Name: preparation of newborn rat brain tissue for ultrastructural morphometric analysis of synaptic vesicle distribution at nerve terminals
Uploaded: 2019-06-07T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Newborn Rat Brain Tissue for Ultrastructural Morphometric Analysis of Synaptic Vesicle Distribution at Nerve Terminals at JoVE.com

Dit manuscript werd gesteund door NIH/NIGMS K08 123321 (aan N.L.) en door fondsen van het ministerie van Anesthesiologie bij de Universiteit van Virginia. De auteurs willen bedanken alev Erisir (afdeling biologie, Universiteit van Virginia, Charlottesville, VA) voor een uitstekende opleiding en technische bijstand met TEM, en voor haar waardevolle manuscript kritiek. De auteurs danken ook de geavanceerde elektronenmicroscopie faciliteit bij de Universiteit van Virginia voor technische hulp met specimen en post-bevlekt.

Alle studies werden goedgekeurd door de Institutional Animal zorg en het gebruik Comite aan de Universiteit van Virginia (Charlottesville, VA) en uitgevoerd in overeenstemming met de nationale instituten van gezondheidsrichtlijnen.
1. fixatie door vasculaire doorbloeding
Opmerking: Een algemene beschrijving van de methode voor rat Brain vasculaire transfusie is al gedetailleerd in dit blad13 en valt buiten het bestek van dit pr...

