, vilket minskar Immunogenicitet av transplanterade celler i hög grad. Dessutom, jämfört med iPSCs, iNSCs är inneboende med minskad risk för tumör bildning och härstamning-engagerade plasticitet, endast kunna differentiera till nervceller och glia11. I de första studierna, mänskliga eller mus iPSCs och inscs genererades från fibroblaster erhållits från hudbiopsier, vilket är ett invasivt förfarande14,15. Med detta avseende, PBMNCs är en tilltalande förrätt cell källa på grund av den mindre invasiva provtagning processen, och lätt att få ett stort antal celler inom en kort period av expansionstid16. Inledande omprogrammering studier anställda integrativ leveranssystem, såsom lentivirala eller retrovirala vektorer, som är effektiva och lätta att genomföra i många typer av celler17; dessa leveranssystem kan dock orsaka mutationer och reaktivering av kvarvarande transgener, som utgör säkerhetsfrågor för kliniska terapeutiska ändamål12. Sendai virus (SeV) är en icke-integrativ RNA-virus med en negativ känsla, enkelsträngad arvsmassa som inte integreras i värd arvsmassan, men bara replikat i cytoplasman hos infekterade celler, som erbjuder ett effektivt och säkert fordon för omprogrammering18 ,19. Rekombinanta SeV vektorer finns tillgängliga som innehåller omprogrammering faktorer inklusive Human OCT3/4, SOX2, KLF4 och c-MYC i sina öppna Läs ramar. Dessutom kan SeV virusvektorer förbättras ytterligare genom att införa temperaturkänsliga mutationer, så att de snabbt kan avlägsnas när odlings temperaturen höjs till 39 ° c20. I den här artikeln beskriver vi ett protokoll för att programmera PBMNCs till iNSCs med hjälp av SeV-systemet.
Många studier har rapporterat härledning av da neuroner från mänskliga ESCs eller iPSCs med hjälp av olika metoder6,8,21. Emellertid, det finns en brist på protokoll som beskriver differentiering av DA neuroner från iNSCs i detaljer. I detta protokoll kommer vi att beskriva den effektiva generationen av DA-neuroner från iNSCs med hjälp av en tvåstegs metod. DA neuronala prekursorer kan transplanteras in i striatum av PD musmodeller för säkerhet och effekt utvärderingar. Denna artikel kommer att presentera ett detaljerat protokoll som täcker olika stadier från generering av inducerad neurala stamceller av Sendai virus, differentiering av iNSCs i DA neuroner, inrättande av mus PD-modeller, till transplantation av DA prekursorer i striatum av PD-modellerna. Med hjälp av detta protokoll kan man generera iNSCs från patienter och friska donatorer och härleda DA neuroner som är säkra, standardiserade, skalbara och homogena för celltransplantation ändamål, eller för modellering PD i en maträtt och utredning av mekanismerna bakomliggande sjukdomsdebut och utveckling.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:828px;" width="827">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">15-ml conical tube</td>
			<td style="width:183px;">Corning</td>
			<td style="width:153px;">430052</td>
			<td style="width:215px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">1-Thioglycerol</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">M6145</td>
			<td>Toxic for inhalation and skin contact</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">24-well plate</td>
			<td style="width:183px;">Corning</td>
			<td style="width:153px;">3337</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">50-ml conical tube&#160;</td>
			<td style="width:183px;">Corning</td>
			<td style="width:153px;">430828</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">6-OHDA</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">H4381</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">6-well plate</td>
			<td style="width:183px;">Corning</td>
			<td style="width:153px;">3516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Accutase</td>
			<td style="width:183px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">A11105-01</td>
			<td>Cell dissociation reagent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Apomorphine</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">A4393</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Ascorbic acid</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">A92902</td>
			<td>Toxic with skin contact&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">B27 supplement&#160;</td>
			<td style="width:183px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">17504044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">BDNF</td>
			<td style="width:183px;">Peprotech</td>
			<td style="width:153px;">450-02</td>
			<td>Brain derived neurotrophic factor</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:277px;">Blood collection tubes containing sodium heparin</td>
			<td style="width:183px;">BD</td>
			<td style="width:153px;">367871</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">BSA</td>
			<td style="width:183px;">yisheng</td>
			<td style="width:153px;">36106es60</td>
			<td>Fetal bovine serum</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">cAMP</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">D0627</td>
			<td>Dibutyryladenosine cyclic monophosphate</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">CellBanker 2</td>
			<td style="width:183px;">ZENOAQ</td>
			<td style="width:153px;">100ml</td>
			<td>Used as freezing medium for PBMNCs</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Chemically defined lipid concentrate</td>
			<td style="width:183px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">11905031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">CHIR99021</td>
			<td style="width:183px;">Gene Operation</td>
			<td style="width:153px;">04-0004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Coverslip</td>
			<td style="width:183px;">Fisher</td>
			<td style="width:153px;">25*25-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">DAPI</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">D8417-10mg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">DAPT</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">D5942</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Dexamethasone</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">D2915-100MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">DMEM-F12</td>
			<td style="width:183px;">Gibco</td>
			<td style="width:153px;">11330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">DMEM-F12</td>
			<td style="width:183px;">Gibco</td>
			<td style="width:153px;">11320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Donkey serum</td>
			<td style="width:183px;">Jackson</td>
			<td style="width:153px;">017-000-121</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">EPO</td>
			<td style="width:183px;">Peprotech</td>
			<td style="width:153px;">100-64-50UG</td>
			<td>Human Erythropoietin</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">FGF8b</td>
			<td style="width:183px;">Peprotech</td>
			<td style="width:153px;">100-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Ficoll-Paque Premium</td>
			<td style="width:183px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:153px;">17-5442-02</td>
			<td>P=1.077, density gradient medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">GDNF</td>
			<td style="width:183px;">Peprotech</td>
			<td style="width:153px;">450-10</td>
			<td>Glial derived neurotrophic factor</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">GlutaMAX</td>
			<td style="width:183px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">21051024</td>
			<td>100 &#215; Glutamine stock solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Ham&#39;s-F12</td>
			<td style="width:183px;">Gibco</td>
			<td style="width:153px;">11765-054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">HBSS</td>
			<td style="width:183px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">14175079</td>
			<td>Balanced salt solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Human leukemia inhibitory factor</td>
			<td style="width:183px;">Millpore</td>
			<td style="width:153px;">LIF1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Human recombinant SCF</td>
			<td style="width:183px;">Peprotech</td>
			<td style="width:153px;">300-07-100UG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">IGF-1</td>
			<td style="width:183px;">Peprotech</td>
			<td style="width:153px;">100-11-100UG</td>
			<td>Human insulin-like growth factor&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">IL-3</td>
			<td style="width:183px;">Peprotech</td>
			<td style="width:153px;">200-03-10UG</td>
			<td>Human interleukin 3</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">IMDM</td>
			<td style="width:183px;">Gibco</td>
			<td style="width:153px;">215056-023</td>
			<td>Iscove&#39;s modified Dulbecco&#39;s medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Insulin</td>
			<td style="width:183px;">Roche&#160;</td>
			<td style="width:153px;">12585014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">ITS-X</td>
			<td style="width:183px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">51500-056</td>
			<td>Insulin-transferrin-selenium-X supplement</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Knockout serum replacement</td>
			<td style="width:183px;">Gibco</td>
			<td style="width:153px;">10828028</td>
			<td>Serum free basal medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Laminin</td>
			<td style="width:183px;">Roche&#160;</td>
			<td style="width:153px;">11243217001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Microsyringe</td>
			<td style="width:183px;">Hamilton</td>
			<td style="width:153px;">7653-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">N2 supplement&#160;</td>
			<td style="width:183px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">17502048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">NEAA</td>
			<td style="width:183px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">11140050</td>
			<td>Non-essential amino acid</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Neurobasal</td>
			<td style="width:183px;">Gibco</td>
			<td style="width:153px;">10888</td>
			<td>Basic medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">PDL</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">P7280</td>
			<td>Poly-D-lysine</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">SAG1</td>
			<td style="width:183px;">Enzo</td>
			<td style="width:153px;">ALX-270-426-M01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">SB431542</td>
			<td style="width:183px;">Gene Operation</td>
			<td style="width:153px;">04-0010-10mg</td>
			<td>Store from light at -20&#8451;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Sendai virus</td>
			<td style="width:183px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:153px;">MAN0009378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Sucrose</td>
			<td style="width:183px;">baiaoshengke</td>
			<td style="width:153px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">TGF&#946;&#8546;</td>
			<td style="width:183px;">Peprotech</td>
			<td style="width:153px;">100-36E</td>
			<td>Transforming growth factor&#160; &#946;&#8546;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Transferrin</td>
			<td style="width:183px;">R&#38;D Systems</td>
			<td style="width:153px;">2914-HT-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Triton X 100</td>
			<td style="width:183px;">baiaoshengke</td>
			<td style="width:153px;"></td>
			<td>Nonionic surfactant</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Trypan blue</td>
			<td style="width:183px;">Gibco</td>
			<td style="width:153px;">T10282</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:277px;">Xylazine</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">X1126</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generation of induced neural stem cells from peripheral mononuclear cells and differentiation toward dopaminergic neuron precursors for transplantation studies

