Name: murine model of metastatic liver tumors in the setting of ischemia reperfusion injury
Uploaded: 2019-08-30T13:00:00
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저자는 언어 개정사라 마네마이어와 알렉산더 코메시에 감사드립니다.

모든 동물 프로토콜은 기관 동물 관리 및 사용 위원회의 승인을 받았으며 국립 보건원(NIH) 지침을 준수합니다. 모든 수술에 사용되는 기구는 철저하게 살균되었다.
1. 초기 준비
<ol><li>마우스 비장으로 암세포를 주입하기 전에, 절차 도중 이용되는 모든 기구를 autoclave 및 살균하십시오.</li>
	<li>가열 패드, 수술 용 장갑, 거즈, 가위 쌍, 작은 클램프, 용기 확장기, 수술 집게 및 ?...

<ol>
	<li>Riihim&#228;ki, M., Hemminki, A., Sundquist, J., Hemminki, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+metastasis+in+colon+and+rectal+cancer.">Patterns of metastasis in colon and rectal cancer.</a> Scientific Reports. 6 (1), 29765 (2016).</li><li>Oki, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+treatment+for+colorectal+liver+metastasis.">Recent advances in treatment for colorectal liver metastasis.</a> Annals of gastroenterological surgery. 2 (3), 167-175 (2018).</li><li>Wolpin, B. M., Mayer, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systemic+treatment+of+colorectal+cancer.">Systemic treatment of colorectal cancer.</a> Gastroenterology. 134 (5), 1296-1310 (2008).</li><li>van Golen, R. F., Reiniers, M. J., Olthof, P. B., van Gulik, T. M., Heger, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sterile+inflammation+in+hepatic+ischemia/reperfusion+injury:+present+concepts+and+potential+therapeutics.">Sterile inflammation in hepatic ischemia/reperfusion injury: present concepts and potential therapeutics.</a> Journal of Gastroenterology and Hepatology. 28 (3), 394-400 (2013).</li><li>Demicheli, R., Retsky, M. W., Hrushesky, W. J. M., Baum, M., Gukas, I. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+surgery+on+tumor+growth:+a+century+of+investigations.">The effects of surgery on tumor growth: a century of investigations.</a> Annals of Oncology. 19 (11), 1821-1828 (2008).</li><li>Tohme, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+Extracellular+Traps+Promote+the+Development+and+Progression+of+Liver+Metastases+after+Surgical+Stress.">Neutrophil Extracellular Traps Promote the Development and Progression of Liver Metastases after Surgical Stress.</a> Cancer Research. 76 (6), 1367-1380 (2016).</li><li>Tseng, W., Leong, X., Engleman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+mouse+model+of+colorectal+cancer.">Orthotopic mouse model of colorectal cancer.</a> Journal of Visualized Experiments. (10), 484 (2007).</li><li>Elkin, M., Vlodavsky, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tail+vein+assay+of+cancer+metastasis.">Tail vein assay of cancer metastasis.</a> Current Protocols in Cell Biology. 19 (19.2), (2001).</li><li>Thalheimer, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+intraportal+injection+model:+A+practical+animal+model+for+hepatic+metastases+and+tumor+cell+dissemination+in+human+colon+cancer.">The intraportal injection model: A practical animal model for hepatic metastases and tumor cell dissemination in human colon cancer.</a> BMC Cancer. 9 (1), 29 (2009).</li><li>Frampas, E., Maurel, C., Thedrez, P., Le Sa&#235;c, P. R. e. m. a. u. d. -., Faivre-Chauvet, A., Barbet, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+intraportal+injection+model+for+liver+metastasis:+Advantages+of+associated+bioluminescence+to+assess+tumor+growth+and+influences+on+tumor+uptake+of+radiolabeled+anti-carcinoembryonic+antigen+antibody.">The intraportal injection model for liver metastasis: Advantages of associated bioluminescence to assess tumor growth and influences on tumor uptake of radiolabeled anti-carcinoembryonic antigen antibody.</a> Nuclear Medicine Communications. 32 (2), 147-154 (2011).</li><li>Goddard, E. T., Fischer, J., Schedin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Portal+Vein+Injection+Model+to+Study+Liver+Metastasis+of+Breast+Cancer.">A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer.</a> Journal of Visualized Experiments. (118), (2016).</li><li>Limani, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+portal+vein+injection+for+the+design+of+syngeneic+models+of+liver+malignancy.">Selective portal vein injection for the design of syngeneic models of liver malignancy.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 310 (9), G682-G688 (2016).</li></ol>

이 원고에 설명된 동물 모델은 두 가지 주요 접근법을 기반으로 합니다. 첫 번째는 암세포가 간엽에서 국소화하고 증식하는 능력을 인식하는 것입니다. 두 번째는 종양 성장 및 전이에 영향을 미치는 간 허혈 재관류 손상의 효과를 연구하는 것이다. 이 모형은 면역 적격 마우스에 있는 이차 전이의 부재에 있는 간 전이의 관련 연구 결과를 허용합니다. 이 모델은 세포 생존 외설 및 증식과 같은 전?...

