Name: evaluation of protein&#8211;protein interactions using an on-membrane digestion technique
Uploaded: 2019-07-19T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Evaluation of ProteinÃ¢â‚¬â€œProtein Interactions using an On-Membrane Digestion Technique at JoVE.com

Это исследование было частично поддержано Японским обществом содействия науке KAKENHI Грант номер 17K09869 (к AM), Японское общество по содействию науки KAKENHI Грант номер 15K09418 (к TM), научно-исследовательский грант от Kanehara Ichiro Медицинский научный фонд и исследовательский грант от Мемориального фонда Suzuken (все - Tm).

1. Иммунопрециция
ПРИМЕЧАНИЕ: Мы использовали не натрий додецил сульфат (SDS) лиза буфера и цитрат elution, как описано в следующих разделах. Однако использование альтернативного метода иммунопреципиции может быть также применимо для подготовки образцов LC-MS/MS.
<ol><li>Трансфект ...

<ol>
	<li>Thommen, M., Holtkamp, W., Rodnina, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-translational+protein+folding:+progress+and+methods.">Co-translational protein folding: progress and methods.</a> Current Opinion in Structural Biology. 42, 83-89 (2017).</li><li>Miyazaki, T., Miyazaki, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defective+protein+catabolism+in+atherosclerotic+vascular+inflammation.">Defective protein catabolism in atherosclerotic vascular inflammation.</a> Frontiers in Cardiovascular Medicine. 4, 79 (2017).</li><li>Miyazaki, T., Miyazaki, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysregulation+of+calpain+proteolytic+systems+underlies+degenerative+vascular+disorders.">Dysregulation of calpain proteolytic systems underlies degenerative vascular disorders.</a> Journal of Atherosclerosis and Thrombosis. 25 (1), 1-15 (2018).</li><li>Steckelberg, A. L., Boehm, V., Gromadzka, A. M., Gehring, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CWC22+connects+pre-mRNA+splicing+and+exon+junction+complex+assembly.">CWC22 connects pre-mRNA splicing and exon junction complex assembly.</a> Cell Reports. 2 (3), 454-461 (2012).</li><li>Turriziani, B., von Kriegsheim, A., Pennington, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein-protein+interaction+detection+via+mass+spectrometry-based+proteomics.">Protein-protein interaction detection via mass spectrometry-based proteomics.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 919, 383-396 (2016).</li><li>Obama, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+modified+apolipoprotein+B-100+structures+formed+in+oxidized+low-density+lipoprotein+using+LC-MS/MS.">Analysis of modified apolipoprotein B-100 structures formed in oxidized low-density lipoprotein using LC-MS/MS.</a> Proteomics. 7 (13), 2132-2141 (2007).</li><li>Matsudaira, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sequence+from+picomole+quantities+of+proteins+electroblotted+onto+polyvinylidene+difluoride+membranes.">Sequence from picomole quantities of proteins electroblotted onto polyvinylidene difluoride membranes.</a> The Journal of Biological Chemistry. 262 (21), 10035-10038 (1987).</li><li>Yamaguchi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+method+for+N-terminal+sequencing+of+proteins+by+MALDI+mass+spectrometry.">High-throughput method for N-terminal sequencing of proteins by MALDI mass spectrometry.</a> Analytical Chemistry. 77 (2), 645-651 (2005).</li><li>Iwamatsu, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=S-carboxymethylation+of+proteins+transferred+onto+polyvinylidene+difluoride+membranes+followed+by+in+situ+protease+digestion+and+amino+acid+microsequencing.">S-carboxymethylation of proteins transferred onto polyvinylidene difluoride membranes followed by in situ protease digestion and amino acid microsequencing.</a> Electrophoresis. 13 (3), 142-147 (1992).</li><li>Strader, M. B., Tabb, D. L., Hervey, W. J., Pan, C., Hurst, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+and+specific+trypsin+digestion+of+microgram+to+nanogram+quantities+of+proteins+in+organic-aqueous+solvent+systems.">Efficient and specific trypsin digestion of microgram to nanogram quantities of proteins in organic-aqueous solvent systems.</a> Analytical Chemistry. 78 (1), 125-134 (2006).</li><li>Miyazaki, T., Miyazaki, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+roles+of+calpain+proteolytic+systems+in+macrophage+cholesterol+handling.">Emerging roles of calpain proteolytic systems in macrophage cholesterol handling.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 74 (16), 3011-3021 (2017).</li><li>Miyazaki, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calpain-6+confers+atherogenicity+to+macrophages+by+dysregulating+pre-mRNA+splicing.">Calpain-6 confers atherogenicity to macrophages by dysregulating pre-mRNA splicing.</a> Journal of Clinical Investigation. 126 (9), 3417-3432 (2016).</li><li>Tonami, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calpain-6,+a+microtubule-stabilizing+protein,+regulates+Rac1+activity+and+cell+motility+through+interaction+with+GEF-H1.">Calpain-6, a microtubule-stabilizing protein, regulates Rac1 activity and cell motility through interaction with GEF-H1.</a> Journal of Cell Science. 124 (Pt 8), 1214-1223 (2011).</li><li>Rodnina, M. V., Wintermeyer, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+elongation,+co-translational+folding+and+targeting.">Protein elongation, co-translational folding and targeting.</a> Journal of Molecular Biology. 428 (10 Pt B), 2165-2185 (2016).</li><li>Bunai, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomic+analysis+of+acrylamide+gel+separated+proteins+immobilized+on+polyvinylidene+difluoride+membranes+following+proteolytic+digestion+in+the+presence+of+80%+acetonitrile.">Proteomic analysis of acrylamide gel separated proteins immobilized on polyvinylidene difluoride membranes following proteolytic digestion in the presence of 80% acetonitrile.</a> Proteomics. 3 (9), 1738-1749 (2003).</li></ol>

