Name: murine model of metastatic liver tumors in the setting of ischemia reperfusion injury
Uploaded: 2019-08-30T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Model of Metastatic Liver Tumors in the Setting of Ischemia Reperfusion Injury at JoVE.com

Авторы благодарят Сару Минемайер и Александра Комерчи за лингвистическую ревизию.

Все протоколы о животных утверждаются Институциональным комитетом по уходу за животными и использованию и соблюдаются в соответствии с Руководящими принципами Национальных институтов здравоохранения (NIH). Инструменты, используемые для любой хирургической процедуры, были тщательно с...

<ol>
	<li>Riihim&#228;ki, M., Hemminki, A., Sundquist, J., Hemminki, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+metastasis+in+colon+and+rectal+cancer.">Patterns of metastasis in colon and rectal cancer.</a> Scientific Reports. 6 (1), 29765 (2016).</li><li>Oki, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+treatment+for+colorectal+liver+metastasis.">Recent advances in treatment for colorectal liver metastasis.</a> Annals of gastroenterological surgery. 2 (3), 167-175 (2018).</li><li>Wolpin, B. M., Mayer, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systemic+treatment+of+colorectal+cancer.">Systemic treatment of colorectal cancer.</a> Gastroenterology. 134 (5), 1296-1310 (2008).</li><li>van Golen, R. F., Reiniers, M. J., Olthof, P. B., van Gulik, T. M., Heger, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sterile+inflammation+in+hepatic+ischemia/reperfusion+injury:+present+concepts+and+potential+therapeutics.">Sterile inflammation in hepatic ischemia/reperfusion injury: present concepts and potential therapeutics.</a> Journal of Gastroenterology and Hepatology. 28 (3), 394-400 (2013).</li><li>Demicheli, R., Retsky, M. W., Hrushesky, W. J. M., Baum, M., Gukas, I. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+surgery+on+tumor+growth:+a+century+of+investigations.">The effects of surgery on tumor growth: a century of investigations.</a> Annals of Oncology. 19 (11), 1821-1828 (2008).</li><li>Tohme, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+Extracellular+Traps+Promote+the+Development+and+Progression+of+Liver+Metastases+after+Surgical+Stress.">Neutrophil Extracellular Traps Promote the Development and Progression of Liver Metastases after Surgical Stress.</a> Cancer Research. 76 (6), 1367-1380 (2016).</li><li>Tseng, W., Leong, X., Engleman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+mouse+model+of+colorectal+cancer.">Orthotopic mouse model of colorectal cancer.</a> Journal of Visualized Experiments. (10), 484 (2007).</li><li>Elkin, M., Vlodavsky, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tail+vein+assay+of+cancer+metastasis.">Tail vein assay of cancer metastasis.</a> Current Protocols in Cell Biology. 19 (19.2), (2001).</li><li>Thalheimer, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+intraportal+injection+model:+A+practical+animal+model+for+hepatic+metastases+and+tumor+cell+dissemination+in+human+colon+cancer.">The intraportal injection model: A practical animal model for hepatic metastases and tumor cell dissemination in human colon cancer.</a> BMC Cancer. 9 (1), 29 (2009).</li><li>Frampas, E., Maurel, C., Thedrez, P., Le Sa&#235;c, P. R. e. m. a. u. d. -., Faivre-Chauvet, A., Barbet, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+intraportal+injection+model+for+liver+metastasis:+Advantages+of+associated+bioluminescence+to+assess+tumor+growth+and+influences+on+tumor+uptake+of+radiolabeled+anti-carcinoembryonic+antigen+antibody.">The intraportal injection model for liver metastasis: Advantages of associated bioluminescence to assess tumor growth and influences on tumor uptake of radiolabeled anti-carcinoembryonic antigen antibody.</a> Nuclear Medicine Communications. 32 (2), 147-154 (2011).</li><li>Goddard, E. T., Fischer, J., Schedin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Portal+Vein+Injection+Model+to+Study+Liver+Metastasis+of+Breast+Cancer.">A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer.</a> Journal of Visualized Experiments. (118), (2016).</li><li>Limani, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+portal+vein+injection+for+the+design+of+syngeneic+models+of+liver+malignancy.">Selective portal vein injection for the design of syngeneic models of liver malignancy.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 310 (9), G682-G688 (2016).</li></ol>

Модель животных, описанная в этой рукописи, основана на двух основных подходах. Во-первых, признать способность раковых клеток к локализации и размножаться в доле печени. Во-вторых, для изучения влияния печеночной ишемии реперфузии травмы, влияющие на рост опухоли и метастазов. Данная м...

