Name: dual bioluminescence imaging of tumor progression and angiogenesis
Uploaded: 2019-08-01T13:00:00
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Diese Forschung wurde unterstützt durch das National Key R&D Program of China (2017YFA0103200), die National Natural Science Foundation of China (81671734) und Key Projects of Tianjin Science and Technology Support Program (18YFZCSY00010), Fundamental Research Funds for den Zentraluniversitäten (63191155). Wir erkennen die Revisionen der Gloria Nance an, die für die Verbesserung der Qualität unseres Manuskripts wertvoll waren.

Die Versuche müssen den nationalen und institutionellen Vorschriften über die Verwendung von Tieren zu Forschungszwecken entsprechen. Genehmigungen für die Durchführung von Experimenten müssen eingeholt werden. Die Behandlung von Tieren und die experimentellen Verfahren der Studie entsprechen den Richtlinien des Nankai University Animal Care and Use Committee, die den richtlinien für Tierpflege entsprechen, die von den National Institutes of Health (NIH) genehmigt wurden.
1. LV-Rluc-RFP (R...

<ol>
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W., Cao, Y., Moeller, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cycling+hypoxia+and+free+radicals+regulate+angiogenesis+and+radiotherapy+response.">Cycling hypoxia and free radicals regulate angiogenesis and radiotherapy response.</a> Nature Reviews. Cancer. 8, 425-437 (2008).</li><li>Wigerup, C., Pahlman, S., Bexell, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+targeting+of+hypoxia+and+hypoxia-inducible+factors+in+cancer.">Therapeutic targeting of hypoxia and hypoxia-inducible factors in cancer.</a> Pharmacology &amp; Therapeutics. 164, 152-169 (2016).</li><li>Wong, P. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual-action+combination+therapy+enhances+angiogenesis+while+reducing+tumor+growth+and+spread.">Dual-action combination therapy enhances angiogenesis while reducing tumor growth and spread.</a> Cancer Cell. 27, 123-137 (2015).</li><li>Mezzanotte, L., van &#39;t Root, M., Karatas, H., Goun, E. A., Lowik, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+Molecular+Bioluminescence+Imaging:+New+Tools+and+Applications.">In vivo Molecular Bioluminescence Imaging: New Tools and Applications.</a> Trends in Biotechnology. 35, 640-652 (2017).</li><li>Du, W., Tao, H., Zhao, S., He, Z. 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R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Red-emitting+chimeric+firefly+luciferase+for+in+vivo+imaging+in+low+ATP+cellular+environments.">Red-emitting chimeric firefly luciferase for in vivo imaging in low ATP cellular environments.</a> Analytical Biochemistry. 534, 36-39 (2017).</li><li>McLatchie, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+sensitive+in+vivo+imaging+of+Trypanosoma+brucei+expressing+&amp;#34;red-shifted&amp;#34;+luciferase.">Highly sensitive in vivo imaging of Trypanosoma brucei expressing &amp;#34;red-shifted&amp;#34; luciferase.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 7, e2571 (2013).</li></ol>

In diesem Protokoll wird ein nicht-invasiver dualer BLI-Ansatz zur Überwachung der Tumorentwicklung und Angiogenese beschrieben. Das BLI-Reportersystem wurde entwickelt und enthält das HSV-ttk/GCV-Selbstmordgen zur Verfolgung der Tumorprogression und Regression in vivo durch Rluc-Bildgebung. In der Zwischenzeit wird die Tumorangiogenese mit Vegfr2-Fluc-KI-Mäusen mittels Fluc-Bildgebung untersucht. Dieses tumortragende Mausmodell ist in der Lage, eine praktische Plattform für die kontinuierliche und nicht-invasive Tra...

