Name: preparation of newborn rat brain tissue for ultrastructural morphometric analysis of synaptic vesicle distribution at nerve terminals
Uploaded: 2019-06-07T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Newborn Rat Brain Tissue for Ultrastructural Morphometric Analysis of Synaptic Vesicle Distribution at Nerve Terminals at JoVE.com

כתב יד זה נתמך על ידי NIH/כK08 MS 123321 (כדי N.L.) ועל ידי כספים של המחלקה למהרדמה באוניברסיטת וירג. המחברים רוצים להודות לאלייב ריסיר (מחלקת הביולוגיה, אוניברסיטת וירג, שרלוטסוויל, VA) להכשרה מעולה וסיוע טכני עם TEM, וביקורת על כתב היד שלה לא יסולא בפז. המחברים מודים גם בפני מתקן אלקטרון מתקדם באוניברסיטת וירג לקבלת סיוע טכני באמצעות דגימה ולאחר כתמים.

כל המחקרים אושרו על ידי הוועדה לטיפול בבעלי חיים מוסדיים והשימוש באוניברסיטת וירג (שרלוטסוויל, VA) ונערכו בהתאם להנחיות המוסדות הלאומיים לבריאות.
1. קיבעון של וסקולזיה
הערה: תיאור כללי של השיטה למוח עכברוש זלוף כלי כבר מפורט בכתב העת הזה13 ?...

