Name: in vivo immunofluorescence localization for assessment of therapeutic and diagnostic antibody biodistribution in cancer research
Uploaded: 2019-09-16T12:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Immunofluorescence Localization for Assessment of Therapeutic and Diagnostic Antibody Biodistribution in Cancer Research at JoVE.com

Vi takker Dr. Andrew Olson (Stanford Neuroscience Microscopy service) for diskussioner og udstyr brug. Vi takker Dr. Juergen K. Willmann for hans mentorordning. Denne undersøgelse blev støttet af NIH R21EB022214 Grant (KEW), NIH R25CA118681 uddannelse Grant (Kew) og NIH K99EB023279 (KEW). Den Stanford Neuroscience Microscopy service blev støttet af NIH NS069375.

Alle de metoder, der er beskrevet her, er blevet godkendt af det institutionelle administrative panel for Laboratoriedyrs pleje (APLAC) på Stanford University.
1. transgene musemodel af brystkræft udvikling
<ol><li>Observere mus fra den ønskede kræft model for den relevante tumorvækst via palpering eller caliper måling før du fortsætter. Bemærk: her blev den transgene murine model af brystcancer udvikling (FVB/N-TG (MMTV-PyMT) 634Mul/J) (MMTV-PyMT) anvendt. Disse dyr udvikler spo...

