Name: a double humanized blt-mice model featuring a stable human-like gut microbiome and human immune system
Uploaded: 2019-08-30T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Double Humanized BLT-mice Model Featuring a Stable Human-Like Gut Microbiome and Human Immune System at JoVE.com

BLT 인간화된 마우스 를 생성하는 데 도움을 준 얀민 완, 강구빈, 팔라비 쿤두에게 감사드립니다. 우리는 기능 유전체학 NE-INBRE P20-INBRE P203427-14, 신경 감각 시스템 CoBRE 의 분자 생물학, 프레드 & 파멜라에서 네브래스카 연구 네트워크에서 부분지원을받는 UNMC 유전체학 핵심 시설을 인정하고 싶습니다 버핏 암 센터 - P30CA036727, 뿌리와 뿌리 줄기 혁신 센터 (CRRI) 36-5150-2085-20, 네브래스카 연구 이니셔티브. 우리는 네브래스카 대학 - 링컨 생명 과학 별관과 그들의 도움을 주셔서 감사드립니다. 이 연구는 국립 보건원 (NIH) 교부금 R01AI124804, R21AI122377-01, P30 MH062261-16A1 신경 에이즈 (CHAIN) 센터에서 만성 HIV 감염 및 노화에 의해 부분적으로 지원됩니다, 1R01AI111862 Q Li.  기금 모금자는 연구 설계, 데이터 수집 및 분석, 원고 준비 또는 출판 결정에 아무런 역할을하지 않았습니다.

여기에 설명된 모든 방법은 네브래스카 링컨 대학(UNL)의 기관 동물 관리 및 연구 위원회(IACUC)승인 프로토콜에 따라 수행되었습니다. UNL의 IACUC는 이중 후 마우스를 포함하여 hu-BLT 마우스를 생성하고 사용하는 두 가지 프로토콜을 승인했습니다. 또한 UNL의 과학 연구 감독 위원회(SROC)는 인간 적인 쥐 연구를 위한 고급 생명 과학 자원에서 조달되는 인간 배아 줄기 세포 및 태아 조직의 사용을 승인했...

