Name: the use of mouse mammary tumor cells in an in vitro invasion assay as a measure of oncogenic cell behavior
Uploaded: 2019-06-12T14:30:00
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Diese Arbeit wurde durch den Zuschuss R15CA169978 von den National Institutes of Health unterstützt. Zusätzliche Mittel kamen von der Universität Villanova.

Alle Experimente und Methoden wurden nach Genehmigung durch das Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) der Universität Villanova durchgeführt.
1. Genexpression in kultivierten Maus-Mammary-Tumorzellen
<ol><li>Bereiten Sie zunächst die zu testenden Zelllinien vor.</li>
	<li>
Verwenden Sie eine Brutkolonie von BALB/cV-Mäusen. Diese Mäuse tragen den BALB/cV-Stamm des Maus-Mammary-Tumorvirus, übertragen an Welpen in Milch6,<sup class=...

<ol>
	<li>He, X., Lee, B., Jiang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-ECM+Interactions+in+Tumor+Invasion.">Cell-ECM Interactions in Tumor Invasion.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 936, 73-91 (2016).</li><li>Albini, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rapid+in+vitro+assay+for+quantitating+the+invasive+potential+of+tumor+cells.">A rapid in vitro assay for quantitating the invasive potential of tumor cells.</a> Cancer Research. 47 (12), 3239-3245 (1987).</li><li>Simon, N., Noel, A., Foidart, J. 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L., Li, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overexpression+of+microRNA-98+inhibits+cell+proliferation+and+promotes+cell+apoptosis+via+claudin-1+in+human+colorectal+carcinoma.">Overexpression of microRNA-98 inhibits cell proliferation and promotes cell apoptosis via claudin-1 in human colorectal carcinoma.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 120 (4), 6090-6105 (2019).</li><li>Yan, W., Cao, Q. J., Arenas, R. B., Bentley, B., Shao, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GATA3+inhibits+breast+cancer+metastasis+through+the+reversal+of+epithelial-mesenchymal+transition.">GATA3 inhibits breast cancer metastasis through the reversal of epithelial-mesenchymal transition.</a> Journal of Biological Chemistry. 285 (18), 14042-14051 (2010).</li></ol>

Der In-vitro-Invasionstest ist eine kostengünstige, schnelle, quantitative und unkomplizierte Methode, um die Faktoren zu untersuchen, die die Invasion von Krebszellen fördern. Brustkrebs ist die am häufigsten diagnostizierte Krebsbeilage bei Frauen. Von den drei Hauptsubtypen von Brustkrebs ist das dreifach negative (oderER-, PR-, HER2/neu -) der aggressivste, am ehesten metastasierende und tödlichste9. Daher kann das Verständnis der Gene und der Expression, die zu Metastasen führe...

