Name: in vivo immunofluorescence localization for assessment of therapeutic and diagnostic antibody biodistribution in cancer research
Uploaded: 2019-09-16T12:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Immunofluorescence Localization for Assessment of Therapeutic and Diagnostic Antibody Biodistribution in Cancer Research at JoVE.com

Vi takker Dr. Andrew Olson (Stanford nevrovitenskap mikroskopi service) for diskusjoner og utstyr bruk. Vi takker Dr. Juergen K. Willmann for hans mentorer. Denne studien ble støttet av NIH R21EB022214 Grant (KEW), NIH R25CA118681 Training Grant (KEW), og NIH K99EB023279 (KEW). Stanford nevrovitenskap mikroskopi service ble støttet av NIH NS069375.

Alle metoder som er beskrevet her er godkjent av institusjonelle administrative panel på laboratorium Animal Care (APLAC) av Stanford University.
1. transgene Mouse modell av brystkreft utvikling
<ol><li>Observer mus fra ønsket kreft modell for riktig tumor vekst via palpasjon eller tykkelse måling før du fortsetter. Merk: Her ble transgene murine-modellen av brystkreft utvikling (FVB/N-TG (MMTV-PyMT) 634Mul/J) (MMTV-PyMT) brukt. Disse dyrene utvikler spontant en invasiv brystkreft sv...