간은 전이성 질병의 발달을 위한 일반적인 사이트의 한개 1. 사망률은 거의 변함없이 간에서 종양 성장과 관련된 합병증에 기인한다. 간에서 전이성 고형 종양을 가진 환자에서, 수술은 질병 통제및 가능한 치료 접근을 위한 결정적인 내정간섭남아 있습니다. 그러나, 환자의 대다수는 궁극적으로재발하는질병으로, 간2,3에서우세하게 제출합니다. 간 수술 중 수술 중 수술 중 출혈은 흔하며 혈관 클램핑 방법을 포함하여 출혈 을 조절하기 위한 수혈 및 다른 기술적 접근법이 필요합니다. 그러나, 이러한 조치는 간 조직에 간 허혈/재관류 (I/R)를 일으키는 원인이 됩니다. 간 세포 기능에 I/R의 불리 한 효과 잘 문서화 되었습니다. 간 I/R 모욕은 선동적인 통로를 통해서 혈류의회복 도중 선동적인 폭포를 점화합니다 4. 간 I/R 상해는 간 부전으로 기여할 뿐만 아니라, 현재의 증거는 I/R 손상이 종양 세포 부착을 자극하고, 기존 미세 전이성 질환의 전이 형성 및 성장의 발생을 촉진한다는 것을 보여줍니다5. 우리는 이전에 외과 적 스트레스가 1 차적인 종양의 성장에 도움뿐만 아니라, 순환 내의 암세포를 포착해서 전이를촉진하는 면역 세포의 활성화를 유도한다는 것을 보고했습니다 6.
여기서 우리는 간 전이를 확립하는 기술을 자세하게 기술한다. 이 모델에서, 우리는 또한 간 허혈 재관류 상해를 유도하는 방법을 제시하며 이는 간절제술 동안 임상적으로 존재하는 외과적 스트레스에 대리역할을 한다. 암 주사와 간 I/R의 결합된 방법은 1 차적인 종양 절제를 겪은 환자에 있는 CRLM의 발달을 성공적으로 해석할 수 있습니다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>12-614F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>900-108</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25030-081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicilin</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>15-140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stretomysin</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>15-140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>SH3023701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>sh30042.02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture Flask 75cm</td>
			<td>5 Cells Star</td>
			<td>658170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15ml PP Conical Tubes</td>
			<td>BioExcell</td>
			<td>41021037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue Stain</td>
			<td>Giibco</td>
			<td>15250-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>1376152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cautry</td>
			<td>Bovie</td>
			<td>AA01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microvascular clamp</td>
			<td>Finescience tools</td>
			<td>18055-03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-Serrefine clamp applicator with lock</td>
			<td>Fine science toosl</td>
			<td>FST-18056-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spring scissor</td>
			<td>Fine science toosl</td>
			<td>FST-15021-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vessel Dilator</td>
			<td>Fine science toosl</td>
			<td>FST-00276-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic fixator Retraction system</td>
			<td>Fine science toosl</td>
			<td>FST-18200020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-Adson Forceps</td>
			<td>Fine science toosl</td>
			<td>FST-11019-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-Adson Forceps</td>
			<td>Fine science toosl</td>
			<td>FST-11018-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 polypropylene suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>K881H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>72-8826</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating Pad</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>1443915</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clipper</td>
			<td>Oster</td>
			<td>559A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone-Iodine solution</td>
			<td>Medline</td>
			<td>MDS093945</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 1ml 25G</td>
			<td>BD safety Glide</td>
			<td>305903</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringe 0.5 ml</td>
			<td>BD insulin Syringes</td>
			<td>32946</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton -Tipped Applicator</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>23-400-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>LR92240</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mycoplasma Elisa Kit</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11663925910</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Putney</td>
			<td>#056344</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>NADA</td>
			<td>#139-236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ALT strip</td>
			<td>Heska</td>
			<td>15809554</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AST strip</td>
			<td>Heska</td>
			<td>15809542</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LDH strip</td>
			<td>Heska</td>
			<td>15809607</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine model of metastatic liver tumors in the setting of ischemia reperfusion injury

간 허혈및 재관류 (I/R) 상해, 일반적인 임상 도전은, 다중 조직 및 기관 손상을 유도하기 위하여 보인 불가피한 병리생리학 프로세스남아 있습니다. 최근의 발전과 치료 접근법에도 불구하고, 전반적인 사망률은 근본적인 실치 이상을 가진 환자에서 특히 만족스럽지 않은 남아 있습니다. 공격적인 암 성장 및 전이의 맥락에서, 외과 I/R은 종양 재발을 통제하는 프로모터로 의심됩니다. 이 문서는 간 I/R 및 대장 간 전이의 임상적으로 관련 있는 뮤린 모델을 설명하는 것을 목표로 합니다. 이렇게, 우리는 더 나은 간 전이 촉진에 간 I/R의 효과 이해 하기 위해 그들의 일상적인 연구 연습에 대 한이 모델을 확립 하 고 완벽에 다른 조사자를 지원 하는 것을 목표로.

