Name: analysis of spliceosomal snrna localization in human hela cells using microinjection
Uploaded: 2019-08-06T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Spliceosomal snRNA Localization in Human Hela Cells Using Microinjection at JoVE.com

Dette arbeidet ble støttet av den tsjekkiske Science Foundation (18-10035S), det nasjonale bærekraft programmet I (LO1419), institusjonell støtte (RVO68378050), det europeiske Regional Development Fund (CZ. 02.1.01/0,0/0,0/16_013/0001775) og Grant Agency of Charles University (GAUK 134516). Vi erkjenner videre Light mikroskopi Core Facility, IMG CAS, Praha, Tsjekkia (støttet av tilskudd (tsjekkisk-Bioimaging-LM2015062).

1. utarbeidelse av snRNAs for Microinjection
<ol><li>Forbered en DNA-mal som inneholder full-lengde eller avkortet/mutert versjon av snRNA av PCR ved hjelp av følgende PCR-oppsett: 98 ° c for 60 s, 98 ° c for 15 s, 68 ° c for 30 s, 72 ° c i 1 min, 98 ° c for 15 s for 35x og 72 ° c i 5 min.</li>
	<li>Den fremover primer må inneholde en promoter sekvens for in vitro transkripsjon bare oppstrøms av de første transkripsjon nukleotid. Forsterk U2 snRNA sekvens ved å bruke frem primer som inneholder T7 promoter og...

<ol>
	<li>Ishikawa, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+truncated+forms+of+U1+snRNA+reveals+a+novel+RNA+degradation+pathway+during+snRNP+biogenesis.">Identification of truncated forms of U1 snRNA reveals a novel RNA degradation pathway during snRNP biogenesis.</a> Nucleic Acids Research. 42 (4), 2708-2724 (2014).</li><li>Stanek, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cajal+bodies+and+snRNPs+-+friends+with+benefits.">Cajal bodies and snRNPs - friends with benefits.</a> RNA Biology. 14 (6), 671-679 (2017).</li><li>Stanek, D., Fox, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nuclear+bodies:+news+insights+into+structure+and+function.">Nuclear bodies: news insights into structure and function.</a> Curentr Opinion in Cell Biology. 46, 94-101 (2017).</li><li>Novotny, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SART3-Dependent+Accumulation+of+Incomplete+Spliceosomal+snRNPs+in+Cajal+Bodies.">SART3-Dependent Accumulation of Incomplete Spliceosomal snRNPs in Cajal Bodies.</a> Cell Reports. 10, 429-440 (2015).</li><li>Roithova, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Sm-core+mediates+the+retention+of+partially-assembled+spliceosomal+snRNPs+in+Cajal+bodies+until+their+full+maturation.">The Sm-core mediates the retention of partially-assembled spliceosomal snRNPs in Cajal bodies until their full maturation.</a> Nucleic Acids Research. 46 (7), 3774-3790 (2018).</li><li>Fischer, U., Sumpter, V., Sekine, M., Satoh, T., Luhrmann, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nucleo-cytoplasmic+transport+of+U+snRNPs:+definition+of+a+nuclear+location+signal+in+the+Sm+core+domain+that+binds+a+transport+receptor+independently+of+the+m3G+cap.">Nucleo-cytoplasmic transport of U snRNPs: definition of a nuclear location signal in the Sm core domain that binds a transport receptor independently of the m3G cap.</a> EMBO Journal. 12 (2), 573-583 (1993).</li><li>Shukla, S., Parker, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quality+control+of+assembly-defective+U1+snRNAs+by+decapping+and+5&#39;-to-3&#39;+exonucleolytic+digestion.">Quality control of assembly-defective U1 snRNAs by decapping and 5&#39;-to-3&#39; exonucleolytic digestion.</a> Proceeding of the National Academy of U S A. 111 (32), E3277-E3286 (2014).</li><li>Weil, T. T., Parton, R. M., Davis, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Making+the+message+clear:+visualizing+mRNA+localization.">Making the message clear: visualizing mRNA localization.</a> Trends in Cell Biology. 20 (7), 380-390 (2010).</li><li>Klingauf, M., Stanek, D., Neugebauer, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancement+of+U4/U6+small+nuclear+ribonucleoprotein+particle+association+in+Cajal+bodies+predicted+by+mathematical+modeling.">Enhancement of U4/U6 small nuclear ribonucleoprotein particle association in Cajal bodies predicted by mathematical modeling.</a> Molecular Biology of the Cell. 17 (12), 4972-4981 (2006).</li><li>Mhlanga, M. M., Vargas, D. Y., Fung, C. W., Kramer, F. R., Tyagi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=tRNA-linked+molecular+beacons+for+imaging+mRNAs+in+the+cytoplasm+of+living+cells.">tRNA-linked molecular beacons for imaging mRNAs in the cytoplasm of living cells.</a> Nucleic Acids Research. 33 (6), 1902-1912 (2005).</li></ol>

