Name: a uniform shear assay for human platelet and cell surface receptors via cone-plate viscometry
Uploaded: 2019-06-05T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Uniform Shear Assay for Human Platelet and Cell Surface Receptors via Cone-plate Viscometry at JoVE.com

Работа, относящееся к этому исследованию, была частично поддержана Национальными институтами здравоохранения (NIH) Национальным институтом сердца, легких и крови, гранты HL082808, HL123984 (R.L.) и F31HL134241 (M.E.). Финансирование также обеспечивается грантом Национального института общих медицинских наук НФН Т32Г008367 (М.Е.З.); и пилотные грантовые фонды от детского здравоохранения Атланты и Университета Эмори педиатрического потока Cytometry Core. Авторы хотели бы поблагодарить д-ра Ганса Декммина за совместное использование антител 6B4 и Детского научно-исследовательского центра Emory Flow Cytometry Core за техническую поддержку.

Все методы использования донорских тромбоцитов, полученных из донорских, описанных в нем, были одобрены Институциональным наблюдательным советом Университета Эмори/Детского здравоохранения Атланты.
1. Кровавая ничья и изоляция тромбоцитов
<ol><li>Нарисуйте человеческую...

<ol>
	<li>Sullivan, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-voltage-gated+Ca2++influx+through+mechanosensitive+ion+channels+in+aortic+baroreceptor+neurons.">Non-voltage-gated Ca2+ influx through mechanosensitive ion channels in aortic baroreceptor neurons.</a> Circulation Research. 80 (6), 861-867 (1997).</li><li>Lansman, J. B., Hallam, T. J., Rink, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+stretch-activated+ion+channels+in+vascular+endothelial+cells+as+mechanotransducers.">Single stretch-activated ion channels in vascular endothelial cells as mechanotransducers.</a> Nature. 325 (6107), 811-813 (1987).</li><li>Fettiplace, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hair+Cell+Transduction,+Tuning,+and+Synaptic+Transmission+in+the+Mammalian+Cochlea.">Hair Cell Transduction, Tuning, and Synaptic Transmission in the Mammalian Cochlea.</a> Comprehensive Physiology. 7 (4), 1197-1227 (2017).</li><li>Zimmerman, A., Bai, L., Ginty, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+gentle+touch+receptors+of+mammalian+skin.">The gentle touch receptors of mammalian skin.</a> Science. 346 (6212), 950-954 (2014).</li><li>Nelson, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emergent+patterns+of+growth+controlled+by+multicellular+form+and+mechanics.">Emergent patterns of growth controlled by multicellular form and mechanics.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 102 (33), 11594-11599 (2005).</li><li>Yu, C. H., Law, J. B., Suryana, M., Low, H. Y., Sheetz, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+integrin+binding+to+Arg-Gly-Asp+peptide+activates+actin+polymerization+and+contractile+movement+that+stimulates+outward+translocation.">Early integrin binding to Arg-Gly-Asp peptide activates actin polymerization and contractile movement that stimulates outward translocation.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 108 (51), 20585-20590 (2011).</li><li>Wen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+shear-dependent+NO-cGMP-cGKI+cascade+in+platelets+acts+as+an+auto-regulatory+brake+of+thrombosis.">A shear-dependent NO-cGMP-cGKI cascade in platelets acts as an auto-regulatory brake of thrombosis.</a> Nature Communications. 9 (1), 4301 (2018).</li><li>Marki, A., Gutierrez, E., Mikulski, Z., Groisman, A., Ley, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidics-based+side+view+flow+chamber+reveals+tether-to-sling+transition+in+rolling+neutrophils.">Microfluidics-based side view flow chamber reveals tether-to-sling transition in rolling neutrophils.</a> Scientific Reports. 6, 28870 (2016).</li><li>Brockman, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+the+3D+orientation+of+piconewton+integrin+traction+forces.">Mapping the 3D orientation of piconewton integrin traction forces.</a> Nature Methods. 