<ol>
	<li>Forthal, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functions+of+Antibodies.">Functions of Antibodies.</a> Microbiology Spectrum. 2 (4), 1-17 (2014).</li><li>Boder, E. T., Midelfort, K. S., Wittrup, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directed+evolution+of+antibody+fragments+with+monovalent+femtomolar+antigen-binding+affinity.">Directed evolution of antibody fragments with monovalent femtomolar antigen-binding affinity.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (20), 10701-10705 (2000).</li><li>K&#246;hler, G., Milstein, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous+cultures+of+fused+cells+secreting+antibody+of+predefined+specificity.">Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity.</a> Nature. 256 (5517), 495-497 (1975).</li><li>Lonberg, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen-specific+human+antibodies+from+mice+comprising+four+distinct+genetic+modifications.">Antigen-specific human antibodies from mice comprising four distinct genetic modifications.</a> Nature. 368 (6474), 856-859 (1994).</li><li>McCafferty, J., Griffiths, A. D., Winter, G., Chiswell, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phage+antibodies:+filamentous+phage+displaying+antibody+variable+domains.">Phage antibodies: filamentous phage displaying antibody variable domains.</a> Nature. 348 (6301), 552-554 (1990).</li><li>Ferlay, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+incidence+and+mortality+worldwide:+sources,+methods+and+major+patterns+in+GLOBOCAN+2012.">Cancer incidence and mortality worldwide: sources, methods and major patterns in GLOBOCAN 2012.</a> International Journal of Cancer. 136 (5), E359-E386 (2015).</li><li>Reichert, J. M., Valge-Archer, V. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+trends+for+monoclonal+antibody+cancer+therapeutics.">Development trends for monoclonal antibody cancer therapeutics.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 6 (5), 349-356 (2007).</li><li>Kircher, M. F., Willmann, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+Body+Imaging:+MR+Imaging,+CT,+and+US.+Part+I.+Principles.">Molecular Body Imaging: MR Imaging, CT, and US. Part I. Principles.</a> Radiology. 263 (3), 633-643 (2012).</li><li>Fleuren, E. D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Theranostic+applications+of+antibodies+in+oncology.">Theranostic applications of antibodies in oncology.</a> Molecular Oncology. 8 (4), 799-812 (2014).</li><li>Forsstr&#246;m, B., Bis&#322;awska Axn&#228;s, B., Rockberg, J., Danielsson, H., Bohlin, A., Uhlen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissecting+Antibodies+with+Regards+to+Linear+and+Conformational+Epitopes.">Dissecting Antibodies with Regards to Linear and Conformational Epitopes.</a> PLoS ONE. 10 (3), (2015).</li><li>Woof, J. M., Burton, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+antibody-Fc+receptor+interactions+illuminated+by+crystal+structures.">Human antibody-Fc receptor interactions illuminated by crystal structures.</a> Nature Reviews Immunology. 4 (2), 89-99 (2004).</li><li>Brooks, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translational+genomics:+The+challenge+of+developing+cancer+biomarkers.">Translational genomics: The challenge of developing cancer biomarkers.</a> Genome Research. 22 (2), 183-187 (2012).</li><li>Tabrizi, M., Bornstein, G. G., Suria, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodistribution+Mechanisms+of+Therapeutic+Monoclonal+Antibodies+in+Health+and+Disease.">Biodistribution Mechanisms of Therapeutic Monoclonal Antibodies in Health and Disease.</a> The AAPS Journal. 12 (1), 33-43 (2009).</li><li>Duraiyan, J., Govindarajan, R., Kaliyappan, K., Palanisamy, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+immunohistochemistry.">Applications of immunohistochemistry.</a> Journal of Pharmacy &amp; Bioallied Sciences. 4 (Suppl 2), S307-S309 (2012).</li><li>Gambhir, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+imaging+of+cancer+with+positron+emission+tomography.">Molecular imaging of cancer with positron emission tomography.</a> Nature Reviews. Cancer. 2 (9), 683-693 (2002).</li><li>Freise, A. C., Wu, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+Imaging+with+Antibodies+and+Engineered+Fragments.">In vivo Imaging with Antibodies and Engineered Fragments.</a> Molecular Immunology. 67 (200), 142-152 (2015).</li><li>Cilliers, C., Menezes, B., Nessler, I., Linderman, J., Thurber, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+Tumor+Penetration+and+Single-Cell+Targeting+of+Antibody-Drug+Conjugates+Increases+Anticancer+Efficacy+and+Host+Survival.">Improved Tumor Penetration and Single-Cell Targeting of Antibody-Drug Conjugates Increases Anticancer Efficacy and Host Survival.</a> Cancer Research. 78 (3), 758-768 (2018).</li><li>Wilson, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectroscopic+Photoacoustic+Molecular+Imaging+of+Breast+Cancer+using+a+B7-H3-targeted+ICG+Contrast+Agent.">Spectroscopic Photoacoustic Molecular Imaging of Breast Cancer using a B7-H3-targeted ICG Contrast Agent.</a> Theranostics. 7 (6), 1463-1476 (2017).</li><li>Wischhusen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+molecular+imaging+as+a+non-invasive+companion+diagnostic+for+netrin-1+interference+therapy+in+breast+cancer.">Ultrasound molecular imaging as a non-invasive companion diagnostic for netrin-1 interference therapy in breast cancer.</a> Theranostics. 8 (18), 5126-5142 (2018).</li><li>Guy, C. T., Cardiff, R. D., Muller, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+mammary+tumors+by+expression+of+polyomavirus+middle+T+oncogene:+a+transgenic+mouse+model+for+metastatic+disease.">Induction of mammary tumors by expression of polyomavirus middle T oncogene: a transgenic mouse model for metastatic disease.</a> Molecular and Cellular Biology. 12 (3), 954-961 (1992).</li><li>Hober, S., Nord, K., Linhult, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+A+chromatography+for+antibody+purification.">Protein A chromatography for antibody purification.</a> Journal of Chromatography B. 848 (1), 40-47 (2007).</li><li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+Animal+Perfusion+Fixation+for+Rodents.">Whole Animal Perfusion Fixation for Rodents.</a> Journal of Visualized Experiments JoVE. (65), (2012).</li><li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li><li>Bachawal, S. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Earlier+detection+of+breast+cancer+with+ultrasound+molecular+imaging+in+a+transgenic+mouse+model.">Earlier detection of breast cancer with ultrasound molecular imaging in a transgenic mouse model.</a> Cancer Research. 73, 1689-1698 (2013).</li><li>Fitamant, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Netrin-1+expression+confers+a+selective+advantage+for+tumor+cell+survival+in+metastatic+breast+cancer.">Netrin-1 expression confers a selective advantage for tumor cell survival in metastatic breast cancer.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 105 (12), 4850-4855 (2008).</li><li>Kennedy, T. E., Serafini, T., de la Torre, J. R., Tessier-Lavigne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Netrins+are+diffusible+chemotropic+factors+for+commissural+axons+in+the+embryonic+spinal+cord.">Netrins are diffusible chemotropic factors for commissural axons in the embryonic spinal cord.</a> Cell. 78 (3), 425-435 (1994).</li><li>Ryman, J. T., Meibohm, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacokinetics+of+Monoclonal+Antibodies.">Pharmacokinetics of Monoclonal Antibodies.</a> CPT: Pharmacometrics &amp; Systems Pharmacology. 6 (9), 576-588 (2017).</li><li>Scalia, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen+Masking+During+Fixation+and+Embedding,+Dissected.">Antigen Masking During Fixation and Embedding, Dissected.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 65 (1), 5-20 (2017).</li><li>Robertson, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+labeled+tomato+lectin+for+imaging+vasculature+structures.">Use of labeled tomato lectin for imaging vasculature structures.</a> Histochemistry and Cell Biology. 143 (2), 225-234 (2015).</li><li>Chen, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+flow+reprograms+lymphatic+vessels+to+blood+vessels.">Blood flow reprograms lymphatic vessels to blood vessels.</a> The Journal of Clinical Investigation. 122 (6), 2006-2017 (2012).</li><li>Anderson, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravascular+staining+for+discrimination+of+vascular+and+tissue+leukocytes.">Intravascular staining for discrimination of vascular and tissue leukocytes.</a> Nature Protocols. 9 (1), 209-222 (2014).</li><li>de Boer, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Vivo+Fluorescence+Immunohistochemistry:+Localization+of+Fluorescently+Labeled+Cetuximab+in+Squamous+Cell+Carcinomas.">In Vivo Fluorescence Immunohistochemistry: Localization of Fluorescently Labeled Cetuximab in Squamous Cell Carcinomas.</a> Scientific Reports. 5, (2015).</li><li>Jenkins, R. W., Barbie, D. A., Flaherty, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+resistance+to+immune+checkpoint+inhibitors.">Mechanisms of resistance to immune checkpoint inhibitors.</a> British Journal of Cancer. 118 (1), 9-16 (2018).</li><li>Rexer, B. N., Arteaga, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrinsic+and+acquired+resistance+to+HER2-targeted+therapies+in+HER2+gene-amplified+breast+cancer:+mechanisms+and+clinical+implications.">Intrinsic and acquired resistance to HER2-targeted therapies in HER2 gene-amplified breast cancer: mechanisms and clinical implications.</a> Critical Reviews in Oncogenesis. 17 (1), 1-16 (2012).</li></ol>

