Name: in vivo immunofluorescence localization for assessment of therapeutic and diagnostic antibody biodistribution in cancer research
Uploaded: 2019-09-16T12:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Immunofluorescence Localization for Assessment of Therapeutic and Diagnostic Antibody Biodistribution in Cancer Research at JoVE.com

Agradecemos ao Dr. Andrew Olson (serviço de microscopia de neurociência de Stanford) para discussões e uso de equipamentos. Agradecemos ao Dr. Juergen K. willmann pela sua orientação. Este estudo foi apoiado pela concessão de NIH R21EB022214 (KEW), pela concessão do treinamento de NIH R25CA118681 (KEW), e pelo NIH K99EB023279 (KEW). O serviço de microscopia de neurociência de Stanford foi apoiado pela NIH NS069375.

Todos os métodos aqui descritos foram aprovados pelo painel administrativo institucional de cuidados com animais de laboratório (APLAC) da Universidade de Stanford.
1. modelo transgênico do rato do desenvolvimento do cancro da mama
<ol><li>Observe os camundongos do modelo de câncer desejado para o crescimento tumoral apropriado por meio de palpação ou medição de paquímetro antes de prosseguir. Nota: o modelo murino transgênico de desenvolvimento do câncer de mama (FVB/N-TG (MMT...

<ol>
	<li>Forthal, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functions+of+Antibodies.">Functions of Antibodies.</a> Microbiology Spectrum. 2 (4), 1-17 (2014).</li><li>Boder, E. T., Midelfort, K. S., Wittrup, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directed+evolution+of+antibody+fragments+with+monovalent+femtomolar+antigen-binding+affinity.">Directed evolution of antibody fragments with monovalent femtomolar antigen-binding affinity.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (20), 10701-10705 (2000).</li><li>K&#246;hler, G., Milstein, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous+cultures+of+fused+cells+secreting+antibody+of+predefined+specificity.">Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity.</a> Nature. 256 (5517), 495-497 (1975).</li><li>Lonberg, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen-specific+human+antibodies+from+mice+comprising+four+distinct+genetic+modifications.">Antigen-specific human antibodies from mice comprising four distinct genetic modifications.</a> Nature. 368 (6474), 856-859 (1994).</li><li>McCafferty, J., Griffiths, A. D., Winter, G., Chiswell, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phage+antibodies:+filamentous+phage+displaying+antibody+variable+domains.">Phage antibodies: filamentous phage displaying antibody variable domains.</a> Nature. 348 (6301), 552-554 (1990).</li><li>Ferlay, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+incidence+and+mortality+worldwide:+sources,+methods+and+major+patterns+in+GLOBOCAN+2012.">Cancer incidence and mortality worldwide: sources, methods and major patterns in GLOBOCAN 2012.</a> International Journal of Cancer. 136 (5), E359-E386 (2015).</li><li>Reichert, J. M., Valge-Archer, V. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+trends+for+monoclonal+antibody+cancer+therapeutics.">Development trends for monoclonal antibody cancer therapeutics.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 6 (5), 349-356 (2007).</li><li>Kircher, M. F., Willmann, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+Body+Imaging:+MR+Imaging,+CT,+and+US.+Part+I.+Principles.">Molecular Body Imaging: MR Imaging, CT, and US. Part I. Principles.</a> Radiology. 263 (3), 633-643 (2012).</li><li>Fleuren, E. D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Theranostic+applications+of+antibodies+in+oncology.">Theranostic applications of antibodies in oncology.</a> Molecular Oncology. 8 (4), 799-812 (2014).</li><li>Forsstr&#246;m, B., Bis&#322;awska Axn&#228;s, B., Rockberg, J., Danielsson, H., Bohlin, A., Uhlen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissecting+Antibodies+with+Regards+to+Linear+and+Conformational+Epitopes.">Dissecting Antibodies with Regards to Linear and Conformational Epitopes.</a> PLoS ONE. 10 (3), (2015).</li><li>Woof, J. M., Burton, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+antibody-Fc+receptor+interactions+illuminated+by+crystal+structures.">Human antibody-Fc receptor interactions illuminated by crystal structures.</a> Nature Reviews Immunology. 4 (2), 89-99 (2004).</li><li>Brooks, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translational+genomics:+The+challenge+of+developing+cancer+biomarkers.">Translational genomics: The challenge of developing cancer biomarkers.</a> Genome Research. 