Name: analysis of spliceosomal snrna localization in human hela cells using microinjection
Uploaded: 2019-08-06T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Spliceosomal snRNA Localization in Human Hela Cells Using Microinjection at JoVE.com

Эта работа была поддержана Чешским научным фондом (18-10035S), Национальной программой устойчивого развития I (LO1419), институциональной поддержкой (RVO68378050), Европейским фондом регионального развития (К.02.1.01/0.0/0.0/16-013/0001775) и Грантовое агентство Карлов университет (GAUK 134516). Мы также признаем, свет микроскопии Core фонда, IMG CAS, Прага, Чешская Республика (при поддержке грантов (Чешская-Биоизображение - LM2015062).

1. Подготовка срнНА для микроинъекций
<ol><li>Подготовьте шаблон ДНК, содержащий полнометражную или усеченную/мутировавую версию snRNA по PcR, используя следующую установку ПЦР: 98 градусов по Цельсию для 60 с, 98 градусов по Цельсию для 15 с, 68 градусов по Цельсию на 30 с, 72 кс на 1 мин, 98 градусов по Ц...

<ol>
	<li>Ishikawa, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+truncated+forms+of+U1+snRNA+reveals+a+novel+RNA+degradation+pathway+during+snRNP+biogenesis.">Identification of truncated forms of U1 snRNA reveals a novel RNA degradation pathway during snRNP biogenesis.</a> Nucleic Acids Research. 42 (4), 2708-2724 (2014).</li><li>Stanek, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cajal+bodies+and+snRNPs+-+friends+with+benefits.">Cajal bodies and snRNPs - friends with benefits.</a> RNA Biology. 14 (6), 671-679 (2017).</li><li>Stanek, D., Fox, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nuclear+bodies:+news+insights+into+structure+and+function.">Nuclear bodies: news insights into structure and function.</a> Curentr Opinion in Cell Biology. 46, 94-101 (2017).</li><li>Novotny, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SART3-Dependent+Accumulation+of+Incomplete+Spliceosomal+snRNPs+in+Cajal+Bodies.">SART3-Dependent Accumulation of Incomplete Spliceosomal snRNPs in Cajal Bodies.</a> Cell Reports. 10, 429-440 (2015).</li><li>Roithova, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Sm-core+mediates+the+retention+of+partially-assembled+spliceosomal+snRNPs+in+Cajal+bodies+until+their+full+maturation.">The Sm-core mediates the retention of partially-assembled spliceosomal snRNPs in Cajal bodies until their full maturation.</a> Nucleic Acids Research. 46 (7), 3774-3790 (2018).</li><li>Fischer, U., Sumpter, V., Sekine, M., Satoh, T., Luhrmann, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nucleo-cytoplasmic+transport+of+U+snRNPs:+definition+of+a+nuclear+location+signal+in+the+Sm+core+domain+that+binds+a+transport+receptor+independently+of+the+m3G+cap.">Nucleo-cytoplasmic transport of U snRNPs: definition of a nuclear location signal in the Sm core domain that binds a transport receptor independently of the m3G cap.</a> EMBO Journal. 12 (2), 573-583 (1993).</li><li>Shukla, S., Parker, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quality+control+of+assembly-defective+U1+snRNAs+by+decapping+and+5&#39;-to-3&#39;+exonucleolytic+digestion.">Quality control of assembly-defective U1 snRNAs by decapping and 5&#39;-to-3&#39; exonucleolytic digestion.</a> Proceeding of the National Academy of U S A. 111 (32), E3277-E3286 (2014).</li><li>Weil, T. T., Parton, R. M., Davis, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Making+the+message+clear:+visualizing+mRNA+localization.">Making the message clear: visualizing mRNA localization.</a> Trends in Cell Biology. 20 (7), 380-390 (2010).</li><li>Klingauf, M., Stanek, D., Neugebauer, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancement+of+U4/U6+small+nuclear+ribonucleoprotein+particle+association+in+Cajal+bodies+predicted+by+mathematical+modeling.">Enhancement of U4/U6 small nuclear ribonucleoprotein particle association in Cajal bodies predicted by mathematical modeling.</a> Molecular Biology of the Cell. 17 (12), 4972-4981 (2006).</li><li>Mhlanga, M. M., Vargas, D. Y., Fung, C. W., Kramer, F. R., Tyagi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=tRNA-linked+molecular+beacons+for+imaging+mRNAs+in+the+cytoplasm+of+living+cells.">tRNA-linked molecular beacons for imaging mRNAs in the cytoplasm of living cells.</a> Nucleic Acids Research. 33 (6), 1902-1912 (2005).</li></ol>

Мы использовали микроинъекцию флуоресцентно маркированных snRNAs для определения последовательностей, важных для локализации snRNA в ядерные тела Cajal. Благодаря быстрой и довольно простой подготовке маркированных РНК (подготовка шаблона ДНК ПЦР с последующим транскрипцией in vitro) метод пре...