Angiogenese ist ein wesentlicher Prozess bei der Progression von Krebs von kleinen, lokalisierten Neoplasmen zu größeren, potenziell metastasierenden Tumoren1,2. Die Korrelation zwischen Tumorwachstum und Angiogenese wird zu einem der Schwerpunkte im Bereich der onkologischen Forschung. Herkömmliche Methoden zur Messung morphologischer Veränderungen können jedoch die Tumorprogression und Angiogenese bei lebenden Tieren nicht gleichzeitig mit einem visualisierten Ansatz überwachen.
Biolumineszenz-Bildgebung (BLI) von Tumorzellen ist eine besonders geeignete experimentelle Methode zur Überwachung des Tumorwachstums aufgrund seiner Nicht-Invasivität, Empfindlichkeit und Spezifität3,4,5,6 . Die BLI-Technologie basiert auf dem Prinzip, dass die Luziferase die Oxidation eines bestimmten Substrats katalysieren kann, während sie Diebiomineszenz aussendet. Die in implantierten Tumorzellen exprimierte Luziferase reagiert mit dem injizierten Substrat, das durch ein lebendiges Bildgebungssystem nachgewiesen werden kann, und Signale spiegeln indirekt die Veränderungen der Zellzahl oder Zelllokalisierung in vivo6,7wider.
Abgesehen vom Tumorwachstum kann die Tumorangiogenese (der kritische Schritt in der Krebsprogression) auch durch BLI-Technologie mit Vegfr2-Fluc-KI transgenen Mäusen8,9,10visualisiert werden. Der vaskuläre endotheliale Wachstumsfaktor (Vegf) Rezeptor 2 (Vegfr2), eine Art Von Vegf-Rezeptor, wird meist in den vaskulären Endothelzellen von erwachsenen Mäusen11exprimiert. Bei transgenen Vegfr2-Fluc-KI-Mäusen wird die DNA-Sequenz der Firefly-Luziferase (Fluc) in das erste Exon der endogenen Vegfr2-Sequenz geschlagen. Als Ergebnis wird der Fluc (der als BLI-Signale erscheint) in einer Weise ausgedrückt, die mit dem Niveau der Angiogenese bei Mäusen identisch ist. Um über ein paar Millimeter zu wachsen, rekrutiert der Tumor neue Gefäße aus bestehenden Blutgefäßen, die die durch Wachstumsfaktoren aus den Tumorzellen1ausgelöste Vegfr2 stark ausdrücken. Dies eröffnet die Möglichkeit, vegfr2-Fluc-KI transgene Mäuse zu verwenden, um die Tumorangiogenese durch BLI nicht-invasiv zu überwachen.
In diesem Protokoll wird ein tumortragendes Mausmodell zur Überwachung der Tumorprogression und Angiogenese in einer einzigen Maus durch Firefly luciferase (Fluc) bzw. Renilla luciferase (Rluc) Bildgebung eingerichtet (Abbildung 1). Es entsteht eine 4T1-Zelllinie (4T1-RR), die Rluc und rotes fluoreszierendes Protein (RFP) stabil ausdrückt, um das Zellwachstum durch Rluc-Bildgebung zu verfolgen. Um die dynamischen Veränderungen der Angiogenese in der Progression und Regression des Tumors weiter zu untersuchen, wird eine weitere 4T1-Zelllinie (4T1-RRT) erstellt, die Selbstmord-Genherpes simplex-Virus abgeschnittene Thymidinkinase (HSV-ttk), Rluc und RFP ausdrückt. Durch die Verabreichung von Ganciclovir (GCV) werden die HSV-ttk-Exemitzellen selektiv ablated. Basierend auf diesen Zelllinien wird ein tumortragendes Modell in Vegfr2-Fluc-KI-Mäusen entwickelt, das als experimentelles Modell dient, das die Tumorprogression und Tumorangiogenese in vivo überbrückt.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.25% Trypsin-0.53 mM EDTA</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25200072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL Tubes</td>
			<td>Axygen Scientific</td>
			<td>MCT-105-C-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL Tubes</td>
			<td>Corning Glass Works</td>
			<td>601052-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>293T</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-3216</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4T1</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-2539</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>60 mm Dish</td>
			<td>Corning Glass Works</td>
			<td>430166</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well Plate</td>
			<td>Corning Glass Works</td>
			<td>3516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biosafety Cabinet</td>
			<td>Shanghai Lishen Scientific</td>
			<td>Hfsafe-900LC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blasticidine S Hydrochloride (BSD)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>15205</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Counting Kit-8</td>
			<td>MedChem Express</td>
			<td>HY-K0301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 Tegulated Incubator</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coelenterazine (CTZ)</td>
			<td>NanoLight Technology</td>
			<td>479474</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-luciferin Potassium Salt</td>
			<td>Caliper Life Sciences</td>
			<td>119222</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>C11995500BT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>BIOIND</td>
			<td>04-001-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Ti-E/U/S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ganciclovir (GCV)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Y0001129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graphics Software</td>
			<td>GraphPad Software</td>
			<td>Graphpad Prism 6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin Syringe Needles</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>328421</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>691477H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lentiviral Packaging System</td>
			<td>Biosettia</td>
			<td>cDNA-pLV03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liposome</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11668019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Living Imaging Software</td>
			<td>Caliper Life Sciences</td>
			<td>Living Imaging Software 4.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Living Imaging System</td>
			<td>Caliper Life Sciences</td>
			<td>IVIS Lumina II</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM Medium</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>31985-070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
			<td>Corning Glass Works</td>
			<td>R21031399</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polybrene</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H9268-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI1640 Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>C11875500BT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SORVALL ST 16R Centrifuge</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Thermo Sorvall ST 16 ST16R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra-low Temperature Refrigerator</td>
			<td>Haier</td>
			<td>DW-86L338</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XGI-8 Gas Anesthesia System</td>
			<td>XENOGEN Corporation</td>
			<td>7293</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dual bioluminescence imaging of tumor progression and angiogenesis

