Name: the use of mouse mammary tumor cells in an in vitro invasion assay as a measure of oncogenic cell behavior
Uploaded: 2019-06-12T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Use of Mouse Mammary Tumor Cells in an In Vitro Invasion Assay as a Measure of Oncogenic Cell Behavior at JoVE.com

Dette arbejde blev støttet af Grant R15CA169978 fra National Institutes of Health. Yderligere finansiering kom fra Villanova University.

Alle eksperimenter og metoder blev udført som autoriseret af Villanova University institutionel dyrepleje og brug udvalg (IACUC).
1. genekspression i kulturperler mus mammary tumor celler
<ol><li>Forbered først de cellelinjer, der skal testes.</li>
	<li>
Brug en avls koloni af BALB/cV-mus. Disse mus bære Balb/cV stamme af mus brysttumor virus, overføres til pup i mælk6,7. 50 procent af avls hunnerne udvikler brysttumorer...

<ol>
	<li>He, X., Lee, B., Jiang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-ECM+Interactions+in+Tumor+Invasion.">Cell-ECM Interactions in Tumor Invasion.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 936, 73-91 (2016).</li><li>Albini, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rapid+in+vitro+assay+for+quantitating+the+invasive+potential+of+tumor+cells.">A rapid in vitro assay for quantitating the invasive potential of tumor cells.</a> Cancer Research. 47 (12), 3239-3245 (1987).</li><li>Simon, N., Noel, A., Foidart, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+in+vitro+reconstituted+basement+membrane+assay+to+assess+the+invasiveness+of+tumor+cells.">Evaluation of in vitro reconstituted basement membrane assay to assess the invasiveness of tumor cells.</a> Invasion and Metastasis. 12 (3-4), 156-167 (1992).</li><li>Benton, G., Arnaoutova, I., George, J., Kleinman, H. K., Koblinski, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrigel:+from+discovery+and+ECM+mimicry+to+assays+and+models+for+cancer+research.">Matrigel: from discovery and ECM mimicry to assays and models for cancer research.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 79-80, 3-18 (2014).</li><li>Kleinman, H. K., Martin, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrigel:+basement+membrane+matrix+with+biological+activity.">Matrigel: basement membrane matrix with biological activity.</a> Seminars in Cancer Biology. 15 (5), 378-386 (2005).</li><li>Kang, J. J., Schwegel, T., Knepper, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sequence+similarity+between+the+long+terminal+repeat+coding+regions+of+mammary-tumorigenic+BALB/cV+and+renal-tumorigenic+C3H-K+strains+of+mouse+mammary+tumor+virus.">Sequence similarity between the long terminal repeat coding regions of mammary-tumorigenic BALB/cV and renal-tumorigenic C3H-K strains of mouse mammary tumor virus.</a> Virology. 196 (1), 303-308 (1993).</li><li>Slagle, B. L., Lanford, R. E., Medina, D., Butel, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+mammary+tumor+virus+proteins+in+preneoplastic+outgrowth+lines+and+mammary+tumors+of+BALB/cV+mice.">Expression of mammary tumor virus proteins in preneoplastic outgrowth lines and mammary tumors of BALB/cV mice.</a> Cancer Research. 44 (5), 2155-2162 (1984).</li><li>Schmidt, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+the+oncogenic+phenotype+by+the+nuclear+body+protein+ZC3H8.">Regulation of the oncogenic phenotype by the nuclear body protein ZC3H8.</a> BMC Cancer. 18 (1), 759 (2018).</li><li>Neophytou, C., Boutsikos, P., Papageorgis, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+Mechanisms+and+Emerging+Therapeutic+Targets+of+Triple-Negative+Breast+Cancer+Metastasis.">Molecular Mechanisms and Emerging Therapeutic Targets of Triple-Negative Breast Cancer Metastasis.</a> Frontiers in Oncology. 8, 31 (2018).</li><li>Al-Alwan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fascin+is+a+key+regulator+of+breast+cancer+invasion+that+acts+via+the+modification+of+metastasis-associated+molecules.">Fascin is a key regulator of breast cancer invasion that acts via the modification of metastasis-associated molecules.</a> PloS One. 6 (11), e27339 (2011).</li><li>Wang, M. J., Zhang, H., Li, J., Zhao, H. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=microRNA-98+inhibits+the+proliferation,+invasion,+migration+and+promotes+apoptosis+of+breast+cancer+cells+by+binding+to+HMGA2.">microRNA-98 inhibits the proliferation, invasion, migration and promotes apoptosis of breast cancer cells by binding to HMGA2.</a> Bioscience Reports. 38 (5), (2018).</li><li>Zheng, Y. F., Luo, J., Gan, G. L., Li, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overexpression+of+microRNA-98+inhibits+cell+proliferation+and+promotes+cell+apoptosis+via+claudin-1+in+human+colorectal+carcinoma.">Overexpression of microRNA-98 inhibits cell proliferation and promotes cell apoptosis via claudin-1 in human colorectal carcinoma.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 120 (4), 6090-6105 (2019).</li><li>Yan, W., Cao, Q. J., Arenas, R. B., Bentley, B., Shao, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GATA3+inhibits+breast+cancer+metastasis+through+the+reversal+of+epithelial-mesenchymal+transition.">GATA3 inhibits breast cancer metastasis through the reversal of epithelial-mesenchymal transition.</a> Journal of Biological Chemistry. 285 (18), 14042-14051 (2010).</li></ol>