15 (2), 115-118 (2018).</li><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Constructing+modular+and+universal+single+molecule+tension+sensor+using+protein+G+to+study+mechano-sensitive+receptors.">Constructing modular and universal single molecule tension sensor using protein G to study mechano-sensitive receptors.</a> Scientific Reports. 6, 21584 (2016).</li><li>Quach, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fc-independent+immune+thrombocytopenia+via+mechanomolecular+signaling+in+platelets.">Fc-independent immune thrombocytopenia via mechanomolecular signaling in platelets.</a> Blood. 131 (7), 787-796 (2018).</li><li>Cao, W., Krishnaswamy, S., Camire, R. M., Lenting, P. J., Zheng, X. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factor+VIII+accelerates+proteolytic+cleavage+of+von+Willebrand+factor+by+ADAMTS13.">Factor VIII accelerates proteolytic cleavage of von Willebrand factor by ADAMTS13.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 105 (21), 7416-7421 (2008).</li><li>Kroll, M. H., Hellums, J. D., McIntire, L. V., Schafer, A. I., Moake, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelets+and+shear+stress.">Platelets and shear stress.</a> Blood. 88 (5), 1525-1541 (1996).</li><li>Pareti, F. I., Niiya, K., McPherson, J. M., Ruggeri, Z. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+two+domains+of+human+von+Willebrand+factor+that+interact+with+fibrillar+collagen+types+I+and+III.">Isolation and characterization of two domains of human von Willebrand factor that interact with fibrillar collagen types I and III.</a> Journal of Biological Chemistry. 262 (28), 13835-13841 (1987).</li><li>Deng, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet+clearance+via+shear-induced+unfolding+of+a+membrane+mechanoreceptor.">Platelet clearance via shear-induced unfolding of a membrane mechanoreceptor.</a> Nature Communications. 7, 12863 (2016).</li><li>Ikeda, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+von+Willebrand+factor+and+fibrinogen+in+platelet+aggregation+under+varying+shear+stress.">The role of von Willebrand factor and fibrinogen in platelet aggregation under varying shear stress.</a> Journal of Clinical Investigation. 87 (4), 1234-1240 (1991).</li><li>Westerhof, N., Stergiopulos, N., Noble, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Snapshots of hemodynamics: an aid for clinical research and graduate education. , (2010).</li><li>Liang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific+inhibition+of+ectodomain+shedding+of+glycoprotein+Ibalpha+by+targeting+its+juxtamembrane+shedding+cleavage+site.">Specific inhibition of ectodomain shedding of glycoprotein Ibalpha by targeting its juxtamembrane shedding cleavage site.</a> Journal of Thrombosis and Haemostasis. 11 (12), 2155-2162 (2013).</li><li>Samsel, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+flow+cytometry+for+morphologic+and+phenotypic+characterization+of+rare+circulating+endothelial+cells.">Imaging flow cytometry for morphologic and phenotypic characterization of rare circulating endothelial cells.</a> Cytometry Part B: Clinical Cytometry. 84 (6), 379-389 (2013).</li><li>Basiji, D. A., Ortyn, W. E., Liang, L., Venkatachalam, V., Morrissey, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+image+analysis+and+imaging+by+flow+cytometry.">Cellular image analysis and imaging by flow cytometry.</a> Clinics in Laboratory Medicine. 27 (3), 653-670 (2007).</li><li>Quach, M. E., Chen, W., Li, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+platelet+clearance+and+translation+to+improve+platelet+storage.">Mechanisms of platelet clearance and translation to improve platelet storage.</a> Blood. 131 (14), 1512-1521 (2018).</li></ol>

Протокол, описанный в данной рукописи, позволяет быстро и универсально оценить влияние ламинарового сдвига на тромбоциты и рецепторы поверхности клеток. Конкретные представленные здесь репрезентативные результаты подчеркивают, как влияние многомерных или двухвалентных лиганд може?...

