Name: analysis of spliceosomal snrna localization in human hela cells using microinjection
Uploaded: 2019-08-06T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Spliceosomal snRNA Localization in Human Hela Cells Using Microinjection at JoVE.com

Detta arbete stöddes av tjeckiska vetenskapsstiftelsen (18-10035S), det nationella hållbarhetsprogrammet I (LO1419), institutionellt stöd (RVO68378050), Europeiska regionala utvecklingsfonden (CZ. 02.1.01/0.0/0.0/16_013/0001775) och bidrags myndigheten för Karlsuniversitetet (GAUK 134516). Vi erkänner vidare den lätta mikroskopi Core Facility, IMG CAS, Prag, Tjeckien (med stöd av bidrag (Czech-bioimaging-LM2015062).

1. beredning av snRNAs för mikroinjektion
<ol><li>Förbered en DNA-mall som innehåller full längd eller stympad/muterad version av snRNA genom PCR med en följande PCR-inställning: 98 ° c för 60 s, 98 ° c för 15 s, 68 ° c för 30 s, 72 ° c i 1 min, 98 ° c för 15 s för 35x och 72 ° c i 5 min.</li>
	<li>Den främre primer måste innehålla en promotor sekvens för in vitro-transkription strax uppströms den första transkriberade nukleotid. Amplifiera U2 snRNA sekvens med hjälp av framåt primer som inneh?...

<ol>
	<li>Ishikawa, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+truncated+forms+of+U1+snRNA+reveals+a+novel+RNA+degradation+pathway+during+snRNP+biogenesis.">Identification of truncated forms of U1 snRNA reveals a novel RNA degradation pathway during snRNP biogenesis.</a> Nucleic Acids Research. 42 (4), 2708-2724 (2014).</li><li>Stanek, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cajal+bodies+and+snRNPs+-+friends+with+benefits.">Cajal bodies and snRNPs - friends with benefits.</a> RNA Biology. 14 (6), 671-679 (2017).</li><li>Stanek, D., Fox, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nuclear+bodies:+news+insights+into+structure+and+function.">Nuclear bodies: news insights into structure and function.</a> Curentr Opinion in Cell Biology. 46, 94-101 (2017).</li><li>Novotny, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SART3-Dependent+Accumulation+of+Incomplete+Spliceosomal+snRNPs+in+Cajal+Bodies.">SART3-Dependent Accumulation of Incomplete Spliceosomal snRNPs in Cajal Bodies.</a> Cell Reports. 10, 429-440 (2015).</li><li>Roithova, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Sm-core+mediates+the+retention+of+partially-assembled+spliceosomal+snRNPs+in+Cajal+bodies+until+their+full+maturation.">The Sm-core mediates the retention of partially-assembled spliceosomal snRNPs in Cajal bodies until their full maturation.</a> Nucleic Acids Research. 46 (7), 3774-3790 (2018).</li><li>Fischer, U., Sumpter, V., Sekine, M., Satoh, T., Luhrmann, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nucleo-cytoplasmic+transport+of+U+snRNPs:+definition+of+a+nuclear+location+signal+in+the+Sm+core+domain+that+binds+a+transport+receptor+independently+of+the+m3G+cap.">Nucleo-cytoplasmic transport of U snRNPs: definition of a nuclear location signal in the Sm core domain that binds a transport receptor independently of the m3G cap.</a> EMBO Journal. 12 (2), 573-583 (1993).</li><li>Shukla, S., Parker, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quality+control+of+assembly-defective+U1+snRNAs+by+decapping+and+5&#39;-to-3&#39;+exonucleolytic+digestion.">Quality control of assembly-defective U1 snRNAs by decapping and 5&#39;-to-3&#39; exonucleolytic digestion.</a> Proceeding of the National Academy of U S A. 111 (32), E3277-E3286 (2014).</li><li>Weil, T. T., Parton, R. M., Davis, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Making+the+message+clear:+visualizing+mRNA+localization.">Making the message clear: visualizing mRNA localization.</a> Trends in Cell Biology. 20 (7), 380-390 (2010).</li><li>Klingauf, M., Stanek, D., Neugebauer, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancement+of+U4/U6+small+nuclear+ribonucleoprotein+particle+association+in+Cajal+bodies+predicted+by+mathematical+modeling.">Enhancement of U4/U6 small nuclear ribonucleoprotein particle association in Cajal bodies predicted by mathematical modeling.</a> Molecular Biology of the Cell. 17 (12), 4972-4981 (2006).</li><li>Mhlanga, M. M., Vargas, D. Y., Fung, C. W., Kramer, F. R., Tyagi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=tRNA-linked+molecular+beacons+for+imaging+mRNAs+in+the+cytoplasm+of+living+cells.">tRNA-linked molecular beacons for imaging mRNAs in the cytoplasm of living cells.</a> Nucleic Acids Research. 33 (6), 1902-1912 (2005).</li></ol>