In vitro invasion assay er en billig, hurtig, kvantitativ, og ligetil metode til at studere de faktorer, der fremmer kræft celle invasion. Brystkræft er den mest almindeligt diagnosticeret kræft blandt kvinder. Af de tre store undertyper af brystkræft, Triple negative, (eller ER-, PR-, HER2/Neu-), er den mest aggressive, mest sandsynligt at metastasize, og mest dødbringende9. Derfor, forstå de gener og udtryk, der resulterer i metastase kan hjælpe med at finde nye terapeutiske mål...

In vitro invasion assay kan være et nyttigt værktøj, når man måler en celles evne til at migrere gennem en protein-belagt membran, analogt med de første skridt i metastase. En vigtig funktion af maligne kræftceller er deres evne til at migrere gennem og invaderer nærliggende væv. Kræft, der har spredt eller stase udgør mere behandling udfordringer og har lavere satser for langvarig overlevelse, mens lokaliserede tumorer er lettere at behandle og har højere satser for langsigtet overlevelse. For at metastasize, kræftceller skal forlade den primære tumor og migrere ind i kredsløbssygdomme eller lymfesystem, en proces, der kræver passerer gennem ekstracellulære matrix og kælder membran1. I processen kaldet epitelial mesenchymal Transition (EMT), tumorcellerne skal bryde celle-celle kontakter, migrere direktionelt, og invaderer nærliggende blod eller lymfeknuder fartøjer. De første skridt i denne metastase kaskade er af stor interesse, da disse trin er, hvad der kan gøre kræft deadlier. De genetiske og epigenetiske faktorer, der er involveret i de tidlige faser af metastase er fokus for en stor mængde forskning, men nøjagtige og pålidelige eksperimentelle værktøjer er nødvendige for at teste disse tidlige trin både in vivo og in vitro.
Værktøjer til at måle ændringer i celle migration såsom sårheling (scratch) assays eller vækst i 3D-miljøer såsom bløde agar-analyser kan delvist løse behovet for eksperimentelle metoder til måling af tidlige trin af metastase, men en analyse til måling af invasion er mere udfordrende, da processen sker i kroppen inden for en kompleks tumor mikromiljø. Med henblik på screening af stoffer eller genændringer for at bestemme vigtige faktorer i invasion og metastase, et system, der kan bruges in vitro med dyrkede celler og efterligne de udfordringer, som metastatiske celler in vivo er invasion assay2, 3. Brystkræft er den mest almindeligt diagnosticeret type kræft i kvinder og den anden førende årsag til kræft død i kvinder, så forstå de gener, der er ansvarlige for brystkræft celle invasion og metastase er kritisk vigtigt for folkesundheden. Desuden er museceller et nyttigt model system til at studere brystkræft og dens progression.
In vitro-invasions analysen er baseret på BoyDen-kammer samlingen, hvor to kamre af vækstmedier adskilles af en porøs membran3. For at efterligne tumor mikromiljøet, en protein-rige gel er også inkluderet for at adskille celler i et kammer fra en chemoattraktant i den anden og fungere som en kælder membran barriere. For at migrere mod chemoattraktant skal cellerne først passere gennem den proteinrige barriere og derefter passere gennem den porøse membran-en proces svarende til, hvordan metastatiske celler migrerer gennem stroma. Den proteinholdige gel kan ændres baseret på eksperimentets behov, men består normalt af kollagen eller kælder membran ekstrakt (f. eks. Matrigel)4. Det er en kompleks blanding af proteiner, proteoglycaner og vækstfaktorer, men for det meste består af lamininer og kollagen IV 4,5. Cellerne skal derefter passere gennem en porøs membran, der typisk er fremstillet af polycarbonat, polyester eller polytetrafluorethylen (PTFE). Membraner kan købes kommercielt med eller uden en Proteingel (typisk collagens), eller gelen kan købes separat og tilsættes. Porestørrelsen kan justeres ud fra cellestørrelsen. Mens porestørrelser er tilgængelige fra 0,4-8,0 μm, er kun porer fra 3,0-8,0 μm store nok til celle migrering. Invasionen analyse er blevet brugt til at bestemme effektiviteten af inhibitorer på evnen af celler til at migrere og invade. Mens mangler den nøjagtige tumor mikromiljø, der er til stede in vivo, in vitro invasion assay er gavnlig på screening mange betingelser på kort tid samtidig minimere behovet for dyremodeller. Målet med disse eksperimenter er at sammenligne genekspression af formodede onkogener og bestemme virkningerne på cancer celle adfærd og sygdoms aggressivitet ved hjælp af in vitro invasion assay og andre tests. Samlet set, invasionen analyse giver konsistente, kvantitative, og hurtige resultater til bestemmelse af metastatisk potentiale samtidig også være en relativt billig, ligetil, og tilpasselig metode.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>24-well plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353504</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimycotic (100X)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>15240062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BALB/c mice</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture Incubator</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture Treated Flasks</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clinical cenrifuge</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swab</td>
			<td>Puritan</td>
			<td>25-806</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Crystal Violet</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C0775</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distilled water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>10566-016</td>
			<td>high glucose, GlutaMAX</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F2442-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forcepts</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Slide</td>
			<td>VWR</td>
			<td>16004-422</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>14025076</td>
			<td>no calcium, no magnesium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemocytometer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imersion oil</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Invasion Chambers (24-well)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354480</td>
			<td>Cat. #354481 for 6-well</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light Microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine Transfection Reagent</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel, disposable</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>#11</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>shRNA</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Transfer pipet</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>25200056</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the use of mouse mammary tumor cells in an in vitro invasion assay as a measure of oncogenic cell behavior

In vitro invasion assay bruger en protein-rige matrix i en BoyDen kammer til at måle evnen af dyrkede celler til at passere gennem matrixen og en porøs membran i en proces, der svarer til de første skridt af cancer celle metastaser. De testede celler kan ændres for genekspression eller behandles med inhibitorer for at teste for ændringer i invasions potentialet. Dette eksperiment tester den aggressive fænotype af musen brysttumor celler til at opdage og karakterisere de potentielle onkogener, der fremmer celle invasion. Denne teknik kan dog være alsidig og tilpasset til mange forskellige applikationer. Eksperimentet i sig selv kan gøres på én dag, og resultaterne er erhvervet ved lys mikroskopi i mindre end en dag. Resultaterne omfatter optællinger af antallet af invaderende celler til sammenligning og analyse. In vitro invasion assay er en hurtig, billig, og klar-cut metode til bestemmelse af celle adfærd i en kultur, der kan bruges som en indledende vurdering før mere involveret i vivo assays.

