Name: a double humanized blt-mice model featuring a stable human-like gut microbiome and human immune system
Uploaded: 2019-08-30T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Double Humanized BLT-mice Model Featuring a Stable Human-Like Gut Microbiome and Human Immune System at JoVE.com

ونود أن نشكر يانمين وان، وغوبين كانغ، وبالابي كوندو على مساعدتهم في توليد الفئران ذات الأنسنة BLT. نود أن نعربعن بالمرفق الأساسي لعلم الجينوم التابع للأمم المتحدة الذي يتلقى دعماً جزئياً من شبكة أبحاث نبراسكا في علم الجينوم الوظيفي NE-INBRE P20GM103427-14، البيولوجيا الجزيئية للأنظمة الحسية العصبية CoBRE P30GM110768، وفريد & باميلا مركز بافيت للسرطان - P30CA036727، ومركز الابتكار الجذر وجذمور (CRRI) 36-5150-2085-20، ومبادرة أبحاث نبراسكا. ونود أن نشكر جامعة نبراسكا - ملحق علوم الحياة في لينكولن وموظفيها على مساعدتهم. ويدعم هذه الدراسة جزئيا من قبل المعاهد الوطنية للصحة (NIH) المنح R01AI124804، R21AI122377-01، P30 MH062261-16A1 العدوى المزمنة فيروس نقص المناعة البشرية والشيخوخة في مركز NeuroAIDS (CHAIN)، 1R01AI111862 إلى Q Li.  ولم يكن للممولين أي دور في تصميم الدراسة، وجمع البيانات وتحليلها، وإعداد المخطوطة أو اتخاذ قرار لنشرها.

وقد أجريت جميع الأساليب الموصوفة هنا وفقا للبروتوكولات التي وافقت عليها اللجنة المؤسسية لرعاية الحيوانات والبحوث في جامعة نبراسكا لينكولن. وقد وافق المجلس الدولي للدراسات المتعلقة بالفئران في الأمم المتحدة على بروتوكولين يتعلقان بتوليد واستخدام فئران هو - BLT، بما في ذلك الفئران المزدوج...