<ol>
	<li>Forthal, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functions+of+Antibodies.">Functions of Antibodies.</a> Microbiology Spectrum. 2 (4), 1-17 (2014).</li><li>Boder, E. T., Midelfort, K. S., Wittrup, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directed+evolution+of+antibody+fragments+with+monovalent+femtomolar+antigen-binding+affinity.">Directed evolution of antibody fragments with monovalent femtomolar antigen-binding affinity.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (20), 10701-10705 (2000).</li><li>K&#246;hler, G., Milstein, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous+cultures+of+fused+cells+secreting+antibody+of+predefined+specificity.">Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity.</a> Nature. 256 (5517), 495-497 (1975).</li><li>Lonberg, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen-specific+human+antibodies+from+mice+comprising+four+distinct+genetic+modifications.">Antigen-specific human antibodies from mice comprising four distinct genetic modifications.</a> Nature. 368 (6474), 856-859 (1994).</li><li>McCafferty, J., Griffiths, A. D., Winter, G., Chiswell, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phage+antibodies:+filamentous+phage+displaying+antibody+variable+domains.">Phage antibodies: filamentous phage displaying antibody variable domains.</a> Nature. 348 (6301), 552-554 (1990).</li><li>Ferlay, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+incidence+and+mortality+worldwide:+sources,+methods+and+major+patterns+in+GLOBOCAN+2012.">Cancer incidence and mortality worldwide: sources, methods and major patterns in GLOBOCAN 2012.</a> International Journal of Cancer. 136 (5), E359-E386 (2015).</li><li>Reichert, J. M., Valge-Archer, V. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+trends+for+monoclonal+antibody+cancer+therapeutics.">Development trends for monoclonal antibody cancer therapeutics.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 6 (5), 349-356 (2007).</li><li>Kircher, M. F., Willmann, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+Body+Imaging:+MR+Imaging,+CT,+and+US.+Part+I.+Principles.">Molecular Body Imaging: MR Imaging, CT, and US. Part I. Principles.</a> Radiology. 263 (3), 633-643 (2012).</li><li>Fleuren, E. D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Theranostic+applications+of+antibodies+in+oncology.">Theranostic applications of antibodies in oncology.</a> Molecular Oncology. 8 (4), 799-812 (2014).</li><li>Forsstr&#246;m, B., Bis&#322;awska Axn&#228;s, B., Rockberg, J., Danielsson, H., Bohlin, A., Uhlen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissecting+Antibodies+with+Regards+to+Linear+and+Conformational+Epitopes.">Dissecting Antibodies with Regards to Linear and Conformational Epitopes.</a> PLoS ONE. 10 (3), (2015).</li><li>Woof, J. M., Burton, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+antibody-Fc+receptor+interactions+illuminated+by+crystal+structures.">Human antibody-Fc receptor interactions illuminated by crystal structures.</a> Nature Reviews Immunology. 4 (2), 89-99 (2004).</li><li>Brooks, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translational+genomics:+The+challenge+of+developing+cancer+biomarkers.">Translational genomics: The challenge of developing cancer biomarkers.</a> Genome Research. 22 (2), 183-187 (2012).</li><li>Tabrizi, M., Bornstein, G. G., Suria, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodistribution+Mechanisms+of+Therapeutic+Monoclonal+Antibodies+in+Health+and+Disease.">Biodistribution Mechanisms of Therapeutic Monoclonal Antibodies in Health and Disease.</a> The AAPS Journal. 12 (1), 33-43 (2009).</li><li>Duraiyan, J., Govindarajan, R., Kaliyappan, K., Palanisamy, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+immunohistochemistry.">Applications of immunohistochemistry.</a> Journal of Pharmacy &amp; Bioallied Sciences. 4 (Suppl 2), S307-S309 (2012).</li><li>Gambhir, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+imaging+of+cancer+with+positron+emission+tomography.">Molecular imaging of cancer with positron emission tomography.</a> Nature Reviews. Cancer. 2 (9), 683-693 (2002).</li><li>Freise, A. C., Wu, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+Imaging+with+Antibodies+and+Engineered+Fragments.">In vivo Imaging with Antibodies and Engineered Fragments.</a> Molecular Immunology. 67 (200), 142-152 (2015).</li><li>Cilliers, C., Menezes, B., Nessler, I., Linderman, J., Thurber, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+Tumor+Penetration+and+Single-Cell+Targeting+of+Antibody-Drug+Conjugates+Increases+Anticancer+Efficacy+and+Host+Survival.">Improved Tumor Penetration and Single-Cell Targeting of Antibody-Drug Conjugates Increases Anticancer Efficacy and Host Survival.</a> Cancer Research. 78 (3), 758-768 (2018).</li><li>Wilson, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectroscopic+Photoacoustic+Molecular+Imaging+of+Breast+Cancer+using+a+B7-H3-targeted+ICG+Contrast+Agent.">Spectroscopic Photoacoustic Molecular Imaging of Breast Cancer using a B7-H3-targeted ICG Contrast Agent.</a> Theranostics. 7 (6), 1463-1476 (2017).</li><li>Wischhusen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+molecular+imaging+as+a+non-invasive+companion+diagnostic+for+netrin-1+interference+therapy+in+breast+cancer.">Ultrasound molecular imaging as a non-invasive companion diagnostic for netrin-1 interference therapy in breast cancer.</a> Theranostics. 8 (18), 5126-5142 (2018).</li><li>Guy, C. T., Cardiff, R. D., Muller, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+mammary+tumors+by+expression+of+polyomavirus+middle+T+oncogene:+a+transgenic+mouse+model+for+metastatic+disease.">Induction of mammary tumors by expression of polyomavirus middle T oncogene: a transgenic mouse model for metastatic disease.</a> Molecular and Cellular Biology. 12 (3), 954-961 (1992).</li><li>Hober, S., Nord, K., Linhult, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+A+chromatography+for+antibody+purification.">Protein A chromatography for antibody purification.</a> Journal of Chromatography B. 848 (1), 40-47 (2007).</li><li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+Animal+Perfusion+Fixation+for+Rodents.">Whole Animal Perfusion Fixation for Rodents.</a> Journal of Visualized Experiments JoVE. (65), (2012).</li><li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li><li>Bachawal, S. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Earlier+detection+of+breast+cancer+with+ultrasound+molecular+imaging+in+a+transgenic+mouse+model.">Earlier detection of breast cancer with ultrasound molecular imaging in a transgenic mouse model.</a> Cancer Research. 73, 1689-1698 (2013).</li><li>Fitamant, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Netrin-1+expression+confers+a+selective+advantage+for+tumor+cell+survival+in+metastatic+breast+cancer.">Netrin-1 expression confers a selective advantage for tumor cell survival in metastatic breast cancer.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 105 (12), 4850-4855 (2008).</li><li>Kennedy, T. E., Serafini, T., de la Torre, J. R., Tessier-Lavigne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Netrins+are+diffusible+chemotropic+factors+for+commissural+axons+in+the+embryonic+spinal+cord.">Netrins are diffusible chemotropic factors for commissural axons in the embryonic spinal cord.</a> Cell. 78 (3), 425-435 (1994).</li><li>Ryman, J. T., Meibohm, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacokinetics+of+Monoclonal+Antibodies.">Pharmacokinetics of Monoclonal Antibodies.</a> CPT: Pharmacometrics &amp; Systems Pharmacology. 6 (9), 576-588 (2017).</li><li>Scalia, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen+Masking+During+Fixation+and+Embedding,+Dissected.">Antigen Masking During Fixation and Embedding, Dissected.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 65 (1), 5-20 (2017).</li><li>Robertson, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+labeled+tomato+lectin+for+imaging+vasculature+structures.">Use of labeled tomato lectin for imaging vasculature structures.</a> Histochemistry and Cell Biology. 143 (2), 225-234 (2015).</li><li>Chen, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+flow+reprograms+lymphatic+vessels+to+blood+vessels.">Blood flow reprograms lymphatic vessels to blood vessels.</a> The Journal of Clinical Investigation. 122 (6), 2006-2017 (2012).</li><li>Anderson, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravascular+staining+for+discrimination+of+vascular+and+tissue+leukocytes.">Intravascular staining for discrimination of vascular and tissue leukocytes.</a> Nature Protocols. 9 (1), 209-222 (2014).</li><li>de Boer, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Vivo+Fluorescence+Immunohistochemistry:+Localization+of+Fluorescently+Labeled+Cetuximab+in+Squamous+Cell+Carcinomas.">In Vivo Fluorescence Immunohistochemistry: Localization of Fluorescently Labeled Cetuximab in Squamous Cell Carcinomas.</a> Scientific Reports. 5, (2015).</li><li>Jenkins, R. W., Barbie, D. A., Flaherty, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+resistance+to+immune+checkpoint+inhibitors.">Mechanisms of resistance to immune checkpoint inhibitors.</a> British Journal of Cancer. 118 (1), 9-16 (2018).</li><li>Rexer, B. N., Arteaga, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrinsic+and+acquired+resistance+to+HER2-targeted+therapies+in+HER2+gene-amplified+breast+cancer:+mechanisms+and+clinical+implications.">Intrinsic and acquired resistance to HER2-targeted therapies in HER2 gene-amplified breast cancer: mechanisms and clinical implications.</a> Critical Reviews in Oncogenesis. 17 (1), 1-16 (2012).</li></ol>