Parkinsons sjukdom (PD) orsakas av degeneration av dopaminerga (DA) nervceller vid substantia nigra pars compacta (SNpc) i den ventrala mesencephalon (VM). Cell substitutionsterapi har ett stort löfte för behandling av PD. nyligen har inducerad neurala stamceller (iNSCs) vuxit fram som en potentiell kandidat för cell substitutionsterapi på grund av minskad risk för tumör bildning och plasticitet att ge upphov till regionspecifika nervceller och glia. iNSCs kan omprogrammeras från autolodiga somatiska cellulära källor, såsom fibroblaster, perifera mononukleära blodceller (PBMNCs) och olika andra typer av celler. Jämfört med andra typer av somatiska celler, PBMNCs är en tilltalande förrätt celltyp på grund av den lätthet att komma åt och expandera i kulturen. Sendai virus (SeV), en RNA icke-integrativ virus, kodning omprogrammering faktorer inklusive Human OCT3/4, SOX2, KLF4 och c-MYC, har en negativ känsla, enkelsträngad, icke-segmenterade genomet som inte integreras i värd arvsmassa, men bara replikat i cytoplasman hos infekterade celler, som erbjuder ett effektivt och säkert fordon för omprogrammering. I den här studien beskriver vi ett protokoll där iNSCs erhålls genom omprogrammering av PBMNCs, och differentieras till specialiserade VM DA-neuroner genom en tvåstegs metod. Sedan DA prekursorer transplanteras in ensidigt 6-hyroxydopamin (6-OHDA)-lesioned PD musmodeller för att utvärdera säkerhet och effekt för behandling av PD. Denna metod ger en plattform för att undersöka de funktioner och terapeutiska effekterna av patientspecifika DA neurala celler in vitro-och in vivo.