Печень является одним из наиболее распространенных мест для развития метастатического заболевания1. Смертность почти всегда объясняется осложнениями, связанными с ростом опухоли в печени. У пациентов с метастатическими твердыми опухолями в печени, хирургия остается одним из важнейших вмешательства для борьбы с болезнью и возможного лечебного подхода. Тем не менее, подавляющее большинство пациентов в конечном итоге присутствует с рецидивирующимзаболевание заболеванием, преимущественно в печени2,3. Во время печеночной хирургии распространено внутриоперационное кровотечение, что часто требует переливания крови и различных технических подходов к борьбе с кровотечениями, включая сосудистые методы зажима. Однако такие меры вызывают печеночную ишемию/реперфузию (I/R) в ткани печени. Неблагоприятное воздействие I/R на гепатоцеллюлярную функцию хорошо задокументировано. Печень I / R оскорбление зажигает воспалительные каскады во время восстановления кровотока через воспалительные пути4. Мало того, что повреждение печени I/R способствует печеночной недостаточности, но текущие данные также показывают, что Травма I/R стимулирует адгезиюопухолевых клеток, а также способствует заболеваемости образованием метастазаций и росту существующих микрометастатических заболеваний 5. Ранее мы сообщали, что хирургический стресс вызывает активацию иммунных клеток, которая не только помогает в росте первичной опухоли, но и облегчает метастазирование путем захвата раковых клеток в циркуляции6.
Здесь мы подробно описываем технику для создания модели опухоли опухоли метации печени. В этой модели, мы также представляем метод, чтобы вызвать печеночной ишемии реперфузии травмы, которая действует как суррогатной хирургического стресса присутствует клинически во время гепатэктомии. Комбинированные методы инъекции рака и печеночной I/R могут успешно интерпретировать развитие CRLM у пациентов, перенесших первичную резекцию опухоли.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>12-614F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>900-108</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25030-081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicilin</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>15-140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stretomysin</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>15-140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>SH3023701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>sh30042.02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture Flask 75cm</td>
			<td>5 Cells Star</td>
			<td>658170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15ml PP Conical Tubes</td>
			<td>BioExcell</td>
			<td>41021037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue Stain</td>
			<td>Giibco</td>
			<td>15250-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>1376152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cautry</td>
			<td>Bovie</td>
			<td>AA01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microvascular clamp</td>
			<td>Finescience tools</td>
			<td>18055-03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-Serrefine clamp applicator with lock</td>
			<td>Fine science toosl</td>
			<td>FST-18056-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spring scissor</td>
			<td>Fine science toosl</td>
			<td>FST-15021-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vessel Dilator</td>
			<td>Fine science toosl</td>
			<td>FST-00276-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic fixator Retraction system</td>
			<td>Fine science toosl</td>
			<td>FST-18200020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-Adson Forceps</td>
			<td>Fine science toosl</td>
			<td>FST-11019-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-Adson Forceps</td>
			<td>Fine science toosl</td>
			<td>FST-11018-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 polypropylene suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>K881H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>72-8826</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating Pad</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>1443915</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clipper</td>
			<td>Oster</td>
			<td>559A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone-Iodine solution</td>
			<td>Medline</td>
			<td>MDS093945</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 1ml 25G</td>
			<td>BD safety Glide</td>
			<td>305903</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringe 0.5 ml</td>
			<td>BD insulin Syringes</td>
			<td>32946</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton -Tipped Applicator</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>23-400-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>LR92240</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mycoplasma Elisa Kit</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11663925910</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Putney</td>
			<td>#056344</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>NADA</td>
			<td>#139-236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ALT strip</td>
			<td>Heska</td>
			<td>15809554</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AST strip</td>
			<td>Heska</td>
			<td>15809542</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LDH strip</td>
			<td>Heska</td>
			<td>15809607</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine model of metastatic liver tumors in the setting of ischemia reperfusion injury

Ишемия печени и реперфузии (I / R) травмы, общая клиническая проблема, остается неизбежным патофизиологический процесс, который, как было показано, вызывают множественные ткани и повреждения органов. Несмотря на последние достижения и терапевтические подходы, общая заболеваемость остается неудовлетворительной, особенно у пациентов с основными паранхимальными аномалиями. В контексте агрессивного роста рака и метастазирования, хирургический I / R подозревается в промоутер регулирует рецидив опухоли. Эта статья направлена на описание клинически реинную модель печени I / R и колоректального метастаза печени. При этом, мы стремимся помочь другим следователям в создании и совершенствовании этой модели для их обычной исследовательской практики, чтобы лучше понять влияние печени I / R на содействие метастазам печени.