Die Angiogenese als entscheidender Prozess der Tumorprogression ist zu einem Forschungs-Hotspot und Ziel der Anti-Tumor-Therapie geworden. Es gibt jedoch kein zuverlässiges Modell, um Tumorprogression und Angiogenese gleichzeitig visuell und sensibel zu verfolgen. Die Biolumineszenz-Bildgebung zeigt ihre einzigartige Überlegenheit in der lebendigen Bildgebung aufgrund ihrer Vorteile hoher Empfindlichkeit, starker Spezifität und genauer Messung. Präsentiert hier ist ein Protokoll, um ein tumortragendes Mausmodell zu etablieren, indem eine Renilla-Luziferase-markierte murine Brustkrebs-Zelllinie 4T1 in die transgene Maus mit Angiogenese-induzierter Firefly-Luzifferase-Expression injiziert wird. Dieses Mausmodell bietet ein wertvolles Werkzeug, um die Tumorprogression und Angiogenese in Echtzeit durch duale Biolumineszenz-Bildgebung in einer einzigen Maus zu überwachen. Dieses Modell kann weit verbreitet in Anti-Tumor-Arzneimittel-Screening und Onkologie-Forschung angewendet werden.

In diesem Experiment wurde ein Brustkrebs-Mausmodell mit 4T1-Zellen erstellt, um den Zusammenhang zwischen Tumorwachstum und Tumorangiogenese zu untersuchen (Abbildung 1). Zunächst wurden zwei Lentiviren verpackt, die Gensequenzen trugen, die Rluc/RFP (LV-RR) und Rluc/RFP/HSV-ttk (LV-RRT) exättierten, wie bereits berichtet7. Anschließend wurden zwei verschiedene 4T1-Zelllinien mit den Namen 4T1-RR und 4T1-RRT durch die Transducing L...

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Dual Bioluminescence Imaging of Tumor Progression and Angiogenesis

Dual Biolumineszenz-Bildgebung der Tumorprogression und Angiogenese

Dieses Protokoll beschreibt die Etablierung eines tumortragenden Mausmodells zur Überwachung der Tumorprogression und Angiogenese in Echtzeit durch duale Biolumineszenz-Bildgebung.

Angiogenesis, as a crucial process of tumor progression, has become a research hotspot and target of anti-tumor therapy. However, there is no reliable ...