Här rapporterar vi ett protokoll som täcker olika stadier av iNSC-DA cellterapi för att behandla PD-modeller. För det första var PBMNCs isolerade och expanderade, och omprogrammeras till iNSCs av SeV infektion. En schematisk representation av procedurerna med PBMNC-expansion och iNSC-induktion visas i figur 1. På dag-14, PBMNCs isolerades med hjälp av en densitet gradient medium (tabell över material). Före centrifugering separerades blod som späddes med PBS och de...

Watch this Scientific Journal Video about Generation of Induced Neural Stem Cells from Peripheral Mononuclear Cells and Differentiation Toward Dopaminergic Neuron Precursors for Transplantation Studie

Generation of Induced Neural Stem Cells from Peripheral Mononuclear Cells and Differentiation Toward Dopaminergic Neuron Precursors for Transplantation Studies

Generering av inducerade neurala stamceller från perifera mononukleära celler och differentiering mot dopaminerga neuron prekursorer för transplantations studier

I protokollet presenteras omprogrammering av perifera mononukleära blodceller för att inducera neurala stamceller av Sendai virusinfektion, differentiering av iNSCs i dopaminerga neuroner, transplantation av DA-prekursorer till den ensidigt-lesioned Musmodeller för Parkinsons sjukdom och utvärdering av säkerheten och effekten av de iNSC-härledda DA-prekursorer för PD-behandling.

Parkinson&#39;s disease (PD) is caused by degeneration of dopaminergic (DA) neurons at the substantia nigra pars compacta (SNpc) in the ventral ...