Denne metode har flere kritiske trin og kræver potentielle ændringer for at sikre en vellykket implementering. For det første skal dosering og timing af antistof/antistof konjugat intravenøs injektion skræddersys til den specifikke applikation. Generelt, doser bør anvendes, der er i overensstemmelse med, hvordan antistof konjugat vil typisk blive brugt, dvs matchende doser af det terapeutiske antistof eller antistof-baserede kontrastmiddel. Desuden bør tidspunktet for indsamlingen af målvæv overvejes nøje. Anti...

Monoklonale antistoffer (MAB) er store glycoproteiner (ca. 150 kDa) af immunglobulin superfamilien, der udskilles af B-celler og har en primær funktion i immunsystemet til at identificere og enten hæmme den biologiske funktion af, eller Mark for ødelæggelse, bakterielle eller virale patogener, og kan genkende unormalt protein udtryk på cancerceller1. Antistoffer kan have en ekstremt høj affinitet til deres specifikke epitoper ned til femtomolære koncentrationer, hvilket gør dem meget lovende værktøjer i biomedicin2. Med udviklingen af hybridom celle-teknologien af Milstein og Köhler (tildelt Nobelprisen i 1984) blev produktionen af MABS mulig3. Senere blev humane MABS genereret ved hjælp af fagtypning display teknologi eller transgene muse stammer og revolutionerede deres anvendelse som nye forskningsværktøjer og Therapeutics4,5.
Kræft er et verdensomspændende sundhedsproblem og en væsentlig dødsårsag, der skaber behovet for nye tilgange til forebyggelse, opdagelse og terapi6. Til dato, MABS har tilladt udstråling af rollen af gener og deres proteiner i tumor og når rettet mod kræft biomarkører, kan muliggøre tumor detektion og karakterisering for patient stratificering. For kræftbehandling, bispecifikke mAbs, antistof-Drug konjugater, og mindre antistof fragmenter er ved at blive udviklet som Therapeutics, og for den målrettede Drug levering til at forbedre terapeutisk virkning7. Derudover tjener antistoffer for biomarkør målretning af kontrastmidler til molekylære billedbehandlings metoder såsom fluorescens-guidet kirurgi, photoacoustic (PA) Imaging, ultralyd (US) molekylær billeddannelse, og klinisk anvendte Positron emission tomografi (PET) eller enkelt foton emission computertomografi (SPECT)8. Endelig kan antistoffer også anvendes som theranostiske midler, der muliggør stratificering af patienter og respons overvågning for målrettede terapier9. Derfor er nye mAbs begyndt at spille en afgørende rolle i kræft påvisning, diagnose, og behandling.
På trods af kritiske fremskridt i udviklingen og produktionen af nye og meget specifikke mAbs, diagnostiske og terapeutiske applikationer kan gøres ineffektive på grund af kompleksiteten af tumor miljøet. Antistof interaktioner er afhængige af typen af epitope, dvs,om det er lineær eller konformationel10. Ud over anerkendelsen af antigener skal antistoffer overvinde naturlige barrierer såsom fartøjs vægge, basal membraner og tumor stroma for at nå målcellerne, som udtrykker antigenet. Antistoffer interagerer med vævet ikke kun gennem det variable fragment antigen binding (Fab) domæne, men også gennem det konstante krystallinske fragment (FC), som yderligere fører til off-site interaktioner11. Målretning er også kompliceret af det heterogene udtryk af tumor markører i hele tumor bulk og heterogenitet i tumor vaskularisering og lymfesystemet12,13. Desuden er tumor mikromiljø sammensat af Cancer-associerede fibroblaster, som understøtter tumorceller, tumor immunceller, der undertrykker anti-tumor immunreaktioner, og tumor endotelet som understøtter transport af ilt og næringsstoffer, alle som interfererer med penetration, distribution, og tilgængelighed af antistof-baserede Therapeutics eller diagnostik. Samlet set kan disse overvejelser begrænse terapeutisk eller diagnostisk virkning, reducere behandlingsrespons, og kan resultere i tumor resistens.
Derfor, for udvikling af effektive antistof-baserede terapier og diagnostik, det er afgørende at vurdere Biodistribution og interaktion af antistof-baserede konjugat i tumor mikromiljø. I øjeblikket, i prækliniske undersøgelser, markør udtryk i tumor forskningsmodeller analyseres ex vivo ved immunofluorescens (hvis) farvning af tumor sektioner14. Standard hvis farvning udføres med primære markør-specifikke antistoffer, som derefter fremhæves af sekundære fluorescently mærkede antistoffer på ex vivo tumor væv skiver, der er blevet isoleret fra dyret. Denne teknik fremhæver den statiske placering af mærket på tidspunktet for vævs fiksering og giver ikke indsigt i, hvordan antistof-baserede Therapeutics eller diagnostik kan distribuere eller interagere i fysiologiske forhold. Molekylær billeddannelse af PET, SPECT, US og PA kan give oplysninger om antistof-konjugeret kontraststof fordeling i levende prækliniske modeller8,15. Da disse billedbehandlings metoder er ikke-invasive, kan der udføres longitudinale undersøgelser, og tidsfølsomme data kan indsamles med et minimalt antal dyr pr. gruppe. Men, disse ikke-invasive molekylære Imaging tilgange er ikke følsomme nok og ikke har nok opløsning til lokalisering af stof fordeling på cellulært niveau. Desuden kan de fysiske og biologiske karakteristika af det primære antistof ændres drastisk ved konjugering af et kontrastmiddel16.
For at tage in vivo fysiologiske og patologiske betingelser i betragtning af, hvordan antistof-baserede Therapeutics og diagnostik interagerer inden for tumor miljøet og for at opnå høj opløsning cellulære og endda sub-cellulære distribution profiler af ikke-konjugeret antistoffer, foreslår vi en IF-tilgang, der anses in vivo immunofluorescens lokalisering (IVIL), hvor det antigen specifikke antistof intravenøst injiceres in vivo. Den antistof-baserede terapeutiske eller diagnostiske, fungerer som et primært antistof, cirkulerer i funktionelle blodkar og binder sig til sit mål protein i den meget nøjagtige, levende tumor miljø. Efter isolering af in vivo-mærkede tumorer med det primære antistof bruges et sekundært antistof til at lokalisere akkumulerede og bevarede antistof konjugater. Denne fremgangsmåde svarer til en tidligere beskrevet, hvis histologi tilgang injicerer fluorescently mærkede antistoffer17. Selv om her, brugen af ikke-konjugeret antistoffer undgår en potentiel ændring i Biodistribution egenskaber induceret af antistof modifikation. Desuden undgår ex vivo-påføring af fluorescerende sekundært antistof et muligt tab af fluorescens signal under vævs opsamling og-behandling og giver forstærkning af fluorescens signalintensitet. Vores mærknings tilgang afspejler in vivo Biodistribution af antistof-baserede lægemidler og målrettede agenter og kan give vigtig indsigt i udviklingen af nye diagnostiske og terapeutiske agenter.
Her beskriver vi to anvendelser af IVIL-metoden som anvendt i tidligere undersøgelser, der undersøger biodistributionen og tilgængeligheden af antistof baserede kontrastmidler til molekylære billedbehandlings metoder til påvisning af brystkræft. For det første er biodistributionen af et antistof-nær infrarød farvestof konjugat (anti-B7-H3-antistof bundet til det nær infrarøde fluorescens farvestof, indocyanine Green, B7-H3-ICG) og isotype Control agent (ISO-ICG) for fluorescens og foto akustisk molekyl billeddannelse udforskes18. Denne applikation metode er beskrevet i protokollen. Dernæst kvantificeres biodistributionsmæssigt følsomt antistof til netrin-1, typisk ikke detekterbart med traditionel, hvis billeddannelse, der anvendes med ultralyd molekyle dannelse, og præsenteres i de repræsentative resultater19. Ved indgåelsen af denne protokol papir, læsere bør føle sig trygge vedtage IVIL metode til deres egne antistof-baserede forskningsprogrammer.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:990px;" width="990">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Animal Model</td>