Ранее мы описали анализ окислительных модификаций аполипопротеина B-100 в окисленном липопротеине низкойплотности с использованием LC-MS/MS, предшествовавшего методу переваривания на мембране 6. В настоящем исследовании мы объединили эту технику с иммунопрецицией и выявили н...

Хотя белки играют составную роль в живых организмах, они постоянно синтезируются, обрабатываются и деградируют во внутриклеточной среде. Кроме того, внутриклеточные белки часто физически и биохимически взаимодействуют, чтовлияет на функцию одного или обоих 1,2,3. Например, для сборки комплекса экзонических соединений соединения4необходима прямая привязка сплайсцео-связанного белка омолога CWC22 с эукариотическим фактором инициации перевода 4A3 (eIF4A3). В соответствии с этим, eIF4A3 мутант, который не хватает сродства к CWC22 не может облегчить экзон соединения комплексного мРНК сращивания4. Таким образом, изучение белковых взаимодействий имеет решающее значение для точного понимания физиологических регуляции, а также клеточных функций.
Последние достижения в области масс-спектрометрии (МС) были применены к комплексному анализу белково-белковых взаимодействий. Например, совместное выпадение эндогенных белков или экзогенно введенных помеченных белков с их сопутствующими белками, а затем анализ MS, позволяет выявить новые взаимодействия белка5. Тем не менее, одним из основных узких мест MS / MS анализа является плохое восстановление от триптических дайджестов белковых образцов. Для проведения протеомического анализа на клеточных лизатах, в геле и на мембранном пищеварении методы, как правило, используются для подготовки MS / MS образцов. Ранее мы сравнили процедуру переваривания в геле сметодом пищеварения 6, и показали, что последняя была связана с лучшим покрытием последовательности. Поливилиден дифлуорид (PVDF) мембрана может быть подходящим для этой цели, потому что это механически надежный и устойчивый к высоким концентрациям органических растворителей7,8, что позволяет ферментативное пищеварение обездвижемых белки в присутствии 80% ацетонитрила9. Кроме того, иммобилизация на мембране может вызвать конформанционные изменения в целевых белков, что приводит к улучшению эффективности триптического пищеварения10. Соответственно, в этой статье мы описали использование иммунопреципиции-LC/MS/MS анализа белковых взаимодействий с использованием метода пищеварения на мембране. Этот простой метод облегчает удобный анализ белково-белковых взаимодействий даже в неспециализированных лабораториях.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acetonitrile</td>
			<td>Wako</td>
			<td>014-00386</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citric acid</td>
			<td>Wako</td>
			<td>030-05525</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DiNA</td>
			<td>KYA Tech Co.</td>
			<td></td>
			<td>nanoflow high-performance liquid chromatography</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DiNa AI</td>
			<td>KYA Tech Co.</td>
			<td></td>
			<td>nanoflow high-performance liquid chromatography equipped with autosampler</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DTT</td>
			<td>Nacalai tesque</td>
			<td>14112-94</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dynabeads protein G</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10003D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formic acid</td>
			<td>Wako</td>
			<td>066-00461</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HiQ Sil C18W-3</td>
			<td>KYA Tech Co.</td>
			<td>E03-100-100</td>
			<td>0.10mmID * 100mmL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodoacetamide</td>
			<td>Wako</td>
			<td>095-02151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine 3000</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>L3000008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Living Colors A.v. Monoclonal Antibody (JL-8)</td>
			<td>Clontech</td>
			<td>632380</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Wako</td>
			<td>191-01665</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NH4HCO3</td>
			<td>Wako</td>
			<td>018-21742</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nonidet P-40</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>N6507</td>
			<td>poly(oxyethelene) octylphenyl ether (n=9)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>peptide standard</td>
			<td>KYA Tech Co.</td>
			<td>tBSA-04</td>
			<td>tryptic digests of bovine serum albumin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PP vial</td>
			<td>KYA Tech Co.</td>
			<td>03100S</td>
			<td>plastic sample tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protease inhibitor cooctail</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P8465</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProteinPilot software</td>
			<td>Sciex</td>
			<td>5034057</td>
			<td>software for protein identification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sequencing Grade Modified Trypsin</td>
			<td>Promega</td>
			<td>V5111</td>
			<td>trypsin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium orthovanadate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S6508</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate dibasic dihydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>71643</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TFA</td>
			<td>Wako</td>
			<td>206-10731</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>trap column</td>
			<td>KYA Tech Co.</td>
			<td>A03-05-001</td>
			<td>0.5mmID * 1mmL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TripleTOF 5600 system</td>
			<td>Sciex</td>
			<td>4466015</td>
			<td>Hybrid quadrupole time-of-flight tandem mass spectrometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris</td>
			<td>Wako</td>
			<td>207-06275</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-20</td>
			<td>Wako</td>
			<td>160-21211</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