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	<li>Simpson-Abelson, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+engraftment+and+expansion+of+tumor-derived+memory+T+cells+following+the+implantation+of+non-disrupted+pieces+of+human+lung+tumor+into+NOD-scid+IL2R+gamma(null)+mice.">Long-term engraftment and expansion of tumor-derived memory T cells following the implantation of non-disrupted pieces of human lung tumor into NOD-scid IL2R gamma(null) mice.</a> Journal of Immunology. 180 (10), 7009-7018 (2008).</li><li>Bankert, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+Mouse+Model+of+Ovarian+Cancer+Recapitulates+Patient+Solid+Tumor+Progression,+Ascites+Formation,+and+Metastasis.">Humanized Mouse Model of Ovarian Cancer Recapitulates Patient Solid Tumor Progression, Ascites Formation, and Metastasis.</a> PLoS One. 6 (9), (2011).</li><li>Vudattu, N. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+Mice+as+a+Model+for+Aberrant+Responses+in+Human+T+Cell+Immunotherapy.">Humanized Mice as a Model for Aberrant Responses in Human T Cell Immunotherapy.</a> Journal of Immunology. 193 (2), 587-596 (2014).</li><li>Whitfield-Larry, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HLA-A2+Matched+Peripheral+Blood+Mononuclear+Cells+From+Type+1+Diabetic+Patients,+but+Not+Nondiabetic+Donors,+Transfer+Insulitis+to+NOD-scid/gamma+c(null)/HLA-A2+Transgenic+Mice+Concurrent+With+the+Expansion+of+Islet-Specific+CD8(+)+T+cells.">HLA-A2 Matched Peripheral Blood Mononuclear Cells From Type 1 Diabetic Patients, but Not Nondiabetic Donors, Transfer Insulitis to NOD-scid/gamma c(null)/HLA-A2 Transgenic Mice Concurrent With the Expansion of Islet-Specific CD8(+) T cells.</a> Diabetes. 60 (6), 1726-1733 (2011).</li><li>Yi, G. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+DNA+Vaccine+Protects+Human+Immune+Cells+against+Zika+Virus+Infection+in+Humanized+Mice.">A DNA Vaccine Protects Human Immune Cells against Zika Virus Infection in Humanized Mice.</a> EBioMedicine. 25, 87-94 (2017).</li><li>Stary, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mucosal+vaccine+against+Chlamydia+trachomatis+generates+two+waves+of+protective+memory+T+cells.">A mucosal vaccine against Chlamydia trachomatis generates two waves of protective memory T cells.</a> Science. 348 (6241), (2015).</li><li>Sun, Z. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrarectal+transmission,+systemic+infection,+and+CD4(+)+T+cell+depletion+in+humanized+mice+infected+with+HIV-1.">Intrarectal transmission, systemic infection, and CD4(+) T cell depletion in humanized mice infected with HIV-1.</a> Journal of Experimental Medicine. 204 (4), 705-714 (2007).</li><li>Wang, L. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized-BLT+mouse+model+of+Kaposi's+sarcoma-associated+herpesvirus+infection.">Humanized-BLT mouse model of Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus infection.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (8), 3146-3151 (2014).</li><li>Ernst, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+in+infectious+diseases.">Humanized mice in infectious diseases.</a> Comparative Immunology Microbiology and Infectious Diseases. 49, 29-38 (2016).</li><li>Turnbaugh, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+obesity-associated+gut+microbiome+with+increased+capacity+for+energy+harvest.">An obesity-associated gut microbiome with increased capacity for energy harvest.</a> Nature. 444 (7122), 1027-1031 (2006).</li><li>Gopalakrishnan, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gut+microbiome+modulates+response+to+anti-PD-1+immunotherapy+in+melanoma+patients.">Gut microbiome modulates response to anti-PD-1 immunotherapy in melanoma patients.</a> Science. 359 (6371), 97-103 (2018).</li><li>Routy, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gut+microbiome+influences+efficacy+of+PD-1-based+immunotherapy+against+epithelial+tumors.">Gut microbiome influences efficacy of PD-1-based immunotherapy against epithelial tumors.</a> Science. 359 (6371), (2018).</li><li>Clemente, J. C., Manasson, J., Scher, J. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+the+gut+microbiome+in+systemic+inflammatory+disease.">The role of the gut microbiome in systemic inflammatory disease.</a> Bmj-British Medical Journal. 360, (2018).</li><li>Kau, A. L., Ahern, P. P., Griffin, N. W., Goodman, A. L., Gordon, J. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+nutrition,+the+gut+microbiome+and+the+immune+system.">Human nutrition, the gut microbiome and the immune system.</a> Nature. 474 (7351), 327-336 (2011).</li><li>Hooper, L. V., Littman, D. R., Macpherson, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactions+Between+the+Microbiota+and+the+Immune+System.">Interactions Between the Microbiota and the Immune System.</a> Science. 336 (6086), 1268-1273 (2012).</li><li>Maynard, C. L., Elson, C. O., Hatton, R. D., Weaver, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reciprocal+interactions+of+the+intestinal+microbiota+and+immune+system.">Reciprocal interactions of the intestinal microbiota and immune system.</a> Nature. 489 (7415), 231-241 (2012).