Все мыши дикого типа (C57BL6) (n No 20) подвергались модели метастазов печени с использованием описанного выше протокола. Все инъекционные мыши с или без ишемии реперфузии травмы выжили до даты жертвоприношения. Схематическая диаграмма Рисунок 1A рака инъекционной печени иллю...

Watch this Scientific Journal Video about Murine Model of Metastatic Liver Tumors in the Setting of Ischemia Reperfusion Injury at JoVE.com

Murine Model of Metastatic Liver Tumors in the Setting of Ischemia Reperfusion Injury

Мы подробно описываем клинически рестазовы колоректального рака печени (CRLM) и влияние реперфузии ишемии печени (I/R) на рост опухоли и метастазы. Эта модель может помочь лучше понять механизмы, лежащие в основе хирургии индуцированной поощрения метастатического роста печени.

Murine Модель метастатических опухолей печени в настройке Ишемия Реперфузия Травмы

Liver ischemia and reperfusion (I/R) injury, a common clinical challenge, remains an inevitable pathophysiological process that has been shown to induce ...

Экспериментальные и клинические данные показывают, что реперфузия печеночной ишемии может увеличить образование метастатических очагов путем распространения раковых клеток и роста микрометастатического заболевания. Эта воспроизводимая модель мурина позволяет проучить как установление метастазов, так и рост уже существующей опухоли в печени. Хирургия печени, кровотечение и септический шок все связаны с реперфузией печени и может повлиять на рост метастатического заболевания.Эти методы позволяют изучать это явление в попытке лучше диагностировать и предотвратить пагубное влияние ишемии reperfusion на рост опухоли в клинических условиях. После подтверждения отсутствия реакции на щепотку ноша в анестезированным от восьми до 12-недельного самца C57 черная 6 мышь, дезинфицировать открытые брюшной стенки кожи с povidone йод скраб и использовать зубчатые щипец, чтобы поднять кожу. Используя хирургический скальпель, сделайте разрез средней линии кожи и поднимите мышцы живота и брюшной полости, чтобы облегчить создание трехсемейного разреза средней линии, чтобы разоблачить содержимое брюшной полости.После размещения гемостата по обе стороны от разреза и под процесс xiphoid, тянуть и ленты хвост вниз, чтобы расширить живот и использовать шестидюймовый стерильный хлопок наконечник аппликатор отделить и подвергать селезенки из жировой ткани поджелудочной железы. Далее, вихрь подвески раковых клеток интерес разъедать любые клеточные сгустки и загрузить клетки в 0,5-миллилитровый инсулин шприц оснащен 28-калиберной иглой. Медленно и осторожно ввиснуть 100 микролитров клеток в кончик селезенки, поместив хлопчатобумажный наконечник, прилегающий к стороне прокола иглы, чтобы поглотить любые возможные утечки опухоли в брюшной полости, добавляя нежное давление для стабилизации селезенки во время инъекции.Успешная инъекция будет очевидна изменением цвета печени. Когда все клетки были доставлены, поместите кусок пропитанной PBS стерильной марли над вскрытой области и поместите мышь на грелку в течение 15 минут, чтобы раковые клетки циркулировать в системе. Чтобы вызвать ишемию и травму реперфузии, используйте два увлажненых наконечника хлопка, чтобы аккуратно переместить кишечник из полости, чтобы разоблачить вену портала и поместить мышь под рассеченный микроскоп.Поднимите медиану и левую лобную долей печени против диафрагмы. Поместите небольшой влажный ватный тампон между средней долей и правой боковой долей, чтобы создать достаточно места для зажима и тщательно пройти сосуд расширитеор forceы за портал триады и, используя сосуд расширителя тибры, использовать 10-сантиметровый кусок 4-0 полипропиленовый шов пройти позади и поднять портал триады. Используйте аппликатор микро-серрифина с замком, чтобы поместить микрососудистый зажим на левую и среднюю долей печени, чтобы окклюдировать все структуры в триаде портала.При наблюдении бланширования снимите 4-0 полипропиленовый шов и небольшой ватный тампон и аккуратно верните кишечник в брюшную полость. Обложка брюшной стенки с новым куском PBS пропитанной марлей и покрыть марлю полиэтиленовой пленкой, чтобы свести к минимуму испарительные потери. Затем поместите мышь обратно на грелку в течение 60 минут.На протяжении всего ишемического интервала, визуализировать бледно бланширование правой медиальной, левой медиальной и боковой доли, чтобы подтвердить доказательства травмы ишемии. В конце периода травмы снимите зажим. Для выполнения спленэктомии, тщательно поднимите селезенку с гладкими типсами и использовать портативный прижигательное устройство для прижигания селезенки кровеносных сосудов, чтобы избежать чрезмерного кровотечения.Трансект сосудов на прижигаемой секции, чтобы удалить селезенку и сразу же использовать 4-0 полипропиленовых швов, чтобы закрыть мышцы и разрезы кожи в двухслойный шов картины. Затем поместите мышь обратно в свою домашнюю клетку с мониторингом до полного выздоровления. Хирургический стресс значительно увеличивает количество заранее установленных микрометастазы в печени.Эта разница наблюдается даже через две недели после реперфузии ишемии по сравнению с неишемией, переросшей мышами. Реперфузия печени и инъекция опухолевых клеток могут зависеть от комнатной температуры и жизнеспособности клеток, поэтому позаботьтесь о контроле над этими переменными. Этот метод облегчает изучение влияния хирургического стресса и травмы печени на рост метастатических заболеваний.Это поможет исследователям лучше понять феномен хирургического роста опухоли.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Next Generation Sequencing for the Detection of Actionable Mutations in Solid and Liquid Tumors