			<td style="width:196px;"></td>
			<td style="width:166px;"></td>
			<td style="width:334px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:22px;">FVB/N-Tg(MMTV-PyMT)634Mul/J</td>
			<td style="width:196px;">The Jackson Laboratory</td>
			<td style="width:166px;">002374</td>
			<td>Females, 4-6 weeks of age</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Animal Handling Supplies</td>
			<td style="width:196px;"></td>
			<td style="width:166px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">27G Catheter</td>
			<td style="width:196px;">VisualSonics</td>
			<td style="width:166px;">Please call to order</td>
			<td>Vevo MicroMarker Tail Vein Access Cannulation Kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Alcohol Wipes</td>
			<td style="width:196px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">22-246073</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Gauze Sponges (4&#34; x 4&#34; 16 Ply)</td>
			<td style="width:196px;">Cardinal Health</td>
			<td style="width:166px;">2913</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Heat Lamp</td>
			<td style="width:196px;">Morganville Scientific</td>
			<td style="width:166px;">&#160;HL0100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:196px;">Henry Schein Animal Health</td>
			<td style="width:166px;">29404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Ophthalmic Ointment</td>
			<td style="width:196px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">NC0490117</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Surgical Tape</td>
			<td style="width:196px;">3M</td>
			<td style="width:166px;">1530-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Tissue Collection</td>
			<td style="width:196px;"></td>
			<td style="width:166px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Disposable Base Molds</td>
			<td style="width:196px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">22-363-556</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:295px;">Optimal Cutting Temperature (OCT) Medium</td>
			<td style="width:196px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">23-730-571</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:295px;">Surgical London Forceps</td>
			<td style="width:196px;">Fine Science Tools</td>
			<td>11080-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:295px;">Surgical Scissors</td>
			<td style="width:196px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:166px;">14084-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Antibodies</td>
			<td style="width:196px;"></td>
			<td style="width:166px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">AlexaFluor-488 goat anti-rat IgG</td>
			<td style="width:196px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:166px;">A-11006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">AlexaFluor-546 goat anti-rabbit IgG</td>
			<td style="width:196px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:166px;">A-11010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">AlexaFluor-594 goat anti-human IgG</td>
			<td style="width:196px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:166px;">A11014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Human IgG Isotype Control</td>
			<td style="width:196px;">Novus Biologicals</td>
			<td style="width:166px;">NBP1-97043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Humanized anti-netrin-1 antibody&#160;</td>
			<td style="width:196px;">Netris Pharma</td>
			<td style="width:166px;"></td>
			<td>contact@netrispharma.com</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Rabbit anti-Mouse CD276 (B7-H3)</td>
			<td style="width:196px;">Abcam</td>
			<td style="width:166px;">ab134161</td>
			<td>EPNCIR122 Clone</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Rat anti-Mouse CD31</td>
			<td style="width:196px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:166px;">550274</td>
			<td>MEC 13.3 Clone</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Reagents</td>
			<td style="width:196px;"></td>
			<td style="width:166px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
			<td style="width:196px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:166px;">A2153-50G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Clear Nail Polish</td>
			<td style="width:196px;"></td>
			<td style="width:166px;"></td>
			<td>Any local drug store</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Indocyanine Green - NHS</td>
			<td style="width:196px;">Intrace Medical</td>
			<td style="width:166px;">ICG-NHS ester</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Mounting Medium</td>
			<td style="width:196px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">TA-006-FM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Normal Goat Serum</td>
			<td style="width:196px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">ICN19135680</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Paraformaldehyde (PFA)</td>
			<td style="width:196px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">AAJ19943K2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Sterile Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
			<td style="width:196px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">14190250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Triton-X 100</td>
			<td style="width:196px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:166px;">T8787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Supplies</td>
			<td style="width:196px;"></td>
			<td style="width:166px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Adhesion Glass Slides</td>
			<td style="width:196px;">VWR</td>
			<td style="width:166px;">48311-703</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Desalting Columns</td>
			<td style="width:196px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">45-000-148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Glass Cover Slips</td>
			<td style="width:196px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">12-544G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Hydrophobic Barrier Pen</td>
			<td style="width:196px;">Ted Pella</td>
			<td style="width:166px;">22311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Microcentrifuge Tubes</td>
			<td style="width:196px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">05-402-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Slide Staining Tray</td>
			<td style="width:196px;">VWR</td>
			<td style="width:166px;">87000-136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Software</td>
			<td style="width:196px;"></td>
			<td style="width:166px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">FIJI</td>
			<td style="width:196px;">LOCI, UW-Madison.</td>
			<td style="width:166px;">Version 4.0</td>
			<td>https://fiji.sc/</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo immunofluorescence localization for assessment of therapeutic and diagnostic antibody biodistribution in cancer research