Der In-vitro-Invasionstest kann ein nützliches Werkzeug bei der Messung der Fähigkeit einer Zelle sein, durch eine proteinbeschichtete Membran zu wandern, analog zu den ersten Schritten in der Metastasierung. Ein Schlüsselmerkmal bösartiger Krebszellen ist ihre Fähigkeit, durch nahegelegene Gewebe zu wandern und einzudringen. Krebs, der sich ausgebreitet oder metastasiert hat, stellt mehr Behandlungsherausforderungen dar und hat niedrigere Raten des langfristigen Überlebens, während lokalisierte Tumoren leichter zu behandeln sind und höhere Raten des langfristigen Überlebens haben. Um metastasieren zu können, müssen Krebszellen den Primärtumor verlassen und in das Kreislauf- oder Lymphsystem wandern, ein Prozess, der den Übergang durch die extrazelluläre Matrix und Kellermembran1erfordert. Dabei müssen die Tumorzellen, die als epithelialer mesenchymaler Übergang (EMT) bezeichnet werden, Zellzellkontakte brechen, richtungsweisend migrieren und in nahegelegene Blut- oder Lymphgefäße eindringen. Die ersten Schritte dieser Metastasenkaskade sind von großem Interesse, da diese Schritte Krebs tödlicher machen können. Die genetischen und epigenetischen Faktoren, die an den frühen Schritten der Metastasierung beteiligt sind, stehen im Mittelpunkt einer großen Menge an Forschung, aber es sind genaue und zuverlässige experimentelle Werkzeuge erforderlich, um diese frühen Schritte sowohl in vivo als auch in vitro zu testen.
Werkzeuge zur Messung von Veränderungen in der Zellmigration wie Wundheilung (Kratz-)Assays oder Wachstum in 3D-Umgebungen wie Soft Agar Assays können teilweise die Notwendigkeit experimenteller Methoden zur Messung früher Metastasierungsschritte decken, aber ein Test zur Messung der Invasion ist schwieriger, da der Prozess im Körper in einer komplexen Tumormikroumgebung stattfindet. Für das Screening von Medikamenten oder Genveränderungen, um wichtige Faktoren bei Invasion und Metastasierung zu bestimmen, ist ein System, das in vitro mit kultivierten Zellen verwendet werden kann und die Herausforderungen nachahmt, denen metastasierende Zellen in vivo gegenüberstehen, der Invasionstest2, 3. Brustkrebs ist die am häufigsten diagnostizierte Krebsart bei Frauen und die zweithäufigste Krebstodesursache bei Frauen, daher ist das Verständnis der Gene, die für die Invasion von Brustkrebszellen und Metastasen verantwortlich sind, von entscheidender Bedeutung für die öffentliche Gesundheit. Darüber hinaus sind Mauszellen ein nützliches Modellsystem zur Untersuchung von Brustkrebs und dessen Fortschreiten.
Der In-vitro-Invasionstest basiert auf der Boyden Chamber Assembly, wo zweiKammern von Wachstumsmedien durch eine poröse Membran 3 getrennt sind. Um die Tumormikroumgebung nachzuahmen, ist ein proteinreiches Gel auch enthalten, um Zellen in einer Kammer von einem Chemoattractant in der anderen zu trennen und als Kellermembranbarriere zu fungieren. Um zum Chemoattractant zu wandern, müssen die Zellen zuerst die proteinreiche Barriere passieren und dann die poröse Membran passieren - ein Prozess, der der Art und Weise entspricht, wie metastasierende Zellen durch Stroma wandern. Das proteinreiche Gel kann je nach den Erfordernissen des Experiments verändert werden, besteht aber in der Regel aus Kollagen oder Kellermembranextrakt (z.B. Matrigel)4. Es ist eine komplexe Mischung aus Proteinen, Proteoglykanen und Wachstumsfaktoren, besteht aber hauptsächlich aus Lamininen und Kollagen IV 4,5. Die Zellen müssen dann eine poröse Membran passieren, die typischerweise aus Polycarbonat, Polyester oder Polytetrafluorethylen (PTFE) besteht. Membranen können kommerziell mit oder ohne Proteingel (typischerweise Kollagene) oder das Gel separat erworben und hinzugefügt werden. Die Porengröße kann basierend auf der Zellgröße angepasst werden. Während Porengrößen von 0,4 - 8,0 m erhältlich sind, sind nur Poren von 3,0 - 8,0 m groß genug für die Zellmigration. Der Invasionstest wurde verwendet, um die Wirksamkeit von Inhibitoren auf die Fähigkeit der Zellen zu migrieren und einzudringen zu bestimmen. Obwohl die genaue Tumor-Mikroumgebung fehlt, die in vivo vorhanden ist, ist der In-vitro-Invasionstest vorteilhaft beim Screening vieler Bedingungen in kurzer Zeit und minimiert gleichzeitig den Bedarf an Tiermodellen. Das Ziel dieser Experimente ist es, die Genexpression vermuteter Onkogene zu vergleichen und die Auswirkungen auf das Verhalten von Krebszellen und die Aggressivität von Krankheiten mithilfe des In-vitro-Invasionstests und anderer Tests zu bestimmen. Insgesamt liefert der Invasionstest konsistente, quantitative und schnelle Ergebnisse zur Bestimmung des metastasierenden Potenzials und ist gleichzeitig eine relativ kostengünstige, unkomplizierte und anpassungsfähige Methode.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>24-well plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353504</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimycotic (100X)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>15240062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BALB/c mice</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture Incubator</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture Treated Flasks</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clinical cenrifuge</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swab</td>
			<td>Puritan</td>
			<td>25-806</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Crystal Violet</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C0775</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distilled water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>10566-016</td>
			<td>high glucose, GlutaMAX</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F2442-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forcepts</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Slide</td>
			<td>VWR</td>
			<td>16004-422</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>14025076</td>
			<td>no calcium, no magnesium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemocytometer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imersion oil</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Invasion Chambers (24-well)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354480</td>
			<td>Cat. #354481 for 6-well</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light Microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine Transfection Reagent</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel, disposable</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>#11</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>shRNA</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Transfer pipet</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>25200056</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the use of mouse mammary tumor cells in an in vitro invasion assay as a measure of oncogenic cell behavior