Vi använde mikroinjektion av fluorescerande märkta snRNAs för att bestämma sekvenser viktiga för snRNA lokalisering till nukleära Cajal organ. På grund av snabb och ganska enkel beredning av märkta RNAs (beredning av DNA-mall av PCR följt av in vitro-transkription) metoden erbjuder effektiv analys av hur olika sekvenser bidrar till RNA lokalisering. På relativt kort tid, kunde vi analysera tio olika borttagningar eller substitutioner av U2 snRNA (referens5 och data som inte visas). För ...

RNA skarvning är en av de avgörande stegen i genuttryck, som katalyseras av en stor ribonukleoprotein komplex som kallas spliceosome. Sammanlagt är mer än 150 proteiner och 5 små nukleära RNAs (snRNAs) integrerade i skarvar i olika stadier av skarvning vägen. SnRNAs (U1, U2, U4, U5 och U6) deltar i splitsar av stora GU-AG Introns. Dessa snrnas gå med spliceosome som pre-bildade små nukleära ribonukleoprotein partiklar (snrnps) som innehåller snRNA, sju SM proteiner i samband med snRNA (eller liknande-SM proteiner, som associerar med U6 snRNA) och 1-12 proteiner specifika för varje snRNP.
Montering av snRNPs innebär cytoplasmiska och nukleära stadier. Nyligen transkriberade snRNA exporteras till cytoplasman där den förvärvar en ring sammansatt av sju SM-proteiner. SM-ringen fungerar därefter som en signal för snRNA åter importera tillbaka till kärnan. Defekta snRNAs som inte associeras med SM-proteiner behålls i cytoplasman1. Nyligen importerade snrnps visas först i Cajal kroppen där de uppfyller snRNP-specifika proteiner och avsluta sin mognad (ses över i referens2,3). Vi visade nyligen att hämning av den slutliga mogningen steg resulterar i kvarstad på omogen snrnps i Cajal organ4,5. Vi föreslog en modell där den slutliga snRNP mogningen är under kvalitetskontroll som övervakar tillägg av snRNP-specifika proteiner och bildandet av aktiva snRNPs. Men molekylära detaljer om hur celler skilja mellan korrekt monterade mogna och avvikande omogen partiklar förblir svårfångade.
För att bestämma snRNA sekvenser som är viktiga för inriktning och ackumulering av snrnas i nukleära Cajal organ, vi bestämde oss för att anställa mikroinjektion av överföras märkta snrnas. Microinjection var en metod för val eftersom: 1) det kräver inte en ytterligare sekvens tagg för att skilja syntetiska snRNAs bilda sina endogena motsvarigheter som är särskilt viktigt för korta RNAs med liten plats för införande av extra tagg sekvens; 2) det möjliggör analys av sekvenser som är viktiga för biogenes. Till exempel är SM-sekvensen avgörande för SM-ringmontering och återimport till Nucleus6. När snRNAs uttrycks i cellen, är snRNAs saknar SM sekvens bryts ned i cytoplasman och inte når kärnan och Cajal organ7. Men snRNAs utan SM-sekvensen kan direkt mikroinjiceras i kärnan och därmed en potentiell roll i SM-sekvensen i Cajal Body lokalisering analyseras.
Här beskriver vi i detalj en görs metod som vi tillämpade för att bestämma snRNA sekvenser som krävs för att rikta snrnas in i Cajal kroppen5. Vi visade att SM och SMN bindnings platser är tillsammans nödvändiga och tillräckliga för att lokalisera inte bara snRNAs men olika korta icke-kodning RNAs i Cajal kroppen. Baserat på mikroinjektion samt andra bevis, föreslog vi att SM ringen monteras på SM bindningsstället är Cajal kroppen lokalisering signal.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>ChromaTide Alexa fluor 488-5-UTP</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>C11403</td>