<ol>
	<li>Lunardi, N., Oklopcic, A., Prillaman, M., Erisir, A., Jevtovic-Todorovic, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+exposure+to+general+anesthesia+disrupts+spatial+organization+of+presynaptic+vesicles+in+nerve+terminals+of+the+developing+subiculum.">Early exposure to general anesthesia disrupts spatial organization of presynaptic vesicles in nerve terminals of the developing subiculum.</a> Molecular Neurobiology. 52 (2), 942-951 (2015).</li><li>Lunardi, N., Ori, C., Erisir, A., Jevtovic-Todorovic, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=General+anesthesia+causes+long-lasting+disturbances+in+the+ultrastructural+properties+of+developing+synapses+in+young+rats.">General anesthesia causes long-lasting disturbances in the ultrastructural properties of developing synapses in young rats.</a> Neurotoxicity Research. 17 (2), 179-188 (2010).</li><li>Sanchez, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=General+anesthesia+causes+long-term+impairment+of+mitochondrial+morphogenesis+and+synaptic+transmission+in+developing+rat+brain.">General anesthesia causes long-term impairment of mitochondrial morphogenesis and synaptic transmission in developing rat brain.</a> Anesthesiology. 115 (5), 992-1002 (2011).</li><li>Boscolo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+abolishment+of+anesthesia-induced+cognitive+impairment+by+timely+protection+of+mitochondria+in+the+developing+rat+brain:+the+importance+of+free+oxygen+radicals+and+mitochondria+integrity.">The abolishment of anesthesia-induced cognitive impairment by timely protection of mitochondria in the developing rat brain: the importance of free oxygen radicals and mitochondria integrity.</a> Neurobiology of Disease. 45 (3), 1031-1041 (2012).</li><li>Aghajanian, G. K., Bloom, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+formation+of+synaptic+junctions+in+developing+rat+brain:+a+quantitative+electron+microscopy+study.">The formation of synaptic junctions in developing rat brain: a quantitative electron microscopy study.</a> Brain Research. 6 (4), 716-727 (1967).</li><li>Akert, K., Sandri, C., Santini, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Significance+of+the+Maillet+method+for+cytochemical+studies+of+synapses.">Significance of the Maillet method for cytochemical studies of synapses.</a> Golgi centennial symposium; Perspectives in Neurobiology. , 387-399 (1975).</li><li>Bloom, F. E., Aghajanian, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytochemistry+of+synapses:+selective+staining+for+electron+microscopy.">Cytochemistry of synapses: selective staining for electron microscopy.</a> Science. 154 (3756), 1575-1577 (1966).</li><li>Bloom, F. E., Aghajanian, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fine+structural+and+cytochemical+analysis+of+the+staining+of+synaptic+junctions+with+phosphotungstic+acid.">Fine structural and cytochemical analysis of the staining of synaptic junctions with phosphotungstic acid.</a> Journal of Ultrastructure Research. 22 (5-6), 361-375 (1968).</li><li>Burry, R. W., Lasher, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+quantitative+electron+microscopy+study+of+synapse+formation+in+dispersed+cell+cultures+of+rat+cerebellum+stained+either+by+O-UL+or+by+E-PTA.">A quantitative electron microscopy study of synapse formation in dispersed cell cultures of rat cerebellum stained either by O-UL or by E-PTA.</a> Brain Research. 147 (1), 1-15 (1978).</li><li>Pellegrino de Iraldi, A., Suburo, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electron+staining+of+synaptic+vesicles+using+the+Champy-Maillet+technique.">Electron staining of synaptic vesicles using the Champy-Maillet technique.</a> Journal of Microscopy. 91 (2), 99-103 (1970).</li><li>Pfenninger, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cytochemistry+of+synaptic+densities.+I.+An+analysis+of+the+bismuth+iodide+impregnation+method.">The cytochemistry of synaptic densities. I. An analysis of the bismuth iodide impregnation method.</a> Journal of Ultrastructural Research. 34 (1), 103-122 (1971).</li><li>Hayat, M. A., Hayat, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+fixation.">Chemical fixation.</a> Principles and techniques of electron microscopy. Biological applications. , 4-84 (2000).</li><li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+Animal+Perfusion+Fixation+for+Rodents.">Whole Animal Perfusion Fixation for Rodents.</a> Journal of Visual Experiments. (65), e3564 (2012).</li><li>Hayat, M. A., Hayat, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Fixation for electron microscopy. , (1981).</li><li>Behrman, E. J., et al., Revel, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chemistry+of+osmium+tetroxide+fixation.">The chemistry of osmium tetroxide fixation.</a> The science of biological specimen preparation for microscopy and microanalysis. , 1-5 (1983).</li><li>Nielson, A. J., Griffith, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactions+of+osmium+tetroxide+with+protein+side+chains+and+unsaturated+lipids.">Reactions of osmium tetroxide with protein side chains and unsaturated lipids.</a> Journal of the Chemical Society, Dalton Transactions. (6), 1084-1088 (1979).</li><li>Nielson, A. J., Griffith, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+fixation+by+osmium+tetroxide.+A+possible+role+for+proteins.">Tissue fixation by osmium tetroxide. A possible role for proteins.</a> Journal of Hystochemistry &amp; Cytochemistry. 27 (5), 997-999 (1979).</li><li>Hanker, J. S., Deb, C., Wasserkrug, H. L., Seligman, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Staining+tissue+for+light+and+electron+microscopy+by+bridging+metals+with+multidentate+ligands.">Staining tissue for light and electron microscopy by bridging metals with multidentate ligands.</a> Science. 152 (3729), 1631-1634 (1966).</li><li>Zobel, C. R., Beer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+heavy+metal+salts+as+electron+stains.">The use of heavy metal salts as electron stains.</a> International Review of Cytology. 18, 363-400 (1965).</li><li>Silva, M. T., Guerra, F. C., Magalhaes, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fixative+action+of+uranyl+acetate+in+electron+microscopy.">The fixative action of uranyl acetate in electron microscopy.</a> Experientia. 24 (10), 1074 (1968).</li><li>Terzakis, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uranyl+acetate,+a+stain+and+a+fixative.">Uranyl acetate, a stain and a fixative.</a> Journal of Ultrastructural Research. 22 (1-2), 168-184 (1968).</li><li>Feldman, I., Jones, J., Cross, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chelation+of+uranyl+ions+by+adenine+nucleotides.">Chelation of uranyl ions by adenine nucleotides.</a> Journal of the American Chemical Society. 89 (1), 49-53 (1967).</li><li>Shah, D. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+of+uranyl+ions+with+phospholipid+and+cholesterol+monolayer.">Interaction of uranyl ions with phospholipid and cholesterol monolayer.</a> Journal of Colloid and Interface Science. 29 (2), 210-215 (1969).</li><li>Daems, W. T., Persijn, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Section+staining+with+heavy+metals+of+osmium-fixed+and+formol-fixed+mouse+liver+tissue.">Section staining with heavy metals of osmium-fixed and formol-fixed mouse liver tissue.</a> Journal. Royal Microscopical Society. 81 (pts 3&#38;4), 199-201 (1963).</li><li>Lombardi, L., Prenna, G., Okolicsanyi, L., Gautier, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electron+staining+with+uranyl+acetate:+possible+role+of+free+amino+groups.">Electron staining with uranyl acetate: possible role of free amino groups.</a> Journal of Histochemistry &amp; Cytochemistry. 19 (3), 161-168 (1971).</li><li>Cattini, P. A., Davies, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetics+of+lead+citrate+staining+of+thin+sections+for+electron+microscopy.">Kinetics of lead citrate staining of thin sections for electron microscopy.</a> Stain Technology. 58 (1), 29-40 (1983).</li><li>Reynolds, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+lead+citrate+at+high+pH+as+an+electron+opaque+stain+in+electron+microscopy.">The use of lead citrate at high pH as an electron opaque stain in electron microscopy.</a> Journal of Cell Biology. 17 (1), 208-212 (1963).</li><li>Cattini, P. A., Davies, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Observations+on+the+kinetics+of+uranyl+acetate+and+phosphotungstic+acid+staining+of+chromatin+in+thin+sections+for+electron+microscopy.">Observations on the kinetics of uranyl acetate and phosphotungstic acid staining of chromatin in thin sections for electron microscopy.</a> Stain Technology. 59 (5), 291-304 (1984).</li><li>Derksen, J. W., Meekes, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+staining+of+nucleic+acid+containing+structures+by+uranyl+acetate-lead+citrate.">Selective staining of nucleic acid containing structures by uranyl acetate-lead citrate.</a> Micron and Microscopica Acta. 15 (1), 55-58 (1984).</li><li>Frasca, J. M., Parks, V. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+routine+technique+for+double-staining+ultrathin+sections+using+uranyl+and+lead+salts.">A routine technique for double-staining ultrathin sections using uranyl and lead salts.</a> Journal of Cell Biology. 25 (1), 157-161 (1965).</li><li>Hanaichi, T., Sato, T., Iwamoto, T., Malavasi-Yamashiro, J., Hoshino, M., Mizuno, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+stable+lead+by+modification+of+Sato&#8217;s+method.">A stable lead by modification of Sato&#8217;s method.</a> Journal of Electron Microscopy. 35 (3), 304-306 (1986).</li><li>Sato, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+modified+method+for+lead+staining+of+thin+sections.">A modified method for lead staining of thin sections.</a> Journal of Electron Microscopy. 17 (2), 158-159 (1968).</li><li>Lever, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+of+staining+tissues+with+lead+for+electron+microscopy.">A method of staining tissues with lead for electron microscopy.</a> Nature. , 810-811 (1960).</li><li>Derek, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self+organization+of+the+Escherichia+Coli+chemotaxis+network+imaged+with+super-resolution+light+microscopy.">Self organization of the Escherichia Coli chemotaxis network imaged with super-resolution light microscopy.</a> Public Library of Science Biology. 7 (6), e1000137 (2009).</li><li>Richards, J. G., Heyn, C., Forssmann, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructural+histochemistry+of+nervous+tissue.">Ultrastructural histochemistry of nervous tissue.</a> Techniques in Neuroanatomical Research. , 277-292 (1981).</li><li>Wood, R. L., Luft, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+the+buffer+system+on+fixation+with+osmium+tetroxide.">The influence of the buffer system on fixation with osmium tetroxide.</a> Journal of Ultrastructural Research. 12 (1-2), 22-45 (1965).</li><li>Louw, J., Williams, K., Harper, I. S., Walfe-Coote, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electron+dense+artifactual+deposits+in+tissue+sections:+the+role+of+ethanol,+uranyl+acetate+and+phosphate+buffer.">Electron dense artifactual deposits in tissue sections: the role of ethanol, uranyl acetate and phosphate buffer.</a> Stain Technology. 65 (5), 243-250 (1990).</li></ol>