Monoklonale antistoffer (mAbs) er vigtige værktøjer i kræft påvisning, diagnose og behandling. De er vant til at opklare rollen af proteiner i tumorigenesis, kan rettes til kræft biomarkører muliggør tumor detektion og karakterisering, og kan anvendes til kræftbehandling som mAbs eller antistof-Drug konjugater til at aktivere immun Effector celler, at hæmme signalering veje, eller direkte dræbe celler, der bærer det specifikke antigen. På trods af kliniske fremskridt i udviklingen og produktionen af nye og meget specifikke mAbs, diagnostiske og terapeutiske anvendelser kan blive forringet af kompleksiteten og heterogenitet af tumor mikromiljø. Således, for udvikling af effektive antistof-baserede terapier og diagnostik, det er afgørende at vurdere Biodistribution og interaktion af antistof-baserede konjugat med levende tumor mikromiljø. Her beskriver vi in vivo immunofluorescens lokalisering (IVIL) som en ny metode til at studere interaktioner mellem antistof baseret terapeutisk og diagnostik i in vivo fysiologiske og patologiske tilstande. I denne teknik injiceres et terapeutisk eller diagnostisk antigen-specifikt antistof intravenøst in vivo og lokaliseret ex vivo med et sekundært antistof i isolerede tumorer. IVIL derfor afspejle in vivo Biodistribution af antistof-baserede lægemidler og målretning agenter. To IVIL-applikationer er beskrevet vurdering af Biodistribution og tilgængelighed af antistof-baserede kontrastmidler til molekylær billeddannelse af brystkræft. Denne protokol vil give fremtidige brugere mulighed for at tilpasse IVIL-metoden til deres egne antistof baserede forsknings applikationer.