Denne metode til in vitro-invasion gennem en protein matrix blev brugt til at vurdere de aggressive fænotyper og onkogene celle adfærd af mus brysttumor celler med ændret udtryk for zink finger protein ZC3H88. I forbindelse med andre tilgange, der også undersøger celle migration og vækst i 3D-miljøer, blev det konstateret, at højere niveauer af ekspression af Zc3h8 i tumorcellelinjer, eller ved promotor-medieret udtryk fra en plasmid, resulterede i hurtige ...

Watch this Scientific Journal Video about The Use of Mouse Mammary Tumor Cells in an In Vitro Invasion Assay as a Measure of Oncogenic Cell Behavior at JoVE.com

The Use of Mouse Mammary Tumor Cells in an In Vitro Invasion Assay as a Measure of Oncogenic Cell Behavior

In vitro celle invasion assay bruges til at måle potentialet i kræft metastaser ved at kvantificere det cellulære potentiale for invasion og migration ved hjælp af cellekultur indsætter indeholder protein matrix. Celler udfordres til at migrere gennem protein matrixen og en porøs membran, mod en kemoattraktant, og derefter kvantificeres ved let mikroskopi.

Brugen af mus mammary tumor celler i en in vitro invasion analyse som et mål for Oncogenic celle adfærd

The in vitro invasion assay uses a protein-rich matrix in a Boyden chamber to measure the ability of cultured cells to pass through the matrix and a ...