모든 야생형(C57BL6) 마우스(n=20)는 전술한 프로토콜을 사용하여 간 전이 모델을 행하였다. 허혈 재관류 손상유무에 관계없이 모든 주입 마우스는 희생날짜까지 살아남았다. 암 주사 된 간도 1A는 부분 간 허혈성 (70 %)을 유도하는 포털 트라이어드 (간 동맥, 문맥 및 담관)의 클램핑을 도시합니다. 중앙분리대 와 좌측 로브를 향해 모욕을 가합니다. 간 전이의 수의 증가는 허혈 재...

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Murine Model of Metastatic Liver Tumors in the Setting of Ischemia Reperfusion Injury

우리는 임상적으로 관련된 대장암 간 전이(CRLM) 종양 모델과 종양 성장 및 전이에서 간 허혈 재관류(I/R)의 영향을 상세히 기술한다. 이 모델은 간 전이성 성장의 수술 유발 승진의 근본적인 기계장치를 더 잘 이해하는 것을 도울 수 있습니다.

허혈 재관류 손상의 설정에서 전이성 간 종양의 뮤린 모델

Liver ischemia and reperfusion (I/R) injury, a common clinical challenge, remains an inevitable pathophysiological process that has been shown to induce ...

실험 및 임상 증거는 간 허혈 재관류가 암세포를 순환하고 미세 전이성 질환의 성장을 순환시킴으로써 전이성 초점의 형성을 증가시킬 수 있음을 보여줍니다. 이 재현 가능한 뮤린 모델은 전이의 확립과 간 내의 기존 종양의 성장에 대한 관련 연구를 허용합니다. 간 수술, 출혈 및 패혈증 쇼크는 모두 간 허혈 재관류와 관련이 있으며 전이성 질환의 성장에 영향을 줄 수 있습니다.이러한 기술은 임상 환경에서 종양 성장에 대한 허혈 재관류의 해로운 영향을 더 잘 진단하고 예방하기 위한 노력의 일환으로 이 현상의 연구를 허용합니다. 마취 된 8 - 12 주 된 남성 C57 블랙 6 마우스에서 발가락 핀치에 대한 반응의 부족을 확인 한 후, 포비도네 요오드 스크럽으로 노출 된 복벽 피부를 소독하고 피부를 들어 올리기 위해 이쑤시개를 사용합니다. 외과 메스를 사용하여 피부에 중간 개개를 하고 복부 근육과 복막을 들어 올려 복부 함량을 노출시키기 위해 3센티미터 중간선 절개를 생성할 수 있습니다.절개 과정의 양면과 시포이트 과정에서 hemostat를 배치 한 후, 꼬리를 아래로 당기고 테이프를 당겨 복부를 확장하고 췌장 지방 조직에서 비장을 분리하고 노출하는 6 인치 멸균 면 팁 어플리케이터를 사용합니다. 다음으로, 어떤 세포 덩어리를 해리시키고 28 게이지 바늘을 장착한 0.5 밀리리터 인슐린 주사기로 세포를 로드하기 위해 관심있는 암 세포 현탁액을 소용돌이시다. 천천히 조심스럽게 비장의 끝에 세포의 100 마이크로 리터를 주입, 주입 하는 동안 비장을 안정화 하는 부드러운 압력을 추가 하는 동안 복 막 구멍으로 가능한 종양 유출을 흡수 하는 바늘 천자의 측면에 인접 면 팁을 배치.성공적인 주사는 간 색깔의 변화에 의해 분명할 것입니다. 모든 세포가 전달되면 PBS에 젖은 멸균 거즈 조각을 해부 된 영역에 놓고 마우스를 15 분 동안 가열 패드에 배치하여 암세포가 시스템 내에서 순환 할 수 있도록하십시오. 허혈 및 재관류 손상을 유도하기 위해 두 개의 촉촉한 면 팁을 사용하여 내장을 캐비티에서 부드럽게 이동하여 포털 정맥을 노출시키고 마우스를 해부 현미경 아래에 놓습니다.중앙분리대를 들어 올리고 횡측간 엽을 다이어프램에 대고 들어올립니다. 중앙엽과 오른쪽 측면 엽 사이에 작은 촉촉한 면봉을 놓아 클램핑을 위한 충분한 공간을 만들고, 포탈 트라이어드 뒤에 용기 딜레이터 포셉을 조심스럽게 전달하고, 선박 딜레이터 집게를 사용하여 4-0 폴리프로필렌 봉합사의 10센티미터 조각을 사용하여 뒤로 전달하고 포털 트라이어드를 들어 올립니다. 잠금 장치가 있는 마이크로 세리파인 클램프 어플리케이터를 사용하여 중앙간 엽에 미세 혈관 클램프를 배치하여 포털 트라이어드의 모든 구조를 폐백합니다.희게 관찰될 때, 4-0 폴리프로필렌 봉합사와 작은 면봉을 제거하고 소장을 복강에 조심스럽게 돌려보라고 한다. 복벽을 PBS에 흠뻑 젖은 거즈로 덮고 거즈를 플라스틱 랩으로 덮어 증발 손실을 최소화합니다. 그런 다음 마우스를 60분 동안 가열 패드에 다시 놓습니다.허혈 간격을 통해, 허혈 증의 증거를 확인하기 위해 오른쪽 내측, 왼쪽 내측 및 측면 엽의 창백한 희미하게 시각화합니다. 부상 기간이 끝나면 클램프를 제거합니다. 비장 절제술을 수행하려면 부드러운 집게로 비장을 조심스럽게 들어 올리고 핸드헬드 소생 장치를 사용하여 과도한 출혈을 피하기 위해 비장 혈관을 소생시하십시오.소작 섹션에서 혈관을 분리하여 비장을 제거하고 즉시 4-0 폴리 프로필렌 봉합사를 사용하여 근육과 피부 절개를 이중 층 봉합사 패턴으로 닫습니다. 그런 다음 마우스를 전체 복구할 때까지 모니터링하여 홈 케이지에 다시 배치합니다. 외과 적 스트레스는 간 내의 미리 확립 된 미세 메타아제의 양을 크게 증가시킵니다.이러한 차이는 허혈성 재관류후 2주 후에도 비허혈 레퍼퓨전 마우스에 비해 관찰된다. 간 허혈 재관 류 및 종양 세포 주입 실온 및 세포 생존가능성에 의해 영향을 받을 수 있습니다., 그래서 이러한 변수를 제어 하는 주의. 이 기술은 전이성 질환의 성장에 대한 외과 적 스트레스와 간 손상의 효과에 대한 연구를 용이하게합니다.이것은 연구원이 수술 유도한 종양 성장의 현상을 더 잘 이해하는 것을 도울 것입니다.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Next Generation Sequencing for the Detection of Actionable Mutations in Solid and Liquid Tumors