			<td>Stock concentration 1 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium - high glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D5796</td>
			<td>Containing 4.5 g&#8260;L D-glucose, Phenol red and antibiotics</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FemtoJet express Injector</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5247000013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Femtotips II</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>930000043</td>
			<td>Microinjection needle of 0.5 &#181;m inner and 0.7 &#181;m outer diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoromont G with DAPI</td>
			<td>SouthernBiotech</td>
			<td>0100-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycogen</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>AM9510</td>
			<td>Stock concentration 5 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gridded Glass Coverslips</td>
			<td>Ibidi</td>
			<td>10817</td>
			<td>Coverslips with a grid, no direct experience with them</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>InjectMan NI 2 Micromanipulator</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5181000017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>m3-2,2,7G(5&#39;)ppp(5&#39;)G trimethyled cap analogue</td>
			<td>Jena Bioscience</td>
			<td>NU-853-1</td>
			<td>Stock concentration 40 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEGAshortscript T7 Transcription Kit</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>AM1354</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Cover Glasses 12 mm, No. 1</td>
			<td>Paul Marienfeld GmbH</td>
			<td>111520</td>
			<td>For routine work</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Cover Glasses 12 mm, No. 1.5</td>
			<td>Paul Marienfeld GmbH</td>
			<td>117520</td>
			<td>For high resolution images</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope DeltaVision</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td></td>
			<td>For image acquisition</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope DMI6000</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td>For microinjection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde 32% solution EM grade</td>
			<td>EMS</td>
			<td>15714</td>
			<td>Dissolved in PIPES to the final concentration 4%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol:Chloroform 5:1</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1944</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primers for U2 amplification: Forward: 5&#8217;-TAATACGACTCACTATAGGGATCGCTTCTCGGCCTTTTGG, 
			Reverse: 5&#180; TGGTGCACCGTTCCTGGAGGT</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td></td>
			<td>T7 rpromoter sequence in italics</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phusion High Fidelity DNA polymerase</td>
			<td>BioLab</td>
			<td>M0530L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNasin Plus</td>
			<td>Promega</td>
			<td>N2615</td>
			<td>Stock concentration 40 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tetramethylrhodamine isothiocyanate Dextran 65-85 kDa</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T1162</td>
			<td>Dissolved in water, stock concentration 1 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton-X100</td>
			<td>Serva</td>
			<td>37240</td>
			<td>Dissolved in water, stock concentration 10%</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of spliceosomal snrna localization in human hela cells using microinjection