Denne metoden har flere kritiske trinn og krever potensielle endringer for å sikre en vellykket implementering. Først, dosering og timing av antistoff/antistoff bøye intravenøs injeksjon må skreddersys til den spesifikke anvendelse. Generelt bør dosering brukes som er i samsvar med hvordan antistoff bøy vanligvis brukes, det vil si matchende doser av terapeutisk antistoff eller antistoff-basert kontrastmiddel. Også, tidspunktet for innsamling av målet vev bør vurderes nøye. Antistoffer og antistoff konjugater ...

Monoklonale antistoffer (mAb) er store glykoproteiner (ca. 150 kDa) av de immunglobulin overfamilie som skilles ut av B-celler og har en primær funksjon i immunsystemet for å identifisere og enten hemme den biologiske funksjonen til, eller merke for ødeleggelse, bakteriell eller viral patogener, og kan gjenkjenne unormale protein uttrykk på kreftceller1. Antistoffer kan ha en ekstremt høy affinitet til sine spesifikke epitopes ned til femtomolar konsentrasjoner gjør dem svært lovende verktøy i biomedisin2. Med utviklingen av hybridoma teknologi av Milstein og Köhler (tildelt Nobel prisen i 1984) ble produksjonen av mAbs mulig3. Senere ble Human mAbs generert ved hjelp av phage skjermteknologi eller transgene Mouse-stammer og revolusjonerte bruken som ny forskningsverktøy og legemiddel terapi4,5.
Kreft er et verdensomspennende helseproblem og en viktig dødsårsak som skaper behovet for nye tilnærminger for forebygging, deteksjon og terapi6. Hittil har mAbs tillatt frigjøring av rolle gener og deres proteiner i tumorigenesis og når rettet mot kreft biomarkører, kan aktivere tumor deteksjon og karakterisering for pasienten lagdeling. For kreft terapi, bispecific mAbs, antistoff-narkotika konjugater, og mindre antistoff fragmenter utvikles som legemiddel, og for målrettet legemiddellevering å forbedre terapeutisk effekt7. I tillegg antistoffer tjene for biomarkør målretting av kontrastmidler for molekylær Imaging modaliteter som fluorescens-guidet kirurgi, photoacoustic (PA) Imaging, ultralyd (US) molekylær Imaging, og klinisk brukt positron utslipp tomografi (PET) eller enkelt Foton-utslipp beregnet tomografi (SPECT)8. Til slutt, antistoffer kan også brukes som theranostic midler muliggjør lagdeling av pasienter og respons overvåking for målrettet behandling9. Derfor romanen mAbs begynner å spille en avgjørende rolle i kreft deteksjon, diagnose og behandling.
Til tross for kritiske fremskritt i utvikling og produksjon av romanen og svært spesifikke mAbs, diagnostiske og terapeutiske programmer kan gjengis ineffektiv på grunn av kompleksiteten i tumor miljøet. Antistoff interaksjoner er avhengig av typenepitope, det vil si,om det er lineær eller conformational10. I tillegg til anerkjennelse av antigener, antistoffer må overvinne naturlige barrierer som fartøy vegger, basale membraner, og svulsten stroma å nå målcellene uttrykker antigen. Antistoffer samhandle med vevet ikke bare gjennom den variable fragment antigen bindende (fab) domene, men også gjennom konstant krystallinsk fragment (FC) som viderefører til off-site interaksjoner11. Målretting er også komplisert av den heterogene uttrykk for tumor markører i hele tumor bulk og heterogenitet i tumor endometrial blodkar og lymphatics system12,13. I tillegg er tumor mikromiljøet består av kreft-assosiert fibroblaster som støtter tumorceller, tumor immunceller som undertrykker anti-tumor immunreaksjoner, og tumor endotelet som støtter transport av oksygen og næringsstoffer, alle som forstyrrer inntrengning, distribusjon og tilgjengelighet av antistoff-baserte legemidler eller diagnostikk. Samlet sett kan disse hensyn begrense terapeutisk eller diagnostisk effekt, redusere behandlingen respons, og kan føre til tumor motstand.
For utviklingen av effektive antistoff-baserte terapier og diagnostikk er det derfor avgjørende å vurdere biodistribusjon og samspillet mellom antistoff-baserte bøy i tumor mikromiljøet. For tiden, i prekliniske studier, markør uttrykk i tumor forsknings modeller er analysert ex vivo av immunofluorescence (IF) farging av tumor seksjoner14. Standard IF farging utføres med primære markør spesifikke antistoffer som deretter fremhevet av sekundære fluorescensmerkete merket antistoffer på ex vivo tumor vev skiver som har blitt isolert fra dyret. Denne teknikken fremhever den statiske plasseringen av markøren på tidspunktet for vev fiksering og gir ikke innsikt i hvordan antistoff-baserte legemidler eller diagnostikk kan distribuere eller samhandle i fysiologiske forhold. Molekylær Imaging av pet, SPECT, oss, og pa kan gi informasjon om antistoff-bøyd kontrast agent distribusjon i levende prekliniske modeller8,15. Som disse Imaging modaliteter er ikke-invasiv, langsgående studier kan utføres og tidssensitive data kan samles med et minimalt antall dyr per gruppe. Men disse ikke-invasiv molekylær Imaging tilnærminger er ikke følsom nok og ikke har nok oppløsning for lokalisering av antistoff distribusjon på cellenivå. I tillegg kan de fysiske og biologiske egenskapene til det primære antistoff bli drastisk endret av Bøyning av et kontrastmiddel16.
For å ta in vivo fysiologiske og patologiske tilstander i betraktning av hvordan antistoff-baserte legemidler og diagnostikk samhandle innenfor tumor miljøet og for å oppnå høyoppløselig mobil og selv sub-cellulære distribusjon profiler av ikke-bøyd antistoffer, foreslår vi en IF-tilnærming, som anses in vivo Immunofluorescence lokalisering (IVIL), der antigen-spesifikke antistoff er intravenøst injisert i vivo. Den antistoff-baserte terapeutiske eller diagnostiske, fungerer som en primær antistoff, sirkulerer i funksjonelle blodårer og binder seg til sin mål protein i svært nøyaktige, levende tumor miljøet. Etter isolering av in vivo-merkede svulster med det primære antistoff, brukes et sekundært antistoff til å lokalisere akkumulert og beholdt antistoff-konjugater. Denne tilnærmingen er lik en tidligere beskrevet IF histologi tilnærming sprøytebruk fluorescensmerkete merket antistoffer17. Selv her unngår bruken av ikke-bøyd antistoffer en potensiell endring i biodistribusjon egenskaper indusert av antistoff modifisering. Videre, ex vivo anvendelse av fluorescerende sekundære antistoff unngår et mulig tap av fluorescens signal under vevs Oppsamling og prosessering og gir forsterkning av fluorescens signal intensitet. Vår merking tilnærming reflekterer in vivo biodistribusjon av antistoff-baserte legemidler og målrettede agenter og kan gi viktig innsikt i utviklingen av romanen diagnostiske og terapeutiske midler.
Her beskriver vi to anvendelser av IVIL metoden som anvendes i tidligere studier som undersøker biodistribusjon og tilgjengelighet av antistoff-baserte kontrastmidler for molekylær Imaging tilnærminger for brystkreft deteksjon. Først biodistribusjon av et antistoff-nær infrarød Dye bøye (anti-B7-H3 antistoff bundet til nær infrarød fluorescens fargestoff, indocyanine grønn, B7-H3-ICG) og isotype kontroll agent (ISO-ICG) for fluorescens og photoacoustic molekylær Imaging er utforsket18. Dette programmets metode er beskrevet i protokollen. Deretter blir de biodistribusjon resultatene av en conformationally følsom antistoff til netrin-1, vanligvis ikke synlig med tradisjonell IF Imaging, brukes med ultralyd molekylær Imaging, er kvantifisert og presentert i representative resultater19. Ved avslutningen av denne protokollen papiret, bør leserne føler seg komfortable vedta IVIL metoden for sine egne antistoff-baserte forskningsprogrammer.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:990px;" width="990">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Animal Model</td>