<ol>
	<li>Simpson-Abelson, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+engraftment+and+expansion+of+tumor-derived+memory+T+cells+following+the+implantation+of+non-disrupted+pieces+of+human+lung+tumor+into+NOD-scid+IL2R+gamma(null)+mice.">Long-term engraftment and expansion of tumor-derived memory T cells following the implantation of non-disrupted pieces of human lung tumor into NOD-scid IL2R gamma(null) mice.</a> Journal of Immunology. 180 (10), 7009-7018 (2008).</li><li>Bankert, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+Mouse+Model+of+Ovarian+Cancer+Recapitulates+Patient+Solid+Tumor+Progression,+Ascites+Formation,+and+Metastasis.">Humanized Mouse Model of Ovarian Cancer Recapitulates Patient Solid Tumor Progression, Ascites Formation, and Metastasis.</a> PLoS One. 6 (9), (2011).</li><li>Vudattu, N. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+Mice+as+a+Model+for+Aberrant+Responses+in+Human+T+Cell+Immunotherapy.">Humanized Mice as a Model for Aberrant Responses in Human T Cell Immunotherapy.</a> Journal of Immunology. 193 (2), 587-596 (2014).</li><li>Whitfield-Larry, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HLA-A2+Matched+Peripheral+Blood+Mononuclear+Cells+From+Type+1+Diabetic+Patients,+but+Not+Nondiabetic+Donors,+Transfer+Insulitis+to+NOD-scid/gamma+c(null)/HLA-A2+Transgenic+Mice+Concurrent+With+the+Expansion+of+Islet-Specific+CD8(+)+T+cells.">HLA-A2 Matched Peripheral Blood Mononuclear Cells From Type 1 Diabetic Patients, but Not Nondiabetic Donors, Transfer Insulitis to NOD-scid/gamma c(null)/HLA-A2 Transgenic Mice Concurrent With the Expansion of Islet-Specific CD8(+) T cells.</a> Diabetes. 60 (6), 1726-1733 (2011).</li><li>Yi, G. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+DNA+Vaccine+Protects+Human+Immune+Cells+against+Zika+Virus+Infection+in+Humanized+Mice.">A DNA Vaccine Protects Human Immune Cells against Zika Virus Infection in Humanized Mice.</a> EBioMedicine. 25, 87-94 (2017).</li><li>Stary, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mucosal+vaccine+against+Chlamydia+trachomatis+generates+two+waves+of+protective+memory+T+cells.">A mucosal vaccine against Chlamydia trachomatis generates two waves of protective memory T cells.</a> Science. 348 (6241), (2015).</li><li>Sun, Z. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrarectal+transmission,+systemic+infection,+and+CD4(+)+T+cell+depletion+in+humanized+mice+infected+with+HIV-1.">Intrarectal transmission, systemic infection, and CD4(+) T cell depletion in humanized mice infected with HIV-1.</a> Journal of Experimental Medicine. 204 (4), 705-714 (2007).</li><li>Wang, L. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized-BLT+mouse+model+of+Kaposi's+sarcoma-associated+herpesvirus+infection.">Humanized-BLT mouse model of Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus infection.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (8), 3146-3151 (2014).</li><li>Ernst, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+in+infectious+diseases.">Humanized mice in infectious diseases.</a> Comparative Immunology Microbiology and Infectious Diseases. 49, 29-38 (2016).</li><li>Turnbaugh, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+obesity-associated+gut+microbiome+with+increased+capacity+for+energy+harvest.">An obesity-associated gut microbiome with increased capacity for energy harvest.</a> Nature. 444 (7122), 1027-1031 (2006).</li><li>Gopalakrishnan, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gut+microbiome+modulates+response+to+anti-PD-1+immunotherapy+in+melanoma+patients.">Gut microbiome modulates response to anti-PD-1 immunotherapy in melanoma patients.</a> Science. 359 (6371), 97-103 (2018).</li><li>Routy, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gut+microbiome+influences+efficacy+of+PD-1-based+immunotherapy+against+epithelial+tumors.">Gut microbiome influences efficacy of PD-1-based immunotherapy against epithelial tumors.</a> Science. 359 (6371), (2018).</li><li>Clemente, J. C., Manasson, J., Scher, J. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+the+gut+microbiome+in+systemic+inflammatory+disease.">The role of the gut microbiome in systemic inflammatory disease.</a> Bmj-British Medical Journal. 360, (2018).</li><li>Kau, A. L., Ahern, P. P., Griffin, N. W., Goodman, A. L., Gordon, J. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+nutrition,+the+gut+microbiome+and+the+immune+system.">Human nutrition, the gut microbiome and the immune system.</a> Nature. 474 (7351), 327-336 (2011).</li><li>Hooper, L. V., Littman, D. R., Macpherson, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactions+Between+the+Microbiota+and+the+Immune+System.">Interactions Between the Microbiota and the Immune System.</a> Science. 336 (6086), 1268-1273 (2012).</li><li>Maynard, C. L., Elson, C. O., Hatton, R. D., Weaver, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reciprocal+interactions+of+the+intestinal+microbiota+and+immune+system.">Reciprocal interactions of the intestinal microbiota and immune system.</a> Nature. 489 (7415), 231-241 (2012).