Механорецепторы являются белки, которые реагируют на механические раздражители, такие как давление или механические возмущения / деформации. Для некоторых механорецепторов, зондирование этих механических возмущений явно функция типов клеток, в которых они выражаются. Возьмем, к примеру, растяжечные рецепторы в барорецепторных нейронах; эти механочувствительные ионные каналы регулируют кровяное давление, чувствуя сосудистые "растяжка"1,2. Во внутреннем ухе ионные каналы на волосяныхклетках обнаруживают механические деформации, вызванные звуковыми волнами 3, а кожные низкопороговые механорецепторы (LTMRs) облегчают передачу тактильной информации4. В других случаях механорецепторы предоставляют важную информацию клетке для установления сливов или роста. Клетки могут чувствовать жесткость их местной окружающей среды, и может полагаться на контрактные силы через актин цитоскелет и integrins диктовать рост или распространение5,6.
При изучении взаимодействия рецепторов-лигандов в клеточных или тканевых моделях существуют общие анализы, которые могут быстро и точно сообщать о последствиях изменения температуры, рН, концентрации лиганда, тонистики, мембранного потенциала и многих других параметров которые могут варьироваться в vivo. Тем не менее, эти же анализы могут не хватать, когда дело доходит до обнаружения вклада механической силы в активацию рецепторов. Ли клетки зондирования их микроокружения, обнаружения звуковых волн, или реагирования на стрейч, одна вещь, вышеупомянутые механорецепторы имеют в общем, что они участвуют в взаимодействиях, где лиганд, рецептор, или оба, закреплены на поверхности. Анализы, разработанные для проверки влияния механических сил на взаимодействия рецепторов, часто отражают эту парадигму. Микрофлюитика и камеры потока используются для изучения влияния сдвига потока на клетки и рецепторы7,8. Преимущество подобных экспериментов в том, что они позволяют точно настраивать скорость сдвига с помощью установленных скоростей потока. Другие методы используют флуоресцентные молекулярные зонды для обнаружения сил, применяемых клетками на богатых лигандой поверхностях, что дает точную считывание величины и ориентации сил, участвующих во взаимодействии9,10.
В дополнение к mechanosensation происходит, когда один или оба партнера закреплены на поверхности, сдвига стресс может повлиять на белки и клетки в растворе. Это часто наблюдается в клетках крови / белков, которые постоянно находятся в обращении, и может проявляться через активацию механорецепторов, которые, как правило, поверхностные якорь11, или через воздействие целевых последовательностей, которые будут окклюзии под статических условий12. Тем не менее, относительно меньше методов анализа влияния сдвига силы на частицы в растворе. Некоторые в решении подходов ввести сдвига через вихревые клетки в жидкости подвески с различной скоростью и продолжительностью, хотя эти подходы не могут позволить очень точное определение сдвига стресс генерируется. Вращающиеся вязкости измеряют вязкость, применяя определенную силу сдвига к жидкостям. Здесь мы описываем прикладной метод для определения влияния конкретных ставок ламинара сдвига на клетки или фрагменты клеток в растворе.
Одним из наиболее высоко выраженных белков на поверхности тромбоцитов является комплекс гликопротеинов (GP) Ib-IX. GPIb-IX является основным рецептором плазменного белка фон Виллебранд фактор (VWF). Вместе, эта рецептор-лиганд пара уже давно признана в качестве основы тромбоцитов ответ на сдвига стресс13. В случае повреждения сосудов, VWF связывается с открытым коллагеном в субэндотелиальной матрице14, таким образом, вербовка тромбоцитов к месту травмы через взаимодействие VWF-GPIb-IX. Участие VWF на своем связывающем месте в подразделении GPIb, если GPIb-IX при физиологическом стрессе сдвига индуцирует развертывание мембранно-проксимального механосенсорного домена (MSD), который, в свою очередь, активирует GPIb-IX15. В недавнем исследовании, мы показали, что антитела против GPIb, как и те, которые генерируются во многих иммунных тромбоцитопении (ITP) пациентов, также способны индуцировать тромбоцитов сигнализации через MSD разворачивается под сдвига стресс11. Однако, в отличие от VWF, который облегчает активацию GPIb-IX, индуцированной сдвигами, обездвиживая комплекс при нормальном обращении, двухвалентные антитела способны перекладывать тромбоциты через GPIb-IX и разворачивать MSD в обращении. Таким образом, механорецептор, который обычно активируется путем иммобилизации поверхности под сдвига может быть активирован в растворе. В настоящем докладе, мы продемонстрируем, как вискометр основе равномерного сдвига асссбыл использовать для обнаружения последствий конкретных уровней сдвига нагрузки на активацию рецепторов в растворе.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:764px;" width="764">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:35px;width:413px;">APC anti-human CD62P (P-Selectin)</td>
			<td style="width:128px;">BioLegend</td>
			<td style="width:135px;">304910</td>
			<td style="width:88px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:413px;">Brookfield Cap 2000+ Viscometer</td>
			<td style="width:128px;">Brookfield</td>
			<td style="width:135px;">-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:413px;">FITC-conjugated Erythrina cristagalli lectin (ECL)</td>
			<td style="width:128px;">Vector Labs</td>
			<td style="width:135px;">FL-1141</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pooled Normal Human Plasma</td>
			<td>Precision Biologic</td>
			<td>CCN-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="52">
			<td height="52" style="height:52px;width:413px;">Vacutainer Light Blue Blood Collection Tube (Sodium Citrate)</td>
			<td style="width:128px;">BD</td>
			<td style="width:135px;">369714</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;width:413px;">Vacutainer Blood Collection Set, 21G x &#190;&#34; Needle</td>
			<td style="width:128px;">BD</td>
			<td style="width:135px;">367287</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a uniform shear assay for human platelet and cell surface receptors via cone-plate viscometry

