Name: adult mouse digit amputation and regeneration: a simple model to investigate mammalian blastema formation and intramembranous ossification
Uploaded: 2019-07-12T14:00:00
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Agradecemos a los miembros del Laboratorio Muneoka y del Instituto de Medicina Genómica de Texas (TIGM). Este trabajo fue apoyado por la Universidad Texas A&M.

Todos los usos y técnicas de los animales estaban en cumplimiento con los procedimientos operativos estándar del Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad A&M de Texas.
1. Adult Mouse Hind Limb Distal P3 Amputación
<ol><li>Anestetizar un ratón CD-1 de 8 a 12 semanas (Tablade Materiales)usando gas isoflurano en oxígeno; inicialmente anestesiar al 3% en una cámara, seguido de un 2% de isoflurano suministrado por un nosecone durante la duración...

<ol>
	<li>Douglas, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conservative+management+of+guillotine+amputation+of+the+finger+in+children.">Conservative management of guillotine amputation of the finger in children.</a> Australian Paediatric Journal. 8, 86-89 (1972).</li><li>Illingworth, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trapped+fingers+and+amputated+finger+tips+in+children.">Trapped fingers and amputated finger tips in children.</a> Journal of Pediatric Surgery. 9, 853-858 (1974).</li><li>Borgens, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mice+regrow+the+tips+of+their+foretoes.">Mice regrow the tips of their foretoes.</a> Science. 217, 747-750 (1982).</li><li>Neufeld, D. 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S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Level-specific+amputations+and+resulting+regenerative+outcomes+in+the+mouse+distal+phalanx.">Level-specific amputations and resulting regenerative outcomes in the mouse distal phalanx.</a> Wound repair and Regeneration: Official Publication of the Wound Healing Society [and] the European Tissue Repair Society. 25, 443-453 (2017).</li><li>Dawson, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analogous+cellular+contribution+and+healing+mechanisms+following+digit+amputation+and+phalangeal+fracture+in+mice.">Analogous cellular contribution and healing mechanisms following digit amputation and phalangeal fracture in mice.</a> Regeneration. 3, 39-51 (2016).</li><li>Seifert, A. W., Muneoka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+blastema+and+epimorphic+regeneration+in+mammals.">The blastema and epimorphic regeneration in mammals.</a> Developmental Biology. 433, 190-199 (2018).</li><li>Carlson, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Principles of Regenerative Biology. , (2007).</li><li>Fernando, W. 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P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axonal+regrowth+is+impaired+during+digit+tip+regeneration+in+mice.">Axonal regrowth is impaired during digit tip regeneration in mice.</a> Developmental Biology. 445, 237-244 (2018).</li><li>Dawson, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blastema+formation+and+periosteal+ossification+in+the+regenerating+adult+mouse+digit.">Blastema formation and periosteal ossification in the regenerating adult mouse digit.</a> Wound Repair and Regeneration: Official Publication of the Wound Healing Society [and] the European Tissue Repair Society. 26, 263-273 (2018).</li><li>Sammarco, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endogenous+bone+regeneration+is+dependent+upon+a+dynamic+oxygen+event.">Endogenous bone regeneration is dependent upon a dynamic oxygen event.</a> Journal of Bone and Mineral Research: The Official Journal of the American Society for Bone and Mineral Research. 29, 2336-2345 (2014).</li><li>Einhorn, T. 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A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+tension-stress+effect+on+the+genesis+and+growth+of+tissues.+Part+I.+The+influence+of+stability+of+fixation+and+soft-tissue+preservation.">The tension-stress effect on the genesis and growth of tissues. Part I. The influence of stability of fixation and soft-tissue preservation.</a> Clinical Orthopaedics And Related Research. (238), 249-281 (1989).</li><li>Thompson, Z., Miclau, T., Hu, D., Helms, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+for+intramembranous+ossification+during+fracture+healing.">A model for intramembranous ossification during fracture healing.</a> Journal of Orthopaedic Research: Official Publication of the Orthopaedic Research Society. 20, 1091-1098 (2002).</li><li>Dolan, C. P., Dawson, L. A., Muneoka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Digit+Tip+Regeneration:+Merging+Regeneration+Biology+with+Regenerative+Medicine.">Digit Tip Regeneration: Merging Regeneration Biology with Regenerative Medicine.</a> Stem Cells Translational Medicine. 7, 262-270 (2018).</li><li>Lee, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SDF-1alpha/CXCR4+signaling+mediates+digit+tip+regeneration+promoted+by+BMP-2.">SDF-1alpha/CXCR4 signaling mediates digit tip regeneration promoted by BMP-2.</a> Developmental Biology. 382, 98-109 (2013).</li><li>Doube, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BoneJ:+Free+and+extensible+bone+image+analysis+in+ImageJ.">BoneJ: Free and extensible bone image analysis in ImageJ.</a> Bone. 47, 1076-1079 (2010).</li></ol>

