Name: murine model of metastatic liver tumors in the setting of ischemia reperfusion injury
Uploaded: 2019-08-30T13:00:00
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लेखक भाषाई संशोधन के लिए सारा Minemyer और अलेक्जेंडर Comerci धन्यवाद.

सभी पशु प्रोटोकॉल ों में संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित किए जाते हैं और राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान (एनआईएच) दिशानिर्देशों का पालन करते हैं। किसी भी शल्य चिकित्सा प्रक्रिया के लि...

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	<li>Riihim&#228;ki, M., Hemminki, A., Sundquist, J., Hemminki, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+metastasis+in+colon+and+rectal+cancer.">Patterns of metastasis in colon and rectal cancer.</a> Scientific Reports. 6 (1), 29765 (2016).</li><li>Oki, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+treatment+for+colorectal+liver+metastasis.">Recent advances in treatment for colorectal liver metastasis.</a> Annals of gastroenterological surgery. 2 (3), 167-175 (2018).</li><li>Wolpin, B. M., Mayer, R. 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इस पांडुलिपि में वर्णित पशु मॉडल दो प्रमुख दृष्टिकोण पर आधारित है। पहले कैंसर कोशिकाओं की क्षमता को पहचान करने के लिए स्थानीय और जिगर lobes में proliferate है. दूसरा ट्यूमर के विकास और मेटास्टेसिस को प्रभावित कर?...

यकृत मेटास्टैटिक रोग1के विकास के लिए सबसे आम स्थलों में से एक है . मृत्यु लगभग हमेशा जिगर में ट्यूमर के विकास के साथ जुड़े जटिलताओं के कारण है. जिगर में metastatic ठोस ट्यूमर के साथ रोगियों में, सर्जरी रोग नियंत्रण और एक संभव उपचारात्मक दृष्टिकोण के लिए एक महत्वपूर्ण हस्तक्षेप बनी हुई है. तथापि, अधिकांश रोगी अंततः आवर्तक रोग के साथ उपस्थित होते हैं , मुख्य रूप से यकृत2,3में . यकृत सर्जरी के दौरान, intraoperative खून बह रहा है आम है, अक्सर रक्त आधान और रक्त स्रावन के नियंत्रण के लिए विभिन्न तकनीकी दृष्टिकोण की आवश्यकता, संवहनी clamping तरीकों सहित. तथापि, ऐसे उपाययकृत इस्कीमिया/रिफ्यूजन (आई/आर) यकृत ऊतक के लिए कारण होते हैं। hepatocellular समारोह पर I/R के प्रतिकूल प्रभाव अच्छी तरह से प्रलेखित किया गया है. जिगर मैं / आर अपमान भड़काऊ रास्ते4के माध्यम से रक्त के प्रवाह की बहाली के दौरान भड़काऊ cascades प्रज्वलित . न केवल जिगर I/R चोट जिगर की विफलता के लिए योगदान करता है, लेकिन वर्तमान सबूत भी पता चलता है कि मैं / हम पहले की सूचना दी है कि शल्य तनाव प्रतिरक्षा कोशिकाओं जो न केवल प्राथमिक ट्यूमर के विकास में मदद करता है के सक्रियण लाती है, लेकिन यह भी परिसंचरण के भीतर कैंसर की कोशिकाओं पर कब्जा करके metastases की सुविधा6.
यहाँ हम विस्तार से एक तकनीक का वर्णन करने के लिए एक जिगर metastasis माउस ट्यूमर मॉडल स्थापित. इस मॉडल में, हम हेपेटिक इस्किमिया रिपरफ्यूजन चोट को प्रेरित करने के लिए एक विधि भी प्रस्तुत करते हैं जो हेपेटेक्टोमी के दौरान नैदानिक रूप से मौजूद सर्जिकल तनाव के लिए एक किराए के रूप में कार्य करता है। कैंसर इंजेक्शन और यकृत I/R के संयुक्त तरीकों को सफलतापूर्वक प्राथमिक ट्यूमर लकीर आया है, जो रोगियों में CRLM के विकास की व्याख्या कर सकते हैं।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>12-614F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>900-108</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25030-081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicilin</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>15-140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stretomysin</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>15-140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>SH3023701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>sh30042.02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture Flask 75cm</td>
			<td>5 Cells Star</td>
			<td>658170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15ml PP Conical Tubes</td>
			<td>BioExcell</td>
			<td>41021037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue Stain</td>
			<td>Giibco</td>
			<td>15250-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>1376152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cautry</td>
			<td>Bovie</td>
			<td>AA01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microvascular clamp</td>
			<td>Finescience tools</td>
			<td>18055-03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-Serrefine clamp applicator with lock</td>
			<td>Fine science toosl</td>
			<td>FST-18056-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spring scissor</td>
			<td>Fine science toosl</td>
			<td>FST-15021-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vessel Dilator</td>
			<td>Fine science toosl</td>
			<td>FST-00276-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic fixator Retraction system</td>
			<td>Fine science toosl</td>
			<td>FST-18200020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-Adson Forceps</td>
			<td>Fine science toosl</td>
			<td>FST-11019-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-Adson Forceps</td>
			<td>Fine science toosl</td>
			<td>FST-11018-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 polypropylene suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>K881H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>72-8826</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating Pad</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>1443915</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clipper</td>
			<td>Oster</td>
			<td>559A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone-Iodine solution</td>
			<td>Medline</td>
			<td>MDS093945</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 1ml 25G</td>
			<td>BD safety Glide</td>
			<td>305903</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringe 0.5 ml</td>
			<td>BD insulin Syringes</td>
			<td>32946</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton -Tipped Applicator</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>23-400-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>LR92240</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mycoplasma Elisa Kit</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11663925910</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Putney</td>
			<td>#056344</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>NADA</td>
			<td>#139-236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ALT strip</td>
			<td>Heska</td>
			<td>15809554</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AST strip</td>
			<td>Heska</td>
			<td>15809542</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LDH strip</td>
			<td>Heska</td>
			<td>15809607</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine model of metastatic liver tumors in the setting of ischemia reperfusion injury