Angiogenese spielen eine wichtige Rolle bei der Tumormetastasierung und Progression. In diesem Protokoll werden wir die duale Biolumineszenz-Bildgebungsmethode verwenden, um das dynamische Tumorverlauf und die Angiogenese in einem Mausmodell von Brustkrebs zu überwachen. In diesem Modell können wir das Tumorwachstum und die Angiogenese gleichzeitig in der einzelnen Maus durch Firefly luciferase bzw. Renilla luciferase Bildgebung verfolgen.Dieses Modell kann weit verbreitet in Antitumor-Arzneimittel-Screening und Onkologie-Forschung angewendet werden. Dieses duale Biolumineszenzmodell kann verwendet werden, um Tumorprogression und Regression zu verfolgen und tumorbezogene molekulare Prozesse als Reaktion auf therapeutische Strategien zu erkennen. Angiogenese ist ein entscheidender Prozess der Tumorprogression.Daher ist die visuelle und sensible Überwachung der Tumorprogression und Angiogenese für die Entwicklung wirksamer Tumorbehandlungen notwendig. Die Verfahren werden von Kaiyue Zhang, Chen Wang und Shang Chen, Studenten aus unserem Labor, demonstriert. Für Lentivirus-Verpackungen und Produktionssamen einmal 10 bis sechs sechs von 293T-Zellen in zwei Milliliter DMEM, ergänzt mit 10% fetalem Rinderserum pro Brunnen in eine Sechs-Brunnen-Platte für die Nachtkultur in einem befeuchteten Inkubator bei 37 Grad Celsius und 5% Kohlendioxid.Am nächsten Morgen 7,5 Mikroliter Liposom mit 250 Mikroliter Neinem Essential Medium in zwei separaten 1,5-Milliliter-Röhren für eine fünfminütige Inkubation bei Raumtemperatur mischen. Zur Herstellung der DNA-Lösungen fügen Sie den Plasmid lentivirus RR Vektor und HelferPlasmide zu 250 Mikroliter n. Minimal Essential Medium in einzelnen 1,5-Milliliter-Röhren, wie in der Tabelle beschrieben. Am Ende der Inkubation fügen Sie die DNA RR-Lösungen den Liposomensuspensionen sanft tropfenweise hinzu und lassen Sie die DNA bei Raumtemperatur 20 Minuten lang an die Lipidmembranen kleben.Während die Mischung inkubiert wird, ersetzen Sie den Überstand der 293T-Zellkultur durch einen Milliliter frisches Kulturmedium und fügen Sie jedem Brunnen vorsichtig 0,5 Milliliter der entsprechenden Liposomen-DNA-Mischung hinzu. Bringen Sie die Zellen für 12 bis 16 Stunden in den Zellkultur-Inkubator zurück, bevor Sie den Überstand in jedem Brunnen durch einen Milliliter frisches Kulturmedium ersetzen, das mit Antibiotika ergänzt wird. Nach weiteren 36 Stunden Inkubation die Überstande in einem konischen Röhrchen pro Lentivirus-Stamm bündeln, um die 293T-Zellen durch Zentrifugation zu sedimentieren.Dann übertragen Sie das Lentivirus RR-haltige Überwasserstoffe in einzelne 1,5-Milliliter sterile Polypropylen-Lagerröhrchen zur Lagerung bei minus 80 Grad Celsius. Für die lentivirale Transduktion zur Genexpression in 4T1-Mamma-Tumorzellen ersetzen Sie den Überstand in jedem Brunnen einer sechs-Well-4T1-Zellkulturplatte durch ein Milliliter frisches RPMI-basiertes Zellkulturmedium, ergänzt durch fetales Rinderserum und einen Milliliter Lentiviralen Bestand. Dann fügen Sie acht Mikrogramm pro Milliliter Polybren zu jedem Brunnen, und sanft Pipette ein paar Mal zu mischen.Zentrifugieren Sie die Platte, um die Transduktionseffizienz zu erhöhen, und geben Sie die Zellen für vier bis zwölf Stunden an den Zellkultur-Inkubator zurück. Am Ende der Inkubation, ersetzen Sie den Überstand in jedem Brunnen mit frischen Kulturmedium mit Serum und Antibiotika ergänzt, um alle lentiviralen Partikel und Polybrene zu entfernen. Um für die lentivirus-transduzierten Zellen auszuwählen, durchqueren Sie die transduzierten 4T1-Zellkulturen im Verhältnis von eins zu drei zu vier mit Selektionsmedium, wobei das Medium alle zwei bis drei Tage wechselt.Sehen Sie sich nach sieben Tagen Selektionsmediumkultur die transduzierten Zellkulturen unter einem fluoreszenzinvertierten Phasenkontrastmikroskop an und zählen Sie die Anzahl der roten fluoreszierenden Protein-positiven oder RFP-4T1-Zellen und aller 4T1-Zellen in drei Sichtfeldern, um das RFP-positive Verhältnis zu schätzen. Um ein tumortragendes Mausmodell einzurichten, waschen Sie 80% konfluenttransduzierte Zellkulturen mit PBS, bevor Sie die Zellen mit zwei Millilitern Trypsin-EDTA pro 