Este protocolo describe un procedimiento estandarizado de amputación disal de P3 de ratón adulto, tinción inmunohistoquímica fluorescente para visualizar e investigar la formación de blastema y la osificación intramembranosa, y escaneo secuencial en vivoCT para identificar los cambios morfológicos, de volumen y longitud óseas después de la amputación. La amputación P3 es un modelo único, procedimentalmente simple y reproducible para analizar un entorno de heridas pro-regenerativo que desencadena la formación...

Los mamíferos, incluidos los humanos y los ratones, tienen la capacidad de regenerar las puntas de sus dígitos después de la amputación distal de la falange terminal (P3)1,2,3. En ratones, la respuesta de regeneración depende del nivel de amputación; las amputaciones de dígitos cada vez más proximales muestran una respuesta regenerativa progresivamente atenuada hasta que el fallo regenerativo completo en las amputaciones transectantes y proximal a la matriz de uñas P34,5,6 , 7 , 8. La regeneración P3 está mediada por la formación de un blastema, definido como unapoblación de células proliferantes que se someten a morfogénesis para regenerar las estructuras amputadas 9. La formación de un blastema para regenerar las estructuras perdidas por amputación, un proceso llamado regeneración epimórfica, distingue la respuesta de regeneración P3 a nivel multitejido de la reparación de tejido tradicional después de la lesión6, 10. La regeneración P3 es un modelo reproducible y procedimentalmente simple para investigar procesos regenerativos complejos, incluyendo la cicatrización de heridas11,12, histólisis ósea11,12, revascularización13, regeneración del nervio periférico14,y conversión blastemal a hueso a través de osificación intramembranosa15.
Estudios previos con inmunohistoquímica han demostrado que el blastema es heterogéneo, avascular, hipoxico y altamente proliferativo11,13,15,16. Después de la amputación distal de P3, el blastema temprano se asocia inicialmente con el periosteum P3 y el endosteum y se caracteriza por una proliferación robusta y osteogénesis naciente adyacente a la superficie ósea15. Después de la degradación ósea y el cierre de la herida, el blastema heterogéneo se forma por la fusión de células asociadas a periosteales y endosteales, seguido de la diferenciación de componentes blastemales, incluyendo hueso según la osificación intramembranosa 15.
La reparación ósea en respuesta a la lesión se produce típicamente por osificación endochondral, es decir, a través de un callo cartilageonoso inicial que forma una plantilla para la posterior formación ósea17,18. La osificación intramembranosa ósea larga, es decir, la formación ósea sin un intermedio cartilaginoso, se induce comúnmente utilizando dispositivos de distracción complejos o fijación quirúrgica19,20. La respuesta de regeneración de dígitos es un modelo preclínico que ofrece ventajas sobre los modelos convencionales de osificación intramembranosa: 1) no requiere fijación externa o interna después de una lesión para estimular la osificación intramembranosa, 2) es realizado utilizando 4 dígitos de cada animal, maximizando así las muestras y minimizando el uso de animales, y 3) el análisis secuencial de microcomputación in vivo (CT) se puede realizar con facilidad y velocidad.
En el presente estudio, mostramos el plano de amputación P3 estandarizado para lograr una respuesta de regeneración reproducible y robusta. Además, demostramos un protocolo optimizado de inmunohistoquímica de fluorescencia utilizando secciones de parafina para visualizar la formación de blastema, la revascularización en el contexto de la regeneración y la conversión blastemal a hueso a través de Osificación. También demostramos el uso de la c.CT secuencial para identificar los cambios en la morfología ósea, el volumen y la longitud en el mismo dígito en el transcurso de la regeneración. El objetivo de este protocolo es investigar la formación de blastema de mamíferos después de la amputación y demostrar 2 técnicas, inmunohistoquímica de fluorescencia y secuencial in vivo-CT, para el estudio de la regeneración ósea intramembranosa.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Protein Block Serum Free</td>
			<td>DAKO</td>
			<td>X0909</td>
			<td>Ready to use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-PCNA antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab29</td>
			<td>1:2000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat anti-CXCR4 antibody</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>MAB21651</td>
			<td>1:500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-human vWF XIII antibody</td>
			<td>DAKO</td>
			<td>A0082</td>
			<td>1:800 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-osterix, SP7 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab22552</td>
			<td>1:400 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-Runx2 antibody</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co.</td>
			<td>HPA022040</td>
			<td>1:250 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647-conjugated goat anti-mouse IgG (H+L)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A21235</td>
			<td>1:500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488-conjugated goat anti-rabbit IgG (H+L)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A11008</td>
			<td>1:500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 568-conjugated goat anti-rat IgG (H+L)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A11077</td>
			<td>1:500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prolong Gold antifade reagent</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>P36930</td>
			<td>Ready to use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgipath Decalicifier 1</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>3800400</td>
			<td>Ready to use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Z-Fix, Aqueous buffered zinc formalin fixative</td>
			<td>Anatech LTD</td>
			<td>174</td>
			<td>Ready to use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD-1 Female Mouse</td>
			<td>Envigo</td>
			<td>ICR(CD-1)</td>
			<td>8-12-weeks-old</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>vivaCT 40</td>
			<td>SCANCO Medical</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