</li><li>Xiao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+catalog+of+the+mouse+gut+metagenome.">A catalog of the mouse gut metagenome.</a> Nature Biotechnology. 33 (10), 1103 (2015).</li><li>Nguyen, T. L. A., Vieira-Silva, S., Liston, A., Raes, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+informative+is+the+mouse+for+human+gut+microbiota+research.">How informative is the mouse for human gut microbiota research.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 8 (1), 1-16 (2015).</li><li>Turnbaugh, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Effect+of+Diet+on+the+Human+Gut+Microbiome:+A+Metagenomic+Analysis+in+Humanized+Gnotobiotic+Mice.">The Effect of Diet on the Human Gut Microbiome: A Metagenomic Analysis in Humanized Gnotobiotic Mice.</a> Science Translational Medicine. 1 (6), (2009).</li><li>Hazenberg, M. P., Bakker, M., Verschoor-Burggraaf, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+the+human+intestinal+flora+on+germ-free+mice.">Effects of the human intestinal flora on germ-free mice.</a> Journal of Applied Bacteriology. 50 (1), 95-106 (1981).</li><li>Hansen, C. H. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+Early+Gut+Colonization+Shape+Future+Immune+Responses+of+the+Host.">Patterns of Early Gut Colonization Shape Future Immune Responses of the Host.</a> PLoS One. 7 (3), (2012).</li><li>Lan, P., Tonomura, N., Shimizu, A., Wang, S. M., Yang, Y. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reconstitution+of+a+functional+human+immune+system+in+immunodeficient+mice+through+combined+human+fetal+thymus/liver+and+CD34(+)+cell+transplantation.">Reconstitution of a functional human immune system in immunodeficient mice through combined human fetal thymus/liver and CD34(+) cell transplantation.</a> Blood. 108 (2), 487-492 (2006).</li><li>Li, Q. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+Initiation+of+Antiretroviral+Therapy+Can+Functionally+Control+Productive+HIV-1+Infection+in+Humanized-BLT+Mice.">Early Initiation of Antiretroviral Therapy Can Functionally Control Productive HIV-1 Infection in Humanized-BLT Mice.</a> Jaids-Journal of Acquired Immune Deficiency Syndromes. 69 (5), 519-527 (2015).</li><li>Brainard, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+Robust+Cellular+and+Humoral+Virus-Specific+Adaptive+Immune+Responses+in+Human+Immunodeficiency+Virus-Infected+Humanized+BLT+Mice.">Induction of Robust Cellular and Humoral Virus-Specific Adaptive Immune Responses in Human Immunodeficiency Virus-Infected Humanized BLT Mice.</a> Journal of Virology. 83 (14), 7305-7321 (2009).</li><li>Greenblatt, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Graft+versus+Host+Disease+in+the+Bone+Marrow,+Liver+and+Thymus+Humanized+Mouse+Model.">Graft versus Host Disease in the Bone Marrow, Liver and Thymus Humanized Mouse Model.</a> PLoS One. 7 (9), (2012).</li><li>Hintze, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Broad+scope+method+for+creating+humanized+animal+models+for+animal+health+and+disease+research+through+antibiotic+treatment+and+human+fecal+transfer.">Broad scope method for creating humanized animal models for animal health and disease research through antibiotic treatment and human fecal transfer.</a> Gut Microbes. 5 (2), 183-191 (2014).</li><li>Ericsson, A. C., Personett, A. R., Turner, G., Dorfmeyer, R. A., Franklin, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variable+Colonization+after+Reciprocal+Fecal+Microbiota+Transfer+between+Mice+with+Low+and+High+Richness+Microbiota.">Variable Colonization after Reciprocal Fecal Microbiota Transfer between Mice with Low and High Richness Microbiota.</a> Frontiers in Microbiology. 8, 1-13 (2017).</li><li>Ellekilde, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transfer+of+gut+microbiota+from+lean+and+obese+mice+to+antibiotic-treated+mice.">Transfer of gut microbiota from lean and obese mice to antibiotic-treated mice.</a> Scientific Reports. 4, (2014).</li><li>Staley, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+engraftment+of+human+microbiota+into+mice+with+a+single+oral+gavage+following+antibiotic+conditioning.">Stable engraftment of human microbiota into mice with a single oral gavage following antibiotic conditioning.</a> Microbiome. 5, (2017).</li><li>Zhou, W., Chow, K. H., Fleming, E., Oh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+colonization+ability+of+human+fecal+microbes+in+different+mouse+gut+environments.">Selective colonization ability of human fecal microbes in different mouse gut environments.</a> ISME J. , (2018).</li><li>Lundberg, R., Toft, M. F., August, B., Hansen, A. K., Hansen, C. H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibiotic-treated+versus+germ-free+rodents+for+microbiota+transplantation+studies.">Antibiotic-treated versus germ-free rodents for microbiota transplantation studies.</a> Gut Microbes. 7 (1), 68-74 (2016).</li><li>Wos-Oxley, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+evaluation+of+establishing+a+human+gut+microbial+community+within+rodent+models.">Comparative evaluation of establishing a human gut microbial community within rodent models.</a> Gut Microbes. 3 (3), 234-249 (2012).</li></ol>