РНК сращивания является одним из важнейших шагов в экспрессии генов, который катализируются большой рибонуклеопротеин комплекс называется spliceosome. В общей сложности, более 150 белков и 5 небольших ядерных РНК (SnRNAs) интегрированы в spliceosome на различных стадиях сплайсинга пути. U1, U2, U4, U5 и U6 snRNA участвуют в сращивании крупных интронов GU-AG. Эти snRNAs присоединиться к spliceosome как предварительно сформированные небольшие частицы ядерного рибонуклеопротеина (snRNPs), которые содержат snRNA, семь Sm белков, связанных с snRNA (или Like-Sm белков, которые ассоциируются с U6 snRNA) и 1-12 белков, специфичных для каждого snRNP.
Сборка snRNPs включает цитоплазмамические и ядерные этапы. Недавно транскрибируемая snRNA экспортируется в цитоплазму, где она приобретает кольцо, собранное из семи белков Sm. Кольцо Sm впоследствии служит сигналом для повторного импорта snRNA обратно в ядро. Дефектные snRNAs, которые не связаны с белками Sm сохраняются в цитоплазме1. Недавно импортированные snRNPs впервые появляются в организме Cajal, где они отвечают snRNP-специфических белков и закончить их созревания (рассмотрено в ссылке2,3). Недавно мы показали, что ингибирование окончательных шагов созревания приводит к секвестрации незрелых snRNPs в телах Cajal4,5. Мы предложили модель, в которой окончательное созревание snRNP находится под контролем качества, который отслеживает добавление белков, специфических snRNP, и формирование активных snRNPs. Однако молекулярные детали того, как клетки различают правильно собранные зрелые и аномальные незрелые частицы, остаются неуловимыми.
Для определения последовательностей snRNA, которые необходимы для ориентации и накопления snRNAs в ядерных телах Cajal, мы решили использовать микроинъекцию флуоресцентно маркированных snRNAs. Микроинъекция была методом выбора, потому что: 1) она не требует дополнительной последовательности тега, чтобы различать синтетические snRNAs форме их эндогенных аналогов, что особенно важно для коротких РНК с небольшим пространством для включения дополнительных последовательность тегов; 2) он позволяет анализе последовательностей, которые важны для биогенеза. Например, последовательность Sm имеет важное значение для сборки кольца Sm и реимпорта в ядро6. Когда snRNAs выражены в клетке, snRNAs не хватает Sm последовательность деградируют в цитоплазме и не достигают ядра и Cajal органов7. Тем не менее, snRNAs без последовательности Sm может быть непосредственно микровисван в ядро и, таким образом, потенциальную роль последовательности Sm в локализации тела Cajal анализ.
Здесь мы подробно описываем метод микроинъекций, который мы применили для определения последовательностей snRNA, необходимых для целевой snRNAs в тело Cajal5. Мы показали, что Sm и SMN связывания сайты вместе необходимы и достаточны для локализации не только snRNAs, но различные короткие некодирования РНК в тело Cajal. Основываясь на микроинъекциях, а также других доказательствах, мы предположили, что кольцо Sm, собранное на месте связывания Sm, является сигналом локализации тела Cajal.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>ChromaTide Alexa fluor 488-5-UTP</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>C11403</td>
			<td>Stock concentration 1 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium - high glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D5796</td>
			<td>Containing 4.5 g&#8260;L D-glucose, Phenol red and antibiotics</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FemtoJet express Injector</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5247000013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Femtotips II</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>930000043</td>
			<td>Microinjection needle of 0.5 &#181;m inner and 0.7 &#181;m outer diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoromont G with DAPI</td>
			<td>SouthernBiotech</td>
			<td>0100-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycogen</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>AM9510</td>
			<td>Stock concentration 5 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gridded Glass Coverslips</td>
			<td>Ibidi</td>
			<td>10817</td>
			<td>Coverslips with a grid, no direct experience with them</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>InjectMan NI 2 Micromanipulator</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5181000017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>m3-2,2,7G(5&#39;)ppp(5&#39;)G trimethyled cap analogue</td>
			<td>Jena Bioscience</td>
			<td>NU-853-1</td>
			<td>Stock concentration 40 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEGAshortscript T7 Transcription Kit</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>AM1354</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Cover Glasses 12 mm, No. 1</td>
			<td>Paul Marienfeld GmbH</td>
			<td>111520</td>
			<td>For routine work</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Cover Glasses 12 mm, No. 1.5</td>
			<td>Paul Marienfeld GmbH</td>
			<td>117520</td>
			<td>For high resolution images</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope DeltaVision</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td></td>
			<td>For image acquisition</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope DMI6000</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td>For microinjection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde 32% solution EM grade</td>
			<td>EMS</td>
			<td>15714</td>
			<td>Dissolved in PIPES to the final concentration 4%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol:Chloroform 5:1</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1944</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primers for U2 amplification: Forward: 5&#8217;-TAATACGACTCACTATAGGGATCGCTTCTCGGCCTTTTGG, 
			Reverse: 5&#180; TGGTGCACCGTTCCTGGAGGT</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td></td>
			<td>T7 rpromoter sequence in italics</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phusion High Fidelity DNA polymerase</td>
			<td>BioLab</td>
			<td>M0530L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNasin Plus</td>
			<td>Promega</td>
			<td>N2615</td>
			<td>Stock concentration 40 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tetramethylrhodamine isothiocyanate Dextran 65-85 kDa</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T1162</td>
			<td>Dissolved in water, stock concentration 1 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton-X100</td>
			<td>Serva</td>
			<td>37240</td>
			<td>Dissolved in water, stock concentration 10%</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of spliceosomal snrna localization in human hela cells using microinjection

