Name: a double humanized blt-mice model featuring a stable human-like gut microbiome and human immune system
Uploaded: 2019-08-30T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Double Humanized BLT-mice Model Featuring a Stable Human-Like Gut Microbiome and Human Immune System at JoVE.com

Yanmin Wan, Guobin Kang ve Pallabi Kundu'ya BLT-insanlaşmış farelerin üretilmesindeki yardımları için teşekkür ederiz. Nebraska Araştırma Ağı'ndan Fonksiyonel Genomik NE-INBRE P20GM103427-14, Nörosensorysystems CoBRE P30GM110768 Moleküler Biyolojisi, Fred & Pamela'dan kısmi destek alan UNMC Genomics Çekirdek Tesisi'ne teşekkür ederiz. Buffett Kanser Merkezi - P30CA036727, Kök ve Rhizobiome Yenilik Merkezi (CRRI) 36-5150-2085-20 ve Nebraska Araştırma Girişimi. Biz Nebraska Üniversitesi - Lincoln Yaşam Bilimleri Ek ve personel yardımiçin teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma kısmen Ulusal Sağlık Enstitüleri (NIH) Hiber01AI124804, R21AI122377-01, P30 MH062261-16A1 Kronik HIV Enfeksiyonu ve Yaşlanma NeuroAIDS (CHAIN) Merkezi, 1R01AI111862 Q Li tarafından desteklenmiştir.  Fon layıcıların çalışma tasarımı, veri toplama ve analiz, makalenin hazırlanması veya yayınlanmak üzere karar verme de hiçbir rolü yoktu.

Burada açıklanan tüm yöntemler, Nebraska-Lincoln Üniversitesi'nde (UNL) Kurumsal Hayvan Bakım ve Araştırma Komitesi (IACUC) onaylı protokollere uygun olarak gerçekleştirilmiştir. UNL'deki IACUC, çift hu-fare dahil olmak üzere hu-BLT fareleri üretmek ve kullanmakla ilgili iki protokolü onayladı. Buna ek olarak, UNL'deki Bilimsel Araştırma Gözetim Komitesi (SROC), insanlaştırılmış fareler için Gelişmiş Biyobilim Kaynakları'ndan temin edilen insan embriyonik kök hücreleri ve fetal dokuların k...