여기에 설명된 프로토콜은 기능성 인간 면역 계통과 안정된 인간과 같은 장내 미생물군유전체를 특징으로 하는 이중 hu-BLT 마우스의 생성을 위한 것입니다. 이 프로토콜은 GF 동물 및 그놈학적 시설에 대한 필요 없이 다른 인간화 또는 비인간화 마우스 모델에 적응될 수 있다. 여기에 설명된 방법은 비교적 간단하지만 이중 hu-BLT 마우스의 성공적인 생성에 중요한 몇 가지 중요한 세부 사항이 있습?...

인간화된 마우스(hu-mice)는 조혈, 면역, 암, 자가면역질환, 전염병 1,2,3, 4를 포함한 인간 건강과 질병의 여러 측면에 대한 연구를 변화시켰습니다. ,5,6,7,8,9. 이러한 후 마우스는 기능적인 인간 면역 계통을 가지고 있고 인간 특정 병원체에 감염될 수 있다는 점에서 다른 마우스 모델에 비해 뚜렷한 이점이 있다. 그럼에도 불구하고, 장내 미생물군유전체의 중요성은 비만, 대사증후군, 염증성 질환, 암10,11,12, 13. 점막 면역 계통 및 창자 microbiome는 창자 및 조직 항상성을 유지하기 위하여 상호 적으로 통제됩니다. 면역 계통은 창자 microbiome에 의해 제출된 항원에 의해 형성되고 면역 계통은 공생 창자 박테리아를 승진시키고 병원체 제거에 있는 중요한 규제 역할을 합니다14,15, 그러나,후마우스의 장내 미생물군유전체는 잘 특성화되지 않았으며, 뮤린 장내 미생물군유전체는인간17과의 조성 및 기능면에서 실질적으로 다르다. 이는 뮤린과 인간의 장 사이의 진화적, 생리적, 해부학적 차이뿐만 아니라 식이요법과 같은 다른 중요한 요인들, 이는 후마우스 질환 모델18의실험 결과에 영향을 미칠 수 있기 때문이다. 따라서, 휴 마우스의 뮤린 창자 미생물군유전체의 분류를 넘어, 생체 내에서 인간 질병의 복잡한 상호 작용을 연구하기 위해 인간 면역 체계와 인간 장내 미생물군유전체를 모두 특징으로 하는 동물 모델이 필요하다.
인간의 과목에서 직접 인간의 질병의 연구는 종종 비실용적이거나 비윤리적이다. 많은 동물 모델은 인간 면역 결핍 바이러스 유형 1 (HIV-1)과 같은 인간 병원체를 연구하는 데 사용할 수 없습니다. 비 인간 영장류 모형은 유전으로 교배되고, 아주 비싸고, 많은 인간 적인 병원체에 영향을 받기 쉽지 않습니다. 세균이 없고 인간과 같은 장내 미생물군유전체로 재구성된 마우스는 인간의 건강과 질병을 연구하기 위해 널리 사용되고 있다19,20. 그러나, 이러한 동물은 인간의 면역 체계를 가지고 있지 않으며 GF 동물과 함께 일하려면 전문 시설, 절차 및 전문 지식이 필요합니다. 따라서, 장내 미생물군유전체와 인간 면역 계통의 복잡한 관계를 연구하기 위한 개선된 전임상 모델에 대한 필요성이 있다. NOD와 같은 마우스의 많은 변종. Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/SzJ (NSG), GF로 상업적으로 사용할 수 없습니다. GF 동물은 또한 미생물21의생착에 의해 완전히 반전되지 않는 오래 지속되는 면역 결핍으로 고통받을 수 있습니다. 따라서, 우리는 기능성 인간 면역 계통 및 특정 병원체 자유로운 (SPF) 조건 의 밑에 안정된 인간 같이 창자 microbiome를 모두 특징으로 하는 이중 hu-마우스를 만들었습니다. 이중 후 마우스를 생성하기 위해, NSG 마우스에서 골수, 간, 흉선 인간화 마우스(hu-BLT)를 생성하기 위한 수술을 수행하였다. hu-BLT 마우스는 그 때 건강한 인간 기증자 견본을 가진 배설물 이식을 광스펙트럼 항생제로 취급하고 그 후에 주어졌습니다. 우리는 45개의 이중 hu-BLT 마우스 및 4개의 인간 배설물 기증자 견본에서 173의 배설물 견본의 세균성 창자 microbiome를 특성화했습니다. 이중 hu-BLT 마우스는 이식되는 개별 적인 인간 공여자 견본에 근거를 둔 독특한 16S rRNA 유전자 단면도가 있습니다. 중요한 것은, 이식된 인간과 같은 미생물군유전체는 이식 후 최대 14.5주까지 연구 기간 동안 마우스에서 안정하였다. 또한, 예측된 메타게놈은 이중 hu-BLT 마우스가 인간 공여자 샘플과 더 유사한 후마우스보다 다른 예측 된 기능 능력을 갖는다는 것을 보여주었다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:832px;" width="832">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">Animal Feeding Needles 18G</td>
			<td style="width:225px;">Cadence Science</td>
			<td style="width:103px;">9928B</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:337px;">Clidox-s Activator</td>
			<td style="width:225px;">Pharmacal Research Laboratories</td>
			<td style="width:103px;">95120F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:337px;">Clidox-s Base</td>
			<td style="width:225px;">Pharmacal Research Laboratories</td>
			<td style="width:103px;">96125F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">DGM 108 cage rack</td>
			<td style="width:225px;">Techniplast</td>
			<td style="width:103px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:337px;">Flat Brown Grocery Bag 3-5/8&#34;D x 6&#34;W x 11-1/16&#34;L&#160;</td>
			<td style="width:225px;">Grainger</td>