Многие биологические клетки/ ткани ощущают механические свойства своей местной среды с помощью механорецепторов, белков, которые могут реагировать на такие силы, как давление или механические возмущения. Механорецепторы обнаруживают свои стимулы и передают сигналы через большое разнообразие механизмов. Некоторые из наиболее распространенных ролей для механорецепторов в нейронных реакций, как прикосновение и боль, или волосковые клетки, которые функционируют в равновесии и слуха. Mechanosensation также имеет важное значение для типов клеток, которые регулярно подвергаются стресс сдвига, таких как эндотелиальные клетки, которые выстраивают кровеносные сосуды, или клетки крови, которые испытывают сдвига в нормальном кровообращении. Вискометры являются устройствами, которые обнаруживают вязкость жидкостей. Вращающиеся вязки также могут быть использованы для применения известной силы сдвига к жидкостям. Способность этих инструментов вводить однородный нож для жидкости была использована для изучения многих биологических жидкостей, включая кровь и плазму. Viscometry также может быть использован для применения сдвига к клеткам в растворе, и для проверки влияния сдвига на конкретные пары лиганд-рецепторов. Здесь мы используем конусно-пластинную вискометрию для проверки влияния эндогенного уровня стресса сдвига на тромбоциты, обработанные антителами против тромбоцитов механосенсорного рецептора комплекса GPIb-IX.

На рисунке 1 описывается, как триггерная модель активации GPIb-IX, первоначально введенная для объяснения активации рецепторов, зависящих от сдвига, при закреплении на стенке сосуда, может также поддерживать активацию тромбоцитов, перекрестных многовалентной лиганд. <strong ...

Watch this Scientific Journal Video about A Uniform Shear Assay for Human Platelet and Cell Surface Receptors via Cone-plate Viscometry at JoVE.com

A Uniform Shear Assay for Human Platelet and Cell Surface Receptors via Cone-plate Viscometry

Единый сдвига Ассси для человека тромбоцитов и клеточных поверхностных рецепторов через конус-пластины Viscometry

Мы описываем в растворе метод нанесения равномерного сдвига на рецепторы поверхности тромбоцитов с помощью конусно-пластинной вискомерности. Этот метод также может быть использован более широко для нанесения сдвига на другие типы клеток и клеточных фрагментов и не нужно нацеливаться на конкретную пару лиганд-рецепторов.

Many biological cells/tissues sense the mechanical properties of their local environments via mechanoreceptors, proteins that can respond to forces like ...