<ol>
	<li>Simpson-Abelson, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+engraftment+and+expansion+of+tumor-derived+memory+T+cells+following+the+implantation+of+non-disrupted+pieces+of+human+lung+tumor+into+NOD-scid+IL2R+gamma(null)+mice.">Long-term engraftment and expansion of tumor-derived memory T cells following the implantation of non-disrupted pieces of human lung tumor into NOD-scid IL2R gamma(null) mice.</a> Journal of Immunology. 180 (10), 7009-7018 (2008).</li><li>Bankert, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+Mouse+Model+of+Ovarian+Cancer+Recapitulates+Patient+Solid+Tumor+Progression,+Ascites+Formation,+and+Metastasis.">Humanized Mouse Model of Ovarian Cancer Recapitulates Patient Solid Tumor Progression, Ascites Formation, and Metastasis.</a> PLoS One. 6 (9), (2011).</li><li>Vudattu, N. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+Mice+as+a+Model+for+Aberrant+Responses+in+Human+T+Cell+Immunotherapy.">Humanized Mice as a Model for Aberrant Responses in Human T Cell Immunotherapy.</a> Journal of Immunology. 193 (2), 587-596 (2014).</li><li>Whitfield-Larry, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HLA-A2+Matched+Peripheral+Blood+Mononuclear+Cells+From+Type+1+Diabetic+Patients,+but+Not+Nondiabetic+Donors,+Transfer+Insulitis+to+NOD-scid/gamma+c(null)/HLA-A2+Transgenic+Mice+Concurrent+With+the+Expansion+of+Islet-Specific+CD8(+)+T+cells.">HLA-A2 Matched Peripheral Blood Mononuclear Cells From Type 1 Diabetic Patients, but Not Nondiabetic Donors, Transfer Insulitis to NOD-scid/gamma c(null)/HLA-A2 Transgenic Mice Concurrent With the Expansion of Islet-Specific CD8(+) T cells.</a> Diabetes. 60 (6), 1726-1733 (2011).</li><li>Yi, G. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+DNA+Vaccine+Protects+Human+Immune+Cells+against+Zika+Virus+Infection+in+Humanized+Mice.">A DNA Vaccine Protects Human Immune Cells against Zika Virus Infection in Humanized Mice.</a> EBioMedicine. 25, 87-94 (2017).</li><li>Stary, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mucosal+vaccine+against+Chlamydia+trachomatis+generates+two+waves+of+protective+memory+T+cells.">A mucosal vaccine against Chlamydia trachomatis generates two waves of protective memory T cells.</a> Science. 348 (6241), (2015).</li><li>Sun, Z. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrarectal+transmission,+systemic+infection,+and+CD4(+)+T+cell+depletion+in+humanized+mice+infected+with+HIV-1.">Intrarectal transmission, systemic infection, and CD4(+) T cell depletion in humanized mice infected with HIV-1.</a> Journal of Experimental Medicine. 204 (4), 705-714 (2007).</li><li>Wang, L. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized-BLT+mouse+model+of+Kaposi's+sarcoma-associated+herpesvirus+infection.">Humanized-BLT mouse model of Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus infection.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (8), 3146-3151 (2014).</li><li>Ernst, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+in+infectious+diseases.">Humanized mice in infectious diseases.</a> Comparative Immunology Microbiology and Infectious Diseases. 49, 29-38 (2016).</li><li>Turnbaugh, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+obesity-associated+gut+microbiome+with+increased+capacity+for+energy+harvest.">An obesity-associated gut microbiome with increased capacity for energy harvest.</a> Nature. 444 (7122), 1027-1031 (2006).</li><li>Gopalakrishnan, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gut+microbiome+modulates+response+to+anti-PD-1+immunotherapy+in+melanoma+patients.">Gut microbiome modulates response to anti-PD-1 immunotherapy in melanoma patients.</a> Science. 359 (6371), 97-103 (2018).</li><li>Routy, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gut+microbiome+influences+efficacy+of+PD-1-based+immunotherapy+against+epithelial+tumors.">Gut microbiome influences efficacy of PD-1-based immunotherapy against epithelial tumors.</a> Science. 359 (6371), (2018).</li><li>Clemente, J. C., Manasson, J., Scher, J. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+the+gut+microbiome+in+systemic+inflammatory+disease.">The role of the gut microbiome in systemic inflammatory disease.</a> Bmj-British Medical Journal. 360, (2018).</li><li>Kau, A. L., Ahern, P. P., Griffin, N. W., Goodman, A. L., Gordon, J. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+nutrition,+the+gut+microbiome+and+the+immune+system.">Human nutrition, the gut microbiome and the immune system.</a> Nature. 474 (7351), 327-336 (2011).</li><li>Hooper, L. V., Littman, D. R., Macpherson, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactions+Between+the+Microbiota+and+the+Immune+System.">Interactions Between the Microbiota and the Immune System.</a> Science. 336 (6086), 1268-1273 (2012).</li><li>Maynard, C. L., Elson, C. O., Hatton, R. D., Weaver, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reciprocal+interactions+of+the+intestinal+microbiota+and+immune+system.">Reciprocal interactions of the intestinal microbiota and immune system.</a> Nature. 489 (7415), 231-241 (2012).