			<td style="width:103px;">12R063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">FMT Upper Delivery Microbiota Preparations&#160;</td>
			<td style="width:225px;">OpenBiome</td>
			<td style="width:103px;">FMP30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">Grape Kool-Aid</td>
			<td style="width:225px;">Kraft Foods Inc.</td>
			<td style="width:103px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">hCD19-PE/Cy5</td>
			<td style="width:225px;">Biolegend</td>
			<td style="width:103px;">302209</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">hCD3-PE</td>
			<td style="width:225px;">Biolegend</td>
			<td style="width:103px;">300408</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">hCD4-Alexa 700</td>
			<td style="width:225px;">Biolegend</td>
			<td style="width:103px;">300526</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">hCD45-FITC</td>
			<td style="width:225px;">Biolegend</td>
			<td style="width:103px;">304006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">hCD8-APC/Cy7</td>
			<td style="width:225px;">Biolegend</td>
			<td style="width:103px;">301016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">Lactate Buffered Ringer&#39;s Solution</td>
			<td style="width:225px;">Boston BioProducts Inc&#160;</td>
			<td style="width:103px;">PY-906-500&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">mCD45-APC</td>
			<td style="width:225px;">Biolegend</td>
			<td style="width:103px;">103111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">Microvette 100 K3E</td>
			<td style="width:225px;">Microvette</td>
			<td style="width:103px;">20.1278.100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:337px;">Neosporin First Aid Antibiotic/Pain Relieving Ointment</td>
			<td style="width:225px;">Neosporin</td>
			<td style="width:103px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">NSG mice (NOD.Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/SzJ)</td>
			<td style="width:225px;">The Jackson Laboratory</td>
			<td style="width:103px;">005557</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">PrecisionGlide 25 G Needle</td>
			<td style="width:225px;">BD</td>
			<td style="width:103px;">305127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">RS200 X-ray irradiator</td>
			<td style="width:225px;">RAD Source Technologies</td>
			<td style="width:103px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">Sealsafe Plus GM500 microisolator cages</td>
			<td style="width:225px;">Techniplast</td>
			<td style="width:103px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">Sterile Non-woven Gauze</td>
			<td style="width:225px;">Fisherbrand</td>
			<td style="width:103px;">22-028-558</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">Teklad global 16% protein irradiated mouse chow</td>
			<td style="width:225px;">Teklad</td>
			<td style="width:103px;">2916</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a double humanized blt-mice model featuring a stable human-like gut microbiome and human immune system