Этот протокол позволяет нам ответить на различные вопросы о том, как стрижка действует на клетки в растворе и обеспечивает значительный контроль над длительностью и величиной стрижки. В отличие от других методов, которые обнаруживают влияние стрижки на клетки, которые обездвижены, этот метод позволяет нам применять снооблочные клетки в растворе и поддается спектру методов обнаружения сигналов ниже по течению. После получения периферической крови от согласия, здоровый взрослый донор в 4,5-миллилитровой трубке 3,8%trisodium цитрат, центрифуга крови, чтобы получить богатые тромбоцитами плазмы, и использовать пипетку кончик вырезать под углом 45 градусов, чтобы тщательно удалить в результате чего верхней, облачной, желтой тромбоцитов богатых плазменный слой.Получить количество тромбоцитов через полный анализ крови, и настроить количество тромбоцитов примерно в 2,5 раза от 10 до пятого тромбоцитов на микролитер с бассейном человека тромбоцитов бедных плазмы. Затем поместите подвеску на 22 градуса цельсия с нежным вращением. Для лечения лиганда, медленно добавить антитела или лиганд интереса к тромбоцитов богатых плазмы, и смешать тромбоциты мягко.Во время инкубации включите конусообразный вискометр и установите температуру пластины до 22 градусов по Цельсию. Через 5-10 минут перенесите обработанную плазму, богатую тромбоцитами, на контролируемый температурой конусообразный вискометр непосредственно в центре пластины, заботясь о том, чтобы весь образец был отложен между конусом и пластиной в точке соприкосновения. Чтобы применить сноф к образцу, вычислите сноф в соответствии с руководством по вискометровому анализу и примените ее к образцу с соответствующей скоростью и продолжительностью.В конце применения, поднимите конус около двух миллиметров от пластины, так что образец остается в контакте с пластиной и конусом, и использовать гель-загрузки пипетки отзыв для сбора от пяти до 10 микролитров из центра объема образца. Затем инкубировать прорубь образца с антителами против поверхностных маркеров интерес в течение 20 минут при комнатной температуре, и исправить образцы в 2%paraformaldehyde в течение 20 минут при комнатной температуре. Чтобы проанализировать образцы по цитометрии потока, соберите не менее 20 000 событий для каждого состояния и количественно оцените силу сигнала каждого флуоресцентного маркера, используя значение высоты для интенсивности каждого флюорофора.Затем используйте отрицательный контроль с бычьим альбумин сыворотки или транспортного средства, чтобы нарисовать ворота, исключая негативный фон флуоресцентных событий, и количественно процент событий внутри ворот для всех экспериментальных условиях. Выражение маркера активации тромбоцитов в ответ на применение силы стрижки не регулируется в зависимости от времени образом. Здесь показаны репрезентативные считывания активации тромбоцитов человека в присутствии двух антител, нацеленных на N-терминальный домен гликопротеина 1b-IX и одно контрольное антитело при стрижке и статических условиях.Выражение всех трех маркеров активации было значительно увеличено в присутствии сил стрижки и ориентации антител, по сравнению с либо статических условий или в присутствии антител контроля. Примечательно, что лечение антителами с необязаемой силой слишком низко, чтобы вызвать активацию гликопротеина 1b-IX, не вызывает активации тромбоцитов в условиях статической или стрижки. Кроме того, плазма от пациентов иммунной тромбоцитопении, содержащих антитела против гликопротеина 1b-IX вызвать стрижку зависимых реакций в отличие от плазмы от пациентов без гликопротеина 1b-IX ориентации антител.В дополнение к flowcytometric анализов, клетки, которые подверглись воздействию снопы могут быть также lysed для западной помарки, ELISA, и масс-специальный анализ для определения любых изменений в уровне белка. Как всегда, при использовании крови или человеческих образцов, не забудьте носить надлежащее защитное оборудование и следовать безопасности лаборатории и крови родился патоген руководящих принципов вашего учреждения.