Vi benyttet microinjection av fluorescensmerkete merket snRNAs å bestemme sekvenser viktig for snRNA lokalisering i kjernefysiske Cajal organer. På grunn av rask og ganske enkel utarbeidelse av merket RNAs (utarbeidelse av DNA mal av PCR etterfulgt av in vitro transkripsjon) metoden gir effektiv analyse av hvordan ulike sekvenser bidra til RNA lokalisering. På relativt kort tid var vi i stand til å analysere ti forskjellige slettinger eller erstatninger av U2-snRNA (referanse5 og data ikke vis...

RNA skjøting er en av de avgjørende trinnene i genuttrykk, som er katalysert av et stort ribonucleoprotein kompleks kalt spliceosome. Totalt er mer enn 150 proteiner og 5 små kjernefysiske RNAs (snRNAs) integrert i spliceosome på ulike stadier av skjøting veien. U1, U2, U4, U5 og U6 snRNAs deltar i skjøting av store GU-AG introns. Disse snRNAs delta i spliceosome som pre-formet små kjernefysiske ribonucleoprotein partikler (snRNPs) som inneholder snRNA, syv SM proteiner forbundet med snRNA (eller like-SM proteiner, som forbinder med U6 snRNA) og 1-12 proteiner spesifikke for hver snRNP.
Montering av snRNPs innebærer cytoplasmatiske og kjernefysiske stadier. Nylig transkribere snRNA eksporteres til cytoplasma der den får en ring montert fra syv SM proteiner. Den SM ringen senere fungerer som et signal for snRNA re-import tilbake til kjernen. Defekt snRNAs som ikke klarer å assosiere med SM proteiner er beholdt i cytoplasma1. Nylig importerte snRNPs først vises i Cajal kroppen der de møter snRNP-spesifikke proteiner og fullføre sin modning (gjennomgått i referanse2,3). Vi har nylig viste at hemming av siste modning trinn resulterer i opptak av umodne snRNPs i Cajal organer4,5. Vi foreslo en modell der den endelige snRNP modning er under kvalitetskontroll som overvåker tillegg av snRNP-spesifikke proteiner og dannelsen av aktive snRNPs. Men molekylære detaljer om hvordan celler skille mellom riktig montert modne og avvikende umodne partikler forblir unnvikende.
For å bestemme snRNA sekvenser som er avgjørende for målretting og akkumulering av snRNAs i kjernefysiske Cajal organer, bestemte vi oss for å ansette microinjection av fluorescensmerkete merket snRNAs. Microinjection var en metode for valg fordi: 1) det krever ikke en ekstra sekvens kode for å skille syntetiske snRNAs danne sine endogene kolleger som er spesielt viktig for korte RNAs med liten plass for innsetting av ekstra kodesekvens; 2) det tillater analyse av sekvenser som er viktige for kognitiv. For eksempel er SM sekvensen viktig for SM ring montering og re-import til kjernen6. Når snRNAs er uttrykt i cellen, snRNAs mangler SM sekvensen er degradert i cytoplasma og ikke nå kjernen og Cajal organer7. Men snRNAs uten SM sekvensen kan direkte microinjected inn i kjernen og dermed en potensiell rolle SM sekvensen i Cajal kroppen lokalisering analyseres.
Her beskriver vi i detalj en microinjection metode som vi brukte for å fastslå snRNA-sekvenser som er nødvendige for å målrette snRNAs inn i Cajal-legemet5. Vi viste at SM og SMN bindende nettsteder er sammen nødvendig og tilstrekkelig til å lokalisere ikke bare snRNAs men ulike korte ikke-koding RNAs inn i Cajal kroppen. Basert på microinjection så vel som andre bevis, foreslo vi at SM ringen montert på SM bindende området er Cajal kroppen lokalisering signal.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>ChromaTide Alexa fluor 488-5-UTP</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>C11403</td>