Detta protokoll beskriver en metod för att omprogrammera blod och mononukleära celler till neurala stamceller som kan användas för att behandla neurodegenerativa sjukdomar, såsom Parkinsons sjukdom. Det erbjuder en autolog cellkälla för att behandla neurodegenerativa sjukdomar. Även den tidsram som krävs för konvertering till inducerade neurala stamceller och differentiering till önskade celltyper är kortare än för inducerade pluripotenta stamceller.Inducerade neurala stamceller besitter en bra proliferativ kapacitet och kan skalas upp före applicering. Eftersom iNSC:erna kan specificeras i olika regionspecifika neurala celler, såsom ryggmärgsnervceller eller motoriska nervceller, kan denna metod förlängas för behandling av andra neurologiska sjukdomar. Hela proceduren tar lång tid, med alla steg relaterade och kritiska, så visuell demonstration ger en uppfattning om hur cellerna ser ut och ger några tips för att säkerställa en lyckad generering av de önskade cellerna.Till att börja, överför tidigare isolerade perifera venösa blod i en 50-milliliter koniska röret, och späda ut den med en lika stor volym av sterila Dulbecco's PBS. I en annan 50-milliliter koniska röret, förbereda 15 milliliter av steriliserad densitet gradient medium. Luta röret i 45 graders vinkel, och lägg långsamt och försiktigt 30 milliliter utspädd perifert blod på densitetsgradientmediet.Centrifugera röret vid 800 gånger g i 15 minuter vid rumstemperatur med centrifugbromsen inställd vid avst.läge. Aspirera det gula, övre plasmaskiktet och kassera det. Använd en 10-milliliter pipett för att överföra det vita, grumliga tunna filmskiktet som innehåller mononukleära celler till ett nytt koniskt rör på 50 milliliter.Tillsätt 30 milliliter D-PBS till röret med MNC, och centrifug vid 600 gånger g i 10 minuter vid fyra grader Celsius. När du har kastat supernatanten ska du lägga till 45 milliliter D-PBS och återanvänd cellerna. Efter centrifugering av röret vid 400 gånger g i 10 minuter vid fyra grader Celsius, kassera supernatanten.Resuspend cellerna med fem milliliter av D-PBS, räkna de levande cellerna med trypan blå uteslutningsmetoden, avsätta de MNCs som behövs för expansion, och frysa de återstående cellerna för framtida bruk. På dag minus 14, utsäde MNCs vid en densitet på två till tre miljoner celler per milliliter per brunn av sex-brunn plattan med 1,5 milliliter av 37-graders Celsius, förvörd MNC medium. Inkubera vid 37 grader Celsius, 5%koldioxid i två dagar.På dag minus 11, använd en steriliserad pipett för att samla cellerna med mediet och överföra till ett nytt 15-milliliter koniskt rör. Centrifugera vid 250 gånger g i fem minuter vid rumstemperatur, kassera supernatanten och resuspend cellerna i en milliliter av förvjutet MNC-medium. Efter att ha räknat de livskraftiga cellerna med trypan blå, utsäde MNCs vid en densitet av en miljon celler per milliliter i förvuppvade MNC medium i en sex-brunn tallrik.Inkubera vid 37 grader Celsius, 5%koldioxid i tre dagar, och upprepa cell insamling, centrifugering, och plätering i MNC medium på dagar minus åtta och minus fyra. Sendai virus i denna procedur är farligt, och alla förfaranden som involverar Sendai virus måste utföras i ett säkerhetsskåp. Och alla tips och rör som utsätts för Sendai virus bör behandlas med etanol eller blekmedel före bortskaffande.På dag noll, samla cellerna i MNC medium och överföra till en 15-milliliter koniska röret. Efter centrifuging cellerna på 200 gånger g i fem minuter, aspirera supernatanten och resuspend cellerna med en milliliter av förvörd MNC medium. Räkna de livskraftiga cellerna med trypan blå, och sedan återanvända dem med förvösat MNC medium till en koncentration av 200, 000 celler per brunn i 24-brunnsplattor.Tina rören bort från minus 80-graders Celsius lagring som innehåller Sendai virus i en 37-graders Celsius vattenbad i fem till 10 sekunder, och sedan lämna dem att tina vid rumstemperatur. När tinade, placera dem omedelbart på is. Lägg till det tinade Sendai-viruset i brunnarna på 24-brunnsplattan med MNCs vid en multiplikitet av infektion på 10.För att underlätta fastsättning av celler, centrifug plattorna vid 1, 000 gånger g i 30 minuter och efter det placera plattorna i inkubatorn på 37 grader Celsius, 5%koldioxid. På dag ett, överföra cellerna med mediet till en 15-milliliter centrifugrör. För att ytterligare ta bort de återstående cellerna, skölj brunnarna med en milliliter MNC-medium per brunn och tillsätt cellerna med medium till röret.Efter centrifugering cellen suspensionen vid 200 gånger g i fem minuter, aspirera supernatanten, resuspend cellerna med 500 microliters av färska förvösat MNC medium, och lägga till en brunn av en 24-väl platta. På dag två, använd en milliliter per brunn av tidigare utspädda 50 mikrogram per mikroliter poly-D-lysin i D-PBS för att belägga sex-brunnsplattor i minst två timmar i rumstemperatur. Aspirera