<ol>
	<li>Lunardi, N., Oklopcic, A., Prillaman, M., Erisir, A., Jevtovic-Todorovic, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+exposure+to+general+anesthesia+disrupts+spatial+organization+of+presynaptic+vesicles+in+nerve+terminals+of+the+developing+subiculum.">Early exposure to general anesthesia disrupts spatial organization of presynaptic vesicles in nerve terminals of the developing subiculum.</a> Molecular Neurobiology. 52 (2), 942-951 (2015).</li><li>Lunardi, N., Ori, C., Erisir, A., Jevtovic-Todorovic, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=General+anesthesia+causes+long-lasting+disturbances+in+the+ultrastructural+properties+of+developing+synapses+in+young+rats.">General anesthesia causes long-lasting disturbances in the ultrastructural properties of developing synapses in young rats.</a> Neurotoxicity Research. 17 (2), 179-188 (2010).</li><li>Sanchez, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=General+anesthesia+causes+long-term+impairment+of+mitochondrial+morphogenesis+and+synaptic+transmission+in+developing+rat+brain.">General anesthesia causes long-term impairment of mitochondrial morphogenesis and synaptic transmission in developing rat brain.</a> Anesthesiology. 115 (5), 992-1002 (2011).</li><li>Boscolo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+abolishment+of+anesthesia-induced+cognitive+impairment+by+timely+protection+of+mitochondria+in+the+developing+rat+brain:+the+importance+of+free+oxygen+radicals+and+mitochondria+integrity.">The abolishment of anesthesia-induced cognitive impairment by timely protection of mitochondria in the developing rat brain: the importance of free oxygen radicals and mitochondria integrity.</a> Neurobiology of Disease. 45 (3), 1031-1041 (2012).</li><li>Aghajanian, G. K., Bloom, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+formation+of+synaptic+junctions+in+developing+rat+brain:+a+quantitative+electron+microscopy+study.">The formation of synaptic junctions in developing rat brain: a quantitative electron microscopy study.</a> Brain Research. 6 (4), 716-727 (1967).</li><li>Akert, K., Sandri, C., Santini, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Significance+of+the+Maillet+method+for+cytochemical+studies+of+synapses.">Significance of the Maillet method for cytochemical studies of synapses.</a> Golgi centennial symposium; Perspectives in Neurobiology. , 387-399 (1975).</li><li>Bloom, F. E., Aghajanian, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytochemistry+of+synapses:+selective+staining+for+electron+microscopy.">Cytochemistry of synapses: selective staining for electron microscopy.</a> Science. 154 (3756), 1575-1577 (1966).</li><li>Bloom, F. E., Aghajanian, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fine+structural+and+cytochemical+analysis+of+the+staining+of+synaptic+junctions+with+phosphotungstic+acid.">Fine structural and cytochemical analysis of the staining of synaptic junctions with phosphotungstic acid.</a> Journal of Ultrastructure Research. 22 (5-6), 361-375 (1968).</li><li>Burry, R. W., Lasher, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+quantitative+electron+microscopy+study+of+synapse+formation+in+dispersed+cell+cultures+of+rat+cerebellum+stained+either+by+O-UL+or+by+E-PTA.">A quantitative electron microscopy study of synapse formation in dispersed cell cultures of rat cerebellum stained either by O-UL or by E-PTA.</a> Brain Research. 147 (1), 1-15 (1978).</li><li>Pellegrino de Iraldi, A., Suburo, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electron+staining+of+synaptic+vesicles+using+the+Champy-Maillet+technique.">Electron staining of synaptic vesicles using the Champy-Maillet technique.</a> Journal of Microscopy. 91 (2), 99-103 (1970).</li><li>Pfenninger, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cytochemistry+of+synaptic+densities.+I.+An+analysis+of+the+bismuth+iodide+impregnation+method.">The cytochemistry of synaptic densities. I. An analysis of the bismuth iodide impregnation method.</a> Journal of Ultrastructural Research. 34 (1), 103-122 (1971).</li><li>Hayat, M. A., Hayat, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+fixation.">Chemical fixation.</a> Principles and techniques of electron microscopy. Biological applications. , 4-84 (2000).</li><li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+Animal+Perfusion+Fixation+for+Rodents.">Whole Animal Perfusion Fixation for Rodents.</a> Journal of Visual Experiments. (65), e3564 (2012).</li><li>Hayat, M. A., Hayat, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Fixation for electron microscopy. , (1981).</li><li>Behrman, E. J., et al., Revel, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chemistry+of+osmium+tetroxide+fixation.">The chemistry of osmium tetroxide fixation.</a> The science of biological specimen preparation for microscopy and microanalysis. , 1-5 (1983).</li><li>Nielson, A. J., Griffith, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactions+of+osmium+tetroxide+with+protein+side+chains+and+unsaturated+lipids.">Reactions of osmium tetroxide with protein side chains and unsaturated lipids.</a> Journal of the Chemical Society, Dalton Transactions. (6), 1084-1088 (1979).</li><li>Nielson, A. J., Griffith, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+fixation+by+osmium+tetroxide.+A+possible+role+for+proteins.">Tissue fixation by osmium tetroxide. A possible role for proteins.</a> Journal of Hystochemistry &amp; Cytochemistry. 27 (5), 997-999 (1979).</li><li>Hanker, J. S., Deb, C., Wasserkrug, H. L., Seligman, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Staining+tissue+for+light+and+electron+microscopy+by+bridging+metals+with+multidentate+ligands.">Staining tissue for light and electron microscopy by bridging metals with multidentate ligands.</a> Science. 152 (3729), 1631-1634 (1966).</li><li>Zobel, C. R., Beer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+heavy+metal+salts+as+electron+stains.">The use of heavy metal salts as electron stains.</a> International Review of Cytology. 18, 363-400 (1965).</li><li>Silva, M. T., Guerra, F. C., Magalhaes, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fixative+action+of+uranyl+acetate+in+electron+microscopy.">The fixative action of uranyl acetate in electron microscopy.</a> Experientia. 24 (10), 1074 (1968).</li><li>Terzakis, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uranyl+acetate,+a+stain+and+a+fixative.">Uranyl acetate, a stain and a fixative.</a> Journal of Ultrastructural Research. 22 (1-2), 168-184 (1968).</li><li>Feldman, I., Jones, J., Cross, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chelation+of+uranyl+ions+by+adenine+nucleotides.">Chelation of uranyl ions by adenine nucleotides.</a> Journal of the American Chemical Society. 89 (1), 49-53 (1967).</li><li>Shah, D. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+of+uranyl+ions+with+phospholipid+and+cholesterol+monolayer.">Interaction of uranyl ions with phospholipid and cholesterol monolayer.</a> Journal of Colloid and Interface Science. 29 (2), 210-215 (1969).</li><li>Daems, W. T., Persijn, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Section+staining+with+heavy+metals+of+osmium-fixed+and+formol-fixed+mouse+liver+tissue.">Section staining with heavy metals of osmium-fixed and formol-fixed mouse liver tissue.</a> Journal. Royal Microscopical Society. 81 (pts 3&#38;4), 199-201 (1963).</li><li>Lombardi, L., Prenna, G., Okolicsanyi, L., Gautier, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electron+staining+with+uranyl+acetate:+possible+role+of+free+amino+groups.">Electron staining with uranyl acetate: possible role of free amino groups.</a> Journal of Histochemistry &amp; Cytochemistry. 19 (3), 161-168 (1971).</li><li>Cattini, P. A., Davies, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetics+of+lead+citrate+staining+of+thin+sections+for+electron+microscopy.">Kinetics of lead citrate staining of thin sections for electron microscopy.</a> Stain Technology. 58 (1), 29-40 (1983).</li><li>Reynolds, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+lead+citrate+at+high+pH+as+an+electron+opaque+stain+in+electron+microscopy.">The use of lead citrate at high pH as an electron opaque stain in electron microscopy.</a> Journal of Cell Biology. 17 (1), 208-212 (1963).</li><li>Cattini, P. A., Davies, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Observations+on+the+kinetics+of+uranyl+acetate+and+phosphotungstic+acid+staining+of+chromatin+in+thin+sections+for+electron+microscopy.">Observations on the kinetics of uranyl acetate and phosphotungstic acid staining of chromatin in thin sections for electron microscopy.</a> Stain Technology. 59 (5), 291-304 (1984).</li><li>Derksen, J. W., Meekes, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+staining+of+nucleic+acid+containing+structures+by+uranyl+acetate-lead+citrate.">Selective staining of nucleic acid containing structures by uranyl acetate-lead citrate.</a> Micron and Microscopica Acta. 15 (1), 55-58 (1984).</li><li>Frasca, J. M., Parks, V. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+routine+technique+for+double-staining+ultrathin+sections+using+uranyl+and+lead+salts.">A routine technique for double-staining ultrathin sections using uranyl and lead salts.</a> Journal of Cell Biology. 25 (1), 157-161 (1965).</li><li>Hanaichi, T., Sato, T., Iwamoto, T., Malavasi-Yamashiro, J., Hoshino, M., Mizuno, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+stable+lead+by+modification+of+Sato&#8217;s+method.">A stable lead by modification of Sato&#8217;s method.</a> Journal of Electron Microscopy. 35 (3), 304-306 (1986).</li><li>Sato, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+modified+method+for+lead+staining+of+thin+sections.">A modified method for lead staining of thin sections.</a> Journal of Electron Microscopy. 17 (2), 158-159 (1968).</li><li>Lever, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+of+staining+tissues+with+lead+for+electron+microscopy.">A method of staining tissues with lead for electron microscopy.</a> Nature. , 810-811 (1960).</li><li>Derek, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self+organization+of+the+Escherichia+Coli+chemotaxis+network+imaged+with+super-resolution+light+microscopy.">Self organization of the Escherichia Coli chemotaxis network imaged with super-resolution light microscopy.</a> Public Library of Science Biology. 7 (6), e1000137 (2009).</li><li>Richards, J. G., Heyn, C., Forssmann, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructural+histochemistry+of+nervous+tissue.">Ultrastructural histochemistry of nervous tissue.</a> Techniques in Neuroanatomical Research. , 277-292 (1981).</li><li>Wood, R. L., Luft, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+the+buffer+system+on+fixation+with+osmium+tetroxide.">The influence of the buffer system on fixation with osmium tetroxide.</a> Journal of Ultrastructural Research. 12 (1-2), 22-45 (1965).</li><li>Louw, J., Williams, K., Harper, I. S., Walfe-Coote, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electron+dense+artifactual+deposits+in+tissue+sections:+the+role+of+ethanol,+uranyl+acetate+and+phosphate+buffer.">Electron dense artifactual deposits in tissue sections: the role of ethanol, uranyl acetate and phosphate buffer.</a> Stain Technology. 65 (5), 243-250 (1990).</li></ol>