Der In-vitro-Invasionstest verwendet eine proteinreiche Matrix in einer Boyden-Kammer, um die Fähigkeit kultivierter Zellen zu messen, die Matrix und eine poröse Membran in einem Prozess zu durchlaufen, der den anfangsen Schritten der Metastasierung von Krebszellen entspricht. Die getesteten Zellen können für die Genexpression verändert oder mit Inhibitoren behandelt werden, um Veränderungen im Invasionspotenzial zu testen. Dieses Experiment testet den aggressiven Phänotyp der Maus-Mammary-Tumorzellen, um die potenziellen Onkogene zu entdecken und zu charakterisieren, die die Zellinvasion fördern. Diese Technik kann jedoch vielseitig einsetzbar sein und an viele verschiedene Anwendungen angepasst werden. Das Experiment selbst kann an einem Tag durchgeführt werden und die Ergebnisse werden durch Lichtmikroskopie in weniger als einem Tag erfasst. Die Ergebnisse umfassen die Anzahl der eindringenden Zellen für den Vergleich und die Analyse. Der In-vitro-Invasionstest ist eine schnelle, kostengünstige und klare Methode zur Bestimmung des Zellverhaltens in einer Kultur, die als erste Bewertung verwendet werden kann, bevor sie mehr an vivo-Assays beteiligt ist.

Diese Methode der In-vitro-Invasion durch eine Proteinmatrix wurde verwendet, um die aggressiven Phänotypen und das onkogene Zellverhalten von Maus-Mamma-Tumorzellen mit veränderter Expression des Zinkfingerproteins ZC3H88zu bewerten. In Verbindung mit anderen Ansätzen, die auch die Zellmigration und das Wachstum in 3D-Umgebungen untersuchen, wurde festgestellt, dass höhere Expressionsniveaus von Zc3h8 in Tumorzelllinien oder durch promotoriver vermittelte Expr...

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The Use of Mouse Mammary Tumor Cells in an In Vitro Invasion Assay as a Measure of Oncogenic Cell Behavior

Der In-vitro-Zellinvasionstest wird verwendet, um das Potenzial von Krebsmetastasen zu messen, indem das zelluläre Potenzial für Invasion und Migration mithilfe von Zellkultureinsätzen, die Proteinmatrix enthalten, quantifiziert wird. Die Zellen werden herausgefordert, durch die Proteinmatrix und eine poröse Membran in Richtung eines Chemoattractants zu wandern und dann durch Lichtmikroskopie quantifiziert zu werden.

Die Verwendung von Maus-Mammary-Tumorzellen in einem In-Vitro-Invasions-Assay als Maß für das onkogene Zellverhalten

The in vitro invasion assay uses a protein-rich matrix in a Boyden chamber to measure the ability of cultured cells to pass through the matrix and a ...