</li><li>Xiao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+catalog+of+the+mouse+gut+metagenome.">A catalog of the mouse gut metagenome.</a> Nature Biotechnology. 33 (10), 1103 (2015).</li><li>Nguyen, T. L. A., Vieira-Silva, S., Liston, A., Raes, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+informative+is+the+mouse+for+human+gut+microbiota+research.">How informative is the mouse for human gut microbiota research.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 8 (1), 1-16 (2015).</li><li>Turnbaugh, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Effect+of+Diet+on+the+Human+Gut+Microbiome:+A+Metagenomic+Analysis+in+Humanized+Gnotobiotic+Mice.">The Effect of Diet on the Human Gut Microbiome: A Metagenomic Analysis in Humanized Gnotobiotic Mice.</a> Science Translational Medicine. 1 (6), (2009).</li><li>Hazenberg, M. P., Bakker, M., Verschoor-Burggraaf, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+the+human+intestinal+flora+on+germ-free+mice.">Effects of the human intestinal flora on germ-free mice.</a> Journal of Applied Bacteriology. 50 (1), 95-106 (1981).</li><li>Hansen, C. H. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+Early+Gut+Colonization+Shape+Future+Immune+Responses+of+the+Host.">Patterns of Early Gut Colonization Shape Future Immune Responses of the Host.</a> PLoS One. 7 (3), (2012).</li><li>Lan, P., Tonomura, N., Shimizu, A., Wang, S. M., Yang, Y. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reconstitution+of+a+functional+human+immune+system+in+immunodeficient+mice+through+combined+human+fetal+thymus/liver+and+CD34(+)+cell+transplantation.">Reconstitution of a functional human immune system in immunodeficient mice through combined human fetal thymus/liver and CD34(+) cell transplantation.</a> Blood. 108 (2), 487-492 (2006).</li><li>Li, Q. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+Initiation+of+Antiretroviral+Therapy+Can+Functionally+Control+Productive+HIV-1+Infection+in+Humanized-BLT+Mice.">Early Initiation of Antiretroviral Therapy Can Functionally Control Productive HIV-1 Infection in Humanized-BLT Mice.</a> Jaids-Journal of Acquired Immune Deficiency Syndromes. 69 (5), 519-527 (2015).</li><li>Brainard, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+Robust+Cellular+and+Humoral+Virus-Specific+Adaptive+Immune+Responses+in+Human+Immunodeficiency+Virus-Infected+Humanized+BLT+Mice.">Induction of Robust Cellular and Humoral Virus-Specific Adaptive Immune Responses in Human Immunodeficiency Virus-Infected Humanized BLT Mice.</a> Journal of Virology. 83 (14), 7305-7321 (2009).</li><li>Greenblatt, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Graft+versus+Host+Disease+in+the+Bone+Marrow,+Liver+and+Thymus+Humanized+Mouse+Model.">Graft versus Host Disease in the Bone Marrow, Liver and Thymus Humanized Mouse Model.</a> PLoS One. 7 (9), (2012).</li><li>Hintze, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Broad+scope+method+for+creating+humanized+animal+models+for+animal+health+and+disease+research+through+antibiotic+treatment+and+human+fecal+transfer.">Broad scope method for creating humanized animal models for animal health and disease research through antibiotic treatment and human fecal transfer.</a> Gut Microbes. 5 (2), 183-191 (2014).</li><li>Ericsson, A. C., Personett, A. R., Turner, G., Dorfmeyer, R. A., Franklin, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variable+Colonization+after+Reciprocal+Fecal+Microbiota+Transfer+between+Mice+with+Low+and+High+Richness+Microbiota.">Variable Colonization after Reciprocal Fecal Microbiota Transfer between Mice with Low and High Richness Microbiota.</a> Frontiers in Microbiology. 8, 1-13 (2017).</li><li>Ellekilde, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transfer+of+gut+microbiota+from+lean+and+obese+mice+to+antibiotic-treated+mice.">Transfer of gut microbiota from lean and obese mice to antibiotic-treated mice.</a> Scientific Reports. 4, (2014).</li><li>Staley, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+engraftment+of+human+microbiota+into+mice+with+a+single+oral+gavage+following+antibiotic+conditioning.">Stable engraftment of human microbiota into mice with a single oral gavage following antibiotic conditioning.</a> Microbiome. 5, (2017).</li><li>Zhou, W., Chow, K. H., Fleming, E., Oh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+colonization+ability+of+human+fecal+microbes+in+different+mouse+gut+environments.">Selective colonization ability of human fecal microbes in different mouse gut environments.</a> ISME J. , (2018).</li><li>Lundberg, R., Toft, M. F., August, B., Hansen, A. K., Hansen, C. H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibiotic-treated+versus+germ-free+rodents+for+microbiota+transplantation+studies.">Antibiotic-treated versus germ-free rodents for microbiota transplantation studies.</a> Gut Microbes. 7 (1), 68-74 (2016).</li><li>Wos-Oxley, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+evaluation+of+establishing+a+human+gut+microbial+community+within+rodent+models.">Comparative evaluation of establishing a human gut microbial community within rodent models.</a> Gut Microbes. 3 (3), 234-249 (2012).</li></ol>