Den IVIL metode blev brugt her til at undersøge in vivo Biodistribution og væv interaktion af B7-H3-ICG og ISO-ICG, ved at tillade agenter, efter intravenøs injektion i et levende dyr, at interagere med målvævet for 96 h, og derefter når vævene er som de primære antistoffer under ex vivo-immun farvning. IVIL-metoden blev også sammenlignet med standarden ex vivo ved farvning af vævene til B7-H3-mærket. Normale murine brystkirtler udtrykker ikke B7-H3 markør, bekræftet i ex viv...

Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Immunofluorescence Localization for Assessment of Therapeutic and Diagnostic Antibody Biodistribution in Cancer Research at JoVE.com

In Vivo Immunofluorescence Localization for Assessment of Therapeutic and Diagnostic Antibody Biodistribution in Cancer Research

In vivo immunofluorescenstest lokalisering (ivil) metode kan anvendes til at undersøge in vivo Biodistribution af antistoffer og antistof konjugater til onkologiske formål i levende organismer ved hjælp af en kombination af in vivo tumor målretning og ex vivo immunofarvning Metoder.

In vivo immunofluorescens lokalisering til vurdering af terapeutisk og diagnostisk antistof Biodistribution i kræftforskning

Monoclonal antibodies (mAbs) are important tools in cancer detection, diagnosis, and treatment. They are used to unravel the role of proteins in ...