			<td>Stock concentration 1 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium - high glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D5796</td>
			<td>Containing 4.5 g&#8260;L D-glucose, Phenol red and antibiotics</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FemtoJet express Injector</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5247000013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Femtotips II</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>930000043</td>
			<td>Microinjection needle of 0.5 &#181;m inner and 0.7 &#181;m outer diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoromont G with DAPI</td>
			<td>SouthernBiotech</td>
			<td>0100-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycogen</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>AM9510</td>
			<td>Stock concentration 5 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gridded Glass Coverslips</td>
			<td>Ibidi</td>
			<td>10817</td>
			<td>Coverslips with a grid, no direct experience with them</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>InjectMan NI 2 Micromanipulator</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5181000017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>m3-2,2,7G(5&#39;)ppp(5&#39;)G trimethyled cap analogue</td>
			<td>Jena Bioscience</td>
			<td>NU-853-1</td>
			<td>Stock concentration 40 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEGAshortscript T7 Transcription Kit</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>AM1354</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Cover Glasses 12 mm, No. 1</td>
			<td>Paul Marienfeld GmbH</td>
			<td>111520</td>
			<td>For routine work</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Cover Glasses 12 mm, No. 1.5</td>
			<td>Paul Marienfeld GmbH</td>
			<td>117520</td>
			<td>For high resolution images</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope DeltaVision</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td></td>
			<td>For image acquisition</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope DMI6000</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td>For microinjection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde 32% solution EM grade</td>
			<td>EMS</td>
			<td>15714</td>
			<td>Dissolved in PIPES to the final concentration 4%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol:Chloroform 5:1</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1944</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primers for U2 amplification: Forward: 5&#8217;-TAATACGACTCACTATAGGGATCGCTTCTCGGCCTTTTGG, 
			Reverse: 5&#180; TGGTGCACCGTTCCTGGAGGT</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td></td>
			<td>T7 rpromoter sequence in italics</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phusion High Fidelity DNA polymerase</td>
			<td>BioLab</td>
			<td>M0530L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNasin Plus</td>
			<td>Promega</td>
			<td>N2615</td>
			<td>Stock concentration 40 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tetramethylrhodamine isothiocyanate Dextran 65-85 kDa</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T1162</td>
			<td>Dissolved in water, stock concentration 1 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton-X100</td>
			<td>Serva</td>
			<td>37240</td>
			<td>Dissolved in water, stock concentration 10%</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of spliceosomal snrna localization in human hela cells using microinjection