poly-D-lysin från sex-brunns plattorna, och torka på den vertikala rena bänken i ca 10 minuter.Tillsätt sedan en milliliter per brunn av en tidigare utspädd fem mikrogram per milliliter laminin till sex-brunnsplattor, och inkubera i fyra till sex timmar vid 37 grader Celsius för att belägga. Tvätta plattorna med D-PBS före användning. På dag tre, plattan alla Sendai virus-transduced MNCs i inducerad neurala stamceller medium på poly-D-lysin/laminin-belagda sex-väl plattor.På dag fem och sju, tillsätt försiktigt en milliliter av 37-graders Celsius, förvörd iNSC medium till varje brunn av sex-brunn plattor. Från dag nio till dag 28, byt ut mediet med färskt förvörd iNSC medium dagligen. Övervaka uppkomsten av iNSC kolonier, och i ungefär två till tre veckor plocka kolonier med lämplig morfologi med hjälp av brända glaspipetter och överföra varje koloni till en separat brunn av en sex-väl platta för expansion.För att upprätta ensidiga 6-hyroxydopamine-lesioned mus modeller, raka huvudet av en sövd, vuxen, manlig, SCID-beige mus, och tillämpa erytromycin öga salva. Placera musen på stereotaxiska apparaten, och fixa musen med incisor barer. Sätt i öronkåpa korrekt för att säkert och lämpligt placera mushuvudet.Sterilisera huvudet med povidone jod och isopropylalkohol, och sedan använda en skalpell blad för att göra en cirka 1,5-centimeter sagittal snitt på huvudet huden, utsätta skallen. Justera incisorstången och öronstängerna för att minska höjdskillnaden mellan bregma och lambda till mindre än 0,1 millimeter. Rör dig långsamt och sänk spetsen på mikrosyringsnålen mot bregma, och behandla bregma som nollpunkten.Flytta spetsen till en position med koordinater på främre 0,5 millimeter och laterala 2,1 millimeter i förhållande till Bregma. Dra tillbaka spetsen, markera punkten med en markör penna, och, med en elektronisk borr, burr ett litet hål i skallen. Extrahera två mikroliter på fem mikrogram per milliliter 6-hyroxydopaminlösning i mikrosyringen.Återför nålen till den punkt som markerats, och sätt in nålen till dorsala/ventrala 3,2 millimeter. Injicera 6-hyroxydopaminlösningen från sprutan med en hastighet av en mikroliter per minut, låt injektionsnålen vara på plats i ytterligare fem minuter och dra sedan tillbaka den långsamt. Efter stängning av snittet med suturer, applicera erytromycin ögonsalva på ögonen igen.Ta bort musen från stereotaxisk apparat, lägg den i återhämtningsburen och ge tillgång till mat och vatten tills den återfår medvetandet. Efter PBMNCs var smittade med SeV, var deras morfologi förändras och celler genomgick en drastisk död fram till dag fem. INSC kolonier uppstod på dag 12.Efter att ha plockat och överfört iNSC-kloner för expansion för ett antal passager visade de en bra morfologi och kunde själv förnyas stabilt i iNSC-medium, antingen i en monolayerform eller som sfärer. Efter 24 dagar av differentiering identifierades iNSCs som dopaminerga nervceller som en majoritet av dem uttryckt tyrosin hydroxylas, gaffelhuvud låda A2 och neuron-specifika klass III beta-tubulin markörer. Efter etablering av ensidiga 6-hyroxydopamine-lesioned Parkinsons sjukdom mus modeller genomfördes beteendemässiga bedömning för att uppskatta parkinsons sjukdom symptom.De möss som hade fått celltransplantation visade signifikant förbättring av motorisk funktion. Omfattningen av 6-hyroxydopamine-inducerad lesioning kontrollerades av post-mortem immunofluorescent färgning för TH vid striatum, medial framhjärna bunt och substantia nigra pars compacta. De TH-positiva signalerna återfanns kraftigt i striatum där celler implanterades och även milt återhämtade sig vid SN. Tre månader efter transplantation, bland överlevande celler, omkring 13.84%var TH-positiva dopaminerga nervceller.Omkring 91,72% av de TH-positiva cellerna uttryckte särläkemedel kärnreceptorn, cirka 86,76%uttryckt FOXA2, och cirka 98,77%var co-märkt med G-protein-kopplade inåt likriktare kalium. När du lägger 30 mils utspädd perifert blod på densitetsgradientmediet, var snäll och gör det långsamt och försiktigt, för att inte störa lutningsgränssnittet. Försiktighet bör vidtas för att undvika upprepad upptining och frysning av Sendai virus för att säkerställa en hög virusaktivitet.När omprogrammering perifert blod mononukleära celler till inducerad neurala stamceller, observera noga morfologi av celler varje dag. Också, 6-hydroxydopamin är ljus-och temperaturkänsliga. Var noga med att skydda lösningen mot ljus, och håll den på is före användning.Efter detta förfarande, kan man fortsätta att studera sjukdomen mekanismerna genom att använda familjär PD patient-härledda dopaminerga nervceller i kultur. Man kan också fortsätta att undersöka hur de transplanterade cellerna påverkar de skadade neuronala kretsarna.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Direct Induction of Human Neural Stem Cells from Peripheral Blood Hematopoietic Progenitor Cells