60-Millimeter-Kulturplatte lösen. Wenn die Zellen von den Plattenböden angehoben haben, stoppen Sie die Reaktion mit fünf bis 10 Milliliter Serum ergänzt Medium pro Platte.Und übertragen Sie die Kulturen in einzelne 15-Milliliter-Zentrifugenrohre zum Zählen. Verdünnen Sie die Zellen auf ein mal 10 bis sechs liter Kulturmedium ohne Serumkonzentration. Und subkutan 100 Mikroliter der 4T1-RR-Zelllinie in die linke Schulter einer anästhesierten tumortragenden Modellmaus und 100 Mikroliter der 4T1-RRT-Zelllinie in die rechte Schulter derselben Maus injizieren.Legen Sie nach den Injektionen jede Maus in einen geeigneten Erholungsbereich mit einer thermischen Unterstützung, bis sie vollständig wiederhergestellt ist. Palpate die Tumormassen jeden Tag für sieben Tage, um zu bestätigen, dass die Mäuse tumortragend sind. Am siebten Tag nach der Implantation injiziert intraperitoneal 50 Mikrogramm pro Kilogramm Ganciclovir in jede tumortragende Maus zweimal täglich bis zum Ende des Experiments.Für Tumorwachstum, öffnen Sie das Living Imaging System. Initialisieren Sie die Living Imaging-Software und initialisieren Sie das System. Während der Initialisierung des Systems, verwenden Sie eine Insulinspritze, um jede Maus mit dem entsprechenden Volumen von Coelenterazin in die Retrobulbar abgebildet werden zu injizieren.Legen Sie die injizierten Mäuse in die Kamerakammer und erhalten Sie sofort mehrere Bilder der Maus dorsal, um die Renilla-Luziferase-Signale von 4T1-Zellen zu erfassen, bis die biolumineszierenden Signale verblassen. 10 Minuten nach der Renilla-Luziferase-Bildgebung, verwenden Sie eine Insulinspritze, um das entsprechende Volumen von D-Luciferin in jedes Tier intraperitoneal zu injizieren. 10 Minuten nach der D-Luciferin-Injektion, legen Sie die Mäuse in die Kamerakammer und erhalten Sie mehrere Bilder der Maus dorsal, um die Firefly-Luziferase-Signale von der Angiogenese zu erhalten.Nach der Lentivirus-Transduktion sind mehr als 99% der Zellen RFP-positiv, ohne Unterschiede in der Zellkulturmorphologie zwischen den beiden transduzierten Zelllinien. Anschließend zeigt die Biolumineszenz-Bildgebung der transduzierten Zellen, dass beide Zelllinien starke biolumineszierende Signale ähnlicher Stärke aussenden. Nach subkutaner Injektion der transducierten Zelllinien in ein transgenesenes tumortragendes Mausmodell kann das angiogenese-induzierte Tumorwachstum durch Firefly-Luziferase-Signale in Gegenwart von D-Luziferin bei demselben Tier bewertet werden.Bei sieben Tagen nach der Implantation induziert die Ganciclovir-Verabreichung den Tod in den 4T1-RRT-Zellen, was zu einer dramatischen Reduktion des Renilla-Luziferase-Signals in den von diesen Zellen festgestellten Tumoren führt. Firefly Luziferase Signale erhöhen sich auch in Verbindung mit einer Erhöhung der Renilla luziferase Ausdruck und Abnahme nach Luziferase Rückgang. Zusammengenommen deuten diese Ergebnisse darauf hin, dass es einen direkten Zusammenhang zwischen Tumorangiogenese und Tumorwachstum gibt.Tatsächlich kann der Tod von Ganciclovir-induzierten Tumorzellen zu einer Hemmung der Tumorangiogenese führen. Darüber hinaus zeigt die Immunfärbung für antivaskuläre endotheliale Wachstumsfaktor-Rezeptor II, als Marker der Angiogenese, eine signifikanter etablierte mikrovaskuläre Struktur in 4T1-RR Tumorgewebeabschnitten als in Abschnitten von 4T1-RRT-Tumoren, im Einklang mit dem Rückgang des Firefly-Luziferase-Signals, das nach der Verabreichung von Ganciclovir beobachtet wurde. Der kritischste Schritt des Protokolls ist die Verwendung von zwei Arten von Luziferase, wie FLuc und RLuc für die gleichzeitige Verfolgung der Zellen und die Angiogenese.Diese Technologie könnte verwendet werden, um Krebszellen an verschiedenen Orten zu behandeln, und es kann weit verbreitet in Viruskrebs-Modellen verwendet werden. Dieses Mausmodell ermöglicht es, das Tumorwachstum und die Anti-Tumor-Effekte des HSV-ttk/GCV-Tracking-Systems dynamisch bei einem lebenden Tier zu visualisieren. Eine Einrichtung der Biosicherheitsstufe II ist erforderlich, um eine Lentivirus-Transfektion zu verhindern, da die Medien Lentiviruspartikel enthalten, die für den Menschen schädlich sein könnten.