evaluation of protein&#8211;protein interactions using an on-membrane digestion technique

Многочисленные внутриклеточные белки физически взаимодействуют в соответствии с их внутриклеточными и внеклеточными обстоятельствами. Действительно, клеточные функции во многом зависят от внутриклеточного белково-белкового взаимодействия. Поэтому исследования, касающиеся этих взаимодействий, необходимы для облегчения понимания физиологических процессов. Совместное выпадение связанных белков, за которым и начинается анализ масс-спектрометрии (МС), позволяет выявить новые белковые взаимодействия. В этом исследовании мы предоставили подробную информацию о новой технике иммунопреципиционно-жидкой хроматографии (LC)-MS/MS анализ в сочетании с имбрамбранным пищеварением для анализа белково-белковых взаимодействий. Этот метод подходит для грубых иммунопросицитантов и может улучшить пропускную работу протеомных анализов. Tagged рекомбинантные белки были осаждены с использованием конкретных антител; Далее иммунопроцициты, запятнанные на поливинилиденовые дифлуоридные мембранные части, подвергались редуктивной алкилированию. После трипсиизации, переваренные остатки белка были проанализированы с помощью LC-MS/MS. Используя эту технику, мы смогли определить несколько кандидатов, связанных белков. Таким образом, этот метод удобен и полезен для характеристики новых белково-белковых взаимодействий.

С помощью вышеописанной процедуры были проанализированы иммунопреципицианты с помощью LC-MS/MS(рисунок 1). После исключения экзогенно производных белков (белков других видов и IgGs), 17 белков были выявлены в calpain-6-ассоциированных иммунопреципицитов (Та?...

Watch this Scientific Journal Video about Evaluation of ProteinÃ¢â‚¬â€œProtein Interactions using an On-Membrane Digestion Technique at JoVE.com

Evaluation of ProteinÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â‚¬Å“Protein Interactions using an On-Membrane Digestion Technique

Здесь мы представляем протокол для метода он-мембранного пищеварения для подготовки образцов для массовой спектрометрии. Этот метод облегчает удобный анализ белково-белковых взаимодействий.

Оценка взаимодействия белкови-белков с использованием метода пищеварения On-Membrane

Numerous intracellular proteins physically interact in accordance with their intracellular and extracellular circumstances. Indeed, cellular functions ...