Direkt Induktion av humana neurala stamceller från perifert blod hematopoetiska progenitorceller

Human disease specific neuronal cultures are essential for generating in vitro models for human neurological diseases. However, the lack of access to ...

Generation of Induced Pluripotent Stem Cells from Human Peripheral T Cells Using Sendai Virus in Feeder-free Conditions

Generering av inducerade pluripotenta stamceller från humana perifera T-celler med Sendai virus i Feeder fria förhållanden

Recently, iPSCs have attracted attention as a new source of cells for regenerative therapies. Although the initial method for generating iPSCs relied on ...

Generation of Integration-free Induced Pluripotent Stem Cells from Human Peripheral Blood Mononuclear Cells Using Episomal Vectors

Generation Integrations-fria inducerade pluripotenta stamceller från humant perifert blod mononukleära celler med användning av episomala vektorer

Induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs) hold great promise for disease modeling and regenerative therapies. We previously reported the use of Episomal ...

Differentiating Chondrocytes from Peripheral Blood-derived Human Induced Pluripotent Stem Cells

Differentierande kondrocyter från perifert blod härledda humana inducerade plöripotenta stamceller

In this study, we used peripheral blood cells (PBCs) as seed cells to produce chondrocytes via induced pluripotent stem cells (iPSCs) in an ...

Horizontal Whole Mount: A Novel Processing and Imaging Protocol for Thick, Three-dimensional Tissue Cross-sections of Skin

Horisontell helmontering: Ett nytt bearbetnings- och bildprotokoll för tjocka, tredimensionella vävnads tvärsnitt av huden

Processing a tissue of interest to generate a microscopic image that supports a scientific argument can be challenging. The acquisition of high-quality ...

Rapid, Directed Differentiation of Retinal Pigment Epithelial Cells from Human Embryonic or Induced Pluripotent Stem Cells

Snabb, regisserad differentiering av Retinal Pigment epitelial celler från mänskliga embryonala eller inducerade pluripotenta stamceller

We describe a robust method to direct the differentiation of pluripotent stem cells into retinal pigment epithelial cells (RPE). The purpose of providing ...

Single-cell Photoconversion in Living Intact Zebrafish

Single-cell Photoconversion i levande intakt zebrafiskar

Animal and plant tissue is composed of distinct populations of cells. These cells interact over time to build and maintain the tissue and can cause ...

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Computational analys av den Caenorhabditis elegans könsceller att studera fördelningen av atomkärnor, proteiner och cytoskelettet

The Caenorhabditis elegans (C. elegans) germline is used to study several biologically important processes including stem cell development, apoptosis, and ...

Derivation and Differentiation of Canine Ovarian Mesenchymal Stem Cells

Härledning och differentiering av hundarnas cystor mesenkymala stamceller

Interest in mesenchymal stem cells (MSCs) has increased over the past decade due to their ease of isolation, expansion, and culture. Recently, studies ...

Generation of 3D Skin Organoid from Cord Blood-derived Induced Pluripotent Stem Cells

Generation av 3D hud Organoid från sladd blod-derived inducerade pluripotenta stamceller

The skin is the body&#8217;s largest organ and has many functions. The skin acts as a physical barrier and protector of the body and regulates bodily ...