Name: real-time monitoring of human glioma cell migration on dorsal root ganglion axon-oligodendrocyte co-cultures
Uploaded: 2019-12-13T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Real-Time Monitoring of Human Glioma Cell Migration on Dorsal Root Ganglion Axon-Oligodendrocyte Co-Cultures at JoVE.com

وقد تم دعم هذا العمل من قبل الصناديق الداخلية لقسم جراحه المخ والأعصاب ، جامعه براون إلى N.T.

تمت الموافقة علي بروتوكولات جمع وعزل ونشر خلايا الورم الدبقيه البشرية المستمدة من المريض من قبل لجنه الهجرة والاستشفاء في مستشفي رود ايلاند. تم الحفاظ علي جميع الكائنات وفقا لدليل المعاهد القومية للصحة لرعاية واستخدام المختبرات الحيوانية. تمت الموافقة علي جميع بروتوكولات استخدام الحيو?...

<ol>
	<li>Stupp, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiotherapy+plus+concomitant+and+adjuvant+temozolomide+for+glioblastoma.">Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma.</a> New England Journal of Medicine. 352 (10), 987-996 (2005).</li><li>Stupp, R., Weber, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+radio-+and+chemotherapy+in+glioblastoma.">The role of radio- and chemotherapy in glioblastoma.</a> Onkologie. 28 (6-7), 315-317 (2005).</li><li>Wick, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathway+inhibition:+emerging+molecular+targets+for+treating+glioblastoma.">Pathway inhibition: emerging molecular targets for treating glioblastoma.</a> Neuro-Oncology. 13 (6), 566-579 (2011).</li><li>Friedl, P., Wolf, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumour-cell+invasion+and+migration:+diversity+and+escape+mechanisms.">Tumour-cell invasion and migration: diversity and escape mechanisms.</a> Nature Reviews Cancer. 3 (5), 362-374 (2003).</li><li>Lee, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+stem+cells+derived+from+glioblastomas+cultured+in+bFGF+and+EGF+more+closely+mirror+the+phenotype+and+genotype+of+primary+tumors+than+do+serum-cultured+cell+lines.">Tumor stem cells derived from glioblastomas cultured in bFGF and EGF more closely mirror the phenotype and genotype of primary tumors than do serum-cultured cell lines.</a> Cancer Cell. 9 (5), 391-403 (2006).</li><li>Visvader, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cells+of+origin+in+cancer.">Cells of origin in cancer.</a> Nature. 469 (7330), 314-322 (2011).</li><li>Morshead, C. M., van der Kooy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disguising+adult+neural+stem+cells.">Disguising adult neural stem cells.</a> Current Opinion in Neurobiology. 14 (1), 125-131 (2004).</li><li>Sanai, N., Alvarez-Buylla, A., Berger, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+stem+cells+and+the+origin+of+gliomas.">Neural stem cells and the origin of gliomas.</a> New England Journal of Medicine. 353 (8), 811-822 (2005).</li><li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+restricted+cell+population+propagates+glioblastoma+growth+after+chemotherapy.">A restricted cell population propagates glioblastoma growth after chemotherapy.</a> Nature. 488 (7412), 522-526 (2012).</li><li>Bao, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glioma+stem+cells+promote+radioresistance+by+preferential+activation+of+the+DNA+damage+response.">Glioma stem cells promote radioresistance by preferential activation of the DNA damage response.</a> Nature. 444 (7120), 756-760 (2006).</li><li>Beier, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD133(+)+and+CD133(-)+glioblastoma-derived+cancer+stem+cells+show+differential+growth+characteristics+and+molecular+profiles.">CD133(+) and CD133(-) glioblastoma-derived cancer stem cells show differential growth characteristics and molecular profiles.</a> Cancer Research. 67 (9), 4010-4015 (2007).</li><li>Armento, A., Ehlers, J., Schotterl, S., Naumann, U., De Vleeschouwer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Glioblastoma. , (2017).</li><li>Chedotal, A., Kerjan, G., Moreau-Fauvarque, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+brain+within+the+tumor:+new+roles+for+axon+guidance+molecules+in+cancers.">The brain within the tumor: new roles for axon guidance molecules in cancers.</a> Cell Death and Differentiation. 12 (8), 1044-1056 (2005).</li><li>Rao, S. S., Lannutti, J. J., Viapiano, M. S., Sarkar, A., Winter, J. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+3D+biomimetic+models+to+understand+the+behavior+of+glioblastoma+multiforme+cells.">Toward 3D biomimetic models to understand the behavior of glioblastoma multiforme cells.</a> Tissue Engineering Part B Reviews. 20 (4), 314-327 (2014).</li><li>Windebank, A. J., Wood, P., Bunge, R. P., Dyck, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelination+determines+the+caliber+of+dorsal+root+ganglion+neurons+in+culture.">Myelination determines the caliber of dorsal root ganglion neurons in culture.</a> Journal of Neuroscience. 5 (6), 1563-1569 (1985).</li><li>Wood, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Separation+of+functional+Schwann+cells+and+neurons+from+normal+peripheral+nerve+tissue.">Separation of functional Schwann cells and neurons from normal peripheral nerve tissue.</a> Brain Research. 115 (3), 361-375 (1976).