Биогенез spliceosomal snRNAs представляет собой сложный процесс, включающий как ядерные, так и цитоплазмические фазы, и последний шаг происходит в ядерном отсеке под названием тело Каджала. Однако последовательности, которые направляют локализацию snRNA в эту субнуклеарную структуру, не были известны до недавнего времени. Для определения последовательностей, важных для накопления snRNA в телах Cajal, мы использовали микроинъекции флуоресцентно помечены snRNAs следуют их локализации внутри клеток. Во-первых, мы подготовили snRNA удаления мутантов, синтезированные шаблоны ДНК для транскрипции в пробирке и транскрибированные snRNAs в присутствии UTP в сочетании с Alexa488. Маркированные snRNAs были смешаны с 70 kDa-Dextran спрягались с TRITC, и микровводили к ядру или цитоплазме клеток человека HeLa. Клетки были инкубированы в течение 1 ч и фиксированной и cajal маркер каулин был визуализирован косвенным иммунофлуоресценции, в то время как snRNAs и dextran, который служит маркером ядерной или цитоплазматической инъекции, наблюдались непосредственно с помощью флуоресценционного микроскопа. Этот метод позволяет эффективно и быстро проверить, как различные последовательности влияют на локализацию РНК внутри клеток. Здесь мы показываем важность Последовательности Sm-связывания для эффективной локализации snRNAs в тело Cajal.

Для мониторинга локализации snRNA и роли сайта связывания Sm в таргетинге тела Cajal, мы подготовили шаблон ДНК, содержащий промоутер T7 и либо полнометражный U2 snRNA или U2 snRNA, не хватает семи нуклеотидов (AUUUUG), образующих сайт связывания Sm. snRNAs были в пробирке транскрибированы, изолированы и смеш...

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Spliceosomal snRNA Localization in Human Hela Cells Using Microinjection at JoVE.com

Analysis of Spliceosomal snRNA Localization in Human Hela Cells Using Microinjection

Биогенез spliceosomal snRNAs является сложным процессом с участием различных клеточных отсеков. Здесь мы использовали микроинъекцию флуоресцентно маркированных snRNAs для того, чтобы контролировать их транспортировку внутри клетки.

Анализ Spliceosomal snRNA Локализация в клетках гели человека с использованием микроинъекции

Biogenesis of spliceosomal snRNAs is a complex process involving both nuclear and cytoplasmic phases and the last step occurs in a nuclear compartment ...