22 (2), 183-187 (2012).</li><li>Tabrizi, M., Bornstein, G. G., Suria, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodistribution+Mechanisms+of+Therapeutic+Monoclonal+Antibodies+in+Health+and+Disease.">Biodistribution Mechanisms of Therapeutic Monoclonal Antibodies in Health and Disease.</a> The AAPS Journal. 12 (1), 33-43 (2009).</li><li>Duraiyan, J., Govindarajan, R., Kaliyappan, K., Palanisamy, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+immunohistochemistry.">Applications of immunohistochemistry.</a> Journal of Pharmacy &amp; Bioallied Sciences. 4 (Suppl 2), S307-S309 (2012).</li><li>Gambhir, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+imaging+of+cancer+with+positron+emission+tomography.">Molecular imaging of cancer with positron emission tomography.</a> Nature Reviews. Cancer. 2 (9), 683-693 (2002).</li><li>Freise, A. C., Wu, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+Imaging+with+Antibodies+and+Engineered+Fragments.">In vivo Imaging with Antibodies and Engineered Fragments.</a> Molecular Immunology. 67 (200), 142-152 (2015).</li><li>Cilliers, C., Menezes, B., Nessler, I., Linderman, J., Thurber, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+Tumor+Penetration+and+Single-Cell+Targeting+of+Antibody-Drug+Conjugates+Increases+Anticancer+Efficacy+and+Host+Survival.">Improved Tumor Penetration and Single-Cell Targeting of Antibody-Drug Conjugates Increases Anticancer Efficacy and Host Survival.</a> Cancer Research. 78 (3), 758-768 (2018).</li><li>Wilson, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectroscopic+Photoacoustic+Molecular+Imaging+of+Breast+Cancer+using+a+B7-H3-targeted+ICG+Contrast+Agent.">Spectroscopic Photoacoustic Molecular Imaging of Breast Cancer using a B7-H3-targeted ICG Contrast Agent.</a> Theranostics. 7 (6), 1463-1476 (2017).</li><li>Wischhusen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+molecular+imaging+as+a+non-invasive+companion+diagnostic+for+netrin-1+interference+therapy+in+breast+cancer.">Ultrasound molecular imaging as a non-invasive companion diagnostic for netrin-1 interference therapy in breast cancer.</a> Theranostics. 8 (18), 5126-5142 (2018).</li><li>Guy, C. T., Cardiff, R. D., Muller, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+mammary+tumors+by+expression+of+polyomavirus+middle+T+oncogene:+a+transgenic+mouse+model+for+metastatic+disease.">Induction of mammary tumors by expression of polyomavirus middle T oncogene: a transgenic mouse model for metastatic disease.</a> Molecular and Cellular Biology. 12 (3), 954-961 (1992).</li><li>Hober, S., Nord, K., Linhult, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+A+chromatography+for+antibody+purification.">Protein A chromatography for antibody purification.</a> Journal of Chromatography B. 848 (1), 40-47 (2007).</li><li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+Animal+Perfusion+Fixation+for+Rodents.">Whole Animal Perfusion Fixation for Rodents.</a> Journal of Visualized Experiments JoVE. (65), (2012).</li><li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li><li>Bachawal, S. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Earlier+detection+of+breast+cancer+with+ultrasound+molecular+imaging+in+a+transgenic+mouse+model.">Earlier detection of breast cancer with ultrasound molecular imaging in a transgenic mouse model.</a> Cancer Research. 73, 1689-1698 (2013).</li><li>Fitamant, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Netrin-1+expression+confers+a+selective+advantage+for+tumor+cell+survival+in+metastatic+breast+cancer.">Netrin-1 expression confers a selective advantage for tumor cell survival in metastatic breast cancer.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 105 (12), 4850-4855 (2008).</li><li>Kennedy, T. E., Serafini, T., de la Torre, J. R., Tessier-Lavigne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Netrins+are+diffusible+chemotropic+factors+for+commissural+axons+in+the+embryonic+spinal+cord.">Netrins are diffusible chemotropic factors for commissural axons in the embryonic spinal cord.</a> Cell. 78 (3), 425-435 (1994).</li><li>Ryman, J. T., Meibohm, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacokinetics+of+Monoclonal+Antibodies.">Pharmacokinetics of Monoclonal Antibodies.</a> CPT: Pharmacometrics &amp; Systems Pharmacology. 6 (9), 576-588 (2017).</li><li>Scalia, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen+Masking+During+Fixation+and+Embedding,+Dissected.">Antigen Masking During Fixation and Embedding, Dissected.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 65 (1), 5-20 (2017).