लिवर इस्किमिया और रिफ्यूजन (आई/आर) चोट, एक आम नैदानिक चुनौती, एक अनिवार्य pathophysiological प्रक्रिया है कि कई ऊतक और अंग क्षति प्रेरित करने के लिए दिखाया गया है बनी हुई है। हाल ही में प्रगति और चिकित्सीय दृष्टिकोण के बावजूद, समग्र रुग्णता विशेष रूप से अंतर्निहित पैरेन्काइमल असामान्यताओं के साथ रोगियों में असंतोषजनक बनी हुई है। आक्रामक कैंसर के विकास और मेटास्टेसिस के संदर्भ में, शल्य चिकित्सा I/R ट्यूमर पुनरावृत्ति को विनियमित करने के प्रमोटर होने का संदेह है। इस लेख का उद्देश्य यकृत I/R और कोलोरेक्टल यकृत मेटास्टेसिस के नैदानिक रूप से प्रासंगिक murine मॉडल का वर्णन करना है। ऐसा करने में, हम स्थापित करने और उनके नियमित अनुसंधान अभ्यास के लिए इस मॉडल को सही करने में अन्य जांचकर्ताओं की सहायता करने के लिए बेहतर जिगर metastases को बढ़ावा देने पर जिगर I/R के प्रभाव को समझने का लक्ष्य.

सभी wildtype (C57BL6) चूहों (एन $ 20) जिगर metastases मॉडल के अधीन थे ऊपर वर्णित प्रोटोकॉल का उपयोग कर. सभी इंजेक्शन चूहों के साथ या बिना इस्किमिया reperfusion चोट बलिदान की तारीख तक बच गया. एक कैंसर इंजेक्शन जिगर के योजनाबद्ध आरेख <s...

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Murine Model of Metastatic Liver Tumors in the Setting of Ischemia Reperfusion Injury

हम विस्तार से एक चिकित्सकीय प्रासंगिक कोलोरेक्टल कैंसर जिगर मेटास्टेसिस (CRLM) ट्यूमर मॉडल और ट्यूमर के विकास और मेटास्टेसिस में जिगर ischemia reperfusion के प्रभाव का वर्णन (मैं / इस मॉडल को बेहतर जिगर metastatic विकास के सर्जरी प्रेरित पदोन्नति अंतर्निहित तंत्र को समझने में मदद कर सकते हैं.

इस्कीमिया रिपरफ्यूजन चोट की स्थापना में मेटास्टैटिक लिवर ट्यूमर के Murine मॉडल

Liver ischemia and reperfusion (I/R) injury, a common clinical challenge, remains an inevitable pathophysiological process that has been shown to induce ...