De behandeling van weefselsecties tijdens specimen voorbereiding voor TEM vereist een aanzienlijke graad van finesse, concentratie en geduld. Bij het gebruik van een micropipet om oplossingen toe te voegen en te verwijderen, kunnen specimens door oppervlaktespanning in de pipet worden gezogen, zodat er grote zorg moet worden besteed aan het vermijden van weefselbeschadiging door de pipet. Ook bepaalde stappen van de uitdroging sequentie kan zo snel als 1 minuut, vandaar de exploitant moet snel werken om ervoor te zorgen ...

We beschrijven methoden voor de bereiding van pasgeboren rat hersenweefsel te verkrijgen van hoge kwaliteit elektronen micrografen voor diepgaande Morphometric analyse van de synaptische blaasje ruimtelijke verdeling bij zenuw terminals1,2. De High-contrast-micrografen die kunnen worden verkregen door de verwerking van specimens naar aanleiding van deze methoden kan ook worden gebruikt om de gedetailleerde morfologie van een aantal cellulaire componenten en hun dimensionale structurele relaties te bestuderen3,4.
De Transmission Electron Microscoop (TEM) is een krachtig instrument om de morfologie van organellen en andere cellulaire structuren kwantitatief te bestuderen. Vanaf dit decennium, zijn er geen andere methodes van onderzoek die de zelfde graad van resolutie van lipide membranen en organellen zonder immuun-tagging, met uitzondering van cryofixation door hoge druk het bevriezen kunnen verstrekken. Echter, bevriezing substitutie technieken zijn niet op grote schaal gebruikt, en normaalgesproken dure apparatuur en lange voorbereiding tijden.
Om gebruik te kunnen maken van de hoge oplossings kracht van TEM is een optimale specimen voorbereiding van het allergrootste belang. De belangrijkste doelstellingen van specimen voorbereiding zijn weefselstructuur met minimum wijziging van de het leven staat te bewaren, specimen contrast te verbeteren, en het weefsel tegen extractie van cellulaire componenten tijdens verwerking en blootstelling aan het elektron te stabiliseren Beam. Talrijke protocollen voor de voorbereiding van de TEM-weefsels zijn door de jaren heen geïntroduceerd en geperfectioneerd door verschillende laboratoria. Velen van hen hebben zich geconcentreerd op methoden voor een optimale visualisatie van synaptische blaasjes5,6,7,8,9,10,11. Onder een aantal gevestigde, goudstandaard methoden die momenteel in gebruik zijn, kozen we voor de procedures voor chemische fixatie, post fixatie, en bloc kleuring, sequentiële uitdroging, hars inbedding en post kleuring die gericht zijn op het behoud van optimale weefselstructuur en uitstekende beeldcontrast te bereiken. Van de nota, het behoud van fijne fijnstructuur kan bijzonder uitdagend zijn bij het werken met pasgeboren rat hersenweefsel. In feite is het centrale zenuwstelsel van zeer jonge dieren wordt gekenmerkt door een hoger watergehalte dan de volwassen hersenen, meer prominente uitbreiding van de extracellulaire ruimten, en losser verbindingen tussen de cellen12. Dit maakt pasgeboren rat hersenweefsel diep gevoelig voor veranderingen in osmolariteit, en prachtig vatbaar voor artefactuele krimp en/of zwelling bij verwerking door middel van sequentiële oplossingen van verschillende tonicity12. Daarom werkten onze methodes oplossingen voor specimen verwerking die van osmolariteit zo dicht mogelijk aan dat van Rat pasgeboren hersenen zijn. Ons doel was om hoge kwaliteit, hoge-resolutie elektronenmicroscopie beelden voor kwantitatieve beoordeling van de synaptische blaasje ruimtelijke verdeling bij zenuw terminals te verkrijgen. Concreet wilden we het aantal blaasjes meten in de zenuw Terminal, de afstand van synaptische blaasjes uit de pre-synaptische plasmamembraan, het aantal blaasjes gedokt op de pre-synaptische membraan, de grootte van synaptische blaasjes en de Inter-blaasje afstanden1.
Bevredigende chemische fixatie is een voorwaarde voor het verkrijgen van kwalitatief hoogwaardige elektronen micrografen die de morfologische details die nodig zijn om synaptische blaasje morfologie en ruimtelijke organisatie te bestuderen kan bieden. Hoewel er verschillende wijzen van fixatie bestaan, fixatie van hersenweefsel door vasculaire bloeding is beslist superieur aan andere methoden. Aangezien fixatie via vasculaire bloeding onmiddellijk na de arrestatie van de systemische circulatie begint, verkort het interval tussen ontzuuring van het hersenweefsel en cross-linking van eiwitten met Fixatieven, wat resulteert in minimale veranderingen in de cel Structuur. Bovendien verwezenlijkt het snelle en eenvormige penetratie, wegens de snelle stroom van fixatief van het vasculaire bed aan de extracellulaire en cellulaire compartimenten12,13,14. Primaire fixatie met glutaraldehyde, gevolgd door secundaire fixatie (post-fixatie) met osmium tetroxide, levert een uitstekende bewaring van de fijne structuur15,16,17. Een mengsel van glutaraldehyde en Paraformaldehyde heeft het extra voordeel van snellere penetratie in weefsel12.
Aangezien de biologische weefsels niet voldoende stijf zijn om in dunne secties zonder de steun van een hars matrijs worden gesneden, moeten zij in een middel vóór dunne sectie worden ingebed. Water-onmengbare epoxyharsen worden vaak gebruikt als een inbedding medium in TEM. Wanneer dit type van matrijs wordt gebruikt, moet het vrije water van het specimen met een organisch oplosmiddel vóór hars infiltratie worden vervangen. Water wordt verwijderd door het passeren van het specimen door middel van een reeks van oplossingen van stijgende concentraties van ethanol en/of aceton12. In dit protocol, zijn de specimens eerste vlak ingebed tussen flexibele aclar bladen, dan ingebed in een capsule. Het uiteindelijke resultaat is weefsel gelegen op het puntje van een cilindrische hars blok, die de ideale geometrie te zijn minst beïnvloed door trillingen die zich voordoen tijdens microtome sectie.
De kleuring met zware metalen om endogene weefsel contrast te verbeteren is een ander belangrijk aspect van specimen voorbereiding. Beeldcontrast in TEM is te wijten aan elektronen verstrooiing door de atomen in het weefsel. Echter, biologische materialen bestaan grotendeels uit een laag atoomgewicht moleculen (dwz koolstof, waterstof, zuurstof en stikstof). Daarom vereist de generatie van voldoende verstrooiend contrast de opneming van hoge atoomgewicht atomen in de cellulaire componenten van het weefsel. Dit wordt bereikt door het bevlekken van het specimen met zware metalen12,18,19. Osmium tetroxide, uranium en lood, die sterk aan lipiden binden, zijn de gemeenschappelijkste zware metalen die als elektronen vlekken worden gebruikt.