Kognitiv av Spliceosomal snRNAs er en kompleks prosess som involverer både kjernefysiske og cytoplasmatiske faser, og det siste steget skjer i et kjernefysisk rom kalt Cajal kroppen. Men sekvenser som direkte snRNA lokalisering i denne subnuclear strukturen har ikke vært kjent før nylig. For å finne sekvenser som er viktige for akkumulering av snRNAs i Cajal-organer, brukte vi microinjection av fluorescensmerkete merket snRNAs etterfulgt av deres lokalisering i celler. Først forberedte vi snRNA sletting mutanter, syntetisert DNA maler for in vitro transkripsjon og transkribere snRNAs i nærvær av UTP kombinert med Alexa488. Merket snRNAs ble blandet med 70 kDa-Dextran bøyd med TRITC, og microinjected til kjernen eller cytoplasma av menneskelige HeLa celler. Celler ble inkubert for 1 t og fast og Cajal Body markør Marianne ble sett på av indirekte immunofluorescence, mens snRNAs og dextran, som fungerer som en markør for kjernefysisk eller cytoplasmatiske injeksjon, ble observert direkte ved hjelp av et fluorescens mikroskop. Denne metoden gjør det mulig for effektiv og rask testing av hvordan ulike sekvenser påvirker RNA lokalisering inne i cellene. Her viser vi viktigheten av SM-bindende sekvens for effektiv lokalisering av snRNAs i Cajal kroppen.

For å overvåke snRNA lokalisering og rollen til SM bindende nettsted i Cajal kroppen målretting, forberedte vi en DNA mal som inneholder T7 promoter og enten full-lengde U2 snRNA eller U2 snRNA mangler de syv nukleotider (AUUUUUG) danner SM bindende området. snRNAs var in vitro skrives, isolert og blandet med TRITC-kombinert dextran-70kDa. Vi microinjected blandingen som inneholder in vitro skrives snRNA inn i kjernen eller cytoplasma av HeLa celler.
Det har tidligere blitt vist at SM bind...

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Spliceosomal snRNA Localization in Human Hela Cells Using Microinjection at JoVE.com

Analysis of Spliceosomal snRNA Localization in Human Hela Cells Using Microinjection

Kognitiv av Spliceosomal snRNAs er en kompleks prosess som involverer ulike cellulære rom. Her har vi benyttet microinjection av fluorescensmerkete merket snRNAs for å overvåke deres transport inne i cellen.

Analyse av Spliceosomal snRNA lokalisering i Human Hela Cells bruke Microinjection

Biogenesis of spliceosomal snRNAs is a complex process involving both nuclear and cytoplasmic phases and the last step occurs in a nuclear compartment ...