</li><li>Rambukkana, A., Zanazzi, G., Tapinos, N., Salzer, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contact-dependent+demyelination+by+Mycobacterium+leprae+in+the+absence+of+immune+cells.">Contact-dependent demyelination by Mycobacterium leprae in the absence of immune cells.</a> Science. 296 (5569), 927-931 (2002).</li><li>Tapinos, N., Ohnishi, M., Rambukkana, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ErbB2+receptor+tyrosine+kinase+signaling+mediates+early+demyelination+induced+by+leprosy+bacilli.">ErbB2 receptor tyrosine kinase signaling mediates early demyelination induced by leprosy bacilli.</a> Nature Medicine. 12 (8), 961-966 (2006).</li><li>Chan, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NGF+controls+axonal+receptivity+to+myelination+by+Schwann+cells+or+oligodendrocytes.">NGF controls axonal receptivity to myelination by Schwann cells or oligodendrocytes.</a> Neuron. 43 (2), 183-191 (2004).</li><li>Dugas, J. C., Tai, Y. C., Speed, T. P., Ngai, J., Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+genomic+analysis+of+oligodendrocyte+differentiation.">Functional genomic analysis of oligodendrocyte differentiation.</a> Journal of Neuroscience. 26 (43), 10967-10983 (2006).</li><li>Ruffini, F., Arbour, N., Blain, M., Olivier, A., Antel, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinctive+properties+of+human+adult+brain-derived+myelin+progenitor+cells.">Distinctive properties of human adult brain-derived myelin progenitor cells.</a> American Journal of Pathology. 165 (6), 2167-2175 (2004).</li><li>Zepecki, J. P., Snyder, K. M., Moreno, M. M., Fajardo, E., Fiser, A., Ness, J., Sarkar, A., Toms, S. A., Tapinos, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+human+glioma+cell+migration,+tumor+growth,+and+stemness+gene+expression+using+a+Lck+targeted+inhibitor.">Regulation of human glioma cell migration, tumor growth, and stemness gene expression using a Lck targeted inhibitor.</a> Oncogene. 38, 1734-1750 (2018).</li><li>Chen, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Boyden+chamber+assay.">Boyden chamber assay.</a> Methods in Molecular Bioliogy. 294, 15-22 (2005).</li><li>Merz, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organotypic+slice+cultures+of+human+glioblastoma+reveal+different+susceptibilities+to+treatments.">Organotypic slice cultures of human glioblastoma reveal different susceptibilities to treatments.</a> Neuro-Oncology. 15 (6), 670-681 (2013).</li><li>Singh, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+human+brain+tumour+initiating+cells.">Identification of human brain tumour initiating cells.</a> Nature. 432 (7015), 396-401 (2004).</li><li>Aubert, M., Badoual, M., Christov, C., Grammaticos, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+for+glioma+cell+migration+on+collagen+and+astrocytes.">A model for glioma cell migration on collagen and astrocytes.</a> Journal of the Royal Society Interface. 5 (18), 75-83 (2008).</li><li>Jia, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+three-dimensional+collagen+scaffolds+on+the+expression+profiles+and+biological+functions+of+glioma+cells.">Effects of three-dimensional collagen scaffolds on the expression profiles and biological functions of glioma cells.</a> International Journal of Oncology. 52 (6), 1787-1800 (2018).</li><li>Kaphle, P., Li, Y., Yao, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mechanical+and+pharmacological+regulation+of+glioblastoma+cell+migration+in+3D+matrices.">The mechanical and pharmacological regulation of glioblastoma cell migration in 3D matrices.</a> Journal of Cellular Physiology. 234 (4), 3948-3960 (2019).</li><li>Gritsenko, P., Leenders, W., Friedl, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recapitulating+in+vivo-like+plasticity+of+glioma+cell+invasion+along+blood+vessels+and+in+astrocyte-rich+stroma.">Recapitulating in vivo-like plasticity of glioma cell invasion along blood vessels and in astrocyte-rich stroma.</a> Histochemistry and Cell Biology. 148 (4), 395-406 (2017).</li><li>Gritsenko, P. G., Friedl, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptive+adhesion+systems+mediate+glioma+cell+invasion+in+complex+environments.">Adaptive adhesion systems mediate glioma cell invasion in complex environments.</a> Journal of Cell Science. 131 (15), (2018).</li><li>Kaur, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cadherin-11,+a+marker+of+the+mesenchymal+phenotype,+regulates+glioblastoma+cell+migration+and+survival+in+vivo.">Cadherin-11, a marker of the mesenchymal phenotype, regulates glioblastoma cell migration and survival in vivo.</a> Molecular Cancer Research. 10 (3), 293-304 (2012).</li><li>Rao, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mimicking+white+matter+tract+topography+using+core-shell+electrospun+nanofibers+to+examine+migration+of+malignant+brain+tumors.">Mimicking white matter tract topography using core-shell electrospun nanofibers to examine migration of malignant brain tumors.</a> Biomaterials. 34 (21), 5181-5190 (2013).</li><li>Huang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+hydrogel+is+suitable+for+targeted+investigation+of+amoeboid+migration+of+glioma+cells.">Three-dimensional hydrogel is suitable for targeted investigation of amoeboid migration of glioma cells.</a> Molecular Medicine Reports. 17 (1), 250-256 (2018).</li></ol>