Исследование взаимодействия белка и белка необходимо для понимания физиологических процессов в нескольких сферах. В этом видео мы вводим на мембране метод пищеварения, который позволяет исследователям выполнять всеобъемлющий анализ связывающих белков MS в удобной манере. Основным преимуществом этой методики является то, что мы можем улучшить пропускную способность протеомного анализа на грубые иммунопреципианты, потому что разделение белков полиакриламинидным гель электрофорезом не является необходимым.Начните спряжение антитела к магнитным бусинкам, смешивая анти-GFP антитела с бисером в 500 микролитров фосфатного буфера цитрата. Поверните смесь при температуре 50 об/мин в течение одного часа при комнатной температуре. А затем мыть конъюгированные бусы три раза с цитрат фосфат буфер, содержащий 1%полисорбат 20.Lyse трансфицированных клеток в соответствии с рукописными указаниями. Очисти блюдо и перенесите лисат в 1,5 миллилитровую пробирку. Затем очистить лизат путем центрифугирования на 15000 х г в течение пяти минут и собирать супернатант.Подготовье неотрещенных магнитных бусин, мыть их три раза с 500 микролитров цитрат фосфатного буфера. После окончательной стирки снимите буфер и добавьте лисат ячейки к бисеру. Поверните смесь при температуре 50 об/мин в течение 30 минут при комнатной температуре.Выполните магнитное разделение на магнитной подготе и соберите лисат клетки. Чтобы связать целевые белки с конъюгированными бусинами иммуноглобулина, поместите шарики на магнитную подстворку в течение пяти минут. Отбросьте буфер цитрата и добавьте лизат клетки к бисеру.Поверните смесь в течение одного часа при 50 об/мин. Чтобы отделить целевые белки от свободных нецелесочных белков, мыть бисер три раза с 500 микролитров фосфатного буфера, содержащего 1%полисорбат 20. После окончательной стирки добавьте 30 микролитров буфера цитратов и дайте бисеру сидеть в течение пяти минут при комнатной температуре, чтобы утоить целевые белки.Чтобы подготовить мембрану, разрежьте мембраны PVDF на 3 миллиметра на 3 миллиметра с помощью хирургических ножниц, которые были очищены непосредственно перед использованием. Поместите кусочки мембраны на алюминиевую фольгу и добавьте два-пять микролитров этанола к каждому куску. Прежде чем мембраны полностью высохнут, добавьте к каждому куску от двух до пяти микролитров белка элюента и высушите их до тех пор, пока поверхность мембраны не станет матовой.Затем перенесите мембраны в 1,5 миллилитровые трубки и храните их при четырех градусах Цельсия. При немедленном использовании добавьте от двух до 30 микролитров этанола, которые сделают их гидрофильные. Удалите этанол с пипеткой, но прежде чем мембраны высохнут, полностью добавьте 200 микролитров раствора реакции на основе DTT в каждую трубку, и инкубировать их при 56 градусах по Цельсию в течение одного часа.После инкубации замените раствор реакции 300 микролитров раствора идоацетамида и инкубировать в темноте в течение 45 минут. Затем мыть мембраны дважды с дистиллированной водой и один раз с 2%acetonitrile путем вихря, по крайней мере десять секунд. Работа с диафанным ацетонитрилом может быть чрезвычайно опасной.Маску, очки и перчатки всегда следует носить при выполнении процедуры пищеварения на мембране. Приготовьте трипсин в соответствии с рукописными указаниями и добавьте 100 микролитров трипсинной реакции раствора к каждой мембране. Инкубировать на ночь при 37 градусах по Цельсию для пищеварения.На следующий день перенесите раствор реакции в чистую 1,5 миллилитровую трубку и добавьте в мембрану 100 микролитров растворов для мытья. Инкубировать мембрану при 60 градусах по Цельсию в течение двух часов, затем собрать раствор для мытья и смешать его с реакционным раствором. Добавьте еще 100 микролитров раствора для мытья в мембрану и sonicate его в течение 10 минут.Затем соберите раствор для мытья и смешайте его с реакционным раствором. Обложка пробирку с куском лабораторной пленки и сделать небольшие отверстия в пленке с иглой. Высушите раствор с помощью вакуумного концентратора и растворите остаток в 10 микролитров 2%-процентной кислоты.Центрифуга трубки на 12000 х г в течение трех минут, и передать супернатант в образец трубки. Проанализируйте образец с помощью масс-спектрометра, связанного с системой nano LC/HPLC. Используя этот протокол, 17 белков были определены в Calpain-6 связанных иммунопреципиентов, 15 в GFP связанных иммунопреципиента, и 11 были определены в обоих.Важно отметить, что обнаружение по крайней мере одного высокой точности пептидного фрагмента требуется для положительной идентификации белка-кандидата. Белки, которые осаждались в лисате GFP-экспрессирования, а также гистоны, экзогенные и рибосомные белки были исключены из списка. Мытье мембран перед триптическим пищеварением с дистиллированной водой и 2%acetonitrile является наиболее важным шагом в процедуре переваривания на мембране над белками.Следуя этому методу, можно подтвердить совместное выпадение целевого белка путем проведения других экспериментов, таких как иммунопреципиентация и западный анализ помарки. Этот простой метод позволяет исследователям исследовать новые белково-белковые взаимодействия с удобным и высокочувствительным анализом.