טיפול בחתכי רקמה במהלך הכנת הדגימה עבור TEM דורש מידה ניכרת של עידון, ריכוז וסבלנות. כאשר משתמשים במיקרופיפטה כדי להוסיף ולהסיר פתרונות, ניתן למצוץ דגימות לתוך העצה מפני פני השטח, ולכן יש לנקוט בזהירות רבה כדי למנוע נזק לרקמות על ידי הצנרת. גם, צעדים מסוימים של רצף התייבשות יכול להיות מהיר כמ...

אנו מתארים שיטות להכנת רקמת המוח היילוד הנולד כדי להשיג מיקרוגרפים אלקטרונים באיכות גבוהה עבור ניתוח שורמטרי מעמיק של התפלגות מרחבית סינפטית ושלפוחית במסופים עצביים1,2. מיקרוגרפים בעלי ניגודיות גבוהה הניתנים להשגה על-ידי עיבוד דגימות בעקבות שיטות אלה ניתן להשתמש גם כדי ללמוד את המבנה המפורט של מספר רכיבים סלולריים ויחסי מבניים תלת-ממדיים שלהם3,4.
מיקרוסקופ אלקטרוני שידור (TEM) הוא כלי רב עוצמה כדי ללמוד את המבנה של האורגלים ומבנים סלולריים אחרים כימות. נכון לעשור זה, אין שיטות חקירה אחרות שיכולות לספק את אותה מידת הרזולוציה של קרום השומנים והאורגלים ללא התיוג האנטי-אימונו, למעט הקריוקיבעון באמצעות קיפאון בלחץ גבוה. עם זאת, הקפאת טכניקות החלפה אינן בשימוש נרחב, ובדרך כלל דורשים ציוד יקר וזמני הכנה ארוכה.
כדי לנצל את הכוח לפתרון גבוה של TEM, הכנת הדגימה אופטימלית היא בעלת חשיבות עליונה. המטרות העיקריות של הכנת הדגימה הם לשמר מבנה רקמות עם שינוי מינימלי ממצב החיים, לשפר את הניגודיות הדגימה, ולייצב את הרקמה נגד הפקת רכיבים סלולריים במהלך עיבוד וחשיפה לאלקטרון קרן. פרוטוקולים רבים עבור הכנה רקמת TEM הוכנסו ושכללו על ידי מעבדות מספר במהלך השנים. רבים מהם התמקדו בשיטות להדמיה אופטימלית של שלפוחית הסינפטית5,6,7,8,9,10,11. בין מספר שיטות שנקבעו היטב, תקן זהב כיום בשימוש, בחרנו הליכי קיבוע כימיים, קיבוע קיבעון, בלוק כתמים, התייבשות סדרתית, שרף הטבעה ולאחר צביעת המטרה לשמר את מבנה הרקמה אופטימלית להשיג ניגודיות תמונה מעולה. של הערה, שימור של מבנה בדיקת אולטרה יכול להיות מאתגר במיוחד כאשר עובד עם רקמת המוח היילוד. למעשה, מערכת העצבים המרכזית של בעלי חיים צעירים מאוד מתאפיינת בתוכן מים גבוה יותר מאשר המוח המבוגר, התרחבות בולטת יותר של חללים מחלתיים, וקשרים משוחררים בין תאים12. זה הופך את רקמת המוח הנולד היילוד רגיש עמוקות לשינויים באוסמלתיים, ונוטה להפליא הצטמקות העובדתית ו/או נפיחות כאשר מעובד באמצעות פתרונות רציפים של גוונים שונים12. לכן, השיטות שלנו המועסקים פתרונות עבור עיבוד דגימה כי הם של האוסמלכי קרוב ככל האפשר זה של המוח הנולד החולדה. המטרה שלנו היתה להשיג תמונות באיכות גבוהה, ברזולוציה גבוהה אלקטרון מיקרוסקופ עבור הערכה כמותית של התפלגות סינפטית ושלפוחית מרחבית במסופי העצבים. במיוחד, ביקשו למדוד את מספר השלפוחיות בתוך מסוף העצבים, את המרחק של שלפוחיות סינפטית מקרום פלזמה טרום סינפטית, מספר שלפוחיות מעוגן בקרום טרום סינפטית, בגודל של שלפוחיות סינפטית וה מרחקים בין-שלפוחית1.
קיבעון כימי משביע רצון הוא תנאי הכרחי להשגת מיקרוגרפים אלקטרונים באיכות גבוהה שיכולים לספק את הפרטים המיקרוורפולוגיים הנחוצים לחקר המבנה הסינפטית והארגון המרחבי. למרות מספר מצבים של קיבעון להתקיים, קיבעון של רקמת המוח על ידי זלוף כלי דם הוא בהחלט מעולה על שיטות אחרות. כיוון שקיבעון באמצעות פרזיה וסקולרית מתחיל מיד לאחר מעצרו של מחזור מערכתי, הוא מקצר את המרווח בין הדחמצן של רקמת המוח והקישור החוצה של חלבונים עם fixatives וכתוצאה מכך שינויים מינימליים בתא בנה. יתר על כן, זה משיגה חדירה מהירה ואחידה, בגלל הזרימה המהירה של הקיבעון מן המיטה כלי הדם אל המלושה תאים סלולריים12,13,14. הקיבעון הראשוני עם glutarאלדהיד, ואחריו קיבעון משני (פוסט קיבעון) עם אוסמיום tetroxide, תשואות מעולה של המבנה המשובח15,16,17. תערובת של גלוטרלדהיד ו פאראפורמלדהיד יש יתרון נוסף של חדירה מהירה יותר לתוך הרקמה12.
מאחר שרקמות ביולוגיות אינן נוקשות מספיק כדי לחתוך לחלקים דקים ללא תמיכה של מטריצה שרף, הם צריכים להיות מוטבע בתוך מדיום לפני דק. Immiscible מים שרפים אפוקסי משמשים בדרך כלל כמדיום הטבעה ב TEM. כאשר סוג זה של מטריצה משמש, כל המים חינם של הדגימה חייב להיות מוחלף ממס אורגני לפני הסתננות שרף. המים מוסרים על ידי העברת הדגימה דרך סדרה של פתרונות של ריכוזים עולים של אתנול ו/או אצטון12. בפרוטוקול זה, דגימות הן השטוח הראשון המוטבע בין גיליונות aclar גמישים, ולאחר מכן מוטבע בקפסולה. התוצאה הסופית היא רקמה ממוקמת בקצה של בלוק שרף גלילי, אשר יש את הגיאומטריה האידיאלית להיות מושפע לפחות על ידי תנודות הנובעות במהלך החסימה מיקרוטומה.
כתמים עם מתכות כבדות כדי לשפר את הניגודיות רקמת אנדוסוגני הוא היבט חשוב אחר של הכנת הדגימה. ניגודיות תמונה ב-TEM נובעת מפיזור אלקטרון על ידי האטומים ברקמה. עם זאת, חומרים ביולוגיים מורכבים ברובו מולקולות של משקל אטומי נמוך (כלומר, פחמן, מימן, חמצן וחנקן). לפיכך, הדור של ניגוד פיזור מספיק דורש התאגדות של אטומי משקל אטומי גבוה לתוך הרכיבים הסלולריים של הרקמה. זה מושג באמצעות כתמים של הדגימה עם מתכות כבדות12,18,19. Osmium tetroxide, אורניום ועופרת, אשר לאגד חזק לשומנים, הם המתכות הכבדות הנפוצות ביותר המשמשים כתמי אלקטרונים.
אוסמיום (מספר אטומי 76) הוא אחד מהמתכות הדפססט ביותר הקיימות. זה גם קבע וגם כתם, למרות תפקידה העיקרי ב TEM הוא כמו קבע אמינה12. בין פרוטוקולי קיבוע שונים בשימוש, השיטה של קיבעון כפול עם glutarאלדהיד ואחריו אוסמיום הוא היעיל ביותר בהפחתת החילוץ של המרכיבים התא במהלך הכנת הדגימה. שני התיקונים הללו משמשים לייצוב המספר המירבי של סוגים שונים של מולקולות, במיוחד חלבונים ושומנים, ולגרום לשימור מעולה של מבנה הרקמה12,14,15, מיכל בן 16 , . שבע עשרה