Здесь мы применили микроинъекцию флуоресцентно помеченных РНК для обнаружения РНК-последовательностей, которые необходимы для локализации коротких ядерных РНК в ядерные структуры, называемые телами Cajal. Этот метод имеет два основных преимущества. Во-первых, он может быть применен для коротких РНК, которые в противном случае трудно маркировать и отслеживать.А во-вторых, это позволяет быстро скрининг различных последовательностей и тестирование их роли в локализации РНК. За день до микроинъекции семя HeLa или другие адепт-клетки на 12-миллиметровых крышках достигают 50% стечения во время микроинъекции. Для начала поместите подготовленную крышку в центр чашки Петри, добавьте клетки и два миллиметра культурных средств массовой информации.На следующий день поместите ячейку заполненной чашкой Петри на микроскоп. Используя микрозагрузчик, загрузите три микролитера смеси snRNA в иглу и установите иглу в держатель микроинжектора под углом 45 градусов по отношению к поверхности чашки Петри. Используйте 10X междугородной цели, чтобы найти иглу.Во-первых, установите скорость грубой на инжектор и опустите иглу, пока она не коснется среды культуры. Используя бинокль микроскопа, найдите яркое пятно, которое является местом, где игла касается среды культуры. Измените скорость до штрафа и еще ниже иглы, глядя в микроскоп, пока кончик иглы наблюдается.Перемести иглу в середину поля зрения и переключитесь на цель дальнего расстояния 40X. После этого выберите ячейку и перемести иглу над клеткой. Установите давление и время для контакта с ячейкой.Перемести иглу в клетку, а затем установите нижний предел микроманипулятора. Установка нижнего предела является наиболее важной частью протокола. Потому что поверхность крышки не совершенна и потому что каждая клетка друг, вы установить более низкий предел несколько времен во время встречи впрыски.Затем перемести иглу обратно над клеткой и нажмите кнопку впрыска на джойстик инжектора. Игла будет двигаться автоматически внутри клетки к месту, где установлен предел для введения РНК смеси. Чтобы закончить, нажмите кнопку меню на инжектор и удалить иглу из держателя.Затем отключите трубку от инжектора перед выключением инжектора и микроманипулятора. После микроинъекции верните клетки в инкубатор двуокиси углерода и инкубировать при 37 градусах по Цельсию в течение одного часа. Затем, промыть клетки три раза с PBS при комнатной температуре.Исправить клетки в течение 20 минут с 4%paraformaldehyde в 0,1 молярных труб при рН 6,9. Затем мыть клетки три раза с комнатной температурой PBS. Если анализируется только локализация snRNA, кратко промыть клетки в воде и смонтировать в монтажной среде с DAPI.В случае дополнительной локализации белка, пронизывают клетки с 0,5%Triton X-100 в PBS в течение пяти минут при комнатной температуре. Промыть клетки три раза с PBS и пятно их с соответствующими первичными и вторичными антителами, как указано в текстовом протоколе. Затем промыть три раза с PBS и промыть один раз в воде.После этого смонтировать ячейки в монтажной среде с DAPI. Когда вы будете готовы к изображению, используйте высококачественную микроскопическую систему флуоресценции, оснащенную целью погружения для получения изображений. После того, как микроинъекционные клетки будут идентифицированы, соберите стопку из 20 секций с 200 нанометров на один образец и подвергнитеся математической деконволюции.Для количественной оценки флуоресцентного сигнала сначала откройте изображение микроскопии в ImageJ и разделите каналы на окна. Синхронизация окон инструментом синхронизации окон. Далее, привлечь области интереса вокруг тела Cajal определены катушки иммуностимулятора.Измерьте интенсивность сигнала snRNA в катушке-определенной рентабельности инвестиций. Определите интенсивность флуоресценции snRNA в roi случайным образом помещены в нуклеоплазме. Сохранить измеренные значения и рассчитать соотношение РНК-сигнала в теле Cajal и нуклеоплазме.В этом исследовании, флуоресцентно помечены snRNAs микроинъектируют для того, чтобы контролировать их транспортировку внутри клетки. Чтобы проверить, является ли сайт SM имеет важное значение для накопления тела Cajal, snRNA не хватает SM сайт микроинъектирован непосредственно в ядро. Инъекция в цитоплазму служит в качестве контроля в то время как полная длина snRNA микроинъектирован в качестве положительного контроля.После инкубации, микроинъекции клетки фиксируются и Cajal тела маркер катушкин визуализируется косвенным иммунофторесценции. Полная длина snRNA накапливается в телах Cajal после ядерных и цитоплазмических инъекций. В отличие от этого, snRNA не хватает SM сайт остался в цитоплазме после микроинъекции в этом отсеке в то время как ядерная микроинъекция snRNA без сайта SM показывает, что последовательность связывания SM имеет важное значение для локализации тела Cajal, как это snRNA остается в ядре, но не накапливается в cajal органов.Иногда микроинъекции в только один клеточный отсек не удается и обманули Dextran 70 килодальтон можно найти как в ядре и цитоплазмы. Эти клетки отбрасываются из дальнейшего анализа. Несмотря на то, что флуоресцентно помеченные snRNAs хранятся при отрицательном 80 градусов по Цельсию до инъекции, деградация РНК может произойти.Деградированные snRNA вводят в цитоплазму не транспортируется в ядро и остается локализованным в цитоплазме. Такие snRNA должны быть отброшены и новые snRNA должны быть синтезированы. Важно правильно настроить инъекцию и компенсировать давление для вашего типа клеток.И, как уже говорили ранее, установление правильного нижнего предела для инъекций клеток имеет важное значение для хорошего микроинъекции. Пожалуйста, помните, что фенол-хлороформ, используемый во время изоляции РНК, опасен и что микроинъекция иглы является острым объектом. Будьте осторожны при обработке этих материалов.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Time-lapse Live Imaging of Clonally Related Neural Progenitor Cells in the Developing Zebrafish Forebrain