Osmium (atoomnummer 76) is een van de dichtste metalen in het bestaan. Het is zowel een fixatief en een vlek, hoewel de primaire rol in TEM is als een betrouwbare fixatief12. Onder verschillende fixatie protocollen in gebruik, de methode van dubbele fixatie met glutaraldehyde gevolgd door osmium is het meest effectief in het verminderen van de extractie van cel bestanddelen tijdens het monster voorbereiding. Deze twee Fixatieven worden gebruikt om het maximum aantal verschillende types van molecules, vooral proteïnen en lipiden te stabiliseren, en resulteren in het superieure behoud van weefsel fijnstructuur12,14,15, 16 , 17.
Uranium (atoomnummer 92) is het zwaarste metaal dat gebruikt wordt als elektron vlek, meestal in de vorm van uranyl acetaat. Evenzo om osmium, het fungeert als een vlek en fixatief, hoewel de primaire rol in tem is als een vlek20,21. De nucleïnezuur-bevattende en membranous structuren zijn sterk en bij voorkeur bevlekt met uranyl zouten in aldehyde-vaste weefsels22,23. Behandeling van weefsels met uranyl acetaat na osmication en voor uitdroging resulteert in stabilisatie van membranous en nucleïnezuur-bevattende structuren, evenals een verhoogd contrast, en vergunningen identificatie van een aantal structurele details die niet zou gemakkelijk worden gedetecteerd in specimens gekleurd met osmium alleen12,24,25. Men denkt dat uranyl acetaat de fijne structuur kan stabiliseren door met verminderde osmium te combineren die op lipide membranen tijdens osmication24is gedeponeerd. Maximaal contrast wordt bereikt wanneer uranyl acetaat wordt toegepast voordat inbedding en als een post-vlek in dunne secties12.
Lood (atoomnummer 82) is de meest voorkomende vlek gebruikt voor TEM en is voornamelijk werkzaam voor post-kleuring van dunne secties. Loodzouten hebben een hoge elektronen opaciteit en tonen affiniteit voor een breed scala van cellulaire structuren, met inbegrip van membranen, nucleaire en cytoplasma eiwitten, nucleïnezuren en glycogeen26,27. Wanneer de dubbele kleuring methode wordt gebruikt (dat wil zeggen, kleuring met uranyl acetaat wordt gevolgd door een behandeling met lood), de laatste fungeert als een ontwikkelaar van uranyl acetaat kleuring. Bijvoorbeeld, lood post-kleuring van Chromatin vast met glutaraldehyde verhoogt uranyl acetaat opname met een factor van drie28,29,30,31,32. Lood verbetert ook de kleuring bijbrengen door andere metalen, zoals osmium. Men denkt dat loodzouten vlek de membranen van osmium weefsels door aan de polaire groep fosfatiden in aanwezigheid van verminderde osmium33te bevestigen. Een potentieel nadeel van kleuring met zowel uranyl acetaat en lood, vooral voor langdurige duur, is dat veel verschillende structurele elementen zijn gelijkmatig gekleurd en niet-specifiek, en kan dus niet gemakkelijk worden onderscheiden van elkaar12 .
De recente introductie van alternatieve lichtbronnen, zoals in optische super-resolution Photo-activated localization microscopie, heeft een significant verbeterde Lichtmicroscopie resolutie34. Omdat de Lichtmicroscopie echter gebaseerd is op Histochemical en immuun-cytochemische methoden om individueel gelabelde eiwitten of enzymen te visualiseren, blijft de kracht van TEM om alle structurele elementen in één keer weer te geven ongeëvenaard voor een grondige studie van de morfologie en dimensionale relaties van weefsel structuren. In het bijzonder, kan geen andere techniek de morfologische Details verstrekken noodzakelijk om Morphometric analyse van synaptische blaasje distributie bij pre-synaptische zenuw boutons uit te voeren. Niettemin, is het belangrijk om op te merken dat de elektronen micro grafieken de structuur van het weefsel na het organisme overlijdt vangen, en daarom kunnen zij informatie betreffende de dynamica van pre-synaptische blaasje handel en exocytose niet verstrekken. Vandaar, zouden andere hulpmiddelen, zoals de kleurstof van de FM-levende weergave en flard-klem elektrofysiologisch, moeten worden overwogen wanneer het belangrijkste doel is om dynamische en/of functionele aspecten van synaptische blaasje handel en exocytose te bestuderen.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4% Osmium tetroxide</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>19170</td>
			<td>acqueous</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50% Glutaraldehyde</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>16310</td>
			<td>EM grade, acqueous</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aclar 33 C embedding film</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>50425-25</td>
			<td>7.8 mil thickness, size 8&#34;x10&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BEEM capsule holder</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>69916</td>
			<td>holds size &#34;00&#34; capsules</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BEEM embedding capsules</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>70021</td>
			<td>size &#34;00&#34;, flat</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Butler block trimmer</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>69945-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camel hair paint brush</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>65576-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disc punch</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>77850-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embed 812 kit</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>14120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lead acetate</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>17600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lead citrate</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>17800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lead nitrate</td>
			<td>Electron microscopy Sciences</td>
			<td>17900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica UC7 ultracut microtome</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro scale</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>62091-23</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>19208</td>
			<td>EM grade, granular</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision Thelco laboratory oven</td>
			<td>Thelco</td>
			<td>51221159</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium azide</td>
			<td>Sigma-Aldricht</td>
			<td>S2002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StatMark pen</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72109-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tyrode solution</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>11760-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uranyl acetate</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>22400</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of newborn rat brain tissue for ultrastructural morphometric analysis of synaptic vesicle distribution at nerve terminals