Her brukte vi mikroinjeksjon av fluorescerende merkede RNA-sekvenser for å oppdage RNA-sekvenser som er avgjørende for lokalisering av korte kjernefysiske RNA-er i kjernefysiske strukturer kalt Cajal-organer. Denne teknikken har to store fordeler. Først kan det brukes for korte RNAs som ellers er vanskelig å merke og spore.Og for det andre tillater det rask screening av ulike sekvenser og testing av deres rolle i RNA lokalisering. En dag før mikroinjeksjon, frø HeLa eller andre tilhengerceller på 12 millimeter dekkerlips for å nå 50% samløpet på tidspunktet for mikroinjeksjon. Til å begynne med, plasser en forberedt dekkslip i midten av en petriskål, legg til celler og to millimeter kulturmedier.Neste dag plasserer du cellefylt petriskål på et mikroskopstadium. Bruk en mikrolaster, last tre mikroliter av snRNA-blandingen inn i nålen og installer nålen i holderen på mikroinjektoren i en vinkel på 45 grader med hensyn til overflaten av petriskålen. Bruk et mål på 10 x lang avstand for å finne nålen.Først setter du hastigheten grov på injektoren og senker nålen til den berører kulturmediet. Ved hjelp av mikroskopet kikkerten, finn lyspunktet som er stedet der nålen berører kulturmediet. Endre hastigheten til fin og senk nålen ytterligere mens du ser inn i mikroskopet til spissen av nålen observeres.Flytt nålen midt i synsfeltet og bytt til et 40X langdistansemål. Etter dette merker du cellen og flytter nålen over cellen. Still inn trykk og klokkeslett for cellekontakten.Flytt nålen ned i cellen og sett deretter den nedre grensen for mikromanipulatoren. Å angi den nedre grensen er den mest kritiske delen av protokollen. Fordi dekkglassoverflaten ikke er perfekt, og fordi hver celle er forskjellig, må du sette den nedre grensen flere ganger i løpet av injeksjonsøkten.Deretter flytter du nålen tilbake over cellen og trykker på injeksjonsknappen på styrespaken på injektoren. Nålen vil bevege seg automatisk inne i cellen til stedet der grensen er satt til å injisere RNA-blandingen. For å fullføre, trykk på menyknappen på injektoren og fjern nålen fra holderen.Koble deretter røret fra injektoren før du slår av injektoren og mikromanipulatoren. Etter mikroinjeksjonen, returner cellene til en karbondioksidinkubator og inkubere ved 37 grader Celsius i en time. Skyll deretter cellene tre ganger med PBS ved romtemperatur.Fest cellene i 20 minutter med 4% paraformaldehyd i 0,1 molarrør ved pH 6,9. Vask deretter cellene tre ganger med romtemperatur PBS. Hvis bare snRNA lokalisering analyseres, skyll cellene kort i vann og monter i et monteringsmedium med DAPI.Ved ekstra protein lokalisering, permeabilize cellene med 0,5% Triton X-100 i PBS i fem minutter ved romtemperatur. Skyll cellene tre ganger med PBS og beis dem med passende primære og sekundære antistoffer som beskrevet i tekstprotokollen. Skyll deretter tre ganger med PBS og skyll en gang i vann.Etter dette monterer du cellene i et monteringsmedium med DAPI. Når du er klar til å bilde, bruk et high-end fluorescens mikroskopisk system utstyrt med et nedsenkingsmål for å skaffe bildene. Når de mikroinjekte cellene er identifisert, samle en stabel med 20 Z seksjoner med 200 nanometer Z trinn per prøve og underlagt matematisk deconvolution.For å kvantifisere det fluorescerende signalet, åpne først mikroskopibildet i ImageJ og dele kanaler inn i vinduer. Synkroniser vinduer ved å synkronisere vindusverktøyet. Deretter trekker regionen av interesse rundt en Cajal kroppen identifisert ved coilin immunostaining.Mål intensiteten til snRNA-signalet i den coilindefinerte avkastningen. Bestem intensiteten av snRNA fluorescens i ROI tilfeldig plassert i kjernen. Lagre målte verdier og beregn forholdet mellom RNA-signalet i Cajal-kroppen og nukleoplasma.I denne studien er fluorescerende merkede snRNAer mikroinjisert for å overvåke transporten inne i cellen. For å teste om SM-området er viktig for Cajal kroppsakkumulering, er snRNA mangler SM-området mikroinjisert direkte inn i kjernen. Injeksjon i cytoplasma fungerer som en kontroll mens full lengde snRNA er mikroinjisert for å tjene som en positiv kontroll.Etter inkubasjon er mikroinjiserte celler faste og Cajal kroppsmarkør coilin visualiseres ved indirekte immunofluorescence. Den fulle lengden snRNA akkumulert i Cajal organer etter både kjernefysiske og cytoplasmatiske injeksjoner. I motsetning, snRNA mangler SM området forble i cytoplasma etter mikroinjeksjon i dette rommet mens kjernefysisk mikroinjeksjon av snRNA uten SM området avslører at SM bindende sekvensen er viktig for Cajal kroppen lokalisering som denne snRNA forblir i kjernen, men ikke akkumuleres i Cajal organer.Noen ganger svikter mikroinjeksjonen i bare ett cellulært rom og lurte Dextran 70 kilodalton finnes i både kjernen og cytoplasma. Disse cellene kastes fra videre analyse. Til tross for at de fluorescerende merkede snRNAs lagres ved negative 80 grader Celsius før injeksjonen, kan RNA-nedbrytning forekomme.Degradert snRNA injisert i cytoplasma transporteres ikke inn i kjernen og forblir lokalisert i cytoplasma. Slike snRNA bør kastes og ny snRNA bør syntetiseres. Det er viktig å justere injeksjons- og kompenserende trykk for celletypen din på riktig måte.Og som sagt tidligere, sette riktig nedre grense for celle injeksjon er avgjørende for en god mikroinjeksjon. Husk at fenolklorformen som brukes under RNA-isolasjon er farlig, og at mikroinjeksjonsnålen er et skarpt objekt. Vær forsiktig når du håndterer disse materialene.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Time-lapse Live Imaging of Clonally Related Neural Progenitor Cells in the Developing Zebrafish Forebrain