אורניום (מספר אטומי 92) הוא המתכת הכבדים ביותר המשמשת ככתם אלקטרוני, בדרך כלל בצורה של אצטט uranyl. בדומה לאוסמיום, היא משמשת ככתם ומfixative, למרות שתפקידה העיקרי ב-TEM הוא ככתם20,21. חומצות גרעין המכילים ו קרומי מבנים הם באופן מאוד ומהנה מוכתם עם מלחים uranyl ב אלדהיד-קבוע רקמות22,23. טיפול ברקמות עם אצטט uranyl לאחר osmication ולפני התייבשות תוצאות ייצוב של קרומי ו גרעין חומצות המכילות מבנים, כמו גם ניגודיות משופרת, והיתרי זיהוי של כמה פרטים מבניים שלא להיות מזוהה בקלות בדגימות ויטראז ' עם אוסמיום לבד12,24,25. הוא חשב כי אצטט uranyl יכול לייצב את המבנה המשובח על ידי שילוב עם אוסמיום מופחת כי כבר הופקד על ממברנות שומנים במהלך osmication24. הניגודיות המירבית מושגת כאשר אצטט uranyl מוחל לפני הטבעה כמו לאחר כתם בסעיפים דקים12.
עופרת (מספר אטומי 82) הוא הכתם השכיח ביותר המשמש עבור TEM והוא מועסק בעיקר עבור לאחר כתמי של סעיפים דקים. מלחי עופרת יש אטימות אלקטרון גבוהה ולהראות אהדה עבור מגוון רחב של מבנים סלולריים, כולל ממברנות, חלבון cytoplasmic חלבונים, חומצות גרעין וגליקוגן26,27. כאשר שיטת הצביעה כפול מועסק (כלומר, כתמים עם אצטט uranyl מלווה בטיפול עם העופרת), האחרון משמש כמפתח של כתמים אצטט uranyl. למשל, עופרת לאחר צביעת כרומטין קבוע עם glutarאלדהיד מגביר את uranyl אצטט ספיגה על ידי פקטור של שלושה28,29,30,31,32. עופרת גם מגביר את הצביעת הניתן על ידי מתכות אחרות כגון osmium. הוא חשב כי מלחים עופרת להכתים את הקרומים של אוסממיום רקמות קבוע על ידי הצמדת לקבוצת הקוטב של פוספהדים בנוכחות של אוסמיום מופחת33. חיסרון פוטנציאלי של הכתמים עם אצטט uranyl ולהוביל, במיוחד עבור משכים ממושכת, הוא כי רכיבים רבים שונים מבניים מוכתם באופן שווה ולא במיוחד, ולכן לא ניתן להבדיל בקלות אחד מהשני12 .
המבוא האחרון של מקורות אור חלופיים, כגון במיקרוסקופיה אופטית ברזולוציה של תמונה מופעלת, השתפרה באופן משמעותי ברזולוציה מיקרוסקופ אור34. עם זאת, משום שמיקרוסקופ האור מסתמך על שיטות היסטכימיות והחיסונית-ציטוכימיה להמחיש באופן אינדיבידואלי חלבונים או אנזימים, הכוח של TEM להציג את כל האלמנטים מבניים בו נשאר מתחרות למחקר מעמיק של ה מורפולוגיה ויחסים ממדיים של מבני רקמה. במיוחד, אין טכניקה אחרת יכול לספק את הפרטים מורפולוגיים הדרושים כדי לבצע ניתוח מורמטרי של הפצת שלפוחית סינפטית סינפטיות בתוך בלוני עצבים טרום סינפטית. עם זאת, חשוב לציין כי מיקרוגרפים אלקטרונים ללכוד את מבנה הרקמה לאחר האורגניזם מת, ולכן הם לא יכולים לספק מידע לגבי הדינמיקה של סחר טרום סינפטית והיא האקסוציטוזה. מכאן, כלים אחרים, כגון הדמיה לחיות צבע FM ו תיקון-קלאמפ מהדק, צריך להיחשב כאשר המטרה העיקרית היא ללמוד דינמי ו/או פונקציונלי היבטים של סחר שלפוחית סינפטית ואקסוציטוזה.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4% Osmium tetroxide</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>19170</td>
			<td>acqueous</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50% Glutaraldehyde</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>16310</td>
			<td>EM grade, acqueous</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aclar 33 C embedding film</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>50425-25</td>
			<td>7.8 mil thickness, size 8&#34;x10&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BEEM capsule holder</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>69916</td>
			<td>holds size &#34;00&#34; capsules</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BEEM embedding capsules</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>70021</td>
			<td>size &#34;00&#34;, flat</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Butler block trimmer</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>69945-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camel hair paint brush</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>65576-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disc punch</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>77850-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embed 812 kit</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>14120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lead acetate</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>17600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lead citrate</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>17800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lead nitrate</td>
			<td>Electron microscopy Sciences</td>
			<td>17900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica UC7 ultracut microtome</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro scale</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>62091-23</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>19208</td>
			<td>EM grade, granular</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision Thelco laboratory oven</td>
			<td>Thelco</td>
			<td>51221159</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium azide</td>
			<td>Sigma-Aldricht</td>
			<td>S2002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StatMark pen</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72109-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tyrode solution</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>11760-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uranyl acetate</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>22400</td>
			<td>powder</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of newborn rat brain tissue for ultrastructural morphometric analysis of synaptic vesicle distribution at nerve terminals