</li><li>Robertson, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+labeled+tomato+lectin+for+imaging+vasculature+structures.">Use of labeled tomato lectin for imaging vasculature structures.</a> Histochemistry and Cell Biology. 143 (2), 225-234 (2015).</li><li>Chen, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+flow+reprograms+lymphatic+vessels+to+blood+vessels.">Blood flow reprograms lymphatic vessels to blood vessels.</a> The Journal of Clinical Investigation. 122 (6), 2006-2017 (2012).</li><li>Anderson, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravascular+staining+for+discrimination+of+vascular+and+tissue+leukocytes.">Intravascular staining for discrimination of vascular and tissue leukocytes.</a> Nature Protocols. 9 (1), 209-222 (2014).</li><li>de Boer, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Vivo+Fluorescence+Immunohistochemistry:+Localization+of+Fluorescently+Labeled+Cetuximab+in+Squamous+Cell+Carcinomas.">In Vivo Fluorescence Immunohistochemistry: Localization of Fluorescently Labeled Cetuximab in Squamous Cell Carcinomas.</a> Scientific Reports. 5, (2015).</li><li>Jenkins, R. W., Barbie, D. A., Flaherty, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+resistance+to+immune+checkpoint+inhibitors.">Mechanisms of resistance to immune checkpoint inhibitors.</a> British Journal of Cancer. 118 (1), 9-16 (2018).</li><li>Rexer, B. N., Arteaga, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrinsic+and+acquired+resistance+to+HER2-targeted+therapies+in+HER2+gene-amplified+breast+cancer:+mechanisms+and+clinical+implications.">Intrinsic and acquired resistance to HER2-targeted therapies in HER2 gene-amplified breast cancer: mechanisms and clinical implications.</a> Critical Reviews in Oncogenesis. 17 (1), 1-16 (2012).</li></ol>

Este método tem várias etapas críticas e requer possíveis modificações para garantir a implementação bem-sucedida. Primeiramente, a dosagem e o sincronismo da injeção intravenosa conjugada do anticorpo/anticorpo devem ser costurados à aplicação específica. Geralmente, as dosagens devem ser usadas que são consistentes com a forma como o conjugado de anticorpos normalmente será usado, ou seja, dosagens de correspondência do anticorpo terapêutico ou agente de contraste baseado em anticorpos. Também, o sin...

Os anticorpos monoclonais (mAb) são grandes glicoproteínas (aproximadamente 150 kDa) da superfamília da imunoglobulina que são secretadas por pilhas de B e têm uma função preliminar no sistema imune para identificar e para inibir a função biológica de, ou a marca para destruição, bactérias ou agentes patogénicos virais, e pode reconhecer a expressão anormal da proteína em células cancerosas1. Os anticorpos podem ter uma afinidade extremamente elevada a seus resumos específicos para baixo às concentrações do femtomolar que fazem lhes ferramentas altamente prometedores na biomedicina2. Com o desenvolvimento da tecnologia de hibridoma por Milstein e Köhler (premiado com o prêmio Nobel em 1984), a produção de mAbs tornou-se possível3. Mais tarde, os mAbs humanos foram gerados usando a tecnologia de exibição de fago ou cepas de camundongo transgênico e revolucionaram seu uso como novas ferramentas de pesquisa e terapêutica4,5.
O câncer é uma questão de saúde mundial e uma das principais causas de morte, criando a necessidade de novas abordagens para prevenção, detecção e terapia6. Até o momento, os mAbs permitiram o desencarceramento do papel dos genes e de suas proteínas no tumorigênese e quando dirigidos de encontro aos Biomarkers do cancer, podem permitir a deteção e a caracterização do tumor para a estratificação paciente. Para a terapia do cancro, os mAbs anticorpos, os conjugados do anticorpo-droga, e os fragmentos menores do anticorpo estão sendo desenvolvidos como o Therapeutics, e para a entrega alvejada da droga para realçar a eficácia terapêutica7. Adicionalmente, os anticorpos servem para a segmentação do biomarcador de agentes de contraste para as modalidades da imagem latente molecular tais como a cirurgia fluorescência-guiada, a imagem latente fotoacústica (PA), a imagem latente molecular do ultra-som (e.u.), e a emissão clìnica usada do positrão (PET) ou tomografia computadorizada de emissão de fóton único (SPECT)8. Por fim, os anticorpos também podem ser usados como agentes teranosóticos possibilitando a estratificação dos pacientes e o monitoramento da resposta para terapias direcionadas9. Conseqüentemente, os mAbs novos estão começando a jogar um papel crítico na deteção, no diagnóstico, e no tratamento do cancro.