</li><li>Xiao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+catalog+of+the+mouse+gut+metagenome.">A catalog of the mouse gut metagenome.</a> Nature Biotechnology. 33 (10), 1103 (2015).</li><li>Nguyen, T. L. A., Vieira-Silva, S., Liston, A., Raes, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+informative+is+the+mouse+for+human+gut+microbiota+research.">How informative is the mouse for human gut microbiota research.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 8 (1), 1-16 (2015).</li><li>Turnbaugh, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Effect+of+Diet+on+the+Human+Gut+Microbiome:+A+Metagenomic+Analysis+in+Humanized+Gnotobiotic+Mice.">The Effect of Diet on the Human Gut Microbiome: A Metagenomic Analysis in Humanized Gnotobiotic Mice.</a> Science Translational Medicine. 1 (6), (2009).</li><li>Hazenberg, M. P., Bakker, M., Verschoor-Burggraaf, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+the+human+intestinal+flora+on+germ-free+mice.">Effects of the human intestinal flora on germ-free mice.</a> Journal of Applied Bacteriology. 50 (1), 95-106 (1981).</li><li>Hansen, C. H. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+Early+Gut+Colonization+Shape+Future+Immune+Responses+of+the+Host.">Patterns of Early Gut Colonization Shape Future Immune Responses of the Host.</a> PLoS One. 7 (3), (2012).</li><li>Lan, P., Tonomura, N., Shimizu, A., Wang, S. M., Yang, Y. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reconstitution+of+a+functional+human+immune+system+in+immunodeficient+mice+through+combined+human+fetal+thymus/liver+and+CD34(+)+cell+transplantation.">Reconstitution of a functional human immune system in immunodeficient mice through combined human fetal thymus/liver and CD34(+) cell transplantation.</a> Blood. 108 (2), 487-492 (2006).</li><li>Li, Q. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+Initiation+of+Antiretroviral+Therapy+Can+Functionally+Control+Productive+HIV-1+Infection+in+Humanized-BLT+Mice.">Early Initiation of Antiretroviral Therapy Can Functionally Control Productive HIV-1 Infection in Humanized-BLT Mice.</a> Jaids-Journal of Acquired Immune Deficiency Syndromes. 69 (5), 519-527 (2015).</li><li>Brainard, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+Robust+Cellular+and+Humoral+Virus-Specific+Adaptive+Immune+Responses+in+Human+Immunodeficiency+Virus-Infected+Humanized+BLT+Mice.">Induction of Robust Cellular and Humoral Virus-Specific Adaptive Immune Responses in Human Immunodeficiency Virus-Infected Humanized BLT Mice.</a> Journal of Virology. 83 (14), 7305-7321 (2009).</li><li>Greenblatt, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Graft+versus+Host+Disease+in+the+Bone+Marrow,+Liver+and+Thymus+Humanized+Mouse+Model.">Graft versus Host Disease in the Bone Marrow, Liver and Thymus Humanized Mouse Model.</a> PLoS One. 7 (9), (2012).</li><li>Hintze, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Broad+scope+method+for+creating+humanized+animal+models+for+animal+health+and+disease+research+through+antibiotic+treatment+and+human+fecal+transfer.">Broad scope method for creating humanized animal models for animal health and disease research through antibiotic treatment and human fecal transfer.</a> Gut Microbes. 5 (2), 183-191 (2014).</li><li>Ericsson, A. C., Personett, A. R., Turner, G., Dorfmeyer, R. A., Franklin, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variable+Colonization+after+Reciprocal+Fecal+Microbiota+Transfer+between+Mice+with+Low+and+High+Richness+Microbiota.">Variable Colonization after Reciprocal Fecal Microbiota Transfer between Mice with Low and High Richness Microbiota.</a> Frontiers in Microbiology. 8, 1-13 (2017).</li><li>Ellekilde, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transfer+of+gut+microbiota+from+lean+and+obese+mice+to+antibiotic-treated+mice.">Transfer of gut microbiota from lean and obese mice to antibiotic-treated mice.</a> Scientific Reports. 4, (2014).</li><li>Staley, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+engraftment+of+human+microbiota+into+mice+with+a+single+oral+gavage+following+antibiotic+conditioning.">Stable engraftment of human microbiota into mice with a single oral gavage following antibiotic conditioning.</a> Microbiome. 5, (2017).</li><li>Zhou, W., Chow, K. H., Fleming, E., Oh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+colonization+ability+of+human+fecal+microbes+in+different+mouse+gut+environments.">Selective colonization ability of human fecal microbes in different mouse gut environments.</a> ISME J. , (2018).</li><li>Lundberg, R., Toft, M. F., August, B., Hansen, A. K., Hansen, C. H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibiotic-treated+versus+germ-free+rodents+for+microbiota+transplantation+studies.">Antibiotic-treated versus germ-free rodents for microbiota transplantation studies.</a> Gut Microbes. 7 (1), 68-74 (2016).</li><li>Wos-Oxley, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+evaluation+of+establishing+a+human+gut+microbial+community+within+rodent+models.">Comparative evaluation of establishing a human gut microbial community within rodent models.</a> Gut Microbes. 3 (3), 234-249 (2012).</li></ol>