			<td style="width:196px;"></td>
			<td style="width:166px;"></td>
			<td style="width:334px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:22px;">FVB/N-Tg(MMTV-PyMT)634Mul/J</td>
			<td style="width:196px;">The Jackson Laboratory</td>
			<td style="width:166px;">002374</td>
			<td>Females, 4-6 weeks of age</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Animal Handling Supplies</td>
			<td style="width:196px;"></td>
			<td style="width:166px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">27G Catheter</td>
			<td style="width:196px;">VisualSonics</td>
			<td style="width:166px;">Please call to order</td>
			<td>Vevo MicroMarker Tail Vein Access Cannulation Kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Alcohol Wipes</td>
			<td style="width:196px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">22-246073</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Gauze Sponges (4&#34; x 4&#34; 16 Ply)</td>
			<td style="width:196px;">Cardinal Health</td>
			<td style="width:166px;">2913</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Heat Lamp</td>
			<td style="width:196px;">Morganville Scientific</td>
			<td style="width:166px;">&#160;HL0100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:196px;">Henry Schein Animal Health</td>
			<td style="width:166px;">29404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Ophthalmic Ointment</td>
			<td style="width:196px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">NC0490117</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Surgical Tape</td>
			<td style="width:196px;">3M</td>
			<td style="width:166px;">1530-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Tissue Collection</td>
			<td style="width:196px;"></td>
			<td style="width:166px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Disposable Base Molds</td>
			<td style="width:196px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">22-363-556</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:295px;">Optimal Cutting Temperature (OCT) Medium</td>
			<td style="width:196px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">23-730-571</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:295px;">Surgical London Forceps</td>
			<td style="width:196px;">Fine Science Tools</td>
			<td>11080-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:295px;">Surgical Scissors</td>
			<td style="width:196px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:166px;">14084-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Antibodies</td>
			<td style="width:196px;"></td>
			<td style="width:166px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">AlexaFluor-488 goat anti-rat IgG</td>
			<td style="width:196px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:166px;">A-11006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">AlexaFluor-546 goat anti-rabbit IgG</td>
			<td style="width:196px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:166px;">A-11010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">AlexaFluor-594 goat anti-human IgG</td>
			<td style="width:196px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:166px;">A11014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Human IgG Isotype Control</td>
			<td style="width:196px;">Novus Biologicals</td>
			<td style="width:166px;">NBP1-97043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Humanized anti-netrin-1 antibody&#160;</td>
			<td style="width:196px;">Netris Pharma</td>
			<td style="width:166px;"></td>
			<td>contact@netrispharma.com</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Rabbit anti-Mouse CD276 (B7-H3)</td>
			<td style="width:196px;">Abcam</td>
			<td style="width:166px;">ab134161</td>
			<td>EPNCIR122 Clone</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Rat anti-Mouse CD31</td>
			<td style="width:196px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:166px;">550274</td>
			<td>MEC 13.3 Clone</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Reagents</td>
			<td style="width:196px;"></td>
			<td style="width:166px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
			<td style="width:196px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:166px;">A2153-50G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Clear Nail Polish</td>
			<td style="width:196px;"></td>
			<td style="width:166px;"></td>
			<td>Any local drug store</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Indocyanine Green - NHS</td>
			<td style="width:196px;">Intrace Medical</td>
			<td style="width:166px;">ICG-NHS ester</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Mounting Medium</td>
			<td style="width:196px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">TA-006-FM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Normal Goat Serum</td>
			<td style="width:196px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">ICN19135680</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Paraformaldehyde (PFA)</td>
			<td style="width:196px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">AAJ19943K2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Sterile Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
			<td style="width:196px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">14190250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Triton-X 100</td>
			<td style="width:196px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:166px;">T8787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Supplies</td>
			<td style="width:196px;"></td>
			<td style="width:166px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Adhesion Glass Slides</td>
			<td style="width:196px;">VWR</td>
			<td style="width:166px;">48311-703</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Desalting Columns</td>
			<td style="width:196px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">45-000-148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Glass Cover Slips</td>
			<td style="width:196px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">12-544G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Hydrophobic Barrier Pen</td>
			<td style="width:196px;">Ted Pella</td>
			<td style="width:166px;">22311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Microcentrifuge Tubes</td>
			<td style="width:196px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">05-402-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Slide Staining Tray</td>
			<td style="width:196px;">VWR</td>
			<td style="width:166px;">87000-136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Software</td>
			<td style="width:196px;"></td>
			<td style="width:166px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">FIJI</td>
			<td style="width:196px;">LOCI, UW-Madison.</td>
			<td style="width:166px;">Version 4.0</td>
			<td>https://fiji.sc/</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo immunofluorescence localization for assessment of therapeutic and diagnostic antibody biodistribution in cancer research