ويمكن اجراء دراسات الهجرة لعارضه باستخدام أنظمه غرفه Boyden أو اختبارات الصفر. ومع ذلك ، في حين ان هذه التجارب تفشل في إعطاء اي معلومات بشان تفاعلات الخلايا السرطانية مع الانسجه المحيطة الأخرى ، يمكن للنظام الحالي تلخيص تفاعلات GC مع ألياف النخاعية وغير النخاعية. وعلاوة علي ذلك ، لدراسة تكوين...

الورم المفلطح هو واحد من الأورام الأكثر عدوانيه وفتكا في الدماغ البشري. ويشمل المعيار الحالي للرعاية الاستئصال الجراحي للورم تليها الإشعاع1 زائد المصاحبة والاداريه المساعد لtemozolomide2. حتى مع هذا النهج متعدد العلاجية, تكرار الورم لا مفر منه3. ويرجع ذلك جزئيا إلى طبيعة الهجرة واسعه النطاق من الخلايا السرطانية ، التي تغزو الدماغ حمه خلق العديد من التوقعات مثل الاصبع داخل الدماغ4 التي تجعل استئصال كامل من غير المحتمل.
في السنوات الاخيره ، أصبح من الواضح ان العدوانية من الورم الدبلاستومي يرجع ، في جزء منه ، إلى وجود السكان من الخلايا الجذعية السرطانية داخل كتله الورم5،6، والتي تظهر احتمالات الهجرة عاليه7،8، مقاومه العلاج الكيميائي والإشعاع9،10 والقدرة علي تشكيلالأورامالثانوي GSCs هي قادره علي تلخيص الأورام متعددة الأضلاع الاصليه عندما xenografted إلى الفئران عاريه5.
وعلي الرغم من ثروة المعرفة المتعلقة بالخلفية الوراثية للأورام السرطانية ، فان الدراسات المتعلقة بالهجرة الخلوية (GC) تعرقل حاليا بسبب نقص الكفاءة في المختبر أو في نماذج الهجرة المجرية. وعلي وجه الخصوص ، في حين ان التفاعلات الخلوية المحورية المكونة من قبل العوامل الخلوية والبيئية تشكل عنصرا أساسيا في غزو الدروما ، فان معرفتنا لا يوجد حاليا اي نظام تجريبي مع القدرة علي نمذجة هذه التفاعلات12،13،14. لمعالجه هذا النقص ، قمنا بتطوير نظام الثقافة المجرية السابقة لعارضه الاوليه المشتركة مع المنقي DRG اكسون-oligodendrocytes التي تؤدي إلى ارتفاع التعبير عن علامات الورم المتمايزة ، فضلا عن الهجرة واسعه النطاق والتفاعل من عارضه مع ألياف النخاعية وغير النخاعي هذه المنصة المجرية السابقة ، بسبب تخطيطها مجزاه ، هو مناسبه لاختبار اثار المداواة الرواية علي أنماط الهجرة hGC.,