البروتوكول الموصوف هنا هو لخلق الفئران مزدوجة hu-BLT التي تتميز على حد سواء جهاز المناعة البشرية وظيفية وميكروبيوم الأمعاء مستقرة مثل الإنسان. ويمكن تكييف هذا البروتوكول مع نماذج الفئران الأخرى الأنسنة أو غير أنسنة دون الحاجة إلى الحيوانات GF ومرافق gnotobiotic. في حين أن الأساليب الموضحة هنا بسي...

الفئران أنسنة (هو الفئران) حولت دراسة العديد من جوانب صحة الإنسان والمرض بما في ذلك داء الدم،والمناعة، والسرطان، وأمراض المناعة الذاتية، والأمراض المعدية 1،2،3،4 ،5،6،7،8،9. هذه الفئران هو لديها ميزة متميزة على نماذج الماوس الأخرى في أن لديهم نظام المناعة البشرية وظيفية ويمكن أن تكون مصابة مسببات الأمراض البشرية المحددة. ومع ذلك، فقد ثبت أهمية ميكروبيوم الأمعاء من خلال دورها في العديد من الأمراض البشرية مثل السمنة، متلازمة التمثيل الغذائي، والأمراض الالتهابية، والسرطان10،11،12، 13. يتم تنظيم الجهاز المناعي المخاطي وميكروبيوم الأمعاء بشكل متبادل للحفاظ على الأمعاء والتوازن الجهازي. يتم تشكيل الجهاز المناعي من قبل المستضدات التي تقدمها ميكروبيوم الأمعاء وبشكل متبادل الجهاز المناعي يلعب دورا تنظيميا هاما في تعزيز بكتيريا الأمعاء commensal والقضاء على مسببات الأمراض14،15، 16.ومع ذلك، لم تتميز ميكروبيوم الأمعاء من الفئران هو جيدا وميكروبيوم الأمعاء المورين يختلف اختلافا كبيرا في تكوين وظيفة من البشر17. ويرجع ذلك إلى الاختلافات التطورية والفسيولوجية والتشريحية بين المورين والأمعاء البشرية، فضلا عن عوامل هامة أخرى مثل النظام الغذائي، والتي قد تؤثر على النتائج التجريبية لنماذج مرض هو الفئران18. لذلك، إلى جانب تصنيف ميكروبيوم الأمعاء المورين من الفئران هو، وهناك حاجة إلى نموذج حيواني يضم كل من جهاز المناعة البشرية وميكروبيوم الأمعاء البشرية لدراسة التفاعلات المعقدة للأمراض البشرية في الجسم الحي.
دراسة الأمراض البشرية مباشرة في البشر غالبا ما تكون غير عملية أو غير أخلاقية. لا يمكن استخدام العديد من النماذج الحيوانية لدراسة مسببات الأمراض البشرية مثل فيروس نقص المناعة البشرية من النوع 1 (HIV-1). نماذج الرئيسيات غير البشرية هي ولدت وراثيا، مكلفة جدا، وليست عرضة للعديد من مسببات الأمراض البشرية. الفئران التي تم اشتقاقها كجرثومة خالية (GF) وأعيد تشكيلها مع ميكروبيومالأمعاء مثل الإنسان وقد استخدمت على نطاق واسع لدراسة صحة الإنسان والمرض19،20. ومع ذلك، هذه الحيوانات ليس لديها نظام المناعة البشرية والعمل مع الحيوانات GF يتطلب مرافق متخصصة، والإجراءات، والخبرة. لذلك، هناك حاجة إلى نماذج ما قبل السريرية محسنة لدراسة العلاقة المعقدة من ميكروبيوم الأمعاء والجهاز المناعي البشري. العديد من سلالات الفئران، مثل NOD. Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/SzJ (NSG)، ليست متاحة تجاريا ً كفرنك غيني. قد تعاني الحيوانات GF أيضا من نقص المناعة طويلة الأمد التي لا تعكس تماما عن طريق تطعيم الميكروبات21. لذلك، أنشأنا مزدوجة هو الفئران يضم كل من نظام المناعة البشرية وظيفية ومستقرة الإنسان مثل ميكروبيوم الأمعاء في ظل ظروف محددة خالية من مسببات الأمراض (SPF). لتوليد مزدوجة هو الفئران، أجريت عملية جراحية على الفئران NSG لخلق نخاع العظام والكبد والفئران الغدة الصعترية أنسنة (hu-BLT). ثم عولجت الفئران hu-BLT مع المضادات الحيوية واسعة الطيف ومن ثم إعطاء عمليات زرع البراز مع عينة من المتبرعين الإنسان صحية. لقد ميّزنا ميكروبيوم الأمعاء البكتيرية من 173 عينة برازية من 45 فأراً ثنائياً من الفئران المزدوجة و4 عينات من المتبرعين بالبراز البشري. الفئران مزدوجة hu-BLT لديها فريدة من نوعها 16S rRNA ملامح الجينات استنادا إلى عينة المانحين الإنسان الفردية التي يتم زرعها. والأهم من ذلك، كانت الميكروبيوم ة الشبيهة بالإنسان المزروعة مستقرة في الفئران طوال مدة الدراسة لمدة تصل إلى 14.5 أسبوع بعد الزراعة. وبالإضافة إلى ذلك، أظهرت الجينومات المتوقعة أن الفئران المزدوجة hu-BLT لديها قدرة وظيفية متوقعة مختلفة عن الفئران هو التي هي أكثر مماثلة لعينات المانحين البشرية.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:832px;" width="832">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">Animal Feeding Needles 18G</td>
			<td style="width:225px;">Cadence Science</td>
			<td style="width:103px;">9928B</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:337px;">Clidox-s Activator</td>
			<td style="width:225px;">Pharmacal Research Laboratories</td>
			<td style="width:103px;">95120F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:337px;">Clidox-s Base</td>
			<td style="width:225px;">Pharmacal Research Laboratories</td>
			<td style="width:103px;">96125F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">DGM 108 cage rack</td>
			<td style="width:225px;">Techniplast</td>
			<td style="width:103px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:337px;">Flat Brown Grocery Bag 3-5/8&#34;D x 6&#34;W x 11-1/16&#34;L&#160;</td>
			<td style="width:225px;">Grainger</td>
			<td style="width:103px;">12R063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">FMT Upper Delivery Microbiota Preparations&#160;</td>
			<td style="width:225px;">OpenBiome</td>
			<td style="width:103px;">FMP30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">Grape Kool-Aid</td>
			<td style="width:225px;">Kraft Foods Inc.</td>
			<td style="width:103px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">hCD19-PE/Cy5</td>
			<td style="width:225px;">Biolegend</td>
			<td style="width:103px;">302209</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">hCD3-PE</td>
			<td style="width:225px;">Biolegend</td>
			<td style="width:103px;">300408</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">hCD4-Alexa 700</td>
			<td style="width:225px;">Biolegend</td>
			<td style="width:103px;">300526</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">hCD45-FITC</td>
			<td style="width:225px;">Biolegend</td>
			<td style="width:103px;">304006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">hCD8-APC/Cy7</td>
			<td style="width:225px;">Biolegend</td>
			<td style="width:103px;">301016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">Lactate Buffered Ringer&#39;s Solution</td>
			<td style="width:225px;">Boston BioProducts Inc&#160;</td>
			<td style="width:103px;">PY-906-500&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">mCD45-APC</td>
			<td style="width:225px;">Biolegend</td>
			<td style="width:103px;">103111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">Microvette 100 K3E</td>
			<td style="width:225px;">Microvette</td>
			<td style="width:103px;">20.1278.100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:337px;">Neosporin First Aid Antibiotic/Pain Relieving Ointment</td>
			<td style="width:225px;">Neosporin</td>
			<td style="width:103px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">NSG mice (NOD.Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/SzJ)</td>
			<td style="width:225px;">The Jackson Laboratory</td>
			<td style="width:103px;">005557</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">PrecisionGlide 25 G Needle</td>
			<td style="width:225px;">BD</td>
			<td style="width:103px;">305127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">RS200 X-ray irradiator</td>
			<td style="width:225px;">RAD Source Technologies</td>
			<td style="width:103px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">Sealsafe Plus GM500 microisolator cages</td>
			<td style="width:225px;">Techniplast</td>
			<td style="width:103px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">Sterile Non-woven Gauze</td>
			<td style="width:225px;">Fisherbrand</td>
			<td style="width:103px;">22-028-558</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">Teklad global 16% protein irradiated mouse chow</td>
			<td style="width:225px;">Teklad</td>
			<td style="width:103px;">2916</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a double humanized blt-mice model featuring a stable human-like gut microbiome and human immune system