Monoklonale antistoffer (mAbs) er viktige verktøy i kreft deteksjon, diagnose og behandling. De brukes til å avdekke rollen til proteiner i tumorigenesis, kan rettes til kreft biomarkører slik at tumor deteksjon og karakterisering, og kan brukes for kreft terapi som mAbs eller antistoff-narkotika konjugater å aktivere immun Effektor celler, for å hemme signalering trasé, eller direkte drepe celler som bærer det spesifikke antigen. Til tross for kliniske fremskritt i utvikling og produksjon av romanen og svært spesifikke mAbs, diagnostiske og terapeutiske anvendelser kan svekkes av kompleksiteten og heterogenitet av tumor mikromiljøet. Således, for utvikling av effektive antistoff-baserte terapier og diagnostikk, er det avgjørende å vurdere biodistribusjon og samspillet mellom antistoff-baserte bøy med den levende tumor mikromiljøet. Her beskriver vi in vivo Immunofluorescence lokalisering (IVIL) som en ny tilnærming for å studere interaksjoner av antistoff-baserte legemidler og diagnostikk i in vivo fysiologiske og patologiske tilstander. I denne teknikken, en terapeutisk eller diagnostisk antigen-spesifikt antistoff er intravenøst injisert in vivo og lokaliserte ex vivo med en sekundær antistoff i isolerte svulster. IVIL reflekterer derfor in vivo-biodistribusjon av antistoff-baserte legemidler og målrettings agenter. To IVIL-applikasjoner er beskrevet for å vurdere biodistribusjon og tilgjengeligheten til antistoff-baserte kontrastmidler for molekylær bildebehandling av brystkreft. Denne protokollen vil tillate fremtidige brukere å tilpasse IVIL-metoden for sine egne antistoff-baserte forskningsprogrammer.