adult mouse digit amputation and regeneration: a simple model to investigate mammalian blastema formation and intramembranous ossification

Aquí, presentamos un protocolo de amputación de falange terminal distal de ratón adulto (P3), un modelo de regeneración epimórfica de mamíferos procedimentalmente simple y reproducible, que implica la formación de blastema y la osificación intrammal inmunohistoquímica de fluorescencia y microtomografía microcomputada secuencial en vivo (CT). La regeneración de mamíferos se limita a las amputaciones que transectan la región distal de la falange terminal (P3); dígitos amputados a niveles más proximales no se regeneran y se someten a curación fibrosa y formación de cicatrices. La respuesta de regeneración está mediada por la formación de un blastema proliferativo, seguido de la regeneración ósea a través de la osificación intramembranosa para restaurar la longitud esquelética amputada. La amputación P3 es un modelo preclínico para investigar la regeneración epimórfica en mamíferos, y es una poderosa herramienta para el diseño de estrategias terapéuticas para reemplazar la curación fibrosa con una respuesta regenerativa exitosa. Nuestro protocolo utiliza inmunohistoquímica de fluorescencia a 1) identificar poblaciones de células blastema tempranas y tardías, 2) estudiar la revascularización en el contexto de la regeneración, y 3) investigar la osificación intramembranosa sin necesidad de hueso complejo dispositivos de estabilización. También demostramos el uso de imágenes secuenciales in vivo-CT para crear imágenes de alta resolución para examinar los cambios morfológicos después de la amputación, así como cuantificar los cambios de volumen y longitud en el mismo dígito en el transcurso de la regeneración. Creemos que este protocolo ofrece una enorme utilidad para investigar las respuestas regenerativas tanto epimórficas como tisulares en mamíferos.

Ratón adulto que regenera los dígitos P3 a 6/7 DPA (Figura2A-D), 9 DPA (Figura2E-H)y 10 DPA (Figura2I-L) fueron inmunomanchados con anticuerpos a Runx2, OSX y PCNA para visualizar hueso intrammalembranous regeneración e inmunostecadas con anticuerpos contra CXCR4 y vWF para visualizar la formación de blastema. Las representaciones representativas de los dígitos escaneados antes...