الفئران الأنسنة (هو الفئران) التي تتميز نظام المناعة البشرية وظيفية قد غيرت بشكل أساسي دراسة مسببات الأمراض البشرية والمرض. ويمكن استخدامها لنمذجة الأمراض التي من الصعب أو المستحيل دراسة في البشر أو النماذج الحيوانية الأخرى. يمكن أن يكون لميكروبيوم الأمعاء تأثير عميق على صحة الإنسان والمرض. ومع ذلك، فإن ميكروبيوم الأمعاء المورين يختلف كثيرا عن تلك الموجودة في البشر.  هناك حاجة إلى تحسين نماذج الفئران قبل السريرية التي لديها ميكروبيوم الأمعاء البشرية المطعمة. لذلك، أنشأنا مزدوجة هو الفئران التي تتميز على حد سواء جهاز المناعة البشرية ومستقرة الإنسان مثل ميكروبيوم الأمعاء. موافقه. Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) الفئران هي واحدة من أفضل الحيوانات للأنسنة بسبب ارتفاع مستوى نقص المناعة. ومع ذلك، الفئران NSG خالية من الجراثيم، ومختلف نماذج الفئران الأخرى الهامة الخالية من الجراثيم ليست متاحة تجاريا حاليا. وعلاوة على ذلك، فإن العديد من إعدادات البحوث لا يمكن الوصول إلى مرافق الغنوتوبيوتيك، والعمل في ظل ظروف الغنوتوبية يمكن أن تكون في كثير من الأحيان مكلفة وتستغرق وقتا طويلا. الأهم من ذلك، الفئران الخالية من الجراثيم لديها العديد من أوجه القصور المناعية التي توجد حتى بعد تطعيم الميكروبات. لذلك، وضعنا بروتوكولا لا يتطلب الحيوانات الخالية من الجراثيم أو مرافق gnotobiotic. لتوليد مزدوجة هو الفئران، تم التعامل مع الفئران NSG مع الإشعاع قبل الجراحة لخلق نخاع العظام والكبد والفئران الغدة الصعترية أنسنة (hu-BLT). ثم تم علاج الفئران مع المضادات الحيوية واسعة الطيف لاستنزاف ميكروبيوم الأمعاء المورين الموجودة من قبل. بعد العلاج بالمضادات الحيوية، أعطيت الفئران زرع البراز مع عينات جيدة من المتبرعين الإنسان عن طريق اللقاحات عن طريق الفم. وكان مزدوج ة الفئران HU-BLT فريدة من نوعها 16S rRNA ملامح الجينات استنادا إلى عينة المانحين البشرية الفردية التي تم زرعها. والأهم من ذلك، أن الميكروبيوم الشبيه بالإنسان المزروع كان مستقراً في فئران hu-BLT المزدوجة طوال مدة الدراسة حتى 14.5 أسبوعًا بعد الزراعة.