Denne protokol, in vitro invasion assay, er et nyttigt redskab til kvantitativt at måle en celle linjer evne til at migrere gennem et protein rige matrix og passere gennem en porøs membran, i en proces svarende til de tidlige stadier af kræft celle invasion. Disse cellelinjer kan genetisk ændres for at over udtrykke et gen eller for at have reduceret ekspression af et gen for at afgøre, om dette gen spiller en rolle i cellemigration eller celleinvasion. Mange aggressive kræftformer indebærer dramatiske ændringer i celle adfærd, herunder øget migration og invasion.Så denne in vitro invasion assay kan give os mulighed for bedre at forstå de gener og andre faktorer, der er involveret i denne proces. For at begynde denne procedure, vokse klæbende mus mammary tumorceller i en T25 kolbe ved 37 grader Celsius med 5% kuldioxid og 100% fugtighed, indtil de er 70% til 90% sammenløb for dag ét af forsøget. Hent Boyden kammer skær fra opbevaring og overføre dem til en celle kultur hætte til varm til stuetemperatur i 20 minutter.Brug tre skær til at generere statistisk gyldige data for hver cellelinje for hvert eksperiment. Og derefter tilføje 500 mikroliter af den forvarmte serum-fri DMEM medier til skær, således at den porøse membran og gel er hydreret på begge sider. Inkuberes ved 37 grader Celsius med 5% kuldioxid og 100% fugtighed i mindst to timer.Derefter forberedes cellerne ved at fjerne vækstmedierne og skylle cellerne med fem milliliter HBSS. Fjern HBSS og tilsæt en milliliter 0,25% trypsin EDTA-opløsning. Inkubere ved 37 grader Celsius i et til fem minutter, eller indtil cellerne vises afrundet eller viser tegn på løsrivelse.Tryk derefter forsigtigt på kolben for at løsne alle cellerne. Re-suspendere cellerne i fem milliliter DMEM med 10%FBS. Og overføre celle suspension til en steril 15 milliliter centrifuge rør.Centrifuge cellerne og 1000 gange g i fem minutter for forsigtigt at pellet cellerne. Fjern mediet og re-suspendere pellet i fem milliliter serum-fri DMEM. Centrifugering og gensuspring af processen gentages yderligere to gange for i alt tre vaske.Derefter skal cellerne i de sidste fem milliliter serumfri DMEM suspenderes grundigt, og det sikres, at der ikke er klumper af celler. Brug et hæmocytometer til at bestemme cellekoncentrationen og sørg for kun at tælle levedygtige celler. Og fortynde celle suspensionen til 50,000 celler pr. milliliter i fem milliliter serum-fri DMEM.Fjern derefter skålen med skær fra inkubatoren, og inspirer forsigtigt mediet fra en indsats. Løft indsatsen og aspirere mediet ud af brønden. Arbejde hurtigt, tilføje chemoattractant til det nederste kammer.Placer indsætte i brønden, og for en 24 godt fad, tilsæt 500 mikroliter af cellen suspension til indsatsen. Sørg for, at der ikke er luftbobler på begge sider af membranen. Returner skålen til cellekulturinkubatoren i 22 timer.Efter 22 timer forberedes en opløsning på 1% paraformaldehyd og en X PBS til fiksering. I en ren 24 brøndcellekulturskål tilsættes en milliliter af fiksativnet til individuelle brønde, så der er en brønd til hver indsats. Derefter forberede farvning opløsning af 0,1% krystal violet i en opløsning af PBS med 10% ethanol.Tilføj en milliliter af denne farvningsopløsning til