Покадровый Живая съемка клонально Связанные нейронные клетки-предшественники в развивающихся данио рерио переднего мозга

Precise patterns of division, migration and differentiation of neural progenitor cells are crucial for proper brain development and function1,2. To ...

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-ячейки изображения сенсорных клеток-предшественников органов в интактных Drosophila Куколки

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Electrophysiological Measurements and Analysis of Nociception in Human Infants

Электрофизиологические измерения и анализ ноцицепции в человеческих младенцев

Pain is an unpleasant sensory and emotional experience. Since infants cannot verbally report their experiences, current methods of pain assessment are ...

Efficient Derivation of Human Neuronal Progenitors and Neurons from Pluripotent Human Embryonic Stem Cells with Small Molecule Induction

Эффективное Вывод прав нейронов и нейронов прародителей из плюрипотентных эмбриональных стволовых клеток человека с малыми Индукционная Молекула

There is a large unfulfilled need for a clinically-suitable human neuronal cell source for repair or regeneration of the damaged central nervous system ...

Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation

Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation

Визуализация и генетических манипуляций дендритов и шипы в мышь коры головного мозга и гиппокамп использования<em&gt; Внутриутробное</em&gt; Электропорация

In utero electroporation (IUE) has become a powerful technique to study the development of different regions of the embryonic nervous system 1-5. To date ...

Micromanipulation of Gene Expression in the Adult Zebrafish Brain Using Cerebroventricular Microinjection of Morpholino Oligonucleotides

Микроманипуляция экспрессии генов в головном мозге взрослых данио рерио Использование церебровентрикулярных Микроинъекции олигонуклеотиды Морфолино

Manipulation of gene expression in tissues is  required to perform functional studies. In this paper, we demonstrate the  cerebroventricular ...

Quantification of Cerebral Vascular Architecture using Two-photon Microscopy in a Mouse Model of HIV-induced Neuroinflammation

Количественная оценка церебральной сосудистой архитектуры с использованием двухфотонного микроскопии в мышиной модели ВИЧ-индуцированной нейровоспаление

Human Immunodeficiency Virus 1 (HIV-1) infection frequently results in HIV-1 Associated Neurocognitive Disorders (HAND), and is characterized by a chronic ...

Quantification of Endosome and Lysosome Motilities in Cultured Neurons Using Fluorescent Probes

Количественная оценка подвижности эндосомы и лизосом в культивируемых нейронах с помощью флуоресцентных зондов

In the brain, membrane trafficking systems play important roles in regulating neuronal functions, such as neuronal morphology, synaptic plasticity, ...

3D Kinematic Analysis for the Functional Evaluation in the Rat Model of Sciatic Nerve Crush Injury

3D кинематический анализ для функциональной оценки в Крыса Модель Сиатический нерв Давка травмы

Compared to the Sciatic Functional Index (SFI), kinematic analysis is a more reliable and sensitive method for performing functional evaluations of ...

In Vivo Targeting of Neural Progenitor Cells in Ferret Neocortex by In Utero Electroporation

В Vivo Ориентация нейронных клеток-предшественников в Ferret Neocortex от In Utero Electroporation

Manipulation of gene expression in vivo during embryonic development is the method of choice when analyzing the role of individual genes during mammalian ...