Den IVIL metoden ble brukt her for å undersøke in vivo biodistribusjon og vev interaksjon av B7-H3-ICG og ISO-ICG, ved å la agentene, etter intravenøs injeksjon i et levende dyr, å samhandle med målet vev for 96 h, og så når vevet er for å fungere som primær antistoffer under ex vivo immunostaining. Den IVIL metoden ble også sammenlignet med standard ex vivo IF farging av vev for B7-H3 markør. Normal murine brystkjertler ikke uttrykke B7-H3 markør, bekreftet i ex Vivo, standa...

Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Immunofluorescence Localization for Assessment of Therapeutic and Diagnostic Antibody Biodistribution in Cancer Research at JoVE.com

In Vivo Immunofluorescence Localization for Assessment of Therapeutic and Diagnostic Antibody Biodistribution in Cancer Research

IVIL-metoden (in vivo immunofluorescence lokalisering) kan brukes til å undersøke in vivo-biodistribusjon av antistoffer og antistoff konjugater for onkologiske formål i levende organismer ved hjelp av en kombinasjon av in vivo tumor målretting og ex vivo immunostaining Metoder.

In vivo Immunofluorescence lokalisering for vurdering av terapeutiske og diagnostiske antistoff Biodistribusjon i Cancer Research

Monoclonal antibodies (mAbs) are important tools in cancer detection, diagnosis, and treatment. They are used to unravel the role of proteins in ...