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>100 mm Suspension Culture Dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430591</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2.5S NGF</td>
			<td>ENVIGO</td>
			<td>B.5025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>60 mm Suspension Culture Dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430589</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACK Lysing Buffer</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>A1049201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium Hydroxide Solution</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A669-500</td>
			<td>Concentrated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal-Free Recombinant Human EGF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>AF-100-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal-Free Recombinant Human FGF-basic (154 a.a.)</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>AF-100-18B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-A2B5 MicroBeads, human, mouse, rat</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-093-392</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimycotic (100X)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>15240062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AutoMACS Rinsing Solution (PBS, pH 7.2)</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-091-222</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 Supplement</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>17504044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 Supplement, minus vitamin A</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>12587001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacteriological Plate</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>351029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>B4639</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Campenot Chamber</td>
			<td>Tyler Research</td>
			<td>CAMP-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture Dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430165</td>
			<td>35mm X 10mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Strainer</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352350</td>
			<td>70 uM, Nylon</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Strainer</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352340</td>
			<td>30 uM, Nylon</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase/Dispase</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11097113001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cultrex Rat Collagen I</td>
			<td>Trevigen</td>
			<td>3440-100-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Glucose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G5146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>10313021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase I</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D7291</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dow Corning High-Vacuum Grease</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-635-5D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 Forceps</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>E16 Timed Pregnant Sprague Dawley Rat</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EBSS</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E7510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGTA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E3889</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH30070.02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FUDR</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F0503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlutaMAX Supplement</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>35050061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ham&#39;s F-12 Nutrient Mix</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>11765054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>14175095</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostatic Forceps</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-7035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin Sodium Salt, 0.2% in PBS</td>
			<td>Stem Cell Technologies</td>
			<td>07980</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hypodermic Needle, 18G</td>
			<td>BD</td>
			<td>511097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin-Transferrin-Selenium G</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>41400045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Cysteine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C7477</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>25030081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leibovitz&#39;s L-15 Medium</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>11415064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MACS BSA Stock Solution</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-091-376</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MACS MultiStand</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-042-303</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>1190081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mg2SO4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M2643</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MiniMACS Separator</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-042-102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MS Columns plus tubes</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-041-301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NAC</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A8199</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neurobasal Medium</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>21103049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neurobasal-A Medium</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>10888022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ordinary forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P2 Sprague Dawley Rat Pups</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Papain</td>
			<td>Worthington</td>
			<td>LS003126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>15140148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pin Rake</td>
			<td>Tyler Research</td>
			<td>CAMP-PR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Progesterone</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P8783</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StemPro Accutase Cell Dissociation Reagent</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>A1110501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syrine Grease Applicator</td>
			<td>Tyler Research</td>
			<td>CAMP-GLSS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transferrin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T2036</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uridine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>U3003</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

real-time monitoring of human glioma cell migration on dorsal root ganglion axon-oligodendrocyte co-cultures

الورم المفلطح هو واحد من السرطانات البشرية الأكثر عدوانيه بسبب التغاير الخلوي واسعه النطاق وخصائص الهجرة من عارضه. من أجل فهم أفضل للأليات الجزيئية الكامنة وراء هجره خلايا الورم الدبقي ، من الضروري القدرة علي دراسة التفاعل بين عارضه والمحاور داخل البيئة المجهرية للورم. من أجل نمذجة هذا التفاعل الخلوي ، قمنا بتطوير نظام الثقافة المختلطة التي تتكون من عارضه والظهرية الجذر عقد قاعدي (drg) الثقافات المشتركة اكسون-oligodendrocyte. تم اختيار الثقافات DRG لأنها يمكن ان تكون معزولة بكفاءة ويمكن ان تشكل التوقعات طويلة وواسعة والتي تعتبر مثاليه للدراسات الهجرة من هذا النوع. ثم تمت أضافه الفئران المنقية oligodendrocytes علي الفئران المنقية drg محاور والمستحثة إلى النخاع. بعد التاكد من تشكيل الميالين المدمجة ، تمت أضافه عارضه أخيرا إلى الثقافة المشتركة وتم رصد تفاعلاتها مع محاور drg و oligodendrocytes في الوقت الحقيقي باستخدام المجهر الزمني الفاصل. وفي ظل هذه الظروف ، عارضه شكل البنية التجميعية الشبيهة بالورم التي تعبر عن GFAP و Ki67 ، وتهاجر علي طول المسارات المحورية النخاعية وغير النخاعية وتتفاعل مع هذه المحاور من خلال تشكيل الكاذبة. ويمكن استخدام نظام الثقافة المشتركة السابقة لدينا للتعرف علي أليات الخلوية والجزيئية الجديدة للهجرة hGC ويمكن استخدامها لاختبار فعاليه المخدرات في المختبر.