प्रायोगिक और नैदानिक साक्ष्य बताते हैं कि यकृत इस्केमिया रिपरफ्यूजन कैंसर कोशिकाओं को प्रसारित करके मेटास्टैटिक फोसी के गठन और माइक्रोमेटास्टैनिक रोग के विकास को बढ़ा सकता है। यह प्रजनन योग्य मुरीन मॉडल मेटास्टेस की स्थापना और जिगर के भीतर पहले से मौजूद ट्यूमर के विकास दोनों के प्रासंगिक अध्ययन की अनुमति देता है। लिवर सर्जरी, रक्तस्राव और सेप्टिक शॉक सभी लिवर इस्केमिया रिपरफ्यूजन से जुड़े होते हैं और मेटास्टैटिक डिजीज के विकास को प्रभावित कर सकते हैं।ये तकनीकें इस घटना के अध्ययन को बेहतर निदान करने और नैदानिक सेटिंग में ट्यूमर के विकास पर इस्केमिया रिपरफ्यूजन के हानिकारक प्रभाव को रोकने के प्रयास में अनुमति देती हैं। एक एनेस्थेटाइज्ड आठ से 12 सप्ताह पुराने पुरुष C57 काले 6 माउस में अंगुली चुटकी के लिए प्रतिक्रिया की कमी की पुष्टि के बाद, एक povidone-आयोडीन स्क्रब के साथ उजागर पेट की दीवार त्वचा कीटाणुरहित और दांतेदार संदंश का उपयोग करने के लिए त्वचा उठा । एक सर्जिकल स्केलपेल का उपयोग करके, त्वचा में एक मिडलाइन चीरा बनाएं और पेट की मांसपेशियों और पेरिटोनम को उठाएं ताकि पेट की सामग्री को बेनकाब करने के लिए तीन सेंटीमीटर मिडलाइन चीरा बनाने में सुविधा हो सके।चीरा के दोनों किनारों पर और xiphoid प्रक्रिया के तहत एक हीमोस्टेट रखने के बाद, पेट का विस्तार करने के लिए पूंछ को नीचे खींचें और टेप करें और अग्नाशय के वसा ऊतक से तिल्ली को अलग करने और बेखतू को बेनकाब करने के लिए छह इंच बाँझ कपास टिप एप्लिकेटर का उपयोग करें। इसके बाद, किसी भी कोशिका झुरमुटों को अलग करने और कोशिकाओं को 28 गेज सुई से लैस 0.5 मिलीलीटर इंसुलिन सिरिंज में लोड करने के लिए ब्याज के कैंसर सेल निलंबन को भंवर। धीरे-धीरे और ध्यान से तिल्ली की नोक में कोशिकाओं के 100 माइक्रोलीटर इंजेक्ट करें, इंजेक्शन के दौरान तिल्ली को स्थिर करने के लिए कोमल दबाव जोड़ते हुए पेरिटोनियल गुहा में किसी भी संभावित ट्यूमर बिखराव को अवशोषित करने के लिए सुई पंचर के किनारे के निकट एक सूती टिप रखें।एक सफल इंजेक्शन जिगर के रंग में बदलाव से स्पष्ट होगा। जब सभी कोशिकाओं को वितरित किया गया है, तो विच्छेदन क्षेत्र पर पीबीएस-लथपथ बाँझ धुंध का एक टुकड़ा रखें और माउस को 15 मिनट के लिए हीटिंग पैड पर रखें ताकि कैंसर कोशिकाओं को सिस्टम के भीतर प्रसारित करने की अनुमति दी जा सके। इस्केमिया और रिफ्यूजन इंजरी को प्रेरित करने के लिए, पोर्टल नस को बेनकाब करने और माउस को विच्छेदन माइक्रोस्कोप के नीचे रखने के लिए धीरे-धीरे गुहा से आंत को स्थानांतरित करने के लिए दो गीले सूती युक्तियों का उपयोग करें।मीडियन को उठाएं और बाएं पार्श्व जिगर ने डायाफ्राम के खिलाफ पालियां छोड़ दीं। क्लैंपिंग के लिए पर्याप्त जगह बनाने के लिए मीडियन पालि और दाईं पार्श्व पालि के बीच एक छोटा सा नम सूती झाड़ू रखें और ध्यान से पोर्टल ट्रायड के पीछे एक पोत डिलेटर संदंश पास करें और पोत दिलटर संदंश का उपयोग करके, 4-0 पॉलीप्रोपाइलीन सीवन के 10-सेंटीमीटर टुकड़े का उपयोग करके पीछे से गुजरें और पोर्टल ट्रायड को उठाएं। पोर्टल ट्रायड में सभी संरचनाओं को ऑक्सीलेड करने के लिए बाईं और औसत जिगर लोब्स पर माइक्रोवैस्कुलर क्लैंप रखने के लिए एक लॉक के साथ माइक्रो-सेर्रिफिन क्लैंप एप्लिकेटर का उपयोग करें।जब ब्लैंचिंग मनाया जाता है, तो 4-0 पॉलीप्रोपाइलीन सीवन और छोटे कपास झाड़ू को हटा दें और ध्यान से आंत को पेट की गुहा में वापस कर दें। पीबीएस से लथपथ धुंध के एक नए टुकड़े के साथ पेट की दीवार को कवर करें और वाष्पीकरण हानि को कम करने के लिए प्लास्टिक की चादर के साथ धुंध को कवर करें। फिर माउस को 60 मिनट के लिए हीटिंग पैड पर वापस रखें।इस्कीमिक अंतराल के दौरान, इस्केमिया चोट के सबूतों की पुष्टि करने के लिए दाएं मध्यांबक, बाएं मध्यांबक और पार्श्व पालि के हल्के ब्लैंचिंग की कल्पना करें। चोट की अवधि के अंत में, क्लैंप हटा दें। एक स्प्लेनेक्टॉमी करने के लिए, स्प्लेन को चिकनी संदंश के साथ सावधानी से उठाएं और अत्यधिक रक्तस्राव से बचने के लिए प्लीहा रक्त वाहिकाओं को कोटराइज करने के लिए एक हैंडहेल्ड कॉटरी डिवाइस का उपयोग करें।तिल्ली को हटाने के लिए कॉटराइज्ड सेक्शन पर जहाजों को ट्रांसेक्ट करें और डबल-लेयर सीवन पैटर्न में मांसपेशियों और त्वचा के चीरों को बंद करने के लिए तुरंत 4-0 पॉलीप्रोपाइलीन टांके का उपयोग करें। फिर माउस को पूर्ण वसूली तक निगरानी के साथ अपने घर के पिंजरे में वापस रखें। सर्जिकल तनाव जिगर के भीतर पूर्व-स्थापित माइक्रोमेटास्टेस की मात्रा को काफी बढ़ाता है।यह अंतर गैर-इस्केमिया रिप्रेसित चूहों की तुलना में इस्केमिया रिप्रफ्यूजन के दो सप्ताह बाद भी मनाया जाता है। लिवर इस्केमिया रिपरफ्यूजन और ट्यूमर सेल इंजेक्शन कमरे के तापमान और सेल व्यवहार्यता से प्रभावित हो सकते हैं, इसलिए इन चरों को नियंत्रित करने के लिए ध्यान रखें। इस तकनीक से मेटास्टैटिक रोग के विकास पर सर्जिकल तनाव और जिगर की चोट के प्रभावों के अध्ययन की सुविधा मिलती है।इससे शोधकर्ताओं को सर्जरी से प्रेरित ट्यूमर के विकास की घटना को बेहतर ढंग से समझने में मदद मिलेगी ।