Dieses Protokoll, der In-vitro-Invasionstest, ist ein nützliches Werkzeug zur quantitativen Messung der Fähigkeit einer Zelllinien, durch eine proteinreiche Matrix zu wandern und eine poröse Membran zu durchlaufen, in einem Prozess, der den frühen Stadien der Krebszellinvasion ähnelt. Diese Zelllinien können genetisch verändert werden, um ein Gen zu übertragen oder die Expression eines Gens zu reduzieren, um festzustellen, ob dieses Gen eine Rolle bei der Zellmigration oder Zellinvasion spielt. Viele aggressive Krebsarten beinhalten dramatische Veränderungen im Zellverhalten, einschließlich erhöhter Migration und Invasion.Dieser In-vitro-Invasionstest kann es uns ermöglichen, die Gene und andere Faktoren, die an diesem Prozess beteiligt sind, besser zu verstehen. Um dieses Verfahren zu beginnen, wachsen anhimante Maus-Mammary-Tumorzellen in einem T25-Kolben bei 37 Grad Celsius mit 5% Kohlendioxid und 100% Luftfeuchtigkeit, bis sie 70% bis 90% konfluent für tag eins des Experiments sind. Holen Sie die Boyden Kammereinsätze aus dem Lager und übertragen Sie sie auf eine Zellkulturhaube, um sie für 20 Minuten auf Raumtemperatur zu erwärmen.Verwenden Sie drei Einfügungen, um statistisch gültige Daten für jede Zelllinie für jedes Experiment zu generieren. Und dann 500 Mikroliter des vorgewärmten serumfreien DMEM-Mediums zu den Einsätzen geben, so dass die poröse Membran und das Gel beidseitig hydratisiert sind. Bei 37 Grad Celsius mit 5% Kohlendioxid und 100% Luftfeuchtigkeit für mindestens zwei Stunden inkubieren.Danach bereiten Sie die Zellen vor, indem Sie die Wachstumsmedien entfernen und die Zellen mit fünf Millilitern HBSS spülen. Entfernen Sie den HBSS und fügen Sie einen Milliliter 0,25%trypsin EDTA Lösung hinzu. Inkubieren Sie bei 37 Grad Celsius für ein bis fünf Minuten oder bis Zellen gerundet erscheinen oder Anzeichen einer Ablösung zeigen.Tippen Sie dann vorsichtig auf den Kolben, um alle Zellen zu lösen. Setzen Sie die Zellen in fünf Milliliter DMEM mit 10%FBS wieder aus. Und übertragen Sie die Zellsuspension in ein steriles 15 Milliliter Zentrifugenrohr.Zentrifugieren Sie die Zellen und 1000 mal g für fünf Minuten, um die Zellen sanft zu pellet. Entfernen Sie das Medium und setzen Sie das Pellet in fünf Milliliter serumfreiem DMEM wieder auf. Wiederholen Sie die Zentrifugation und den Wiederaussetzungsprozess zwei weitere Male für insgesamt drei Wäbungen.Danach setzen Sie die Zellen in den letzten fünf Millilitern serumfreiem DMEM gründlich wieder auf und stellen Sie sicher, dass es keine Zellklumpen gibt. Verwenden Sie ein Hämozytometer, um die Zellkonzentration zu bestimmen, um sicherzustellen, dass nur lebensfähige Zellen zählen. Und verdünnen Sie die Zellsuspension auf 50.000 Zellen pro Milliliter in fünf Milliliters serumfreiem DMEM.Als nächstes entfernen Sie die Schale mit den Einsätzen aus dem Inkubator, und saugen Sie das Medium vorsichtig von einem Einsatz ab. Heben Sie den Einsatz an und aspirieren Sie die Medien aus dem Brunnen. Schnell arbeiten, fügen Sie das Chemoattractant in die untere Kammer.Legen Sie den Einsatz in den Brunnen, und für eine 24 Brunnenschale, fügen Sie 500 Mikroliter der Zellsuspension auf den Einsatz. Stellen Sie sicher, dass auf beiden Seiten der Membran keine Luftblasen vorhanden sind. Bringen Sie das Gericht für 22 Stunden in den Zellkultur-Inkubator zurück.Nach 22 Stunden eine Lösung aus 1%Paraformaldehyd und einem X PBS zur Fixierung vorbereiten. In einem sauberen 24 Gut-Zell-Kultur-Gericht, fügen Sie einen Milliliter des Fixativs zu einzelnen Brunnen, so gibt es einen Brunnen für jeden Einsatz. Bereiten Sie dann die Färbelösung von 0,1% Kristallviolett in einer Lösung von PBS mit 10% Ethanol vor.Fügen Sie einen