Denne protokol for in vivo immunofluorescens lokalisering, eller IVIL, vurderer in vivo biodistribution af diagnostiske og terapeutiske antistoffer eller antistof-baserede midler til kræftforskning, påvisning og behandling. I modsætning til konventionel immunfluorescerende farvning, hvor cellulære udtryk for antigener afsløres ex vivo, belyser IVIL-metoden, hvordan antistoffer og antistofbaserede agenser distribueres i det levende dyr. Denne video vil hjælpe forståelsen af den overordnede arbejdsgang i IVIL metode.Det viser vigtige detaljer for en vellykket reproduktion af protokollen for andre applikationer og antistoffer. Overhold mus fra den ønskede kræftmodel for den relevante tumorvækst via palpering eller caliper måling, før du fortsætter. Rensning af antimusbæmus B7-H3 og kanin-IgG-isotypekontrolantistoffer på en afsaltningskolonne for at fjerne konserveringsmidler og opbevaringsbuffere efter fabrikantens anvisninger.Aliquot doser af 33 mikrogram af hvert antistof konjugat i de enkelte mikrocentrifuge rør. Efter bedøvelse som beskrevet i tekstprotokollen forberedes haleveneomuleringen af antistofopløsningerne. Desinficere halen af dyret ved at tørre tre gange med en alkohol tørre.Spil halevenerne ved opvarmning med en varmepude i ca. 30 sekunder. Undgå opvarmning af hele dyret. Ved hjælp af et 27-gauge hale venekateter, indsætte sommerfuglen nålen i en af de to laterale hale vener.Visualiser blodtilslædestrømmen i kateteret for at sikre, at nålen er korrekt placeret, så opløsningerne kommer helt ind i dyret versus bliver fanget i halen. Brug et stykke kirurgisk tape til omhyggeligt at fastgøre halen med den indsatte nål til scenen. Skyl kateteret med 25 mikroliter sterilt fosfat-bufferet saltvand.Injicer derefter antistofopløsningen i kateteret ved hjælp af insulinsprøjter. Skyl kateteret igen med 25 mikroliter steril PBS. Fjern nålen fra halen, og tryk for at stoppe blødninger.Udfør human dødshjælp af musen som beskrevet i tekstprotokollen, og læg musen i liggende position. Brug kirurgisk saks og scer til punktafgifter tumorvæv. Brug anslag til kun at gribe det ydre lag af huden mellem det sæt mælkekirtler tættest på halen, og lav et lille snit med en kirurgisk saks.Indfør den lukkede saks i snittet, og åbn langsomt spidsen for forsigtigt at adskille huden fra den underliggende bugvæggen membran, holde det intakt. Lav en lodret snit op i maven, fortsætter med at adskille huden fra den indre membran. Mellem den tredje og fjerde mælkekirtler, foretage en vandret skåret over maven for at tillade tilbagetrækning af huden og visualisering af mælkekirtlerne.Gribe hver tumor eller normal kirtel med stænde, omhyggeligt trimme væk påsatte hud ved hjælp af kirurgisk saks. Placer punkterede væv i væv engangsbase forme, der er formærket og fyldt med optimal skæretemperatur indlejring medium. Hurtigt fryse forme ved placering på tøris.For at studere off-target levering, punktafgifter andre væv eller organer af interesse. Ved hjælp af en kryostat, sektion frosne væv blokke på 10-mikron tykkelse, og placere tilstødende sektioner på formærket vedhæftning glas dias. Skyl frosne vævsdias med rumtemperatur PBS i fem minutter for at fjerne indlejringsmediet.Afgrænse vævssektioner med en hydrofobe barrierepen for at reducere mængden af opløsninger, der er nødvendige under farvning. Fastgør vævssektionerne med 4% paraformaldehydopløsning i fem minutter. Efter skylning af lysglas i PBS i fem minutter, permeabilize væv sektioner med 0,5%Triton X-100 i PBS i 15 minutter.Skyl objektglassene igen i PBS i fem minutter. Derblokkes væv med PBS, der indeholder 3 %-vægt pr. volumen af kvægserumalbumin, og 5 % volumen pr. volumengedeum i en time ved stuetemperatur. Efter skylning af lysglas i PBS i fem minutter inkuberes sektionerne med registrering af primære antistoffer såsom en almindelig nuklear, vaskulær eller cytoplasmatisk markør.Her anvendes rotte anti-mus CD31 ved en en-til-100 fortynding i blokeringsopløsningen. De dias med primære antistof efterlades natten over ved fire grader Celsius, beskyttet mod dehydrering på en slide bakke. Efter inkubation skylles objektglassene i PBS i fem minutter tre gange.Skift PBS hver gang. Inkuber objektglassene med sekundære antistoffer for at mærke de primære antistoffer. Til dette program visualiser anti-B7-H3 antistof ved hjælp af Alexa Fluor 546 konjugeret ged anti-kanin antistof, og visualisere CD31 med Alexa Fluor 488 ged anti-rotte sekundært antistof i blokerende opløsning.Beskyt objektglasset mod lys og dehydrering på en glidebakke i en time ved stuetemperatur. Efter skylning af lysglas i PBS som før, anvende en dråbe af monteringsmediet i midten af vævssnittet. Placer forsigtigt en dæksling, undgå fastklemning af luftbobler.Seal kanterne af dækslæbet med klar neglelak, og lad det tørre. Fortsæt med konfokal mikroskopibilleddannelse og kvantitativ billedanalyse som beskrevet i tekstprotokollen. Repræsentative konfokale mikrografer viser sammenligningen af specifikke B7-H3 antistof-ICG konjugat og uspecifik isotype kontrol antistof-ICG konjugat lokalisering i murine mælkekirtler, der indeholder normale eller karcinom væv.Normale murine mælkekirtler fra et dyr intravenøst injiceres med Iso-ICG eller B7-H3-ICG og modstænkes med CD31 viser ingen farvning af antistofkonjugater. Normalt væv viste sig ikke at have noget udtryk for B7-H3 ved standard ex vivo immunofluorescens farvning. I invasive mælketumorer binder B7-H3-ICG sig stærkt til vaskulaturen, det første kontaktpunkt in vivo, og derefter er i stand til at ekstravasere fra vaskulaturen til heterogent pletten tumorpitel.Iso-ICG viser uspecifik ophobning i tumorvæv. Standard ex vivo immunfluorescerende farvning viser ensartet udtryk for B7-H3 markør på epitel- og endotelceller. Repræsentative konfokale mikrografer viser in vivo immunofluorescens lokaliseringsmetode til at detektere netrin-1 udtryk eller isotype kontrol udtryk i murine karcinom og normale mælkekirtler.In vivo immunofluorescens lokalisering bekræfter epitelsignal for netrin-1 i MMTV-PyMT tumorer, men ikke i normale mælkekirtler. Desuden er der en stærk netrin-1 signal på endotelceller i bryst tumorer, som angivet ved den afkalcalerede gule signal. Signalet er betydeligt svagere i normale mælkekirtler.IVIL-metoden skal optimeres med hensyn til antistofdosering, vævsindsamling timing, og sekundær antistof fortynding for en vellykket gennemførelse. IVIL tillader målretning af kropslige epitoper, der ikke kan påvises ved hjælp af standard immunofluorescens farvning, som kræver vævsbehandling. Også, sunde organer tumor-bærende mus kan indsamles for at vurdere off-target levering af terapeutiske antistoffer.Med øget brug af antistofbaseret terapi og kontrastmidler i kræftforskning og -håndtering er IVIL-metoden yderst anvendelig til farmaceutisk forskning og udvikling. Forskere i kræftbehandlinger, molekylær billeddannelse, inflammation, og andre områder kan opleve, at IVIL metode giver nyttige oplysninger.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