Burada açıklanan protokol, hem işlevsel bir insan bağışıklık sistemi hem de istikrarlı bir insan benzeri bağırsak mikrobiyomu özelliği çift hu-BLT farelerin oluşturulması içindir. Bu protokol, GF hayvanlarına ve gnotobiyotik tesislere ihtiyaç duymadan diğer insanlaşmış veya insanlaştırılmayan fare modellerine uyarlanabilir. Burada açıklanan yöntemler nispeten basit olmakla birlikte, çift hu-BLT farelerin başarılı yaratılması için önemli olan birkaç kritik ayrıntı vardır. NSG farel...

Humanized fareler (hu-fareler) hematopoyis, bağışıklık, kanser, otoimmün hastalık ve bulaşıcı hastalık1dahil olmak üzere insan sağlığı ve hastalığıbirçok yönünü çalışma dönüştürdü1 ,2,3,4 ,5,6,7,8,9. Bu hu-fareler işlevsel bir insan bağışıklık sistemine sahip ve insan ait patojenler ile enfekte olabilir diğer fare modelleri üzerinde ayrı bir avantaja sahip. Bununla birlikte, bağırsak mikrobiyomu önemi obezite, metabolik sendrom, inflamatuar hastalıklar ve kanser 10,11,12gibi birçok insan hastalıklarında rolü ile gösterilmiştir, 13. yıl. Mukozal bağışıklık sistemi ve bağırsak mikrobiyomu karşılıklı bağırsak ve sistemik homeostaz korumak için düzenlenir. Bağışıklık sistemi bağırsak mikrobiyomu tarafından sunulan antijenler tarafından şekillendirilir ve bağışıklık sistemi kommensal bağırsak bakterilerinteşvik ve patojenleri ortadan kaldırarak önemli bir düzenleyici rol oynar14,15, 16- Ancak, hu-farelerin bağırsak mikrobiyomu iyi karakterize edilmemiştir ve murine bağırsak mikrobiyomu insanlardan kompozisyon ve fonksiyon önemli ölçüde farklıdır17. Bu murine ve insan bağırsak arasındaki evrimsel, fizyolojik ve anatomik farklılıklar yanı sıra hu-fare hastalığı modellerinin deneysel sonuçlarını etkileyebilir diyet gibi diğer önemli faktörler nedeniyle18. Bu nedenle, hu-farelerin murine bağırsak mikrobiyomu sınıflandırma ötesinde, bir insan bağışıklık sistemi ve insan bağırsak mikrobiyomu hem de sahip bir hayvan modeli in vivo insan hastalığının karmaşık etkileşimleri incelemek için gereklidir.
Doğrudan insan deneklerde insan hastalıklarının incelenmesi genellikle pratik değildir veya etik değildir. Birçok hayvan modeli insan immün yetmezlik virüs tip 1 (HIV-1) gibi insan patojenleri incelemek için kullanılamaz. İnsan olmayan primat modelleri genetik olarak dışlanır, çok pahalıdır ve birçok insan patojenine karşı duyarlı değildir. Mikropsuz (GF) olarak türetilmiş ve insan benzeri bağırsak mikrobiyomları ile yeniden yapılı fareleryaygın insan sağlığı ve hastalık 19,20çalışma için kullanılmıştır. Ancak, bu hayvanların bir insan bağışıklık sistemi yok ve GF hayvanlar ile çalışan özel tesisler, prosedürler ve uzmanlık gerektirir. Bu nedenle, bağırsak mikrobiyomu ve insan bağışıklık sisteminin karmaşık ilişkisini incelemek için geliştirilmiş pre-klinik modeller için bir ihtiyaç vardır. NOD gibi birçok fare suşları. Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/SzJ (NSG), ticari olarak GF olarak kullanılamaz. GF hayvanlar da tamamen mikropların engraftment tarafından ters değildir uzun süreli bağışıklık eksiklikleri muzdarip olabilir21. Bu nedenle, belirli patojen içermeyen (SPF) koşullar altında hem fonksiyonel bir insan bağışıklık sistemi ve istikrarlı insan benzeri bağırsak mikrobiyomu içeren bir çift hu-fare oluşturdu. Çift hu-fare üretmek için, kemik iliği, karaciğer, timus humanized fareler (hu-BLT) oluşturmak için NSG fareler üzerinde ameliyat yapıldı. Hu-BLT fareler daha sonra geniş spektrumlu antibiyotikler ile tedavi edildi ve daha sonra sağlıklı bir insan donör örneği ile dışkı nakli verildi. Biz 45 çift hu-BLT fareler ve 4 insan dışkı donör örnekleri 173 dışkı örneklerinin bakteriyel bağırsak mikrobiyomu karakterize. Çift hu-BLT fareler, nakledilen bireysel insan donör örneğine dayalı benzersiz 16S rRNA gen profillerine sahiptir. Daha da önemlisi, nakledilen insan benzeri mikrobiyom, nakil sonrası 14,5 haftaya kadar çalışma süresince farelerde stabildi. Buna ek olarak, öngörülen metagenomlar çift hu-BLT farelerin insan donör örneklerine daha çok benzeyen hu-farelerden farklı tahmin edilen fonksiyonel kapasiteye sahip olduğunu göstermiştir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:832px;" width="832">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">Animal Feeding Needles 18G</td>
			<td style="width:225px;">Cadence Science</td>
			<td style="width:103px;">9928B</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:337px;">Clidox-s Activator</td>
			<td style="width:225px;">Pharmacal Research Laboratories</td>
			<td style="width:103px;">95120F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:337px;">Clidox-s Base</td>
			<td style="width:225px;">Pharmacal Research Laboratories</td>
			<td style="width:103px;">96125F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">DGM 108 cage rack</td>
			<td style="width:225px;">Techniplast</td>
			<td style="width:103px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:337px;">Flat Brown Grocery Bag 3-5/8&#34;D x 6&#34;W x 11-1/16&#34;L&#160;</td>
			<td style="width:225px;">Grainger</td>
			<td style="width:103px;">12R063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">FMT Upper Delivery Microbiota Preparations&#160;</td>
			<td style="width:225px;">OpenBiome</td>
			<td style="width:103px;">FMP30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">Grape Kool-Aid</td>
			<td style="width:225px;">Kraft Foods Inc.</td>
			<td style="width:103px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">hCD19-PE/Cy5</td>
			<td style="width:225px;">Biolegend</td>
			<td style="width:103px;">302209</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">hCD3-PE</td>
			<td style="width:225px;">Biolegend</td>
			<td style="width:103px;">300408</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">hCD4-Alexa 700</td>
			<td style="width:225px;">Biolegend</td>
			<td style="width:103px;">300526</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">hCD45-FITC</td>
			<td style="width:225px;">Biolegend</td>
			<td style="width:103px;">304006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">hCD8-APC/Cy7</td>
			<td style="width:225px;">Biolegend</td>
			<td style="width:103px;">301016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">Lactate Buffered Ringer&#39;s Solution</td>
			<td style="width:225px;">Boston BioProducts Inc&#160;</td>
			<td style="width:103px;">PY-906-500&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">mCD45-APC</td>
			<td style="width:225px;">Biolegend</td>
			<td style="width:103px;">103111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">Microvette 100 K3E</td>
			<td style="width:225px;">Microvette</td>
			<td style="width:103px;">20.1278.100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:337px;">Neosporin First Aid Antibiotic/Pain Relieving Ointment</td>
			<td style="width:225px;">Neosporin</td>
			<td style="width:103px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">NSG mice (NOD.Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/SzJ)</td>
			<td style="width:225px;">The Jackson Laboratory</td>
			<td style="width:103px;">005557</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">PrecisionGlide 25 G Needle</td>
			<td style="width:225px;">BD</td>
			<td style="width:103px;">305127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">RS200 X-ray irradiator</td>
			<td style="width:225px;">RAD Source Technologies</td>
			<td style="width:103px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">Sealsafe Plus GM500 microisolator cages</td>
			<td style="width:225px;">Techniplast</td>
			<td style="width:103px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">Sterile Non-woven Gauze</td>
			<td style="width:225px;">Fisherbrand</td>
			<td style="width:103px;">22-028-558</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">Teklad global 16% protein irradiated mouse chow</td>
			<td style="width:225px;">Teklad</td>
			<td style="width:103px;">2916</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a double humanized blt-mice model featuring a stable human-like gut microbiome and human immune system