המעבדה שלנו ורבים אחרים ניצלו את העוצמה הגבוהה ביותר של מיקרוסקופ אלקטרוני שידור לחקר המבנה והארגון המרחבי של שלפוחיות סינפטית. כדי להשיג מיקרוגרפים אלקטרונים באיכות גבוהה שיכולים להניב את מידת הפירוט המוורפולוגית הנחוצה לניתוח כמותי של התפלגות טרום-סינפטית, הכנת הדגימה האופטימלית היא קריטית. קיבעון כימי הוא הצעד הראשון בתהליך של הכנת הדגימה, ועל חשיבות עליונה כדי לשמור על מבנה בדיקת אולטרה. קיבוע כלי דם עם פתרון הגלוטאלדהיד-פורמלדהיד, ואחריו טיפול של דגימות הרטט מנות עם אוסמיום tetroxide, מייצב את המספר המרבי של מולקולות, בעיקר חלבונים ושומנים, ותוצאות שימור מעולה של מבנה האולטרה. הרקמה מעובדת לאחר מכן עם כתמים, התייבשות רציפה, שרף הטבעה. הגוש בלוקים עם אצטט uranyl (כלומר, כתמים של רקמת הרטט לפני הטבעה שרף) משפר את ניגודיות אנדוגניים ומייצב הרכיבים התא נגד החילוץ במהלך עיבוד הדגימה. ניגודיות יכולה להיות נוספת מוגברת על ידי החלת אצטט uranyl כמו כתם על מקטעים באולטראדקים. כתמים כפולים של סעיפים בודק עם עופרת ציטראט לאחר הטיפול uranyl אצטט גם משפר את רזולוציית התמונה, על ידי העצמת אלקטרון-אטימות של חומצות גרעין-המכיל מבנים באמצעות קשירה סלקטיבית של להוביל אצטט uranyl. מיקרוסקופ אלקטרוני שידור הוא כלי רב עוצמה לאפיון הפרטים המיורפולוגיים של שלפוחיות סינפטית וקוונפיקציה של גודל וארגון מרחבי בבוטון. עם זאת, כיוון שהיא משתמשת ברקמה קבועה, מיקרוסקופ אלקטרוני שידור יכול לספק מידע עקיף רק לגבי תהליכים חיים או מתפתחים. לכן, יש לשקול טכניקות אחרות כאשר המטרה העיקרית היא ללמוד היבטים דינמיים או פונקציונליים של סחר שלפוחית סינפטית ואקסוציטוציטוזה.