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Next Generation Sequencing for the Detection of Actionable Mutations in Solid and Liquid Tumors

ठोस और तरल ट्यूमर में कार्रवाई म्यूटेशन की जांच के लिए अगली पीढ़ी के अनुक्रमण

As our understanding of the driver mutations necessary for initiation and progression of cancers improves, we gain critical information on how specific ...

Advanced Animal Model of Colorectal Metastasis in Liver: Imaging Techniques and Properties of Metastatic Clones

जिगर में कोलोरेक्टल मेटास्टेसिस के उन्नत पशु मॉडल: इमेजिंग तकनीक और metastatic क्लोन का गुण

Patients with a limited number of hepatic metastases and slow rates of progression can be successfully treated with local treatment approaches1,2. ...

A Syngeneic Mouse Model of Metastatic Renal Cell Carcinoma for Quantitative and Longitudinal Assessment of Preclinical Therapies

पूर्व नैदानिक ​​चिकित्सा के मात्रात्मक और अनुदैर्ध्य मूल्यांकन के लिए एक syngeneic माउस प्रक्षेपि के मॉडल गुर्दे सेल कार्सिनोमा

Renal cell carcinoma (RCC) affects &#62; 60,000 people in the United States annually, and ~ 30% of RCC patients have multiple metastases at the time of ...

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

थकान के एक माउस मॉडल परिधीय विकिरण से प्रेरित

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

Identification and Characterization of Metastatic Factors by Gene Transfer into the Novel RIP-Tag; RIP-tva Murine Model

Identification and Characterization of Metastatic Factors by Gene Transfer into the Novel RIP-Tag; RIP-tva Murine Model

पहचान और उपंयास चीर-टैग में जीन हस्तांतरण द्वारा मेटास्टेटिक कारकों के लक्षण वर्णन ; चीर-tva Murine मॉडल

Metastatic cancer accounts for 90% of deaths in patients with solid tumors. There is an urgent need to better understand the drivers of cancer metastasis ...

Development of a Human Preclinical Model of Osteoclastogenesis from Peripheral Blood Monocytes Co-cultured with Breast Cancer Cell Lines

परिधीय रक्त Monocytes सह से Osteoclastogenesis के एक मानव नैदानिक मॉडल का विकास स्तन कैंसर सेल लाइनों के साथ-कल्चरल

The crosstalk between tumor cells and bone cells in the bone microenvironment is crucial to understanding the mechanism of bone metastasis formation. We ...