من أجل دراسة تفاعل عارضه مع محاور ، ونحن ولدت محاور تنقيه drg كما سبق وصفها15،16،17،18. ثم تم بذر هذه المحاور المنقية drg مع عارضه ، التي شكلت gfap +/ki67 + الأورام مثل الهياكل المدمجة داخل الشبكة محاور ، في حين ان عارضه الفردية هاجر?...

Watch this Scientific Journal Video about Real-Time Monitoring of Human Glioma Cell Migration on Dorsal Root Ganglion Axon-Oligodendrocyte Co-Cultures at JoVE.com

Real-Time Monitoring of Human Glioma Cell Migration on Dorsal Root Ganglion Axon-Oligodendrocyte Co-Cultures

هنا نقدم السابقين فيفو مختلطة نظام الثقافة أحاديه الطبقة لدراسة الهجرة الخلية البشرية الورم (hGC) في الوقت الحقيقي. يوفر هذا النموذج القدرة علي مراقبه التفاعلات بين عارضه والمحاور النخاعية وغير النخاعية داخل غرفه مجزاه.

في الوقت الحقيقي رصد الهجرة الخلية البشرية الورم علي العقدة الجذر الظهرية اكسون-اوليغوداندورونسيتي الثقافات المشتركة

Glioblastoma is one of the most aggressive human cancers due to extensive cellular heterogeneity and the migration properties of hGCs. In order to better ...