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Adult Mouse Digit Amputation and Regeneration: A Simple Model to Investigate Mammalian Blastema Formation and Intramembranous Ossification

Amputación y regeneración de dígitos de ratón adultos: un modelo simple para investigar la formación de Blastema de mamíferos y la osificación intramembranosa

Aquí, presentamos un protocolo de amputación de falange terminal de ratón adulto para investigar la formación de blastema de mamíferos y la osificación intramembranosa, analizada por inmunohistoquímica fluorescente y tomografía microcomputada secuencial in vivo.

Here, we present a protocol of adult mouse distal terminal phalanx (P3) amputation, a procedurally simple and reproducible mammalian model of epimorphic ...

La amputación P3 es un modelo preclínico para investigar la regeneración epimórfica de los mamíferos y una poderosa herramienta para identificar poblaciones y mecanismos celulares críticos que controlan la regeneración endógena. El modelo P3 permite la identificación de poblaciones de células blastémicas tempranas y tardías, el estudio de la revascularización durante la regeneración y la investigación de la osificación intramembranosa sin requisitos complejos de dispositivos de estabilización ósea. Demostrando el procedimiento conmigo serán Osama Qureshi, Alyssa Falck, y Katherine Zimmel, técnica, y Regina Brunaeur, una profesora asistente de investigación, todas de nuestro laboratorio.Después de confirmar la falta de respuesta al pellizco del dedo del pie en un ratón CD-1 de ocho a 12 semanas de edad, Aplique ung ón en los ojos del animal y coloque el ratón debajo de un microscopio de disección 10X. Utilice yodo povidona quirúrgico y 70%etanol para esterilizar los dígitos de cada extremidad posterior y utilizar microscisores para recortar el cabello lejos del sitio quirúrgico. Aplicar un microlitro de bupivacaína tópica localmente para anestesiar el sitio quirúrgico, y suavemente tocar una pata trasera para exponer la superficie del dígito medial.A continuación, sosteniendo el bisturí en un ángulo paralelo a la almohadilla de grasa, utilice un bisturí estéril número 10 para amputar la punta distal de la falange terminal de los dígitos dos y cuatro. Aplicar un microlitro adicional de bupivacaína localmente a cada dígito amputado y devolver el ratón a una jaula limpia para permitir que las heridas sanen sin vendaje de la herida y con monitoreo hasta la recumbencia completa. Para asegurar un plano de amputación P3 exitoso, sostenga el bisturí paralelo a la almohadilla de grasa durante la amputación y realice la exploración de micro-CT para confirmar la longitud de amputación correcta.En el punto final experimental adecuado, utilice un bisturí para cortar el dígito a mitad de camino a través del hueso de la falange media aproximadamente en la segunda sangría de la almohadilla de grasa ventral. Transfiera el tejido a un vial de centelleo de 20 mililitros que contenga 10 mililitros de fijador de formalina de zinc con tamponado fresco durante 24 a 48 horas. Y utilizar un microtomo para adquirir secciones de cuatro a cinco micrómetros de espesor de cada dígito, colocando las rodajas en un baño de agua de 38 a 41 grados Celsius complementado con una solución adhesiva histológica a medida que se obtienen.A continuación, capture las rodajas en las diapositivas adhesivas y coloque las diapositivas en un calentador de diapositivas Celsius de 37 grados para secar. Cuando los portaobjetos se hayan desparafinado, sumerja las muestras en un frasco de tinción de una solución de recuperación de antígeno adecuada, y caliente los portaobjetos a 95 grados centígrados durante 25 minutos asegurándose de que no se produzca la ebullición. Al final de la incubación, deje que el frasco llegue a temperatura ambiente, y poner los portaobjetos planos en una caja deslizante de plástico cubierta profunda de una pulgada con papel tisú humedecido en la base.Añadir 100 microlitros de proteinasa precalentada K a cada muestra. Cubra cada diapositiva con una pequeña tira de parafilm para asegurarse de que las secciones no se sequen. Después de 12 minutos a 37 grados centígrados, retire cuidadosamente la película de parafina y drene suavemente las diapositivas en papel tisú para eliminar el exceso de solución de bloqueo.A continuación, añada entre 100 y 200 microlitros de la solución primaria de anticuerpos de interés para cada diapositiva. Devolver los sitios a la cámara humidificadora cubierta con película de parafina para una incubación durante la noche a cuatro grados centígrados. A la mañana siguiente, después de lavar los portaobjetos en solución salina tamponada TRIS, además de