ويبين الشكل 1 الخطوط العريضة للأساليب المستخدمة لإنشاء فئران مزدوجة من نوع hu-BLT ويصف بإيجاز عملية إضافة جهاز مناعي بشري وظيفي ومجهري مستقر يشبه الإنسان إلى فئران مجموعة موردي المواد النووية. يظهر الشكل 2 مثالاً على تحليل قياس التدفق للدم المحيطي من BLT-mouse ال?...

Watch this Scientific Journal Video about A Double Humanized BLT-mice Model Featuring a Stable Human-Like Gut Microbiome and Human Immune System at JoVE.com

A Double Humanized BLT-mice Model Featuring a Stable Human-Like Gut Microbiome and Human Immune System

نحن نصف طريقة جديدة لتوليد مزدوجة أنسنة BLT-الفئران التي تتميز نظام المناعة البشرية وظيفية ومستقرة مطعّمة الإنسان مثل ميكروبيوم الأمعاء. ويمكن اتباع هذا البروتوكول دون الحاجة إلى الفئران الخالية من الجراثيم أو مرافق الغنوبوتيك.

نموذج مزدوج أنسنة BLT-الفئران يضم مستقرة الإنسان مثل الأمعاء ميكروبيوم والجهاز المناعي البشري

Humanized mice (hu-mice) that feature a functional human immune system have fundamentally changed the study of human pathogens and disease. They can be ...