Precise patterns of division, migration and differentiation of neural progenitor cells are crucial for proper brain development and function1,2. To ...

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Electrophysiological Measurements and Analysis of Nociception in Human Infants

Elektrofysiologiske målinger og analyser av Nociception i Human Spedbarn

Pain is an unpleasant sensory and emotional experience. Since infants cannot verbally report their experiences, current methods of pain assessment are ...

Efficient Derivation of Human Neuronal Progenitors and Neurons from Pluripotent Human Embryonic Stem Cells with Small Molecule Induction

Effektiv Utledning av Human nevrale stamceller og nevroner fra pluripotent humane embryonale stamceller med lite molekyl Induksjon

There is a large unfulfilled need for a clinically-suitable human neuronal cell source for repair or regeneration of the damaged central nervous system ...

Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation

Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation

Visualisering og genetisk manipulering av dendritter og pigger i Mus hjernebarken og hippocampus hjelp<em&gt; I fosterlivet</em&gt; Electroporation

In utero electroporation (IUE) has become a powerful technique to study the development of different regions of the embryonic nervous system 1-5. To date ...

Micromanipulation of Gene Expression in the Adult Zebrafish Brain Using Cerebroventricular Microinjection of Morpholino Oligonucleotides

Mikromanipulasjonsprosedyre av Gene Expression i voksen sebrafisk Brain hjelp Cerebroventricular Mikroinjeksjon av morpholino Oligonukleotider

Manipulation of gene expression in tissues is  required to perform functional studies. In this paper, we demonstrate the  cerebroventricular ...

Quantification of Cerebral Vascular Architecture using Two-photon Microscopy in a Mouse Model of HIV-induced Neuroinflammation

Kvantifisering av Cerebral Vascular Architecture ved hjelp av to-foton mikroskopi i en musemodell for HIV-indusert nevroinflammasjon

Human Immunodeficiency Virus 1 (HIV-1) infection frequently results in HIV-1 Associated Neurocognitive Disorders (HAND), and is characterized by a chronic ...

Quantification of Endosome and Lysosome Motilities in Cultured Neurons Using Fluorescent Probes

Kvantifisering av endosom og lysosommotiliteter i dyrkede neuroner ved bruk av fluorescerende prober

In the brain, membrane trafficking systems play important roles in regulating neuronal functions, such as neuronal morphology, synaptic plasticity, ...

3D Kinematic Analysis for the Functional Evaluation in the Rat Model of Sciatic Nerve Crush Injury

3D kinematisk analyse for funksjonell evaluering i rottemodellen av siattisk nerveknuseskade

Compared to the Sciatic Functional Index (SFI), kinematic analysis is a more reliable and sensitive method for performing functional evaluations of ...

In Vivo Targeting of Neural Progenitor Cells in Ferret Neocortex by In Utero Electroporation

In Vivo Målretting av Nevrale stamceller i Ferret Neocortex av In Utero Electroporation

Manipulation of gene expression in vivo during embryonic development is the method of choice when analyzing the role of individual genes during mammalian ...