TWEEN o TBST, etiqueta los portaobjetos con una solución de anticuerpos secundaria adecuada para una incubación de 45 minutos a temperatura ambiente protegida de la luz.Al final de la incubación, lave los portaobjetos en TBST y dérelos secar. A continuación, utilice 100 microlitros de medios de montaje anti-fade para colocar cuidadosamente los cubreobjetos en los portaobjetos secos y almacene los portaobjetos planos a temperatura ambiente durante la noche protegidos de la luz para permitir que el medio de montaje se seque. Para la tomografía microcalculada in vivo secuencial o micro-CT equipar el micro-CT imager con tubo para permitir el flujo de oxígeno dentro y fuera de la cámara animal micro-CT, asegurándose de que el oxígeno saliente está equipado con un filtro de carbón activado para atrapar el isoflurano.Establezca el Voxelsize en 10,5 micrómetros en 55 kilovoltaje pico y 145 microamperios con 1.000 proyecciones por 180 grados y rotación continua con un tiempo de integración de 200 milisegundos, lo que resulta en un máximo de 213 cortes por escaneo. Cuando el escáner esté listo, coloque suavemente el ratón anestesiado en la cámara animal micro-CT con los dígitos de las extremidades posteriores dispuestos en el lado ventral plano y de estrecha asociación hacia arriba con la pata izquierda en el lado izquierdo y la derecha en el lado derecho de la plataforma de escaneo. A continuación, aplique cinta quirúrgica para fijar suavemente los dígitos en su lugar.Aplique pomada oftálmica a los ojos del animal antes de iniciar la exploración. Después de escanear, regrese el animal a una jaula limpia con monitoreo hasta la recumbencia completa, y permita hasta varias horas para la reconstrucción de la imagen de micro-CT. Para el análisis de la imagen ósea 3D reconstruida, utilizando el software proporcionado con el micro-CT, convierta los archivos de imagen en una serie de archivos DICOM.Cuando todos los archivos se hayan convertido, descargue la serie DICOM en una sola carpeta utilizando un descargador de archivos por lotes en un navegador web. Cargue el complemento BoneJ en la carpeta del complemento ImageJ. Arrastre y suelte la carpeta de la serie de archivos DICOM en la barra ImageJ para abrir los archivos.Se abrirá una pila de imágenes de 16 bits que muestra todos los valores grises. Para mostrar solo el hueso, haga clic en Ajuste de imagen y Umbral. Deslice la barra de umbral superior hacia el extremo derecho y ajuste la barra de umbral inferior hasta que solo el hueso se resalte en rojo.El valor de umbral inferior será de aproximadamente 10.000 a 13.000 a una intensidad máxima de la señal de 32.767. Haga clic en Aplicar y, en el nuevo cuadro de diálogo, haga clic en Fondo negro. A continuación, haga clic en Aceptar. Se generará una imagen de ocho bits que muestre valores en blanco y negro.Con el blanco correspondiente al hueso. Dibuja un rectángulo alrededor del hueso P3 para seleccionarlo y duplicar la pila. Para generar una imagen 3D, haga clic en Plugins y Visor 3D y utilice la herramienta de selección a mano alzada para rodear el hueso que se va a eliminar.A continuación, haga clic con el botón derecho y seleccione Rellenar selección para recortar cualquier hueso innecesario de la imagen. Para cuantificar el volumen óseo de la representación 3D, abra el complemento BoneJ y seleccione Fracción de volumen. Aparecerá una ventana de resultados y el volumen óseo mostrado en milímetros en cubos.Para cuantificar la longitud ósea de la representación 3D, utilice la herramienta multipunto ImageJ. Para capturar una imagen de la representación 3D, haga clic en Ver y tome una instantánea. A continuación, guarde la imagen como un archivo TIF o JPEG.En estas imágenes, las secciones de un dígito P3 regenerador de ratón adulto fueron inmunosuradas con anticuerpos para visualizar la regeneración ósea intramembranosa y la formación de blastema en los días seis a siete, nueve y 10 post-amputación. Aquí, se muestran representaciones representativas de micro-CT de dígitos escaneados antes de la amputación y en varios momentos a lo largo de la regeneración con puntos de referencia utilizados para identificar las mediciones de longitud. El modelo de dígitos del ratón es un potente sistema para analizar un entorno de herida pro-regenerativa que desencadena la formación de blastema cuando se amputa a un nivel distal.Por el contrario, la amputación proximal de los dígitos sirve como un sistema modelo para investigar fallas regenerativas, así como un sitio para probar estrategias para mejorar la regeneración.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Kidney Regeneration in Adult Zebrafish by Gentamicin Induced Injury