Denne protokollen for in vivo immunofluorescence lokalisering, eller IVIL, vurderer in vivo biodistribusjon av diagnostiske og terapeutiske antistoffer eller antistoffbaserte midler for kreftforskning, deteksjon og behandling. I motsetning til konvensjonell immunofluorescerende farging der cellulære uttrykk for antigener avsløres ex vivo, belyser IVIL-metoden hvordan antistoffer og antistoffbaserte midler distribuerer i det levende dyret. Denne videoen vil hjelpe forståelsen av den generelle arbeidsflyten til IVIL-metoden.Det viser viktige detaljer for vellykket reproduksjon av protokollen for andre applikasjoner og antistoffer. Vær oppmerksom på mus fra ønsket kreftmodell for riktig tumorvekst via palpasjon eller kalipermåling før du fortsetter. Rens kanin anti-mus B7-H3 og kanin IgG isotype kontroll antistoffer på en desalting kolonne for å fjerne konserveringsmidler og lagringsbuffere etter produsentens instruksjoner.Aliquot doser av 33 mikrogram av hvert antistoff konjugat i individuelle mikrocentrifuge rør. Etter bedøvelse som beskrevet i tekstprotokollen, forberede halen vene inokulasjon av antistoffløsninger. Desinfiser dyrets hale ved å tørke tre ganger med en alkoholserviett.Dilater haleårene ved å varme opp med en varmepute i ca. 30 sekunder. Unngå oppvarming av hele dyret. Bruk et 27-gauge halevenekateter til å sette sommerfuglnålen inn i en av de to laterale haleårene.Visualiser blodtilsigningen inn i kateteret for å sikre at nålen er riktig plassert slik at løsningene vil komme helt inn i dyret kontra å bli fanget i halen. Bruk et stykke kirurgisk tape for å forsiktig fikse halen med den innsatte nålen til scenen. Skyll kateteret med 25 mikroliter sterilt fosfatbufret saltvann.Deretter injiserer du antistoffoppløsningen i kateteret ved hjelp av insulinsprøyter. Skyll kateteret igjen med 25 mikroliter sterile PBS. Fjern nålen fra halen, og trykk for å stoppe blødning.Utfør human eutanasi av musen som beskrevet i tekstprotokollen, og legg musen i liggende stilling. Bruk kirurgisk saks og tang for å avgiftsdirektoratet tumorvev. Bruk tang til å forstå bare det ytre laget av huden mellom settet av brystkjertler nærmest halen, og lag et lite snitt med et par kirurgisk saks.Introdder den lukkede saksen i kuttet, og åpne sakte spissen for å forsiktig skille huden fra den underliggende bukveggmembranen, og hold den intakt. Lag et vertikalt snitt opp i magen, fortsetter å skille huden fra den indre membranen. Mellom tredje og fjerde brystkjertler, gjør et horisontalt kutt over magen for å tillate tilbaketrekking av huden og visualisering av brystkjertlene.Gripe hver svulst eller normal kjertel med tang, forsiktig trimme bort den vedlagte huden ved hjelp av kirurgisk saks. Plasser utskåret vev i vev disponibel base former som er forhåndsmerket og fylt med optimal skjæretemperatur innebygging medium. Frys raskt formene ved plassering på tørris.For å studere off-target levering, avgiftsdirektoratet andre vev eller organer av interesse. Bruk en kryostat, seksjon frosne vevsblokker på 10-mikron tykkelse, og plasser tilstøtende seksjoner på forhåndsmerkede vedheftglass lysbilder. Skyll frosne vevslysbildene med romtemperatur PBS i fem minutter for å fjerne innebyggingsmediet.Avgrense vevsseksjoner med en hydrofob barrierepenn for å redusere volumet av løsninger som trengs under farging. Fest vevsseksjonene med 4% paraformaldehydløsning i fem minutter. Etter å ha skyllet lysbildene i PBS i fem minutter, gjennomsyrer vevsseksjoner med 0,5% Triton X-100 i PBS i 15 minutter.Skyll lysbildene igjen i PBS i fem minutter. Blokker vevet med PBS som inneholder 3 % vekt per volum storfe serumalbumin og 5 % volum per volum geiteserum i én time ved romtemperatur. Etter å ha skyllet lysbildene i PBS i fem minutter, inkubere seksjonene med journalføring primære antistoffer som en vanlig kjernefysisk, vaskulær eller cytoplasmatisk markør.Her brukes rotte anti-mus CD31 ved en en-til-100 fortynning i blokkeringsløsningen. Lysbildene med primært antistoff er igjen over natten ved fire grader Celsius, beskyttet mot dehydrering på en lysbildeskuff. Etter inkubasjon, skyll lysbildene i PBS i fem minutter tre ganger.Endre PBS hver gang. Inkuber lysbildene med sekundære antistoffer for å merke de primære antistoffene. For dette programmet, visualisere anti-B7-H3 antistoff ved hjelp av Alexa Fluor 546 konjugert geit anti-kanin antistoff, og visualisere CD31 med Alexa Fluor 488 geit anti-rotte sekundært antistoff i blokkerende løsning.Beskytt lysbildene mot lys og dehydrering på en skyvebrett i en time ved romtemperatur. Etter skylling av lysbildene i PBS som før, påfør en dråpe av monteringsmediet inn i midten av vevsskiven. Plasser forsiktig en dekkslips, unngå entrapment av luftbobler.Forsegle kantene på dekkslippen med klar neglelakk, og la det tørke. Fortsett med konfokal mikroskopiavbildning og kvantitativ bildeanalyse som beskrevet i tekstprotokollen. Representative konfokale mikrografer viser sammenligningen av spesifikke B7-H3 antistoff-ICG konjugat og uspesifikke isotype kontroll antistoff-ICG konjugere lokalisering i murine brystkjertler som inneholder normale eller karsinomvev.Normale murine brystkjertler fra et dyr intravenøst injisert med Iso-ICG eller B7-H3-ICG og motvirket med CD31 viser ingen flekker av antistoffkonjugater. Normalt vev ble vist å ikke ha noe uttrykk for B7-H3 ved standard ex vivo immunofluorescence farging. I invasive brystsvulster binder B7-H3-ICG seg sterkt til vaskulaturen, det første kontaktpunktet in vivo, og er deretter i stand til å ekstravasate fra vaskulaturen til heterogent flekkete tumorepitelet.Iso-ICG viser uspesifikk akkumulering i tumorvevet. Standard ex vivo immunofluorescerende farging viser ensartet uttrykk for B7-H3 markør på epitel- og endotelceller. Representative konfokale mikrografer viser in vivo immunofluorescence lokaliseringsmetoden for å oppdage netrin-1 uttrykk eller isotype kontroll uttrykk i murine karsinom og normale brystkjertler.In vivo immunofluorescence lokalisering bekrefter epitelsignal for netrin-1 i MMTV-PyMT svulster, men ikke i normale brystkjertler. Videre er det et sterkt netrin-1 signal på endotelceller i brystsvulster, som indikert av det kolokaliserte gule signalet. Signalet er betydelig svakere i normale brystkjertler.IVIL-metoden må optimaliseres når det gjelder antistoffdosering, vevsinnsamlingstid og sekundær antistofffortynning for vellykket implementering. IVIL tillater målretting av konformasjonelle epitoper som ikke kan oppdages ved hjelp av standard immunofluorescence farging, noe som krever vevsbehandling. Også friske organer av tumorbærende mus kan samles for å vurdere off-target levering av terapeutiske antistoffer.Med økt bruk av antistoffbaserte terapeutiske midler og kontrastmidler i kreftforskning og -behandling, er IVIL-metoden svært anvendelig for farmasøytisk forskning og utvikling. Forskere innen kreftbehandling, molekylær avbildning, betennelse og andre områder kan finne at IVIL-metoden gir nyttig informasjon.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