Biogenesis av Spliceosomal snRNAs är en komplicerad process som involverar både nukleära och cytoplasmiska faser och det sista steget sker i ett kärnkrafts fack kallas Cajal kroppen. Men sekvenser som direkt snRNA lokalisering i denna subnukleära struktur har inte varit känd förrän nyligen. För att bestämma sekvenser som är viktiga för ackumulering av snrnas i Cajal organ, vi anställda görs av överföras märkta snrnas följt av deras lokalisering inuti celler. Först, vi förberedde snRNA radering mutanter, syntetiserade DNA-mallar för in vitro-transkription och transkriberas snRNAs i närvaro av UTP i kombination med Alexa488. Märkta snRNAs blandades med 70 kDa-dextran konjugerat med TRITC, och microinjected till kärnan eller Cytoplasman hos mänskliga HeLa celler. Cellerna inkuberades för 1 h och fixeras och Cajal Body marker Mats visualiserades genom indirekt immunofluorescens, medan snrnas och dextran, som fungerar som en markör för nukleär eller Cytoplasmatisk injektion, observerades direkt med hjälp av ett fluorescensmikroskop. Denna metod möjliggör effektiv och snabb testning av hur olika sekvenser påverkar RNA lokalisering inuti celler. Här visar vi vikten av den SM-bindande sekvensen för effektiv lokalisering av snRNAs i Cajal kroppen.

För att övervaka snRNA lokalisering och den roll som SM bindnings plats i Cajal Body inriktning, vi förberedde en DNA-mall som innehåller T7 promotorn och antingen full längd U2 snRNA eller U2 snRNA saknar de sju nukleotider (AUUUUUG) bildar SM bindningsstället. snRNAs var in vitro transkriberad, isolerad och blandad med TRITC-kopplade dextran-70kDa. Vi microinjected blandningen innehåller in vitro transkriberade snRNA i kärnan eller Cytoplasman i HeLa celler.
Det har tidigare visats a...

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Spliceosomal snRNA Localization in Human Hela Cells Using Microinjection at JoVE.com

Analysis of Spliceosomal snRNA Localization in Human Hela Cells Using Microinjection

Biogenesis av Spliceosomal snRNAs är en komplicerad process som involverar olika cellulära fack. Här använde vi mikroinjektion av fluorescerande märkta snRNAs för att övervaka deras transport inuti cellen.

Analys av Spliceosomal snRNA lokalisering i mänskliga hela celler med mikroinjektion

Biogenesis of spliceosomal snRNAs is a complex process involving both nuclear and cytoplasmic phases and the last step occurs in a nuclear compartment ...