La regeneración renal en adultos de pez cebra por gentamicina lesión inducida

The kidney is essential for fluid homeostasis, blood pressure regulation and filtration of waste from the body. The fundamental unit of kidney function is ...

Investigación

Biología del Desarrollo

Loss- and Gain-of-function Approach to Investigate Early Cell Fate Determinants in Preimplantation Mouse Embryos

Deficitaria y en el enfoque de ganancia de función de investigar la célula destino temprano Determinantes de preimplantación embriones de ratón

 Gene silencing and overexpression techniques are instrumental for the identification of genes involved in embryonic development. Direct target gene ...

Epigenetic Conversion as a Safe and Simple Method to Obtain Insulin-secreting Cells from Adult Skin Fibroblasts

Conversión epigenética como un método seguro y simple para obtener células secretoras de insulina a partir de fibroblastos de la piel de adultos

Regenerative medicine requires new, fully functional cells that are delivered to patients in order to repair degenerated or damaged tissues. When such ...

Building Finite Element Models to Investigate Zebrafish Jaw Biomechanics

La construcción de modelos de elementos finitos para investigar pez cebra mandíbula Biomecánica

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Culture of Murine Embryonic Metatarsals: A Physiological Model of Endochondral Ossification

Cultura de murinos embrionarias Metatarsianos: Un modelo fisiológico de osificación endocondral

The fundamental process of endochondral ossification is under tight regulation in the healthy individual so as to prevent disturbed development and/or ...

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

Establecimiento de pez cebra Larval como modelo Animal para investigar Trypanosoma cruzi motilidad En Vivo

Chagas disease is a parasitic infection caused by Trypanosoma cruzi, whose motility is not only important for localization, but also for cellular binding ...

A RANKL-based Osteoclast Culture Assay of Mouse Bone Marrow to Investigate the Role of mTORC1 in Osteoclast Formation

Una base de RANKL osteoclasto cultura ensayo de médula ósea de ratón para investigar el papel de mTORC1 en la formación de osteoclastos

Osteoclasts are unique bone-resorbing cells that differentiate from the monocyte/macrophage lineage of bone marrow. Dysfunction of osteoclasts may result ...

Chemical Amputation and Regeneration of the Pharynx in the Planarian Schmidtea mediterranea

Chemical Amputation and Regeneration of the Pharynx in the Planarian Schmidtea mediterranea

Química la amputación y la regeneración de la faringe en el Planarian Schmidtea mediterranea

Planarians are flatworms that are extremely efficient at regeneration. They owe this ability to a large number of stem cells that can rapidly respond to ...

Partial Lobular Hepatectomy: A Surgical Model for Morphologic Liver Regeneration

Hepatectomía parcial lobulado: Un modelo quirúrgico para regeneración hepática morfológico

Morphological organ regeneration following acute tissue loss is common among lower vertebrates, but is rarely observed in mammalian postnatal life. Adult ...

A Simplified and Efficient Method to Isolate Primary Human Keratinocytes from Adult Skin Tissue

Un método simplificado y eficiente para aislar Keratinocytes humanos primarios de tejido adulto de la piel

Primary human keratinocytes isolated from fresh skin tissues and their expansion in vitro have been widely used for laboratory research and for clinical ...