Следующее поколение Секвенирование для обнаружения осуществимых Мутации в твердых и жидких опухолей

As our understanding of the driver mutations necessary for initiation and progression of cancers improves, we gain critical information on how specific ...

Advanced Animal Model of Colorectal Metastasis in Liver: Imaging Techniques and Properties of Metastatic Clones

Расширенный животной модели колоректального метастазами в печени: Визуализация методы и свойства метастатических клонов

Patients with a limited number of hepatic metastases and slow rates of progression can be successfully treated with local treatment approaches1,2. ...

A Syngeneic Mouse Model of Metastatic Renal Cell Carcinoma for Quantitative and Longitudinal Assessment of Preclinical Therapies

Ячейка Карцинома Сингенной Мышь Модели метастатического Почечной для количественных и Продольных оценок доклинических Терапии

Renal cell carcinoma (RCC) affects &#62; 60,000 people in the United States annually, and ~ 30% of RCC patients have multiple metastases at the time of ...

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

Мышь Модель усталости, индуцированный Peripheral Облучение

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

Identification and Characterization of Metastatic Factors by Gene Transfer into the Novel RIP-Tag; RIP-tva Murine Model

Identification and Characterization of Metastatic Factors by Gene Transfer into the Novel RIP-Tag; RIP-tva Murine Model

Определение и характеристика метастатическим факторов путем переноса генов в романе RIP-тег; РИП tva мышиных модель

Metastatic cancer accounts for 90% of deaths in patients with solid tumors. There is an urgent need to better understand the drivers of cancer metastasis ...

Development of a Human Preclinical Model of Osteoclastogenesis from Peripheral Blood Monocytes Co-cultured with Breast Cancer Cell Lines

Развитие человека доклинических модели Osteoclastogenesis от периферической крови моноциты совместно культивируемых с линии клеток рака молочной железы

The crosstalk between tumor cells and bone cells in the bone microenvironment is crucial to understanding the mechanism of bone metastasis formation. We ...

Utilization of Ultrasound Guided Tissue-directed Cellular Implantation for the Establishment of Biologically Relevant Metastatic Tumor Xenografts

Использование УЗИ руководствоваться ткани направленных сотовой имплантации для создания ксенотрасплантатов биологически соответствующих метастатические опухоли