Research

JoVE Journal

Medicine

Dual-mode Imaging of Cutaneous Tissue Oxygenation and Vascular Function

Dual-Mode-Imaging von Hautgewebe Oxygenation und Gefäßfunktion

Accurate assessment of cutaneous tissue oxygenation and vascular function is important for appropriate detection, staging, and treatment of many health ...

Forschung

Medizin

Monitoring Tumor Metastases and Osteolytic Lesions with Bioluminescence and Micro CT Imaging

Überwachung Tumormetastasen und Osteolysen mit Biolumineszenz und Micro-CT Imaging

Following intracardiac delivery of MDA-MB-231-luc-D3H2LN cells to Nu/Nu mice, systemic metastases developed in the injected animals. Bioluminescence ...

In vivo Bioluminescence Imaging of Tumor Hypoxia Dynamics of Breast Cancer Brain Metastasis in a Mouse Model

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In-vivo-Biolumineszenz-Bildgebung von Tumorhypoxie Dynamics of Breast Cancer Hirnmetastasen in einem Mausmodell

It is well recognized that tumor hypoxia plays an important role in promoting malignant progression and affecting therapeutic response negatively. There ...

In vivo Dual Substrate Bioluminescent Imaging

In vivo Dual Substrate Bioluminescent Imaging

In vivo Dual-Substrat Bioluminescent Imaging

Our understanding of how and when breast cancer cells transit from established primary tumors to metastatic sites has increased at an exceptional rate ...

MAME Models for 4D Live-cell Imaging of Tumor: Microenvironment Interactions that Impact Malignant Progression

MAME Modelle für die 4D-Bildgebung lebender Zellen von Tumor: Mikroumgebung Wechselwirkungen, die Einfluss auf maligne Progression

We have developed 3D coculture models, which we term MAME (mammary architecture and microenvironment engineering), and used them for live-cell imaging in ...

In vivo Imaging of Tumor Angiogenesis using Fluorescence Confocal Videomicroscopy

In vivo Imaging of Tumor Angiogenesis using Fluorescence Confocal Videomicroscopy

In-vivo-Imaging der Tumorangiogenese mit Fluoreszenz-Videomikroskopie Konfokale

Fibered confocal fluorescence in vivo imaging with a fiber optic bundle uses the same principle as fluorescent confocal microscopy. It can excite ...

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

A Novel Hochauflösende<em&gt; In vivo</em&gt; Bildtechnik, um die Dynamik der intrakranielle Strukturen zu Tumorwachstum und Therapeutics Studieren

We have successfully integrated previously established Intracranial window (ICW) technology 1-4 with intravital 2-photon confocal microscopy to develop a ...

Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Modell Netzhautablösung in Nagetiere durch subretinale Injektion von Natriumhyaluronat

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

Candida albicans Biofilm Development on Medically-relevant Foreign Bodies in a Mouse Subcutaneous Model Followed by Bioluminescence Imaging

Candida albicans Biofilm Development on Medically-relevant Foreign Bodies in a Mouse Subcutaneous Model Followed by Bioluminescence Imaging

Candida albicans Biofilm-Entwicklung über die medizinisch relevanten Fremdkörper in einem Maus-Modell durch subkutane Biolumineszenz Imaging Gefolgt

Candida albicans biofilm development on biotic and/or abiotic surfaces represents a specific threat for hospitalized patients. So far, C. albicans ...

Establishment of a Human Multiple Myeloma Xenograft Model in the Chicken to Study Tumor Growth, Invasion and Angiogenesis

Einrichtung eines Menschen Multiple Myeloma Xenograftmodell im Huhn, das Tumorwachstum, Invasion und Angiogenese Studieren

Multiple myeloma (MM), a malignant plasma cell disease, remains incurable and novel drugs are required to improve the prognosis of patients. Due to the ...