İşlevsel bir insan bağışıklık sistemine sahip olan insanlaşmış fareler (hu-fareler) temelde insan patojenleri ve hastalık çalışma değişti. İnsanlarda veya diğer hayvan modellerinde incelenmesi zor veya imkansız olan hastalıkları modellemek için kullanılabilirler. Bağırsak mikrobiyomu insan sağlığı ve hastalığı üzerinde derin bir etkisi olabilir. Ancak, murine bağırsak mikrobiyomu insanlarda bulunan çok farklıdır.  Bir engrafted insan bağırsak mikrobiyomu var gelişmiş pre-klinik hu-fare modelleri için bir ihtiyaç vardır. Bu nedenle, hem insan bağışıklık sistemi hem de kararlı insan benzeri bağırsak mikrobiyomu özelliği çift hu-fareler oluşturdu. Nod. Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) fareler immün yetmezlik yüksek düzeyde nedeniyle insanlaşma için en iyi hayvanlardan biridir. Ancak, mikropiçermeyen NSG fareler, ve diğer çeşitli önemli mikropiçermeyen fare modelleri şu anda ticari olarak mevcut değildir. Ayrıca, birçok araştırma ayarları gnotobiyotik tesislere erişim yok, ve gnotobiyotik koşullar altında çalışan genellikle pahalı ve zaman alıcı olabilir. Daha da önemlisi, mikrop içermeyen farelermikropların engraftment sonra bile var olan çeşitli bağışıklık eksiklikleri var. Bu nedenle, mikropsuz hayvanlar veya gnotobiyotik tesisler gerektirmeyen bir protokol geliştirdik. Çift hu-fare üretmek için, NSG fareler kemik iliği, karaciğer, timus-humanized (hu-BLT) fareler oluşturmak için ameliyat öncesi radyasyon ile tedavi edildi. Fareler daha sonra önceden varolan murine bağırsak mikrobiyom tüketmek için geniş spektrumlu antibiyotikler ile tedavi edildi. Antibiyotik tedavisi sonrası, fareler oral gavaj yoluyla sağlıklı insan donör örnekleri ile dışkı nakli yapıldı. Çift hu-BLT fareler, nakledilen bireysel insan donör örneğine dayalı benzersiz 16S rRNA gen profillerine sahipti. Daha da önemlisi, nakledilen insan benzeri mikrobiyom, nakil sonrası 14,5 haftaya kadar çalışma süresince çift hu-BLT farelerde stabildi.