Research

JoVE Journal

Biology

A Chromatin Assay for Human Brain Tissue

Хроматин Пробирной по правам ткани мозга

Chronic neuropsychiatric illnesses such as schizophrenia, bipolar disease and autism are thought to result from a combination of genetic and environmental ...

Preparation of Pooled Human Platelet Lysate (pHPL) as an Efficient Supplement for Animal Serum-Free Human Stem Cell Cultures

Preparation of Pooled Human Platelet Lysate pHPL as an Efficient Supplement for Animal Serum-Free Human Stem Cell Cultures

Подготовка Объединенные тромбоцитов человека лизат (pHPL) как эффективное дополнение для животных бессывороточной человеческих культур стволовых клеток

Platelet derived growth factors have been shown to stimulate cell proliferation efficiently in vivo1,2 and in vitro. This effect has been reported for ...

A &#946;-glucuronidase (GUS) Based Cell Death Assay

A ÃƒÅ½Ã‚Â²-glucuronidase GUS Based Cell Death Assay

Β-глюкуронидазы (GUS) Основываясь Анализ гибели клеток

We have developed a novel transient plant expression system that simultaneously expresses the reporter gene, &beta;-glucuronidase (GUS), with putative ...

Avidity-based Extracellular Interaction Screening (AVEXIS) for the Scalable Detection of Low-affinity Extracellular Receptor-Ligand Interactions

Avidity-based Extracellular Interaction Screening AVEXIS for the Scalable Detection of Low-affinity Extracellular Receptor-Ligand Interactions

Алчность на основе взаимодействия внеклеточной скрининга (AVEXIS) для масштабируемых обнаружения низкого сродства внеклеточного рецептор-лиганд

Extracellular protein:protein interactions between secreted or membrane-tethered proteins are critical for both initiating intercellular communication and ...

Glycopeptide Capture for Cell Surface Proteomics

Гликопептиды Захват для клеточной поверхности протеомики

Cell surface proteins, including extracellular matrix proteins, participate in all major cellular processes and functions, such as growth, ...

Visualizing Clathrin-mediated Endocytosis of G Protein-coupled Receptors at Single-event Resolution via TIRF Microscopy

Визуализация клатрином эндоцитоза из G-белками в Single-событий резолюции через TIRF микроскопии

Many important signaling receptors are internalized through the well-studied process of clathrin-mediated endocytosis (CME). Traditional cell biological ...

A Method for Selecting Structure-switching Aptamers Applied to a Colorimetric Gold Nanoparticle Assay

Способ выбора Структура переключения Аптамеры Применительно к колориметрическим наночастиц золота Пробирной

Small molecules provide rich targets for biosensing applications due to their physiological implications as biomarkers of various aspects of human health ...

The Assembly and Application of 'Shear Rings': A Novel Endothelial Model for Orbital, Unidirectional and Periodic Fluid Flow and Shear Stress

Ассамблея и применение &quot;Shear колец&quot;: Роман эндотелиальной Модель для Orbital, однонаправленные и периодического потока жидкости и напряжения сдвига

Deviations from normal levels and patterns of vascular fluid shear play important roles in vascular physiology and pathophysiology by inducing adaptive as ...

Live-cell Imaging of Platelet Degranulation and Secretion Under Flow

Live-cell Imaging дегрануляции и секреции тромбоцитов под потоком

Blood platelets are essential players in hemostasis, the formation of thrombi to seal vascular breaches. They are also involved in thrombosis, the ...

A Simple Fluorescence-based Reporter Assay to Identify Cellular Components Required for Ricin Toxin A Chain (RTA) Trafficking in Yeast

A Simple Fluorescence-based Reporter Assay to Identify Cellular Components Required for Ricin Toxin A Chain RTA Trafficking in Yeast

Простой на основе флуоресценции репортер проба для выявления клеточных компонентов необходимых для рицин токсинному цепь (RTA) оборота дрожжей

Bacterial and plant A/B toxins exploit the natural trafficking pathways in eukaryotic cells to reach their intracellular target(s) in the cytosol and to ...