Det<em&gt; Drosophila</em&gt; Imaginære Disc Tumor Model: Visualisering og Kvantificering af genekspression og tumorindtrængen Brug Genetic Mosaics

Drosophila melanogaster has emerged as a powerful experimental system for functional and mechanistic studies of tumor development and progression in the ...

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

In Vivo EPR vurdering af pH, pO2, Redox Status, og koncentrationen af fosfat og glutathion i Tumor mikromiljø

This protocol demonstrates the capability of low-field electron paramagnetic resonance (EPR)-based techniques in combination with functional paramagnetic ...

Assessment of Resistance to Tyrosine Kinase Inhibitors by an Interrogation of Signal Transduction Pathways by Antibody Arrays

Vurdering af resistens over for tyrosin Kinase hæmmere af en afhøring af signaltransduktionsveje af antistof Arrays

Cancer patients with an aberrant regulation of the protein phosphorylation networks are often treated with the tyrosine kinase inhibitors. Response rates ...

Using 22C3 Anti-PD-L1 Antibody Concentrate on Biopsy and Cytology Samples from Non-small Cell Lung Cancer Patients

Ved hjælp af 22C 3 Anti-PD-L1 antistof koncentrere sig om biopsi og cytologi prøver fra patienter med ikke-småcellet lungecancer

Pembrolizumab monotherapy has been approved for the first- and second-line treatment of patients with PD-L1-expressing advanced non-small cell lung cancer ...

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

Etablering af gastrisk Cancer patient afledte xenograft-modeller og primære cellelinjer

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Semi-automatic PD-L1 Characterization and Enumeration of Circulating Tumor Cells from Non-small Cell Lung Cancer Patients by Immunofluorescence

Semi-automatisk PD-L1 karakterisering og optælling af cirkulerende tumor celler fra ikke-småcellet lunge cancer patienter ved immunofluorescens

Circulating tumor cells (CTCs) derived from the primary tumor are shed into the bloodstream or lymphatic system. These rare cells (1&#8722;10 cells per mL ...

Analyzing Tumor and Tissue Distribution of Target Antigen Specific Therapeutic Antibody

Analyse af tumor og væv distribution af Target Antigen specifikke terapeutiske antistof

Monoclonal antibodies are high affinity multifunctional drugs that work by variable independent mechanisms to eliminate cancer cells. Over the last few ...

Enhanced Viability for Ex vivo 3D Hydrogel Cultures of Patient-Derived Xenografts in a Perfused Microfluidic Platform

Forbedret levedygtighed for Ex vivo 3D Hydrogel Kulturer af patient-afledte Xenografts i en perfunderet microfluidic platform

Patient-derived xenografts (PDX), generated when resected patient tumor tissue is engrafted directly into immunocompromised mice, remain biologically ...

Immunofluorescence Imaging of DNA Damage and Repair Foci in Human Colon Cancer Cells

Immunofluorescens Imaging af DNA-skader og reparation Foci i Human Colon Cancer Cells

The purpose of the manuscript is to provide a step-by-step protocol for performing immunofluorescence microscopy to study the radiation-induced DNA damage ...