ويمكن استخدام هذا النظام السابق في مجال الثقافة الحية لتحديد الآليات الخلوية والجزيئية الجديدة لهجرة الخلايا الدبقية البشرية ويمكن أن تستخدم في اختبار فعالية المخدرات في المختبر. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي القدرة على دراسة التفاعلات بين خلايا الورم الأرومي الدبقي البشري ومحور عصبي في الوقت الحقيقي. إثبات الإجراء سيكون جون زيبيكي، طالب دراسات عليا من مختبري.لتجميع أطباق الاستزراع المجزأة، قم بتخفيف محلول مخزون الكولاجين إلى 500 ميكروغرام لكل ملليلتر في الماء المقطر المعقم واخلطه جيداً. مع ماصة نقل معقمة، تعبئة طبق ثقافة 35 ملليمتر مع مليلتر اثنين من محلول الكولاجين المخفف. ثم إمالة قليلا الطبق وإزالة الحل ترك طبقة رقيقة من الكولاجين وراء.الاستغناء عن الحل في طبق 35 ملليمتر المقبل. كرر هذه العملية، مضيفا المزيد من الحل الكولاجين حسب الحاجة حتى يتم المغلفة جميع الأطباق. لتبلمر الكولاجين، في غطاء تدفق لارينار، منصات الشاش الرطب مع ثلاثة ملليلتر من هيدروكسيد الأمونيوم المركزة وتغطي الصواني لمدة 15 دقيقة.إزالة منصات الشاش والسماح لأطباق 35 ملليمتر لتجف. بعد ذلك، استخدم ملف معدني لملف قبالة نقطة إبرة قياس 18 لجعل تلميح حادة. نقع الإبرة في 70٪ الإيثانول لتعقيم.تطبيق الشحوم سيليكون إلى الجزء السفلي من الغرفة اجزأة. تأكد من وضع الشحوم بدقة وتداخلات في جميع الزوايا. يمكن أن تكون هذه التقنية صعبة للغاية لذلك نقترح عليك أن تأخذ وقتًا إضافيًا لممارسة تطبيق الكمية الصحيحة من الشحوم قبل إنشاء الغرف المجزأة من أجل ضمان نمو ممتاز.كما أنه من المهم جداً العمل ببطء. إعداد غرف أكثر مما كنت تعتقد أنك سوف تحتاج لذلك لديك إضافات ينبغي أن يحدث شيء خاطئ. إزالة الغطاء من طبق 35 ملليمتر، عكس الطبق ووضع الخدوش على الغرفة.اضغط لأسفل على الجزء السفلي من الطبق بلطف مع زوج من ملقط. عند تطبيق الحجرات الشحوم على الطبق، لا اضغط من الصعب جدا. خلاف ذلك ، فإن محاور عصبية لن تكون قادرة على النمو تحت في الغرفة المجاورة.استخدام ملقط hemostatic لقلب بلطف أكثر من الطبق. أطلقوا الـ"ملقط" ضع كومة من الشحوم في قاعدة المقصورة المركزية.ملء كل غرفة مع الوسط القاعدية العصبية المكملة. تحقق من وجود تسربات وتسرب الختم مع الشحوم السيليكون حسب الحاجة. مواصلة تجميع جميع الأطباق والثقافة وتخزينها بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون.تسمح الغرفة المجزأة باستخدام الكواشف الدوائية المختلفة بالإضافة إلى القدرة على مقارنة وتباين النتائج بين بئرين على نفس اللوحة. لبذور الثقافات المعدة التي تحتوي على الغلاف العصبي GBM، أولاً استبدال المتوسطة مع بنك الفجيرة الوطني المكملة التي تحتوي على 10٪ FBS في كل غرفة مجزأة. بعد ذلك ، مع ماصة P20 التي تم تعيينها إلى 10 ميكرولترات ، ارسم جهازًا عصبيًا واحدًا GBM من طبق الثقافة.ضع طرف الماصات في الغرفة البعيدة الأقرب إلى الغرفة المركزية دون لمس محور الدوران وطرد الغلاف العصبي GBM ببطء بحيث يسقط بلطف على المحاور. اترك الثقافة في خزانة السلامة البيولوجية لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة للسماح للغلاف العصبي GBM بإرفاقها. ويمكن استخدام هذه الطريقة لاختبار المركبات الدوائية لعلاج أورام الدماغ.ويمكن أيضا تطبيق هذه الطريقة على أمراض أخرى في الجهاز العصبي المحيطي والمركزي مثل اعتلال الأعصاب و التصلب المتعدد. في هذا البروتوكول، تم بذر محاور DRG المنقية مع HCGs التي شكلت GFAP وKI67 هياكل تشبه الورم مدمجة ضمن شبكة محور عصبي تشير إليها علامات الورم الأحمر GFAP في حين أن HGCs الفردية التي تعبر عن البروتين الفلوري الأخضر المهاجرة إما في ارتباط أو بين محاور عصبية. إضافة HGCs على النخاع DRG oligodendrocyte الثقافات المشتركة أظهرت أن HGCs تهاجر بالاشتراك مع المحاور المصبحة الحمراء الملطخة بعيدا عن كتلة الورم من خلال تشكيل pseudopodia.وبمجرد أن تم إتقان هذه التقنية، تمكنا من استخدامها لدراسة هجرة الخلايا الجذعية البشرية GBM في الوقت الحقيقي. كنا أيضا قادرا على دراسة الآثار على هجرة الخلايا بعد إضافة مثبطات جزيء صغير علاجي جديد. يظهر هنا مجال GBM الذي يغزو ثقافة المحور المحوري DRG oligodendrocyte النخاعي.البروتوكول الموصوف هنا يمكن أن يكون بمثابة أساس لأنظمة حيوية أخرى ثلاثية الأبعاد الكائنات الحية السابقة المصممة لتقييم آثار العلاجات الدوائية الجديدة. وينبغي للمرء أن دائماً توخي الحذر عند التعامل مع الخلايا المشتقة من الإنسان. وينبغي ارتداء معدات الوقاية الشخصية المناسبة وينبغي إكمال التدريب على مسببات الأمراض المنقولة بالدم حتى يفهم المرء مخاطر العمل مع الأنسجة المشتقة من المريض.يجب التعامل مع هيدروكسيد الأمونيوم بعناية ويجب عليك ارتداء القفازات ، ومعطف المختبر ، والعمل في غطاء محرك السيارة لمنع التعرض لهذه المادة الكيميائية.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Protocol for Rapid Post-mortem Cell Culture of Diffuse Intrinsic Pontine Glioma (DIPG)

A Protocol for Rapid Post-mortem Cell Culture of Diffuse Intrinsic Pontine Glioma DIPG

بروتوكول للثقافة السريع بعد الوفاة خلية من منتشر الجوهرية جسري بالورم الدبقي (DIPG)

Diffuse Intrinsic Pontine Glioma (DIPG) is a childhood brainstem tumor that carries a universally fatal prognosis. Because surgical resection is not a ...