Här applicerade vi mikroinjektion av fluorescently märkta RNAs för att upptäcka RNA-sekvenser som är nödvändiga för lokalisering av korta nukleära RNA i nukleära strukturer som kallas Cajal organ. Denna teknik har två stora fördelar. Först kan den tillämpas för korta RNAs som annars är svåra att märka och spåra.Och för det andra tillåter det snabb screening av olika sekvenser och testa sin roll i RNA-lokalisering. En dag före mikroinjektion, frö HeLa eller andra anhängare celler på 12 millimeter coverslips att nå 50%confluency vid tidpunkten för mikroinjektion. Till att börja placera en förberedd täckkåp i mitten av en petriskål, lägg till celler och två millimeter kulturmedia.Följande dag, placera cellen fylld Petriskål på ett mikroskop skede. Med hjälp av en mikroladdare, lasta tre mikroliter av snRNA-blandningen i nålen och installera nålen i innehavaren av mikroinjektorn i en vinkel av 45 grader med avseende på petriskålens yta. Använd en 10X långväga målsättning för att hitta nålen.Ställ först in hastigheten grov på spridaren och sänk nålen tills den vidrör odlingsmediet. Med hjälp av mikroskop kikaren, hitta ljuspunkten som är den plats där nålen vidrör odlingsmediet. Ändra hastigheten till fin och sänk nålen ytterligare medan du tittar in i mikroskopet tills nålspetsen observerats.Flytta nålen i mitten av synfältet och växla till en 40X långväga mål. Efter detta markerar du cellen och flyttar nålen ovanför cellen. Ställ in trycket och tiden för cellkontakten.Flytta nålen ner i cellen och ställ sedan in mikromanipulatorns nedre gräns. Att ange den nedre gränsen är den mest kritiska delen av protokollet. Eftersom coverslip yta är inte perfekt och eftersom varje cell är olika, måste du ställa in den nedre gränsen flera gånger under injektionen session.Därefter flyttar du tillbaka nålen ovanför cellen och trycker på injektionsknappen på injektionssprutans joystick. Nålen kommer att flytta sig automatiskt inne i cellen till den plats där gränsen är inställd för att injicera RNA-blandningen. För att avsluta, tryck på menyknappen på injektorn och ta ut nålen ur hållaren.Koppla sedan bort röret från injektorn innan du stänger av injektorn och mikromanipulatorn. Efter mikroinjektionen, återför cellerna till en koldioxidinkubator och inkubera vid 37 grader Celsius i en timme. Därefter sköljer du cellerna tre gånger med PBS i rumstemperatur.Fixera cellerna i 20 minuter med 4%paraformaldehyd i 0,1 molarrör vid pH 6.9. Tvätta sedan cellerna tre gånger med rumstemperatur PBS. Om endast SNRNA-lokalisering analyseras, skölj kortfattat cellerna i vatten och montera i ett monteringsmedium med DAPI.Vid ytterligare proteinlokalisering, permeabilisera cellerna med 0,5%Triton X-100 i PBS i fem minuter vid rumstemperatur. Skölj cellerna tre gånger med PBS och färga dem med lämpliga primära och sekundära antikroppar enligt textprotokollet. Skölj sedan tre gånger med PBS och skölj en gång i vatten.Efter detta monterar du cellerna i ett monteringsmedium med DAPI. När du är klar att avbilda, använd en high-end fluorescens mikroskopiska system utrustad med en nedsänkning mål att förvärva bilderna. När de mikroinjekterade cellerna har identifierats, samla en stapel med 20 Z sektioner med 200 nanometer Z steg per prov och föremål för matematisk dekonvolution.För att kvantifiera lysrörssignalen öppnar du först mikroskopibilden i ImageJ och delar upp kanaler i fönster. Synkronisera fönster genom att synkronisera fönsterverktyget. Därefter dra regionen av intresse runt en Cajal kropp identifieras av coilin immunostaining.Mät intensiteten hos snRNA-signalen i den coilindefinierade ROI. Bestäm intensiteten av snRNA fluorescens i ROI slumpmässigt placeras i nukleoplasmen. Spara uppmätta värden och beräkna förhållandet mellan RNA-signal i Cajalkroppen och nukleoplasmen.I denna studie, fluorescerande märkt snRNAs är microinjected för att övervaka sin transport inuti cellen. För att testa om SM-platsen är viktig för Cajal kroppsansamling, är snRNA saknar SM platsen microinjected direkt i kärnan. Injektion i cytoplasman fungerar som en kontroll medan full längd snRNA är microinjected att fungera som en positiv kontroll.Efter inkubation, microinjected celler är fasta och Cajal kroppen markör coilin visualiseras genom indirekt immunofluorescens. Den fulla längden snRNA ackumuleras i Cajal organ efter både nukleära och cytoplasmatiska injektioner. Däremot snRNA saknar SM platsen kvar i cytoplasman efter microinjection i detta fack medan kärn mikroinjektion av snRNA utan SM platsen avslöjar att SM bindande sekvensen är viktigt för Cajal kroppen lokalisering som detta snRNA kvar i kärnan men inte ackumuleras i Cajal organ.Ibland misslyckas mikroinjektionen i endast ett cellfack och lurade Dextran 70 kilodalton kan hittas i både kärnan och cytoplasman. Dessa celler kasseras från ytterligare analys. Trots att de fluorescerande märkta snRNAs lagras vid negativa 80 grader Celsius före injektionen kan RNA-nedbrytning uppstå.Nedbrutet snRNA som injiceras i cytoplasman transporteras inte in i kärnan och stannar lokaliserade i cytoplasman. Sådana snRNA bör kasseras och nya snRNA ska syntetiseras. Det är viktigt att korrekt justera injektions- och kompensationstryck för din celltyp.Och som sagt tidigare, inställning korrekt nedre gräns för cellinjektion är viktigt för en bra mikroinjektion. Kom ihåg att den fenol-kloroform som används under RNA-isolering är farlig och att mikroinjektionsnålen är ett vasst föremål. Var försiktig när du hanterar dessa material.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Time-lapse Live Imaging of Clonally Related Neural Progenitor Cells in the Developing Zebrafish Forebrain