Şekil 1 çift hu-BLT fareler oluşturmak için kullanılan yöntemlerin bir anahat gösterir ve kısaca NSG fareler için fonksiyonel bir insan bağışıklık sistemi ve istikrarlı insan benzeri bağırsak mikrobiyomu ekleme sürecini açıklar. Şekil 2, ameliyat sonrası insanlaşmış BLT-fareden periferik kanın akış sitometri analizine bir örnek göstermektedir. Şekil 3 çift hu-fareler oluşturmak için bir bağırsak m...

Watch this Scientific Journal Video about A Double Humanized BLT-mice Model Featuring a Stable Human-Like Gut Microbiome and Human Immune System at JoVE.com

A Double Humanized BLT-mice Model Featuring a Stable Human-Like Gut Microbiome and Human Immune System

Biz fonksiyonel bir insan bağışıklık sistemi ve istikrarlı bir engrafted insan benzeri bağırsak mikrobiyomu özelliği çift insanlaşmış BLT-fareler üretmek için yeni bir yöntem açıklar. Bu protokol mikropsuz fareler veya gnotobiyotik tesisler için gerek kalmadan takip edilebilir.

A Double Humanized BLT-fareler Modeli Kararlı Bir İnsan-Benzeri Gut Mikrobiyom ve İnsan Bağışıklık Sistemi featuring

Humanized mice (hu-mice) that feature a functional human immune system have fundamentally changed the study of human pathogens and disease. They can be ...