Preparation and Metabolic Assay of 3-dimensional Spheroid Co-cultures of Pancreatic Cancer Cells and Fibroblasts

الإعداد والتحليل الأيضي الثقافات المشارك كروي ثلاثي الأبعاد لخلايا سرطان البنكرياس والخلايا الليفية

Many cancer types, including pancreatic cancer, have a dense fibrotic stroma that plays an important role in tumor progression and invasion. Activated ...

Using the Dot Assay to Analyze Migration of Cell Sheets

باستخدام المقايسة دوت لتحليل هجرة أوراق الخلية

Although complex organisms appear static, their tissues are under a continuous turnover. As cells age, die, and are replaced by new cells, cells move ...

Serum and Plasma Copy Number Detection Using Real-time PCR

مصل وبلازما نسخة الكشف رقم PCR الوقت الحقيقي باستخدام

Serum and plasma cell free DNA (cfDNA) has been shown as an informative, non-invasive source of biomarkers for cancer diagnosis, prognosis, monitoring, ...

Real Time Detection of In Vitro Tumor Cell Apoptosis Induced by CD8+ T Cells to Study Immune Suppressive Functions of Tumor-infiltrating Myeloid Cells

Real Time Detection of In Vitro Tumor Cell Apoptosis Induced by CD8+ T Cells to Study Immune Suppressive Functions of Tumor-infiltrating Myeloid Cells

الكشف عن الوقت الحقيقي في المختبر ورم الخلايا المبرمج الناجمة عن CD8+ تي الخلايا لدراسة وظائف المناعة القمعية من التسلل إلى ورم الخلايا النقوي

Potentiation of the tumor-killing ability of CD8+ T cells in tumors, along with their efficient tumor infiltration, is a key element of successful ...

Evaluation of Biomarkers in Glioma by Immunohistochemistry on Paraffin-Embedded 3D Glioma Neurosphere Cultures

تقييم المؤشرات الحيوية في الدبقي التي Immunohistochemistry على الثقافات نيوروسفيري جزءا لا يتجزأ من البارافين الدبقي 3D

Analysis of protein expression in glioma is relevant for several aspects in the study of its pathology. Numerous proteins have been described as ...

Time-Lapse 2D Imaging of Phagocytic Activity in M1 Macrophage-4T1 Mouse Mammary Carcinoma Cells in Co-cultures

الوقت الفاصل بين التصوير 2D من النشاط Phagocytic في M1 الضامة-4T1 الفئران سرطان الثدي خلايا في الثقافات المشتركة

Tumor-associated macrophages (TAMs) have been identified as an important component for tumor growth, invasion, metastasis, and resistance to cancer ...

Impedance-based Real-time Measurement of Cancer Cell Migration and Invasion

المعاوقة القائمة على قياس في الوقت الحقيقي من هجرة الخلايا السرطانية والغزو

Cancer arises due to uncontrolled proliferation of cells initiated by genetic instability, mutations, and environmental and other stress factors. These ...

Measuring Real-time Drug Response in Organotypic Tumor Tissue Slices

قياس الاستجابة للمخدرات في الوقت الحقيقي في شرائح أنسجة الورم Organotypic

Tumor tissues are composed of cancerous cells, infiltrated immune cells, endothelial cells, fibroblasts, and extracellular matrix. This complex milieu ...

A Rapid Screening Workflow to Identify Potential Combination Therapy for GBM using Patient-Derived Glioma Stem Cells

سير عمل الفحص السريع لتحديد العلاج المركب المحتمل ل GBM باستخدام الخلايا الجذعية الدبقي المشتقة من المريض

The glioma stem cells (GSCs) are a small fraction of cancer cells which play essential roles in tumor initiation, angiogenesis, and drug resistance in ...