بروتوكولنا مهم ، لأنه يمكن استخدامه لإنشاء الفئران بشكل مستنسخ مع كل من ميكروبيوم الأمعاء البشرية وجهاز المناعة البشري. نحن ندعو هذه الفئران، فئران مزدوجة أنسانية. يمكن استخدام نموذج الفأر المزدوج الأنساني لكل من الأبحاث الطبية الحيوية الأساسية والترجمة ، بما في ذلك دراسة العلاقات في الجسم الحي بين ميكروبيوم الأمعاء البشرية وجهاز المناعة البشري.وسوف يكون إثبات الإجراء جيانشوي تشانغ، وهو ما بعد الدكتوراه، ويلون تشانغ، وهو طالب دكتوراه من مختبرنا. لزرع أنسجة الكبد والغدة الصعترية في كبسولة الكلى اليسرى، أولاً، ضع الفأر في غطاء محرك السيارة. في يوم الجراحة ، علاج الفئران مع الجسم كله تحت أشعة تحت هاته في 12 centigrays لكل غرام من وزن الجسم جرعة.حلق كل فأر حول الجانب الجانبي الأيسر و الجانب الوسيط بعد التأكد من مستوى مناسب من التخَدّم. ضع مرهم العيون على عيون الحيوان، وطبق علامة الأذن حسب الحاجة. تطهير الجلد مع ثلاثة اليود متتابعة و 70٪ الدعك isopropanol.عندما تم إعداد الجلد، استخدم ملقط لتحميل واحد إلى واحد إلى ستة ملليمتر مكعبات جزء أنسجة الكبد الجنين الإنسان في trocar، تليها واحد إلى 1.6 ملليمتر مكعبات الجسم البشري جزء أنسجة الغدة الصعترية الجنينية. استخدام ملقط لرفع الجلد، واستخدام مشرط لجعل قطع طولية صغيرة في الجلد. تمديد القطع إلى 1.5 إلى اثنين من سنتيمتر على الجانب الأيسر من الماوس.واستخدام ملقط لرفع طبقة العضلات. استخدام مقص لفتح طبقة العضلات طوليا، وتوسيع خفض حسب الضرورة لفضح الكلى، وفهم بلطف الأنسجة الدهنية المحيطة بالكلية. استخدم مشرطًا لإجراء شق من ملليمتر إلى ملليمترين في الطرف الخلفي من كبسولة الكلى وأدخل التروكر المُحمَّل مسبقًا ببطء في الشق الموازي للمحور الطويل للكلى.حرر الأنسجة بين كبسولة الكلى والكلى، ثم ارجع الكلى والأمعاء إلى وضعها الطبيعي. ثم، استخدم الغرز لإغلاق طبقة العضلات والمواد الغذائية الجراحية لإغلاق الجلد. ضع الماوس في قفص ميكروسولاتر ذاتي مع المراقبة حتى الانكرامي الكامل.بعد ست ساعات من الجراحة، ضع الفئران تحت مصباح الحرارة وطهر ذيول مع 70٪ isopropanol. حقن 1.5 إلى خمس مرات 10-5 CD34 إيجابية أنسجة الكبد الجنينية البشرية عزل الخلايا الجذعية hemopoietic في 200 ميكرولترات من برنامج تلفزيوني في واحد الوريد الذيل المتوسعة لكل. ثم وقف أي نزيف مع ضغط لطيف والعودة الفئران إلى قفص وطنهم.بعد 9 إلى 12 أسابيع من الجراحة، استخدم ضبط النفس مشط البلاستيك الحجم المناسب لعزل ساق واحدة من الماوس أنيس، ورذاذ الجانب الوسط من الساق المعزولة مع 70٪ isopropanol. نشر المضادات الحيوية والمرهم تخفيف الألم على موقع جمع. باستخدام إبرة 25 قياس عقد في زاوية 90 درجة، ثقب الوريد الصابغ لجمع 50 إلى 100 ميكرولتر من الدم في أنبوب جمع الدم المغلفة EDTA.عندما يتم الحصول على كمية مناسبة من الدم ، قم بالضغط على الموقع بقطعة شاش معقمة لوقف النزيف قبل إعادة الماوس إلى قفصه. ثم استخدم عينة الدم الطرفية التي تم جمعها لتقييم مستوى إعادة تشكيل الخلايا المناعية البشرية عن طريق قياس تدفق الخلايا باستخدام الأجسام المضادة ضد CD45 الإنسان، CD3، CD4، CD8، CD19 والفأر CD45. لجمع عينة البراز الطازجة، ضع أكياس الورق الأوتكاميد الفردية في غطاء أبخرة ووضع فأر واحد في كل كيس حتى كل يفرغ.ثم العودة الفئران إلى قفصها، واستخدام ملقط العقيمة لنقل كل عينة البراز في أنبوب واحد 1.5 ملليلتر لكل ماوس لتخزين ناقص 80 درجة مئوية. في نهاية العلاج بالمضادات الحيوية لمدة 14 يومًا ، قم بتغيير مياه الشرب إلى المياه المعقمة المعقمة ، ونقل الفئران إلى قفص جديد. 24 و 48 ساعة بعد توقف المضادات الحيوية تذوب بشكل صحيح مصادر أعدت من مادة زرع الجراثيم البراز، و aliquot العينات في غرفة اللاهوائية في ظل الظروف اللاهوائية.لإجراء عملية زرع البراز ، قم بتسليم 200 ميكرولترات من مواد زرع الميكروبات البرازية عبر القفاض الفموي إلى كل تجريبي ، ونشر أي مواد مذابة متبقية على فرو الفئران الإنسانية أو على فراش القفص. هنا، مثال على تحليل تدفق تحليل القياسات الدموية من الدم المحيطي من ماوس BLT أنسانية 10 أسابيع بعد الجراحة مبين. يمكن تحديد مجموعات الخلايا T و B على حد سواء، وكذلك مجموعات فرعية من الخلايا T الإيجابية CD4 و CD8.في هذا الرسم البياني يمكن ملاحظة وفرة النسبية من عينات المانحة البراز الإنسان المستخدمة لنقل ميكروبيوم الأمعاء لخلق الفئران الأنيسة مزدوجة. التغيرات الظاهرية إلى الطحال وال cecum الناجمة عن العلاج بالمضادات الحيوية مماثلة لتلك التي لوحظت في الحيوانات الخالية من الجراثيم. هذه المؤامرة تحليل المكون الرئيسي من 16S التمثيل الحمض النووي الريبي 16s البيانات التسلسل يكشف أن الفئران الأنسانية مزدوجة لديها ميكروبيوم الأمعاء مثل الإنسان التي هي فريدة من نوعها لعينة المانحة البشرية.الجانب الأكثر أهمية في هذا البروتوكول هو الحد من إدخال البكتيريا غير المرغوب فيها لضمان بقاء الفئران بصحة جيدة والحفاظ على ميكروبيوم الأمعاء البشرية. هذا النموذج لديه القدرة على تطوير الطب الشخصي والسماح لنا للنظر في كيفية تأثير الأمراض البشرية على ميكروبيوم الأمعاء مع السيطرة على العوامل المخففة الأخرى.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Thermostabilization, Expression, Purification, and Crystallization of the Human Serotonin Transporter Bound to S-citalopram