기능성 인간 면역 계통을 특징으로 하는 인간화된 마우스(hu-mice)는 인간 병원체 및 질병에 대한 연구를 근본적으로 변화시켰다. 그(것)들은 인간 또는 그밖 동물 모형에서 공부하는 그렇지 않으면 어렵거나 불가능한 질병을 모델링하기 위하여 이용될 수 있습니다. 창 자 미생물 은 인간의 건강 및 질병에 깊은 영향을 미칠 수 있습니다. 그러나, 뮤린 창 자 미생물은 인간에서 발견 하는 것 보다 매우 다른.  생착된 인간 장내 미생물군유전체를 가진 개선된 전임상 후마우스 모델에 대한 필요성이 있다. 따라서, 우리는 인간의 면역 체계와 안정적인 인간 같은 창 자 미생물을 특징으로 하는 이중 hu-마우스를 만들었습니다. 끄 덕. Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) 마우스는 면역 결핍의 그들의 높은 수준으로 인해 인간화를 위한 최고의 동물 중 하나입니다. 그러나, 세균이 없는 NSG 마우스 및 기타 다양한 중요한 세균 없는 마우스 모델은 현재 시판되고 있지 않다. 또한, 많은 연구 설정은 그놈 바이오 틱 시설에 액세스 할 수 없습니다, 그리고 gnotobiotic 조건에서 작업하는 것은 종종 비용이 많이 들고 시간이 많이 소요 될 수 있습니다. 중요한 것은, 세균이 없는 마우스는 세균의 생착 후에도 존재하는 몇몇 면역 성이 결핍이 있습니다. 따라서, 우리는 세균이없는 동물이나 뇨대 생물 시설을 필요로하지 않는 프로토콜을 개발했다. 이중 후 마우스를 생성하기 위해, NSG 마우스는 골수, 간, 흉선 인간화 (hu-BLT) 마우스를 만들기 위해 수술 전에 방사선으로 처리하였다. 마우스는 그 때 기존의 뮤린 창자 미생물군유전체를 고갈시키기 위하여 광범위한 스펙트럼 항생제로 취급되었습니다. 항생제 치료 후, 마우스는 경구 위장을 통해 건강한 인간 기증자 샘플을 가진 배설물 이식을 받았다. 이중 hu-BLT 마우스는 이식된 개별 인간 공여자 샘플에 기초하여 독특한 16S rRNA 유전자 프로파일을 가졌다. 중요한 것은, 이식된 인간-유사 미생물군유전체는 이식 후 최대 14.5주까지의 연구 기간 동안 이중 후-BLT 마우스에서 안정하였다.