고체 및 액체 종양에서 실행 가능한 돌연변이의 검출을위한 차세대 시퀀싱

As our understanding of the driver mutations necessary for initiation and progression of cancers improves, we gain critical information on how specific ...

연구

암 연구학

Advanced Animal Model of Colorectal Metastasis in Liver: Imaging Techniques and Properties of Metastatic Clones

고급 동물의 간에서 대장 전이의 모델 : 이미징 기술 및 전이성 클론의 특성

Patients with a limited number of hepatic metastases and slow rates of progression can be successfully treated with local treatment approaches1,2. ...

A Syngeneic Mouse Model of Metastatic Renal Cell Carcinoma for Quantitative and Longitudinal Assessment of Preclinical Therapies

전임상 치료의 양적 및 종 방향 평가를위한 동계 마우스 모델 전이성의 신장 세포 암

Renal cell carcinoma (RCC) affects &#62; 60,000 people in the United States annually, and ~ 30% of RCC patients have multiple metastases at the time of ...

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

주변 방사선 조사에 의해 유도 된 피로의 마우스 모델

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

Identification and Characterization of Metastatic Factors by Gene Transfer into the Novel RIP-Tag; RIP-tva Murine Model

Identification and Characterization of Metastatic Factors by Gene Transfer into the Novel RIP-Tag; RIP-tva Murine Model

식별 및 태그-소설 RIP;으로 유전자 이동에 의해 전이성 요인의 특성 RIP-tva Murine 모델

Metastatic cancer accounts for 90% of deaths in patients with solid tumors. There is an urgent need to better understand the drivers of cancer metastasis ...

Development of a Human Preclinical Model of Osteoclastogenesis from Peripheral Blood Monocytes Co-cultured with Breast Cancer Cell Lines

말 초 혈액 Monocytes 유 방 암 세포 라인 공동 경작에서 Osteoclastogenesis의 인간의 전 임상 모델의 개발

The crosstalk between tumor cells and bone cells in the bone microenvironment is crucial to understanding the mechanism of bone metastasis formation. We ...