קריטריונים כלליים מקובלים בעיקר כרמז על שימור משביע רצון או פגום של הדגימה עבור TEM הוקמו. קריטריונים אלה מתוארים בארבעה מיקרוגרפים אלקטרונים נבחרים (שתי דוגמאות להכנה אופטימלית, שתי דוגמאות של הכנה פגומה) שהושגו על ידי טיפול ברקמת המוח הצעירה בעקבות השיטות המתוארות בפרוטוקול זה.
<p class="jo...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Newborn Rat Brain Tissue for Ultrastructural Morphometric Analysis of Synaptic Vesicle Distribution at Nerve Terminals at JoVE.com

Preparation of Newborn Rat Brain Tissue for Ultrastructural Morphometric Analysis of Synaptic Vesicle Distribution at Nerve Terminals

אנו מתארים הליכים לעיבוד רקמות המוח היילוד הנולד כדי להשיג מיקרוגרפים אלקטרונים ברזולוציה גבוהה עבור ניתוח מורמטרי של הפצת שלפוחית סינפטית במסופי העצבים. המיקרוגרפים שהושגו בשיטות אלה יכולים לשמש גם לחקר המבנה של מספר רכיבים סלולאריים אחרים ולמערכות היחסים המבדיות שלהם.

הכנת התינוק היילוד רקמת המוח עבור ניתוח בדיקת מבנית באולטרסאונד של הפצת שלפוחית סינפטית במסופי העצבים

Our laboratory and many others have exploited the high resolving power of transmission electron microscopy to study the morphology and spatial ...