Milliliter dieser Färbelösung zu einem sauberen Brunnen für jeden Einsatz hinzu. Entfernen Sie mit Zangen jede Einfügung nacheinander. Legen Sie einen sterilen Wattestäbchen in jeden Einsatz und wischen Sie die Oberseite der Membran ab, um alle nicht migrierten Zellen zu entfernen.Wiederholen Sie diesen Vorgang mit einem zweiten Wattestäbchen. Entfernen Sie als Nächstes alle verbleibenden Medien von der Innenseite des Einsatzes, und fügen Sie 750 Mikroliter PBS hinzu, um alle abgetrennten Zellen wegzuwaschen. Entfernen Sie die PBS und wiederholen Sie die Wäsche mit frischen PBS.Legen Sie dann den Einsatz in einen Brunnen, der Fixativ enthält, um die migrierten Zellen auf der Unterseite der Membran zu fixieren. Wiederholen Sie diesen Vorgang für alle Einsätze und lassen Sie die Einsätze 15 Minuten bei Raumtemperatur fixieren. Danach entfernen Sie jeden Einsatz nacheinander aus seinem Brunnen und waschen Sie ihn mit 750 Mikroliter PBS.Legen Sie den Einsatz in eine gut enthaltende Färbelösung und lassen Sie ihn 15 Minuten lang, um alle migrierten und festen Zellen zu färben. Entfernen Sie dann die Einsätze und tauchen Sie sie in einen Becher mit destilliertem Wasser, bis das Wasser, das von der Einlage abfließt, klar ist. Entfernen Sie überschüssige Wassertröpfchen und legen Sie den Einsatz seitlich auf ein Stück Filterpapier.Lassen Sie die Einsätze lufttrocknen. Bereiten Sie die Membran für die Bildgebung vor, indem Sie für jeden Einsatz ein sauberes Glasmikroskopdia beschriften und einen kleinen Tropfen Mikroskop-Tauchöl in die Mitte jedes Dias legen. Mit einem Skalpell um den Umfang der Membran auf der Innenseite des Kunststoffeinsatzes schneiden, um die Membran zu lösen.Verwenden Sie Zangen, um die Membran zu entfernen und auf den Öltropfen auf dem beschrifteten Schlitten zu legen. Mit einem zusammengesetzten Mikroskop können Sie Zellen fünfmal, zehnmal oder 20-mal vergrößern. Nehmen Sie zur Quantifizierung mehrere nicht überlappende Bilder bei der 10-fachen Vergrößerung.Bestimmen Sie die Gesamtzahl der einfallenden Zellen oder Zellen pro Fläche für alle Proben. Führen Sie für jedes Experiment jede Bedingung im Test mit drei Replizierenvoneinsätzen aus und wiederholen Sie sie mehrmals, um statistisch nützliche Ergebnisse zu erzielen. In dieser Studie wird die In-vitro-Invasion durch eine Proteinmatrix verwendet, um die aggressiven Phänotypen in onkogenen Zellverhalten von Maus-Mammary-Tumorzellen mit veränderter Expression des Zinkfingerproteins Zc3h8 zu bewerten.Höhere Konzentrationen der Zc3h8-Expression werden in Tumorzelllinien oder durch Promotor vermittelte Expression eines Plasmids gesehen, was zu schnellen Raten der Zellproliferation, schneller Migration, Wachstum in 3D-Umgebungen und erhöhtem Eindringen in den In-vitro-Invasionstest führt. Umgekehrt führt eine verminderte Expression durch shRNA-Konstrukte zu weniger aggressiver Proliferation, Migration und Invasion. Während die Zellinvasion nach shRNA-Knockdown des Zc3h8-Ausdrucks abnimmt, wird diese Invasion gerettet, wenn der Ausdruck gerettet wird.Die In-vitro-Invasions-Assay-Technik ist äußerst nützlich, da sie ein schneller, kostengünstiger, flexibler und relativ einfacher Ansatz zur Untersuchung des Zellverhaltens ist. Zellen, die in der Kultur angebaut werden, sind leicht genetisch zu manipulieren. Sie können sogar auf spezifische Mutationen getestet werden.Das In-vitro-Invasionssystem ermöglicht auch die Analyse von kleinen Molekülinhibitoren sowie biologischen Wirkstoffen wie Mikro-RNAs für ihre Auswirkungen auf die Zellmigration und -invasion. Dieser Test beinhaltet auch eine große Flexibilität, die eine Veränderung des Proteingehalts der Matrix, Porengröße und Chemoattractant ermöglicht.