Ons laboratorium en vele anderen hebben de hoge oplossende kracht van transmissie elektronenmicroscopie benut om de morfologie en ruimtelijke ordening van synaptische blaasjes te bestuderen. Voor het verkrijgen van kwalitatief hoogwaardige elektronen micrografen die de mate van morfologische details die nodig zijn voor de kwantitatieve analyse van pre-synaptische blaasje distributie kan opleveren, is een optimale specimen voorbereiding van cruciaal belang. Chemische fixatie is de eerste stap in het proces van het specimen voorbereiding, en van het allergrootste belang voor het behoud van fijne fijnstructuur. Vasculaire fixatie met een glutaraldehyde-formaldehydeoplossing, gevolgd door de behandeling van vibratome specimens met osmium tetroxide, stabiliseert het maximum aantal moleculen, met name eiwitten en lipiden, en resulteert in een superieure instandhouding van fijnstructuur. Weefsel wordt vervolgens verwerkt met counterstaining, sequentiële uitdroging en hars-inbedding. En bloc kleuring met uranyl acetaat (dat wil zeggen, kleuring van vibratome weefsel voor hars inbedding) verbetert endogene contrast en stabiliseert cel componenten tegen extractie tijdens het monster verwerking. Contrast kan verder worden verhoogd door het toepassen van uranyl acetaat als een post-vlek op ultradunne secties. Dubbel-kleuring van ultradunne secties met lood citraat na uranyl acetaat behandeling verbetert ook de beeldresolutie, door het intensiveren van elektronen-opaciteit van nucleïnezuur-bevattende structuren door middel van selectieve binding van lood tot uranyl acetaat. Transmission Electron microscopie is een krachtig hulpmiddel voor de karakterisering van de morfologische Details van synaptische blaasjes en kwantificering van hun grootte en ruimtelijke organisatie in de Terminal Bouton. Echter, omdat het gebruik maakt van vaste weefsels, transmissie elektronenmicroscopie kan alleen indirect informatie over levende of evoluerende processen. Daarom moeten andere technieken worden overwogen wanneer de belangrijkste doelstelling is het bestuderen van dynamische of functionele aspecten van de synaptische blaasje handel en exocytose.