en ren brønd for hver indsats. Brug af en medfÃ 0, og fjern hver enkelt indsats ad gangen. Placer en steril vatpind inde i hver indsats og podning oversiden af membranen for at fjerne eventuelle udvandrede celler.Gentag denne proces med en anden vatpind. Fjern derefter eventuelle resterende medier fra indersiden af indsatsen, og tilsæt 750 mikroliter af PBS for at vaske eventuelle fritliggende celler væk. Fjern PBS og gentag vasken med frisk PBS.Placer derefter indsatsen i et godt indeholdende fiksativ for at fastgøre de migrerede celler på undersiden af membranen. Gentag denne proces for alle skær, og lad indsatserne reparere i 15 minutter ved stuetemperatur. Derefter fjernes hver enkelt indsats ad gangen fra brønden og vaskes med 750 mikroliter PBS.Ansendes indsatsen i en brønd, der indeholder farvningsopløsningen, og lad den være i 15 minutter for at plette alle migrerede og faste celler. Fjern derefter indsatsen og dyppe dem i et bægerglas, der indeholder destilleret vand, indtil vandet løber ud af indsatsen er klar. Fjern eventuelle overskydende vanddråber, og placer indsatsen sidelæns på et stykke filterpapir.Lad indsatserne lufttørre. Forbered membranen til billeddannelse ved at mærke et rent glasmikroskop dias for hver indsats, og placere en lille dråbe mikroskop nedsænkning olie i midten af hvert dias. Ved hjælp af en skalpel, skåret rundt omkredsen af membranen på indersiden af plast indsætte at frigøre membranen.Brug vicess til at fjerne membranen og placere den oven på oliedråbe på den mærkede rutsjebane. Ved hjælp af et sammensat mikroskop skal du se celler fem gange, 10 gange eller 20 gange forstørrelse. Tag flere billeder, der ikke overlapper hinanden, ved 10 gange forstørrelsen for kvantificering.Det samlede antal invaderende celler eller celler pr. område bestemmes for alle prøver. For hvert eksperiment udføres hver betingelse i analysen med tre replikate skær, og gentag flere gange for statistisk nyttige resultater. I denne undersøgelse, in vitro invasion gennem et protein matrix bruges til at vurdere de aggressive fænotyper i oncogenics celle adfærd mus mammary tumorceller med ændret udtryk for zink finger protein, Zc3h8.Højere niveauer af Zc3h8 udtryk ses i tumor cellelinjer eller af promotor medieret udtryk fra en plasmid, hvilket resulterer i hurtige satser for celleproliferedning, hurtig migration, vækst i 3D-miljøer, og øget indgreb i in vitro invasion assay. Omvendt resulterer nedsat udtryk fra shRNA-konstruktioner i mindre aggressiv spredning, migration og invasion. Mens celleinvasionen falder ved shRNA knockdown af Zc3h8 udtryk, at invasionen er reddet, når udtrykket er reddet.Den in vitro invasion assay teknik er yderst nyttigt, da det er en hurtig, billig, fleksibel og relativt nem tilgang til at studere celle adfærd. Celler, der dyrkes i kultur, er lette at manipulere genetisk. De kan endda testes for specifikke mutationer.In vitro invasion system giver også mulighed for analyse af små molekyle hæmmere samt biologiske agenser som mikro RNA'er for deres virkninger på celle migration og invasion. Denne analyse omfatter også en stor mængde fleksibilitet, der giver mulighed for ændring af proteinindholdet i matrixen, porestørrelse og kemoattractant.