도 1은 이중 hu-BLT 마우스를 생성하는 데 사용되는 방법의 개요를 보여주고 NSG 마우스에 기능성 인간 면역 계통 및 안정된 인간유사 장성 미생물군유전체를 추가하는 과정을 간략하게 설명한다. 도 2는 수술 후 10주 동안 인간화된 BLT-마우스로부터 말초 혈액의 유세포분석의 예를 나타낸다. 도 3은 이중 후마우스를 생성하기 위해 ?...

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A Double Humanized BLT-mice Model Featuring a Stable Human-Like Gut Microbiome and Human Immune System

우리는 기능적인 인간적인 면역 계통 및 안정한 생착한 인간 같이 창자 microbiome를 특징으로 하는 이중 인간화한 BLT 마우스를 생성하기 위한 새로운 방법을 기술합니다. 이 프로토콜은 세균이 없는 마우스 또는 뇨바이오틱 시설에 대한 필요 없이 따를 수 있다.

안정된 인간과 같은 장내 미생물군유전체와 인간 면역 체계를 특징으로 하는 이중 인간화 BLT 마우스 모델

Humanized mice (hu-mice) that feature a functional human immune system have fundamentally changed the study of human pathogens and disease. They can be ...

우리의 프로토콜은 인간 적인 창 자 미생물군유전체와 인간 면역 체계를 가진 마우스를 재현적으로 만드는 것을 이용하기 위하여 이용될 수 있기 때문에, 중요합니다. 우리는 이 마우스, 이중 인간화마우스를 부릅니다. 이중 인간화된 마우스 모델은 인간 적인 창 자 미생물군유전체와 인간 면역 체계 사이의 생체 내 관계의 연구를 포함하여 기본 및 번역 생물 의학 연구 모두에 사용할 수 있습니다.이 절차를 시연하는 것은 포스트독인 장진수와 우리 실험실에서 박사 학위를 취득한 장일룬이 될 것입니다. 간과 흉선 조직을 왼쪽 신장 캡슐에 이식하려면 먼저 마우스를 후드에 넣습니다. 수술 당일, 몸 전체의 치사성 조사로 마우스를 체중 량 1그램당 12센티미터씩 치료하십시오.적절한 수준의 침전을 확인한 후 왼쪽 측면 및 내측 주위의 각 마우스를 면도합니다. 동물의 눈에 안과 연고를 바르고 필요에 따라 귀 태그를 바치게 됩니다. 3개의 순차요오드와 70%의 이소프로판올 스크럽으로 피부를 소독합니다.피부가 준비되면, 1~6밀리미터의 인간 태아 간 조직 조각을 트로카에 싣고, 그 다음에 1-1.6밀리미터의 인간 태아 흉선 조직 단편을 적재합니다. 포셉을 사용하여 피부를 들어 올리고 메스를 사용하여 피부에 작은 세로 절단을 합니다. 절단을 마우스 왼쪽에 있는 1.5~2cm로 확장합니다.그리고 집게를 사용하여 근육 층을 들어 올립니다. 가위를 사용하여 근육 층을 세로로 열고 신장을 노출하기 위해 필요에 따라 절단을 확장하고 신장을 둘러싼 지방 조직을 부드럽게 잡습니다. 메스를 사용하여 신장 캡슐의 후부 끝에서 1-2 밀리미터 절개를 하고 신장의 긴 축과 평행한 절개에 미리 로드된 트로카를 천천히 삽입합니다.신장 캡슐과 신장 사이 조직을 풀어 놓고, 그들의 일반적인 위치에 신장과 창자를 반환합니다. 그런 다음 봉합사를 사용하여 근육 층과 수술 용 스테이플을 닫아 피부를 닫습니다. 마우스를 완전한 방수까지 모니터링하여 자동 마이크로이졸라이터 케이지에 넣습니다.수술 후 6시간 후, 마우스를 열램프 아래에 놓고 70%의 이소프로파놀로 꼬리를 소독합니다. PBS의 200 마이크로리터에서 1.5~5회 CD34 양성 인간 태아 간 조직 분리 된 혈청 줄기 세포를 동물 당 하나의 팽창 꼬리 정맥으로 주입하십시오. 그런 다음 부드러운 압력으로 출혈을 멈추고 마우스를 홈 케이지로 돌려놓습니다.수술 후 9~12주 동안 적절한 크기의 플라스틱 빗 구속을 사용하여 한 개의 인간화된 마우스의 한 쪽 다리를 분리하고, 분리된 다리의 내측을 70%의 이소프로판올로 분사한다. 항생제와 통증 완화 연고를 수집 부위에 퍼뜨리세요. 90도 각도로 유지되는 25게이지 바늘을 사용하여 사페누스 정맥을 천자하여 EDTA 코팅 혈액 수집 튜브에 50~100마이크로리터의 혈액을 수집합니다.적당한 양의 혈액이 얻어지면, 마우스를 케이지로 되돌리기 전에 출혈을 막기 위해 멸균 된 거즈 조각으로 부위에 압력을 가하십시오. 그런 다음 수집된 말초 혈액 샘플을 사용하여 인간 CD45, CD3, CD4, CD8, CD19 및 마우스 CD45에 대한 항체를 사용하여 혈동 세포측정에 의한 인간 면역 세포 재구성의 수준을 평가한다. 신선한 배설물 샘플 컬렉션을 위해 개별 오토클레이브 종이 봉투를 연기 후드에 넣고 각 동물이 배변할 때까지 각 가방에 마우스 한 개를 넣습니다.그런 다음 마우스를 케이지로 돌려보내고 멸균 집게를 사용하여 각 배설물 샘플을 마우스 당 1.5 밀리리터 튜브로 영하 80도 저장하도록 옮킨다. 14일 항생제 치료가 끝나면 식수를 자동 살균물로 바꾸고 마우스를 새로운 오토클레이브 케이지로 옮킨다. 항생제의 중단 후 24 및 48 시간 대변 미생물 이식 물질의 제대로 준비 된 소스를 해동하고 혐기성 조건하에서 혐기성 챔버에서 샘플을 알리쿼트.배설물 이식을 수행하기 위해 경구 개비지를 통해 200마이크로리터의 배설물 미생물 이식 물질을 각 실험 동물에 전달하고, 인간화된 마우스의 털이나 케이지 침구에 남은 해동 물질을 확산시킵니다. 여기서, 인간화된 BLT 마우스로부터 말초 혈액의 유동 세포측정 분석의 예가 10주 후 수술 후 나타난다. T 및 B 세포 집단은 CD4 및 CD8 양성 T 세포 하위 집합뿐만 아니라 둘 다 식별될 수 있다.이 그래프에서 이중 인간화된 마우스를 생성하기 위해 장내 미생물군유전체를 이송하는 데 사용되는 인간 대변 기증자 샘플의 상대적 풍부를 관찰할 수 있다. 항생제 치료에 의해 유도된 비장 과 cecum에 대한 현상제 변화는 세균이 없는 동물에서 관찰된 것과 유사합니다. 대표적인 16S 리보소말 RNA 염기서열 분석 데이터의 이 주요 성분 분석 플롯은 이중 인간화된 마우스가 인간 기증자 샘플에 고유한 인간과 같은 장용 미생물군유전체를 가지고 있음을 보여준다.이 프로토콜의 가장 중요한 측면은 마우스가 건강하게 유지하고 인간의 창자 미생물군유전체를 유지하기 위해 원치 않는 박테리아의 도입을 제한하는 것입니다. 이 모델은 개인화 된 의학을 발전시키고 인간 질병이 다른 완화 요인을 제어하는 동안 장 내 미생물군유전체에 미치는 영향을 볼 수있는 잠재력을 가지고 있습니다.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Thermostabilization, Expression, Purification, and Crystallization of the Human Serotonin Transporter Bound to S-citalopram