Algemene criteria die meestal worden aanvaard als indicatie van een bevredigende of gebrekkige bewaring van specimen voor TEM zijn vastgesteld. Deze criteria worden geïllustreerd in vier geselecteerde elektronen micrografen (twee voorbeelden van optimale voorbereiding, twee voorbeelden van gebrekkige voorbereiding) die werden verkregen door het behandelen van jonge rat hersenweefsel volgens de methoden beschreven in dit protocol.
In het algemeen, een goede kwaliteit elektronen Micrograph vers...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Newborn Rat Brain Tissue for Ultrastructural Morphometric Analysis of Synaptic Vesicle Distribution at Nerve Terminals at JoVE.com

Preparation of Newborn Rat Brain Tissue for Ultrastructural Morphometric Analysis of Synaptic Vesicle Distribution at Nerve Terminals

Wij beschrijven procedures voor de verwerking van pasgeboren rat hersenweefsel te verkrijgen hoge-resolutie elektronen micrografen voor Morphometric analyse van de synaptische blaasje distributie bij zenuw terminals. De met deze methoden verkregen micrografen kunnen ook gebruikt worden om de morfologie van een aantal andere cellulaire componenten en hun dimensionale structurele relaties te bestuderen.

Voorbereiding van pasgeboren rat hersenweefsel voor Ultrastructurele Morphometric analyse van de synaptische blaasje distributie bij zenuw terminals

Our laboratory and many others have exploited the high resolving power of transmission electron microscopy to study the morphology and spatial ...