Research

JoVE Journal

Genetics

Rearing and Double-stranded RNA-mediated Gene Knockdown in the Hide Beetle, Dermestes maculatus

Rearing and Double-stranded RNA-mediated Gene Knockdown in the Hide Beetle, Dermestes maculatus

Opdræt og dobbelt-strenget RNA-medieret Gene Knockdown i Skjul Beetle,<em&gt; Dermestes maculatus</em

Advances in genomics have raised the possibility of probing biodiversity at an unprecedented scale. However, sequence alone will not be informative ...

Detection of Copy Number Alterations Using Single Cell Sequencing

Påvisning af Copy Number Ændringer Brug Single Cell Sequencing

Detection of genomic changes at single cell resolution is important for characterizing genetic heterogeneity and evolution in normal tissues, cancers, and ...

In Vitro Bioluminescence Assay to Characterize Circadian Rhythm in Mammary Epithelial Cells

In Vitro Bioluminescence Assay to Characterize Circadian Rhythm in Mammary Epithelial Cells

In Vitro Bioluminescens Assay at karakterisere døgnrytme i Brystkirtlerne epitelceller

The circadian rhythm is a fundamental physiological process present in all organisms that regulates biological processes ranging from gene expression to ...

Profiling DNA Replication Timing Using Zebrafish as an In Vivo Model System

Profiling DNA Replication Timing Using Zebrafish as an In Vivo Model System

Profilering DNA replikation Timing ved hjælp af zebrafisk som en In Vivo modelsystem.

DNA replication timing is an important cellular characteristic, exhibiting significant relationships with chromatin structure, transcription, and DNA ...

Formaldehyde-assisted Isolation of Regulatory Elements to Measure Chromatin Accessibility in Mammalian Cells

Formaldehyd-assisteret Isolation af regulerende elementer til foranstaltning kromatin tilgængelighed i pattedyrceller

Appropriate gene expression in response to extracellular cues, that is, tissue- and lineage-specific gene transcription, critically depends on highly ...

Using In Vitro and In-cell SHAPE to Investigate Small Molecule Induced Pre-mRNA Structural Changes

Ved hjælp af in Vitro og i celler form at undersøge lille molekyle induceret Pre-mRNA strukturelle ændringer

In the process of drug development of RNA-targeting small molecules, elucidating the structural changes upon their interactions with target RNA sequences ...

Characterizing Histone Post-translational Modification Alterations in Yeast Neurodegenerative Proteinopathy Models

Kendetegner Histon posttranslationel modifikation ændringer i gær Neurodegenerative Proteinopathy modeller

Neurodegenerative diseases, such as amyotrophic lateral sclerosis (ALS) and Parkinson&#39;s disease (PD), cause the loss of hundreds of thousands of lives ...

Determining the Egg Fertilization Rate of Bemisia tabaci Using a Cytogenetic Technique

Determining the Egg Fertilization Rate of Bemisia tabaci Using a Cytogenetic Technique

Fastsættelsen af den æg befrugtning Bemisia tabaci ved hjælp af en cytogenetisk teknik

A few species of sap-sucking whiteflies are some of the most damaging terrestrial pests worldwide because of the crop damage they inflict and plant ...

An In Vitro Protocol for Evaluating MicroRNA Levels, Functions, and Associated Target Genes in Tumor Cells

En in vitro-protokol til evaluering af MicroRNA-niveauer, funktioner og tilknyttede Målgener i tumor celler

MicroRNAs (miRNAs) are small regulatory RNAs which are recognized to modulate numerous intracellular signaling pathways in several diseases including ...

Use of Frozen Tissue in the Comet Assay for the Evaluation of DNA Damage

Anvendelse af frosset væv i Comet-analysen til vurdering af DNA-skader

The comet assay is gaining popularity as a means to assess DNA damage in cultured cells and tissues, particularly following exposure to chemicals or other ...