De<em&gt; Drosophila</em&gt; Imaginal Disc Tumor Model: Visualisering og Kvantifisering av genekspresjon og Tumor Invasivitet Bruke Genetic Mosaikk

Drosophila melanogaster has emerged as a powerful experimental system for functional and mechanistic studies of tumor development and progression in the ...

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

I Vivo EPR vurdering av pH, pO2, Redox Status, og konsentrasjoner av fosfat og glutation i svulst Microenvironment

This protocol demonstrates the capability of low-field electron paramagnetic resonance (EPR)-based techniques in combination with functional paramagnetic ...

Assessment of Resistance to Tyrosine Kinase Inhibitors by an Interrogation of Signal Transduction Pathways by Antibody Arrays

Vurdering av motstand mot Tyrosine Kinase hemmere av en avhør av signaltransduksjon trasé av antistoff matriser

Cancer patients with an aberrant regulation of the protein phosphorylation networks are often treated with the tyrosine kinase inhibitors. Response rates ...

Using 22C3 Anti-PD-L1 Antibody Concentrate on Biopsy and Cytology Samples from Non-small Cell Lung Cancer Patients

Med 22C 3 Anti-PD-L1 antistoff konsentrere seg om biopsi og cytologi eksempler fra ikke-småcellet lungekreft pasienter

Pembrolizumab monotherapy has been approved for the first- and second-line treatment of patients with PD-L1-expressing advanced non-small cell lung cancer ...

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

Etablering av magekreft pasient-avledet Xenograft modeller og primær celle Lines

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Semi-automatic PD-L1 Characterization and Enumeration of Circulating Tumor Cells from Non-small Cell Lung Cancer Patients by Immunofluorescence

Semi-automatisk PD-L1 karakterisering og opplisting av sirkulerende tumor celler fra ikke-liten celle Lungekreftpasienter ved Immunofluorescence

Circulating tumor cells (CTCs) derived from the primary tumor are shed into the bloodstream or lymphatic system. These rare cells (1&#8722;10 cells per mL ...

Analyzing Tumor and Tissue Distribution of Target Antigen Specific Therapeutic Antibody

Analysere tumor- og vevsfordeling av målantigenspesifikt terapeutisk antistoff

Monoclonal antibodies are high affinity multifunctional drugs that work by variable independent mechanisms to eliminate cancer cells. Over the last few ...

Enhanced Viability for Ex vivo 3D Hydrogel Cultures of Patient-Derived Xenografts in a Perfused Microfluidic Platform

Forbedret levedyktighet for Ex vivo 3D hydrogelkulturer av pasientavledede Xenografts i en perfused mikrofluidisk plattform

Patient-derived xenografts (PDX), generated when resected patient tumor tissue is engrafted directly into immunocompromised mice, remain biologically ...

Immunofluorescence Imaging of DNA Damage and Repair Foci in Human Colon Cancer Cells

Immunofluorescens Avbildning av DNA-skade og reparasjon av foci i humane tykktarmskreftceller

The purpose of the manuscript is to provide a step-by-step protocol for performing immunofluorescence microscopy to study the radiation-induced DNA damage ...