Onder verschillende bestaande protocollen voor weefselvoorbereiding voor transmissie elektronenmicroscopie, selecteerden we methoden die optimale structurele bewaring en hoge resolutie micrografen opleveren om morfometrische analyse van synaptische vesiklesdistributie bij presynaptische terminals uit te voeren. De afbeeldingen met een hoog contrast verkregen met deze methoden maken het mogelijk om parameters te kwantificeren, zoals de afstand van synaptische blaasjes van het presynaptische membraan aantal blaasjes die aan de presynaptische membraan en interserige afstanden zijn gedokt. Al deze parameters zijn indicatief voor synaptische functie.Aangezien veranderingen in de ruimtelijke organisatie van synaptische akels kunnen worden geassocieerd met de verstoring van de synaptische functie, zijn deze methoden gebruikt om de effecten van algemene verdoving op synaptische ontwikkeling te onderzoeken. Deze methoden kunnen ook worden gebruikt om de effecten van een geneesmiddel of behandeling op de gedetailleerde morfologie van synapsen te onderzoeken om inzicht te geven in hun functie. Begin met het voorbereiden van osmiumtetroxide voor postfixatie van rattenhersensecties die eerder zijn vastgesteld met paraformaldehyde en glutaraldehyde via vasculaire perfusie.Secties worden stijf na behandeling met osmium tetroxide. Daarom weefsel behandeling vereist aandacht vanaf dat. Ook, voordat het toevoegen van osmium, zorg ervoor dat uw secties worden afgevlakt als een vouw zal waarschijnlijk resulteren in weefselfractuur.Open een vijf milliliter glazen ampule van 4% osmium tetroxide en water en laat het in een bruine glazen fles vallen. Voeg vijf milliliter fosfaatbuffer van 0,2 molar toe en voeg vervolgens 10 milliliter fosfaatbuffer van 0,1 moler toe om een uiteindelijke oplossing van 1% te bereiken. Gebruik een spuit van 20 milliliter die is uitgerust met een lange naald om de 1%osmiumtetroxide op te stellen en voeg vervolgens de osmiumtetroxide toe aan een bruine glazen pot bedekt met aluminiumfolie.Voeg na het feit dat het monster is uitgeklapt en afgevlakt 1%osmiumterroxide en 0,1 molaire PB toe aan het flacon. Incubeer het monster in osmiumtetroxide gedurende een uur bij kamertemperatuur. Haal de osmiumtetroxide uit met een micropipet nadat incubatie is voltooid en spoel de secties zoals beschreven in het protocol.Om uranylacetaat te bereiden, plaatst u een maatkolf van 200 milliliter met 100 milliliter ethanol op een roerplaat. Voeg vier gram uranylacetaat toe aan de kolf, wikkel een aluminiumfolie om neerslag door licht te voorkomen en roer continu. Dehydrateer de secties in 50% ethanol.Vlek met de bereide de 4%uranyl acetaat voor een uur en volg met seriële uitdroging en spoelen zoals beschreven in het manuscript. Verwijder de spuitzuiger uit een 60 milliliter gavage spuit en sluit deze af met een veiligheidsnaald. Plaats de spuit met de open zijkant omhoog en voeg elk ingrediënt van de harsmix één voor één toe.Werk af door 525 microliters van DMP30 toe te voegen met een pipet. Het verplaatsen van de zuiger van de pipet heel langzaam als DMP is zeer stroperig. Doe de zuiger terug in de spuit.Keer de spuit een paar keer om de inhoud te mengen. De kleur verandert van geel naar oranje. Evacueer de lucht in de spuit.Plaats het dan op een tuimelschakelaar met continu schudden voor ten minste 30 minuten. Voeg een volume epoxy hars en een volume aceton aan een scintillatie flacon en schud om te mengen. Breng deze op een hars op aceton mengsel op het weefsel sectie na de laatste aceton spoeling houden in bedekt om aceton verdamping te voorkomen.Verwijder de een tot een mengsel van hars en aceton na twee tot vier uur en vervang het met volledige hars en incubeer gedurende vier uur. Doe al het harsafval in een inzamelcontainer onder de motorkap om te polymeriseren en later te verwijderen. Snijd twee rechthoekige stukken van heldere polychlooriefluorethyleen film en veeg ze met 70% ethanol.Trim ze zo dat er ten minste 1,5 centimeter van weefsel-vrij plastic aan elke kant van de sectie, ervoor te zorgen dat ze dezelfde breedte, maar de hoogte van het blad op de top is ongeveer 2/ 3 van de onderste plaat. Langzaam kantelen van de flacon en gebruik een fijne kameel penseel en een flexibele micro-spatel om zeer voorzichtig til het exemplaar van de bodem. Verplaats vervolgens voorzichtig het gedeelte langs de flaconwanden en breng over op het onderste PCTFE-blad.Verwijder overtollige hars met een microspatel en bedek het monster voorzichtig met het bovenste vel. Duw voorzichtig alle gevangen luchtbellen zonder directe druk op de weefselsectie uit te voeren en veeg de overtollige hars weg. Gebruik een oplosmiddelbestendige pen om de vellen te etiketteren en plaats in een oven op 60 graden Celsius gedurende twee tot drie dagen te polymeriseren.Trek voorzichtig de ingeklemde PCTFE vellen uit elkaar om ze te openen. Gebruik een oplosmiddelbestendige pen om de zijkant van het vel te markeren die de aanhangende sectie bevat die deze in de buurt van het weefsel markeert. Gebruik een schijf punch om een cirkel monster van de sectie te verkrijgen om ervoor te zorgen dat de pen merk is onderdeel van de geponste weefsel.Het penteken zal glinsten wanneer er licht op het monster schijnt. Plaats de dop van een inbedding capsule kant op een capsule houder. Plaats een druppel hars op de dop en steek de geponste schijf in de dop met het weefsel gedeelte naar boven gericht.Steek een capsule in de dop met behulp van een zachte kurkentrekker beweging. Gebruik fijne pincet om een twee centimeter lang stuk papier label in de capsule te rollen en te laten zakken, zodat het past bij de kromming van de zijwanden van de capsule. Giet de inbedding hars in de capsule, vul tot rand van de capsule en gebruik een puntige houten stok om het weefsel monster naar beneden te duwen.Plaats de capsule in de oven op 60 graden Celsius gedurende twee tot drie dagen voor polymerisatie. En ga dan verder met secties en kleuring zoals beschreven in het protocol. Elektronenmicrograaf van bevredigende bewaring van de neuronale celstructuur toont gelaagde celmembranen zonder onderbrekingen.Het cytoplasma is uiteindelijk korrelig en zonder lege ruimtes. Mitochondriën zijn noch gezwollen of gekrompen met een geconserveerd buitenste dubbele membraan en intacte interne cristae. Optimale bewaring van neuronale ultrastructuur en fijne morfologische details is essentieel om synaptische vesikels te visualiseren en hun afstand tot het presynaptische membraan te meten.Synaptische adereilanden moeten worden onderscheiden en bekleed door een ononderbroken enkel membraan. Om de morfometrische analyse van de synaptische vesicleverdeling te vergemakkelijken, moeten presynaptische en postsynaptische membranen parallel zijn in hun continuïteit die behouden blijft. Elektronenmicrograaf van gebrekkige bewaring van weefselstructuur toont de vervorming en breuk van neuronale celmembranen en de aanwezigheid van aanzienlijk vergrote extracellulaire ruimten.Mitochondriën lijken opgezwollen en hebben gezwollen cristae. In een ander voorbeeld van gebrekkige weefselstructuur behoud, waren er grote witte lege ruimtes binnen het cytoplasma in plaats van fijn korrelige cytoplasmatische stof met vergrote extracellulaire ruimten. Een kunstmatig membraan zoals forall waarschijnlijk het gevolg van mobilisatie van lipiden tijdens fixatie met glutaraldehyde.Bij het werken jong hersenweefsel gebruik 1 molaire fosfaatbuffer als oplosmiddel voor al uw oplossing, zodat u toniciteit zo dicht mogelijk bij die van pasgeboren rat hersenen te houden en artefactuele weefsel krimp en of zwelling te minimaliseren. De micrografen verkregen met deze methoden kunnen worden gebruikt om de gedetailleerde morfologie en dimensionale structurele relaties van een aantal cellulaire componenten andere dan synaptische vesikels te bestuderen. Bijvoorbeeld mitochondriën, golgi-apparaten en nucleaire chromatine.Verschillende stappen in dit protocol vereisen chemische stoffen die giftig kunnen zijn. Werk altijd onder een rookkap en draag persoonlijke beschermingsmiddelen bij het hanteren van aldehyden, osmium, uranium en loodverbindingen.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Studying Synaptic Vesicle Pools using Photoconversion of Styryl Dyes