Protokolümüz önemlidir, çünkü hem insan bağırsak mikrobiyomu hem de insan bağışıklık sistemi ile fareleri tekrartekrar oluşturmak için kullanılabilir. Biz bu farelere çift insanlaşmış fare diyoruz. Çift insanize fare modeli hem temel hem de çevirisel biyomedikal araştırma için kullanılabilir, insan bağırsak mikrobiyomu ve insan bağışıklık sistemi arasındaki in vivo ilişkilerinin çalışma da dahil olmak üzere.Prosedürü gösteren Jianshui Zhang, bir postdoc ve Yilun Chang, bizim laboratuvardan doktora yüksek lisans öğrencisi olacaktır. Sol böbrek kapsülü içine karaciğer ve timus dokuları implant için, ilk, bir başlık içinde fare yerleştirin. Ameliyat günü, vücut ağırlığı doz gram başına 12 centigrays tüm vücut sublethal ışınlama ile fareler tedavi.Uygun bir sedasyon düzeyini doğruladıktan sonra her fareyi sol yan ve medial tarafın etrafında tıraş edin. Hayvanın gözlerine oftalmik merhem uygulayın ve gerektiğinde bir kulak etiketi uygulayın. Cildi üç sıralı iyot ve %70 isopropanol scrubs ile dezenfekte edin.Deri hazırlandığında, bir ila altı milimetre küplü insan fetal karaciğer dokusu parçasını bir trokar içine yüklemek için forceps kullanın, bir-1.6 milimetre küplü insan fetal timus doku parçası takip. Cildi kaldırmak için forseps kullanın ve cilde küçük bir uzunlamasına kesim yapmak için bir neşter kullanın. Kesme yi farenin sol tarafında 1,5 ila iki santimetreye kadar uzatın.Ve kas tabakasını kaldırmak için forseps kullanın. Kas tabakasını uzunlamasına açmak için makas kullanın, böbreği ortaya çıkarmak için gerekli olan kesiği genişletin ve böbreği çevreleyen yağ dokusunu nazikçe tutun. Böbrek kapsülünün arka ucunda bir-iki milimetrelik bir kesi yapmak için neşter kullanın ve önceden yüklenmiş trocar'ı böbreğin uzun eksenine paralel olarak yavaş yavaş kesiye takın.Böbrek kapsülü ve böbrek arasındaki dokuları serbest bırakın ve böbrek ve bağırsak normal konumlarına dönmek. Sonra, kas tabakası ve cerrahi zımba cilt kapatmak için kapatmak için dikiş kullanın. Fareyi tam bir işe dönüşene kadar izleyerek otoklavlı bir mikroisolatör kafesine yerleştirin.Ameliyattan altı saat sonra fareleri ısı lambasının altına yerleştirin ve kuyrukları %70 isopropanol ile dezenfekte edin. Enjekte 1.5-beş kez 10-beş-beş CD34 pozitif insan fetal karaciğer dokusu izole hemopoietic kök hücreleri 200 mikrolitre PBS hayvan başına bir dilate kuyruk damar içine. Sonra nazik basınç ile herhangi bir kanama durdurmak ve ev kafesi fareler dönmek.Ameliyattan dokuz ila 12 hafta sonra, insanlaşmış bir farenin bir bacağını izole etmek için uygun büyüklükte plastik tarak kısıtlaması kullanın ve izole bacağın medial tarafını %70 izopropanol ile püskürtün. Toplama sitesine antibiyotik ve ağrı giderici merhem yayın. 90 derecelik açıda tutulan 25 kalibrelik bir iğneyi kullanarak, safenöz damarı delerek EDTA kaplı bir kan toplama tüpüne 50 ila 100 mikrolitre kan toplayın.Uygun miktarda kan elde edildiğinde, fareyi kafesine geri vermeden önce kanamayı durdurmak için steril bir gazlı bez parçası yla bölgeye basınç uygulayın. Daha sonra insan CD45, CD3, CD4, CD8, CD19 ve fare CD45 karşı antikorlar kullanarak akış sitometri tarafından insan bağışıklık hücresi reconstitution düzeyini değerlendirmek için toplanan periferik kan örneği kullanın. Taze dışkı örnek toplama için, bir duman başlık içine ayrı otoklavlı kağıt torbalar yerleştirin ve her hayvan dışkı kadar her çanta içine bir fare yerleştirin.Daha sonra fareleri kafeslerine geri verin ve her dışkı örneğini fare başına eksi 80 santigrat derece depolama için 1,5 mililitrelik bir tüpe aktarmak için steril forsepskullanın. 14 günlük antibiyotik tedavisinin sonunda, içme suyunu sterilize edilmiş suya dönüştürün ve fareleri yeni bir otoklavlı kafese aktarın. Antibiyotiklerin kesilmesinden 24 ve 48 saat sonra fekal mikrobiyota nakli materyalinin düzgün bir şekilde hazırlanmış kaynakları çözülür ve anaerobik koşullarda anaerobik odada numuneleri aliquot.Bir dışkı nakli gerçekleştirmek için, her deneysel hayvan oral gavaj yoluyla dışkı mikrobiyota nakli malzeme 200 mikrolitre teslim ve insanlaşmış farelerin kürk veya kafes yatak üzerine kalan çözülmüş malzeme yayıldı. Burada insanlaşmış BLT faresinden periferik kanın akış sitometri analizine bir örnek 10 hafta sonra ameliyat gösterilmiştir. T ve B hücre popülasyonları, CD4 ve CD8 pozitif T hücreleri alt kümeleri olarak tanımlanabilir.Bu grafikte insandışkısı örneklerinin göreceli bolluğu, çift insanlaşmış fareler oluşturmak için bir bağırsak mikrobiyomu aktarmak için kullanılır. Antibiyotik tedavisi ile indüklenen dalak ve çekumdaki henotik değişiklikler mikropsuz hayvanlarda görülene benzer. Temsili 16S ribozomal RNA sıralama verilerinin bu ana bileşen analiz konusu, çift insanlaştırılmış farelerin insan donör örneğine özgü insanbenzeri bağırsak mikrobiyomlarına sahip olduğunu ortaya koymaktadır.Bu protokolün en kritik yönü farelersağlıklı kalmasını sağlamak ve insan bağırsak mikrobiyom korumak için istenmeyen bakterilerin giriş sınırlamaktır. Bu model kişiselleştirilmiş tıp ilerlemek ve bize insan hastalığı diğer azaltıcı faktörler için kontrol ederken bağırsak mikrobiyomu nasıl etkilediğini bakmak için izin potansiyeline sahiptir.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Thermostabilization, Expression, Purification, and Crystallization of the Human Serotonin Transporter Bound to S-citalopram