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Cell Biology

Biochemistry

Evaluation of Protein&#8211;Protein Interactions using an On-Membrane Digestion Technique

Unit 1

Protein Function

SCIENTISTS IN ACTION

An Efficient Method for the Synthesis of Peptoids with Mixed Lysine-type/Arginine-type Monomers and Evaluation of Their Anti-leishmanial Activity

Эффективный метод синтеза Пептоиды с мономерами смешанного типа Лизин / аргинин-типа и оценки их Анти-leishmanial деятельности

This protocol describes the manual solid-phase synthesis of linear peptoids that contain two differently functionalized cationic monomers. In this ...

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

Используя строительные леса, липосом Развести липидами проксимальный белок-белковых взаимодействий<em&gt; In Vitro</em

Studies of integral membrane proteins in vitro are frequently complicated by the presence of a hydrophobic transmembrane domain. Further complicating ...

Mapping the Binding Site of an Aptamer on ATP Using MicroScale Thermophoresis

Картирование участок связывания аптамер на АТФ Использование Microscale Термофорез

Characterization of molecular interactions in terms of basic binding parameters such as binding affinity, stoichiometry, and thermodynamics is an ...

Time-resolved ElectroSpray Ionization Hydrogen-deuterium Exchange Mass Spectrometry for Studying Protein Structure and Dynamics

Времяразрешенная ионизацией электрораспылением водорода дейтерий Обмен масс-спектрометрии для изучения белка структуры и динамики

Intrinsically disordered proteins (IDPs) have long been a challenge to structural biologists due to their lack of stable secondary structure elements. ...

Force Spectroscopy of Single Protein Molecules Using an Atomic Force Microscope

Спектроскопия силы одного белковых молекул с помощью атомно-силового микроскопа

The determination of the folding process of proteins from their amino acid sequence to their native 3D structure is an important problem in biology. ...

Using Three-color Single-molecule FRET to Study the Correlation of Protein Interactions

С использованием трехцветной сингл молекула лад для изучения корреляции взаимодействий протеина

Single-molecule F&#246;rster resonance energy transfer (smFRET) has become a widely used biophysical technique to study the dynamics of biomolecules. For ...

Detection of Detergent-sensitive Interactions Between Membrane Proteins

Обнаружение моющих средств чувствительных взаимодействия между мембранные белки

Our ability to explore protein-protein interactions is the key to understanding regulatory connections in the cell. However, detection of protein-protein ...

Protein Digestion, Ultrafiltration, and Size Exclusion Chromatography to Optimize the Isolation of Exosomes from Human Blood Plasma and Serum

Переваривание белков, ультрафильтрации и гель-проникающей хроматографии размер для оптимизации изоляции Exosomes из человеческой плазмы крови и сыворотки

Exosomes, a type of nanovesicle released from all cell types, can be isolated from any bodily fluid. The contents of exosomes, including proteins and ...

Detection of Heterodimerization of Protein Isoforms Using an in Situ Proximity Ligation Assay

Detection of Heterodimerization of Protein Isoforms Using an in Situ Proximity Ligation Assay

Обнаружение Heterodimerization изоформ белка, используя Assay в Situ близости лигирование

Regulated protein-protein interactions are a guiding principle for many signaling events, and the detection of such events is an important element in ...