Thermostabilization, Expression, Purification, and Crystallization of the Human Serotonin Transporter Bound to S-citalopram

Thermostabilization والتعبير وتنقية، وتبلور من السيروتونين الناقل الإنسان ملزمة ل<em&gt; S</em&gt; -citalopram

The serotonin transporter is a sodium and chloride-coupled transporter that &#34;pumps&#34; extracellular serotonin into cells. S-citalopram is a drug ...

A Method for Measuring Metabolism in Sorted Subpopulations of Complex Cell Communities Using Stable Isotope Tracing

طريقة لقياس التمثيل الغذائي في التصنيف القطعان المجتمعات خلية مجمع عن طريق مستقر النظائر للبحث عن المفقودين

Mammalian cell types exhibit specialized metabolism, and there is ample evidence that various co-existing cell types engage in metabolic cooperation. ...

A Modified Yeast-one Hybrid System for Heteromeric Protein Complex-DNA Interaction Studies

A الخميرة تعديل واحد نظام هجين ل هيتيروميريك البروتين مجمع دنا التفاعل الدراسات

Over the years, the yeast one-hybrid assay has proven to be an important technique for the identification and validation of physical interactions between ...

Protein Digestion, Ultrafiltration, and Size Exclusion Chromatography to Optimize the Isolation of Exosomes from Human Blood Plasma and Serum

هضم البروتين، أولترافيلتراتيون، وحجم الاستبعاد اللوني لتحسين عزل اكسوسوميس من بلازما الدم البشري والمصل

Exosomes, a type of nanovesicle released from all cell types, can be isolated from any bodily fluid. The contents of exosomes, including proteins and ...

Assessing the Viability of a Synthetic Bacterial Consortium on the In Vitro Gut Host-microbe Interface

Assessing the Viability of a Synthetic Bacterial Consortium on the In Vitro Gut Host-microbe Interface

تقييم جدوى اتحاد البكتيرية الاصطناعية على واجهة المضيف-ميكروب القناة الهضمية في المختبر

The interplay between host and microbiota has been long recognized and extensively described. The mouth is similar to other sections of the ...

Sampling and Pretreatment of Tooth Enamel Carbonate for Stable Carbon and Oxygen Isotope Analysis

أخذ العينات والمعالجة المسبقة لميناء الأسنان كربونات الكربون مستقرة وتحليل نظائر الأكسجين

Stable carbon and oxygen isotope analysis of human and animal tooth enamel carbonate has been applied in paleodietary, paleoecological, and ...

Calibration-free In Vitro Quantification of Protein Homo-oligomerization Using Commercial Instrumentation and Free, Open Source Brightness Analysis Software

Calibration-free In Vitro Quantification of Protein Homo-oligomerization Using Commercial Instrumentation and Free, Open Source Brightness Analysis Software

خالية من المعايرة في المختبر الكمي للبروتين هومو-أوليجوميريزيشن باستخدام الأجهزة التجارية والحرة والمفتوحة المصدر برمجيات التحليل السطوع

Number and brightness is a calibration-free fluorescence fluctuation spectroscopy (FFS) technique for detecting protein homo-oligomerization. It can be ...

Detection of Protein Ubiquitination Sites by Peptide Enrichment and Mass Spectrometry

الكشف عن مواقع اكتشاف البروتين من قبل إثراء الببتيد وقياس الطيف الكتلي

The posttranslational modification of proteins by the small protein ubiquitin is involved in many cellular events. After tryptic digestion of ...

Untargeted Liquid Chromatography-Mass Spectrometry-Based Metabolomics Analysis of Wheat Grain

تحليل الموجات الاختزالية السائلة غير المستهدفة - قياس الطيف الشامل - Metabolomics من حبوب القمح

Understanding the interactions between genes, the environment and management in agricultural practice could allow more accurate prediction and management ...

Analysis and Specification of Starch Granule Size Distributions

تحليل ومواصفات توزيعات حجم حبيبات النشا

Starch from all plant sources are made up of granules in a range of sizes and shapes having different occurrence frequencies, i.e., exhibiting a size and ...