Studeren Synaptic Blaasjes zwembaden met behulp van Photoconversion van styrylkleurstoffen

The fusion of synaptic vesicles with the plasma membrane (exocytosis) is a required step in neurotransmitter release and neuronal communication. The ...

Preparation of Oligomeric &beta;-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices

Preparation of Oligomeric ÃƒÅ½Ã‚Â²-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices

Voorbereiding van oligomere β-amyloïde 1-42 En Inductie van synaptische plasticiteit Waardevermindering op hippocampus Slices

Impairment of synaptic connections is likely to underlie the subtle amnesic changes occurring at the early stages of Alzheimer s Disease (AD). ...

Vibrodissociation of Neurons from Rodent Brain Slices to Study Synaptic Transmission and Image Presynaptic Terminals

Vibrodissociation van de neuronen van knaagdieren Brain Slices synaptische transmissie en Image presynaptische Terminals Study

Mechanical dissociation of neurons from the central nervous system has the advantage that presynaptic boutons remain attached to the isolated neuron of ...

Quantitative Analysis of Synaptic Vesicle Pool Replenishment in Cultured Cerebellar Granule Neurons using FM Dyes

Kwantitatieve analyse van synaptische Blaasjes Pool Replenishment in gekweekte Cerebellaire Korrel Neuronen met behulp van FM-kleurstoffen

After neurotransmitter release in central nerve terminals, SVs are rapidly retrieved by endocytosis.  Retrieved SVs are then refilled with ...

Patch-clamp Capacitance Measurements and Ca2+ Imaging at Single Nerve Terminals in Retinal Slices

Patch-clamp Capacitance Measurements and Ca2+ Imaging at Single Nerve Terminals in Retinal Slices

Patch-clamp capaciteitsmetingen en Ca 2 + Imaging bij Single zenuwuiteinden in het netvlies Slices

Visual stimuli are detected and conveyed over a wide dynamic range of light intensities and frequency changes by specialized neurons in the vertebrate ...

Simultaneous Pre- and Post-synaptic Electrophysiological Recording from Xenopus Nerve-muscle Co-cultures

Simultaneous Pre- and Post-synaptic Electrophysiological Recording from Xenopus Nerve-muscle Co-cultures

Gelijktijdig Pre-en post-synaptische Elektrofysiologische Opnemen vanaf<em&gt; Xenopus</em&gt; Zenuw-spier Co-culturen

Much information about the coupling of  presynaptic ionic currents with the release of neurotransmitter has been obtained  from invertebrate preparations, ...

High-Resolution Quantitative Immunogold Analysis of Membrane Receptors at Retinal Ribbon Synapses

High-Resolution Kwantitatieve immunogoud Analyse van membraanreceptoren op het netvlies Ribbon Synapses

Retinal ganglion cells (RGCs) receive excitatory glutamatergic input from bipolar cells. Synaptic excitation of RGCs is mediated postsynaptically by NMDA ...

Peering at Brain Polysomes with Atomic Force Microscopy

Turen naar Brain polysomen met Atomic Force Microscopy

The translational machinery, i.e., the polysome or polyribosome, is one of the biggest and most complex cytoplasmic machineries in cells. Polysomes, ...

Analyzing Synaptic Modulation of Drosophila melanogaster Photoreceptors after Exposure to Prolonged Light

Analyzing Synaptic Modulation of Drosophila melanogaster Photoreceptors after Exposure to Prolonged Light

Het analyseren van Synaptic Modulatie van<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Fotoreceptoren na blootstelling aan Langdurige Light

The nervous system has the remarkable ability to adapt and respond to various stimuli. This neural adjustment is largely achieved through plasticity at ...