Research

JoVE Journal

Genetics

Rearing and Double-stranded RNA-mediated Gene Knockdown in the Hide Beetle, Dermestes maculatus

Rearing and Double-stranded RNA-mediated Gene Knockdown in the Hide Beetle, Dermestes maculatus

Zucht- und RNA-vermittelte Gene Knockdown in der ausblenden Doppelstrang-Käfer,<em&gt; Dermestes maculatus</em

Advances in genomics have raised the possibility of probing biodiversity at an unprecedented scale. However, sequence alone will not be informative ...

Forschung

Genetik

Detection of Copy Number Alterations Using Single Cell Sequencing

Der Nachweis von Copy Number Änderungen Single Cell-Sequenzierung

Detection of genomic changes at single cell resolution is important for characterizing genetic heterogeneity and evolution in normal tissues, cancers, and ...

In Vitro Bioluminescence Assay to Characterize Circadian Rhythm in Mammary Epithelial Cells

In Vitro Bioluminescence Assay to Characterize Circadian Rhythm in Mammary Epithelial Cells

In-vitro- Biolumineszenz-Assay zirkadianen Rhythmus in Mamma Epithelzellen zu charakterisieren

The circadian rhythm is a fundamental physiological process present in all organisms that regulates biological processes ranging from gene expression to ...

Profiling DNA Replication Timing Using Zebrafish as an In Vivo Model System

Profiling DNA Replication Timing Using Zebrafish as an In Vivo Model System

DNA-Replikation Timing mit Zebrafisch als ein In Vivo Modell-System-Profiling

DNA replication timing is an important cellular characteristic, exhibiting significant relationships with chromatin structure, transcription, and DNA ...

Formaldehyde-assisted Isolation of Regulatory Elements to Measure Chromatin Accessibility in Mammalian Cells

Formaldehyd-gestützte Isolation regulatorischer Elemente auf die Maßnahme Chromatin Barrierefreiheit in Säugerzellen

Appropriate gene expression in response to extracellular cues, that is, tissue- and lineage-specific gene transcription, critically depends on highly ...

Using In Vitro and In-cell SHAPE to Investigate Small Molecule Induced Pre-mRNA Structural Changes

Mit In-vitro- und In der Zelle Form zu untersuchen, kleines Molekül induzierte Pre-mRNA Strukturveränderungen

In the process of drug development of RNA-targeting small molecules, elucidating the structural changes upon their interactions with target RNA sequences ...

Characterizing Histone Post-translational Modification Alterations in Yeast Neurodegenerative Proteinopathy Models

Charakterisierung von Histon Post-translationale Modifikation Veränderungen in Hefe Neurodegenerative Proteinopathy Modelle

Neurodegenerative diseases, such as amyotrophic lateral sclerosis (ALS) and Parkinson&#39;s disease (PD), cause the loss of hundreds of thousands of lives ...

Determining the Egg Fertilization Rate of Bemisia tabaci Using a Cytogenetic Technique

Determining the Egg Fertilization Rate of Bemisia tabaci Using a Cytogenetic Technique

Festsetzung des Ei Befruchtung Tabak Tabaci mit einer zytogenetischen Technik

A few species of sap-sucking whiteflies are some of the most damaging terrestrial pests worldwide because of the crop damage they inflict and plant ...

An In Vitro Protocol for Evaluating MicroRNA Levels, Functions, and Associated Target Genes in Tumor Cells

Ein In-Vitro-Protokoll zur Bewertung von MicroRNA-Spiegeln, -Funktionen und assoziierten Zielgenen in Tumorzellen

MicroRNAs (miRNAs) are small regulatory RNAs which are recognized to modulate numerous intracellular signaling pathways in several diseases including ...

Use of Frozen Tissue in the Comet Assay for the Evaluation of DNA Damage

Verwendung von gefrorenem Gewebe im Kometentest zur Bewertung von DNA-Schäden

The comet assay is gaining popularity as a means to assess DNA damage in cultured cells and tissues, particularly following exposure to chemicals or other ...