Thermostabilization, Expression, Purification, and Crystallization of the Human Serotonin Transporter Bound to S-citalopram

항온, 발현, 정제, 인간 세로토닌 전달체 결정화 바운드<em&gt; S</em&gt; 시탈 로프 람

The serotonin transporter is a sodium and chloride-coupled transporter that &#34;pumps&#34; extracellular serotonin into cells. S-citalopram is a drug ...

연구

생화학

A Method for Measuring Metabolism in Sorted Subpopulations of Complex Cell Communities Using Stable Isotope Tracing

안정 동위 원소 추적을 사용하여 복잡한 세포 공동체의 정렬 된 부분 집단에서 대사를 측정하는 방법

Mammalian cell types exhibit specialized metabolism, and there is ample evidence that various co-existing cell types engage in metabolic cooperation. ...

A Modified Yeast-one Hybrid System for Heteromeric Protein Complex-DNA Interaction Studies

이성질체 단백질 복합체 -DNA 상호 작용 연구를위한 수정 된 효모 원 하이브리드 시스템

Over the years, the yeast one-hybrid assay has proven to be an important technique for the identification and validation of physical interactions between ...

Protein Digestion, Ultrafiltration, and Size Exclusion Chromatography to Optimize the Isolation of Exosomes from Human Blood Plasma and Serum

단백질 소화, 한, 및 크기 배제 크로마토그래피 인간의 혈장 및 혈 청에서 Exosomes의 절연을 최적화 하

Exosomes, a type of nanovesicle released from all cell types, can be isolated from any bodily fluid. The contents of exosomes, including proteins and ...

Assessing the Viability of a Synthetic Bacterial Consortium on the In Vitro Gut Host-microbe Interface

Assessing the Viability of a Synthetic Bacterial Consortium on the In Vitro Gut Host-microbe Interface

생체 외에서 직감 호스트 미생물 인터페이스에 합성 세균 컨소시엄의 생존 능력을 평가

The interplay between host and microbiota has been long recognized and extensively described. The mouth is similar to other sections of the ...

Sampling and Pretreatment of Tooth Enamel Carbonate for Stable Carbon and Oxygen Isotope Analysis

안정적인 탄소 및 산소 동위 원소 분석을 위한 샘플링 및 치아에 나 멜의 전처리 탄산염

Stable carbon and oxygen isotope analysis of human and animal tooth enamel carbonate has been applied in paleodietary, paleoecological, and ...

Calibration-free In Vitro Quantification of Protein Homo-oligomerization Using Commercial Instrumentation and Free, Open Source Brightness Analysis Software

Calibration-free In Vitro Quantification of Protein Homo-oligomerization Using Commercial Instrumentation and Free, Open Source Brightness Analysis Software

생체 외에서 교정 무료 단백질 호모-oligomerization 상업 계측 및 무료, 오픈 소스 밝기 분석 소프트웨어를 사용 하 여의 정량화

Number and brightness is a calibration-free fluorescence fluctuation spectroscopy (FFS) technique for detecting protein homo-oligomerization. It can be ...

Detection of Protein Ubiquitination Sites by Peptide Enrichment and Mass Spectrometry

펩타이드 농축 및 질량 분광법에 의한 단백질 유비퀴틴화 부위 검출

The posttranslational modification of proteins by the small protein ubiquitin is involved in many cellular events. After tryptic digestion of ...

Untargeted Liquid Chromatography-Mass Spectrometry-Based Metabolomics Analysis of Wheat Grain

밀 곡물의 비표적 액체 크로마토그래피 질량 분광계 기반 대사체학 분석

Understanding the interactions between genes, the environment and management in agricultural practice could allow more accurate prediction and management ...

Analysis and Specification of Starch Granule Size Distributions

전분 과립 크기 분포의 분석 및 사양

Starch from all plant sources are made up of granules in a range of sizes and shapes having different occurrence frequencies, i.e., exhibiting a size and ...