בין מספר פרוטוקולים קיימים להכנת רקמות עבור מיקרוסקופ אלקטרונים שידור, בחרנו שיטות המניבים שימור מבני אופטימלי מיקרוגרפים ברזולוציה גבוהה לבצע ניתוח מורפומטרי של הפצת וריסקים סינפטית במסופים presynaptic. תמונות החדות הגבוהה המתקבלות בשיטות אלה מאפשרות לכמת פרמטרים כגון מרחק של ווסיקים סינפטיים ממספר הממברנה הקדם-סינפטית של וריקלים שעגנו בממברנה הקדם-סינפטית ומרחקים בין-וריים. כל הפרמטרים האלה מעידים על פונקציה סינפטית.מאז שינויים בארגון המרחבי של תנודות סינפטיות עשוי להיות קשור עם שיבוש של תפקוד סינפטי, שיטות אלה שימשו כדי לבחון את ההשפעות של הרדמה כללית על התפתחות סינפטית. שיטות אלה יכולות לשמש גם כדי לבחון את ההשפעות של כל תרופה או טיפול על המורפולוגיה המפורטת של הסינפסות כדי לספק תובנה על תפקודם. התחל על ידי הכנת osmium tetroxide עבור קיבעון פוסט של חלקי מוח חולדה קבוע בעבר עם paraformaldehyde ו glutaraldehyde באמצעות זלוב כלי דם.חלקים הופכים נוקשים לאחר הטיפול עם אוסמיניום tetroxide. לכן טיפול ברקמות דורש תשומת לב מאז. כמו כן, לפני הוספת אוסמיניום, ודא כי החלקים שלך הם שטוחים כמו כל קיפול עלול לגרום שבר ברקמות.פתחו אמפולת זכוכית אחת של 4% אוסיום טטרוקסיד ומים והפילו אותה בתוך בקבוק זכוכית חום. הוסף חמישה מיליליטר של חיץ פוספט טוחן 0.2 ולאחר מכן להוסיף 10 מיליליטר נוספים של 0.1 מאגר פוספט טוחן כדי להשיג פתרון 1%הסופי. השתמש מזרק 20 מיליליטר מצויד מחט ארוכה כדי לצייר את 1% osmium tetroxide ולאחר מכן להוסיף את osmium tetroxide לצנצנת זכוכית חומה מכוסה רדיד אלומיניום.לאחר שוודאו שהדגימה נפרשת ושטחה, הוסיפו 1%osmium tetroxide ו-PB טוחנת 0.1 לבקבוקון הדגימה. דגירה הדגימה ב osmium tetroxide במשך שעה בטמפרטורת החדר. מוציאים את אוסמינום טטרוקסיד עם micropipet לאחר הדגירה הוא סיים ולשטוף את החלקים כמתואר בפרוטוקול.להכנת אצטט אורניל, מניחים בקבוק זכוכית נפחי 200 מיליליטר המכיל 100 מיליליטר של 70% אתנול על צלחת ערבוב. מוסיפים ארבעה גרם של אצטט אורניל לבקבוק, עוטפים רדיד אלומיניום כדי למנוע משקעים על ידי אור ומערבבים ברציפות. ייבשו את החלקים באתנול של 50%.הכתם עם אצטט 4% אורניל מוכן במשך שעה אחת ולעקוב עם התייבשות סדרתית שטיפה כמתואר בכתב היד. הסר את הבוכנה מזרק מזרק 60 מיליליטר gavage ולכסות אותו עם מחט בטיחות. מקם את המזרק עם הצד הפתוח למעלה ולהוסיף כל מרכיב של תערובת שף אחד אחד.סיים על-ידי הוספת 525 מיקרוליטרים של DMP30 עם צינור. הזזת הבוכנה של הצינור לאט מאוד כמו DMP הוא צמיג מאוד. שים את הבוכנה בחזרה במזרק.הפוך את המזרק כמה פעמים כדי לערבב את התוכן. הצבע ישתנה מצהוב לענבר. לפנות את האוויר בתוך המזרק.ואז למקם אותו על נדנדה עם רעידות רצופות לפחות 30 דקות. מוסיפים כרך אחד של שרף אפוקסי ונפח אחד של אצטון לבקבוקון scintillation ומנערים לערבב. החל את זה על שף אחד על תערובת אצטון על סעיף הרקמה לאחר שטיפה אצטון האחרון שמירה מכוסה, כדי למנוע אידוי אצטון.מוציאים את התערובת אחת לתערובת של שף ואצטון לאחר שעתיים עד ארבע שעות ומחליפים אותו בשרף מלא ודגירה במשך ארבע שעות. שים את כל פסולת שרף במיכל איסוף מתחת למכסה המנוע כדי פולימריזציה ולהיפטר מאוחר יותר. חותכים שתי חתיכות מלבניות של סרט polychlorotrifluoroethylene ברור ולנגב אותם עם 70% אתנול.לקצץ אותם כך שיש לפחות 1.5 ס"מ של פלסטיק ללא רקמות בכל צד של החלק, לוודא שיש להם את אותו רוחב אבל הגובה של הסדין על גבי הוא כ 2/3 של הגיליון התחתון. להטות לאט את הבקבוקון ולהשתמש מכחול גמלים עדין מיקרו מרית גמישה מאוד בעדינות להרים את הדגימה מלמטה. לאחר מכן הזיזו בזהירות את המקטע לאורך קירות הבקבוקון והעברו לגיליון PCTFE התחתון.הסר עודף שף עם מיקרו מרית בעדינות לכסות את הדגימה עם הגיליון העליון. בעדינות לדחוף את כל בועות אוויר לכודים מבלי להפעיל לחץ ישיר על סעיף הרקמה ולמחוק את השד העודף. השתמש בעט עמיד ממס כדי לתייג את הסדינים ומניחים בתנור ב 60 מעלות צלזיוס במשך יומיים עד שלושה ימים כדי פולימריזציה.יש לפרק בעדינות את גיליונות ה-PCTFE הכריכים כדי לפתוח אותם. השתמש בעט עמיד ממס כדי לסמן את הצד של הגיליון המכיל את סעיף ההיאבקות המסמן אותו ליד הרקמה. השתמש בניקוב דיסק כדי לקבל דגימה מעגלית של המקטע כדי לוודא שסימן העט הוא חלק מהרקמות החבוטות.סימן העט ינצץ כשהאור יזרח על הדגימה. מניחים את המכסה של צד קפסולה הטבעה על מחזיק כמוסה. מניחים טיפת שף על המכסה ומכניסים את הדיסק החבוט לתוך המכסה כשקטע הרקמה פונה כלפי מעלה.הכנס כמוסה לתוך הכובע באמצעות תנועת חולץ פקקים עדינה. השתמש פינצטה עדין לגלגל ולהוריד פיסת נייר מודפסת באורך שני סנטימטרים לתוך הקפסולה, לוודא שהוא מתאים עקמומיות של הקירות הצדדיים של הקפסולה. יוצקים את שף הטבעה בתוך הקפסולה, למלא עד קצה הקפסולה ולהשתמש במקל עץ מחודד לדחוף את דגימת הרקמה למטה לתחתית.מניחים את הקפסולה בתנור ב 60 מעלות צלזיוס במשך יומיים עד שלושה ימים עבור פיסול. ואז להמשיך עם חתך וכתמים כמתואר בפרוטוקול. מיקרוגרף אלקטרונים של שימור משביע רצון של מבנה התא העצבי מראה קרום תאים שכבתי ללא הפסקות.הציטופלסמה היא סוף סוף פרטנית וללא חללים ריקים. המיטוכונדריה אינה נפוחה ואינה מכווצת עם קרום כפול בחוץ שמור וכריסטה פנימית שלמה. שימור אופטימלי של מבנה עצבי אולטרה-מבנה ופרטים מורפולוגיים עדין הוא חיוני על מנת לדמיין ולדקלים סינפטיים ולמדוד את המרחק שלהם מן הממברנה presynaptic.וקסיקים סינפטיים צריכים להיות מובחנים ומרופדים על ידי קרום יחיד רצוף. על מנת להקל על ניתוח מורפומטרי של התפלגות קדחת סינפטית, ממברנות פרסינפטיות ופוסט-סינפטיות צריכות להיות מקבילות בהמשכיות שלהן. מיקרוגרף אלקטרונים של שימור פגום של מבנה הרקמות מראה את העיוות והשבירה של קרום התא העצבי ואת נוכחותם של חללים חוץ תאיים מוגדלים במידה ניכרת.המיטוכונדריה נראית נפוחה ויש לה כריסטה נפוחה. בדוגמה נוספת לשימור מבנה רקמות פגום, היו חללים ריקים לבנים גדולים בתוך הציטופלסמה במקום חומר ציטופלסמי גרגירי דק עם חללים חוץ תאיים מוגדלים. קרום מלאכותי כמו forall ככל הנראה נבע גיוס של שומנים במהלך הקיבעון עם glutaraldehyde.כאשר עובדים רקמת מוח צעירה להשתמש 1 חיץ פוספט טוחן כממס עבור כל הפתרון שלך, כך שאתה שומר על טוניק קרוב ככל האפשר לזה של המוח חולדה שזה עתה נולד למזער הצטמקות רקמות חפצים או נפיחות. ניתן להשתמש במיקרוגרפים המתקבלים בשיטות אלה כדי לחקור את המורפולוגיה המפורטת ואת היחסים המבניים הממדיים של מספר רכיבים תאיים מלבד וריסקים סינפטיים. לדוגמה, מיטוכונדריה, מנגנון גולגי וכרומטין גרעיני.מספר שלבים בפרוטוקול זה דורשים כימיקלים שיכולים להיות רעילים. תמיד לעבוד תחת מכסה המנוע אדים ללבוש ציוד מגן אישי בעת טיפול אלדהידים, אוסיום, אורניום ותרכובות עופרת.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Studying Synaptic Vesicle Pools using Photoconversion of Styryl Dyes