Time-lapse Live avbildning av kloner som är närbesläktade neurala stamceller i utvecklingsländerna Zebrafish framhjärnan

Precise patterns of division, migration and differentiation of neural progenitor cells are crucial for proper brain development and function1,2. To ...

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell imaging av sensoriska celler orgel Precursor i intakt Drosophila Puppor

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Electrophysiological Measurements and Analysis of Nociception in Human Infants

Elektrofysiologiska mätningar och analyser av nociception i Human Spädbarn

Pain is an unpleasant sensory and emotional experience. Since infants cannot verbally report their experiences, current methods of pain assessment are ...

Efficient Derivation of Human Neuronal Progenitors and Neurons from Pluripotent Human Embryonic Stem Cells with Small Molecule Induction

Effektiv Derivering av mänskliga neurala stamceller och nervceller från Pluripotenta mänskliga embryonala stamcellslinjer med liten molekyl Induktion

There is a large unfulfilled need for a clinically-suitable human neuronal cell source for repair or regeneration of the damaged central nervous system ...

Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation

Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation

Visualisering och Genetic Manipulation av dendriter och ryggar i mus hjärnbarken och hippocampus med användning av<em&gt; I utero</em&gt; Elektroporering

In utero electroporation (IUE) has become a powerful technique to study the development of different regions of the embryonic nervous system 1-5. To date ...

Micromanipulation of Gene Expression in the Adult Zebrafish Brain Using Cerebroventricular Microinjection of Morpholino Oligonucleotides

Mikromanipulation av genuttryck i vuxna zebrafisk hjärnan med Cerebroventricular mikroinjektion av Morpholino Oligonucleotides

Manipulation of gene expression in tissues is  required to perform functional studies. In this paper, we demonstrate the  cerebroventricular ...

Quantification of Cerebral Vascular Architecture using Two-photon Microscopy in a Mouse Model of HIV-induced Neuroinflammation

Kvantifiering av cerebral vaskulär Architecture med hjälp av två foton mikroskopi i en musmodell av HIV-inducerad Neuroinflammation

Human Immunodeficiency Virus 1 (HIV-1) infection frequently results in HIV-1 Associated Neurocognitive Disorders (HAND), and is characterized by a chronic ...

Quantification of Endosome and Lysosome Motilities in Cultured Neurons Using Fluorescent Probes

Kvantifiering av endosom och lysosommotiliteter i odlade neuroner med användning av fluorescerande probar

In the brain, membrane trafficking systems play important roles in regulating neuronal functions, such as neuronal morphology, synaptic plasticity, ...

3D Kinematic Analysis for the Functional Evaluation in the Rat Model of Sciatic Nerve Crush Injury

3D Kinematic Analys för funktionell utvärdering i Rat Modell av Sciatic Nerve Crush Skada

Compared to the Sciatic Functional Index (SFI), kinematic analysis is a more reliable and sensitive method for performing functional evaluations of ...

In Vivo Targeting of Neural Progenitor Cells in Ferret Neocortex by In Utero Electroporation

In Vivo Inriktning av neurala progenitorceller i Iller Neocortex av In Utero Electroporation

Manipulation of gene expression in vivo during embryonic development is the method of choice when analyzing the role of individual genes during mammalian ...