Thermostabilization, Expression, Purification, and Crystallization of the Human Serotonin Transporter Bound to S-citalopram

Termo, İfade, saflaştırılması, ve İnsan serotonin Transporter Kristalizasyon Bound<em&gt; S</em&gt; -citalopram

The serotonin transporter is a sodium and chloride-coupled transporter that &#34;pumps&#34; extracellular serotonin into cells. S-citalopram is a drug ...

A Method for Measuring Metabolism in Sorted Subpopulations of Complex Cell Communities Using Stable Isotope Tracing

Kararlı İzotop izlemeyi kullanma Kompleks Hücre Toplulukları Sıralama alt popülasyonlar Metabolizma Ölçme Bir Yöntem

Mammalian cell types exhibit specialized metabolism, and there is ample evidence that various co-existing cell types engage in metabolic cooperation. ...

A Modified Yeast-one Hybrid System for Heteromeric Protein Complex-DNA Interaction Studies

Heteromerik Protein Kompleksi-DNA Etkileşim Çalışmaları İçin Modifiye Maya-Bir Hibrid Sistem

Over the years, the yeast one-hybrid assay has proven to be an important technique for the identification and validation of physical interactions between ...

Protein Digestion, Ultrafiltration, and Size Exclusion Chromatography to Optimize the Isolation of Exosomes from Human Blood Plasma and Serum

Protein sindirimi, Ultrafiltrasyon ve boyutu dışlama Kromatografi insan kan plazması ve Serum Exosomes yalıtım en iyi duruma getirmek için

Exosomes, a type of nanovesicle released from all cell types, can be isolated from any bodily fluid. The contents of exosomes, including proteins and ...

Assessing the Viability of a Synthetic Bacterial Consortium on the In Vitro Gut Host-microbe Interface

Assessing the Viability of a Synthetic Bacterial Consortium on the In Vitro Gut Host-microbe Interface

Sentetik bir bakteriyel konsorsiyum Vitro Gut ana bilgisayar-mikrop arabirimde canlılık değerlendirilmesi

The interplay between host and microbiota has been long recognized and extensively described. The mouth is similar to other sections of the ...

Sampling and Pretreatment of Tooth Enamel Carbonate for Stable Carbon and Oxygen Isotope Analysis

Örnekleme ve diş minesini Önarıtma kararlı karbon ve oksijen izotop analizi için karbonat

Stable carbon and oxygen isotope analysis of human and animal tooth enamel carbonate has been applied in paleodietary, paleoecological, and ...

Calibration-free In Vitro Quantification of Protein Homo-oligomerization Using Commercial Instrumentation and Free, Open Source Brightness Analysis Software

Calibration-free In Vitro Quantification of Protein Homo-oligomerization Using Commercial Instrumentation and Free, Open Source Brightness Analysis Software

Kalibrasyon-Alerjik Vitro miktar Protein Homo-Oligomerizasyonda ticari araçları ve ücretsiz, açık kaynak parlaklık analiz yazılımı kullanarak

Number and brightness is a calibration-free fluorescence fluctuation spectroscopy (FFS) technique for detecting protein homo-oligomerization. It can be ...

Detection of Protein Ubiquitination Sites by Peptide Enrichment and Mass Spectrometry

Peptit Zenginleştirme ve Kütle Spektrometresi ile Protein Ubiquitinasyon Sitelerinin Saptanması

The posttranslational modification of proteins by the small protein ubiquitin is involved in many cellular events. After tryptic digestion of ...

Untargeted Liquid Chromatography-Mass Spectrometry-Based Metabolomics Analysis of Wheat Grain

Hedefsiz Sıvı Kromatografisi-Kütle Spektrometresi Tabanlı Metabolomik Buğday Tanesi Analizi

Understanding the interactions between genes, the environment and management in agricultural practice could allow more accurate prediction and management ...

Analysis and Specification of Starch Granule Size Distributions

Nişaste Granül Boyutu Dağılımlarının Analizi ve Spesifikasyonu

Starch from all plant sources are made up of granules in a range of sizes and shapes having different occurrence frequencies, i.e., exhibiting a size and ...