לימוד בריכות שלפוחיות Synaptic באמצעות photoconversion של צבעים Styryl

The fusion of synaptic vesicles with the plasma membrane (exocytosis) is a required step in neurotransmitter release and neuronal communication. The ...

Preparation of Oligomeric &beta;-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices

Preparation of Oligomeric ÃƒÅ½Ã‚Â²-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices

הכנת Oligomeric β עמילואיד 1-42 ו אינדוקציה של ירידת ערך הפלסטיות הסינפטית על Slices בהיפוקמפוס

Impairment of synaptic connections is likely to underlie the subtle amnesic changes occurring at the early stages of Alzheimer s Disease (AD). ...

Vibrodissociation of Neurons from Rodent Brain Slices to Study Synaptic Transmission and Image Presynaptic Terminals

Vibrodissociation של נוירונים בין פרוסות המוח מכרסמים לחקר הילוכים Synaptic ותמונה מסופי Presynaptic

Mechanical dissociation of neurons from the central nervous system has the advantage that presynaptic boutons remain attached to the isolated neuron of ...

Quantitative Analysis of Synaptic Vesicle Pool Replenishment in Cultured Cerebellar Granule Neurons using FM Dyes

ניתוח כמותי של רענון שלפוחיות Synaptic בריכת ב Cultured נוירונים גרגיר cerebellar באמצעות צבעים FM

After neurotransmitter release in central nerve terminals, SVs are rapidly retrieved by endocytosis.  Retrieved SVs are then refilled with ...

Patch-clamp Capacitance Measurements and Ca2+ Imaging at Single Nerve Terminals in Retinal Slices

Patch-clamp Capacitance Measurements and Ca2+ Imaging at Single Nerve Terminals in Retinal Slices

Patch-clamp מדידות קיבול ו Ca 2 + הדמיה על מסופי עצב יחיד ב Slices רשתית

Visual stimuli are detected and conveyed over a wide dynamic range of light intensities and frequency changes by specialized neurons in the vertebrate ...

Simultaneous Pre- and Post-synaptic Electrophysiological Recording from Xenopus Nerve-muscle Co-cultures

Simultaneous Pre- and Post-synaptic Electrophysiological Recording from Xenopus Nerve-muscle Co-cultures

סימולטני טרום והקלטת אלקטרו פוסט סינפטי מ<em&gt; Xenopus</em&gt; עצבי שרירי Co-תרבויות

Much information about the coupling of  presynaptic ionic currents with the release of neurotransmitter has been obtained  from invertebrate preparations, ...

High-Resolution Quantitative Immunogold Analysis of Membrane Receptors at Retinal Ribbon Synapses

ניתוח ברזולוציה גבוהה כמותי immunogold של קולטני קרום ב סינפסות רצועת הכלים רשתית

Retinal ganglion cells (RGCs) receive excitatory glutamatergic input from bipolar cells. Synaptic excitation of RGCs is mediated postsynaptically by NMDA ...

Peering at Brain Polysomes with Atomic Force Microscopy

מציץ המוח Polysomes עם מיקרוסקופית כוח אטומי

The translational machinery, i.e., the polysome or polyribosome, is one of the biggest and most complex cytoplasmic machineries in cells. Polysomes, ...

Analyzing Synaptic Modulation of Drosophila melanogaster Photoreceptors after Exposure to Prolonged Light

Analyzing Synaptic Modulation of Drosophila melanogaster Photoreceptors after Exposure to Prolonged Light

ניתוח Synaptic אפנון של<em&gt; תסיסנית</em&gt; קולטני אור לאחר חשיפה לאור ממושך

The nervous system has the remarkable ability to adapt and respond to various stimuli. This neural adjustment is largely achieved through plasticity at ...