Apesar dos avanços críticos no desenvolvimento e na produção de mAbs novos e altamente específicos, as aplicações diagnósticas e terapêuticas podem ser tornadas ineficazes devido à complexidade do ambiente do tumor. As interações de anticorpos dependem do tipo de epítopo, ou seja, seé linear ou conformacional10. Além do reconhecimento de antígenos, os anticorpos precisam superar barreiras naturais, como paredes de vasos, membranas basais e o estroma tumoral para alcançar células-alvo expressando o antígeno. Os anticorpos interagem com o tecido não somente através do domínio da ligação do antígeno do fragmento variável (FAB) mas também através do fragmento cristalino constante (FC) que conduz mais às interações do fora-local11. A segmentação também é complicada pela expressão heterogênea de marcadores tumorais em todo o volume tumoral e heterogeneidade na vascularização tumoral e no sistema linfático12,13. Além, o microambiente do tumor é compor dos fibroblastos Cancer-associados que apoiam pilhas do tumor, pilhas imunes do tumor que suprimem reações imunes antitumorais, e o endotélio do tumor que suporta o transporte do oxigênio e dos nutrientes, todo que interferem na penetração, distribuição e disponibilidade de terapêuticas ou diagnósticos baseados em anticorpos. Globalmente, essas considerações podem limitar a eficácia terapêutica ou diagnóstica, reduzir a resposta ao tratamento e podem resultar em resistência tumoral.
Conseqüentemente, para o desenvolvimento de terapias e de diagnósticos anticorpo-baseados eficientes, é crucial avaliar a biodistribuição e a interação do conjugado anticorpo-baseado dentro do microambiente do tumor. Atualmente, em estudos pré-clínicos, a expressão de marcadores em modelos de pesquisa tumoral é analisada ex vivo pela coloração da imunofluorescência (IF) das secções tumorais14. A coloração padrão IF é realizada com anticorpos primários específicos de marcadores, que são então destacados por anticorpos secundários com rótulo fluorescentamente em fatias de tecido tumoral ex vivo que foram isoladas do animal. Esta técnica destaca a posição estática do marcador na altura da fixação do tecido e não fornece a introspecção em como a terapêutica ou o diagnóstico anticorpo-baseado podem distribuir ou interagir em circunstâncias fisiológicas. A imagem latente molecular por animal de estimação, SPECT, nós, e PA pode fornecer a informação sobre a distribuição anticorpo-conjugated do agente do contraste em modelos pré-clínicos vivos8,15. Como essas modalidades de imagem são não invasivas, estudos longitudinais podem ser realizados e dados sensíveis ao tempo podem ser coletados com um número mínimo de animais por grupo. Entretanto, estas aproximações moleculars não invasoras da imagem latente não são sensíveis bastante e não têm bastante definição para a localização da distribuição do anticorpo a nível celular. Adicionalmente, as características físicas e biológicas do anticorpo primário podem ser drasticamente alteradas pela conjugação de um agente de contraste16.
A fim de tomar as condições in vivo fisiológicas e patológicas em consideração de como a terapêutica baseada em anticorpos e diagnósticos interagem dentro do ambiente tumoral e para obter alta resolução celular e até mesmo distribuição subcelular perfis de anticorpos não conjugados, propomos uma abordagem IF, considerada in vivo immunofluorescence Localization (IVIL), na qual o anticorpo antígeno-específico é injetado intravenosamente in vivo. O anticorpo-baseado terapêutico ou diagnóstico, agindo como um anticorpo preliminar, circula em vasos sanguíneos funcionais e liga-se a sua proteína do alvo no ambiente altamente exato, vivo do tumor. Após a isolação de tumores in vivo-etiquetados com o anticorpo preliminar, um anticorpo secundário é usado para localizar conjugados acumulados e retidos do anticorpo. Esta aproximação é similar a uma aproximação previamente descrita da histologia de injetar anticorpos cDNAs etiquetados17. Embora aqui, o uso de anticorpos não conjugados evita uma mudança potencial nas características da biodistribuição induzidas pela modificação do anticorpo. Além disso, a aplicação ex vivo do anticorpo secundário fluorescente evita uma perda possível de sinal da fluorescência durante a coleção e o processamento do tecido e fornece a amplificação da intensidade do sinal da fluorescência. Nossa aproximação da rotulagem reflete in vivo a biodistribuição de drogas anticorpo-baseadas e de agentes alvejados e pode fornecer introspecções importantes para o desenvolvimento de agentes diagnósticos e terapêuticos novos.
Aqui, nós descrevemos duas aplicações do método de IVIL como aplicado em estudos precedentes que investigam a biodistribuição e a acessibilidade de agentes de contraste anticorpo-baseados para aproximações moleculares da imagem latente para a deteção do cancro da mama. Em primeiro lugar, a biodistribuição de um conjugado de corante infravermelho próximo (anticorpo anti-B7-H3 vinculado à tintura de fluorescência infravermelha próxima, verde de indocyanina, B7-H3-ICG) e o agente de controle isotipo (ISO-ICG) para fluorescência e fotoacústica molecular a imagem latente é explorada18. O método deste aplicativo é descrito no protocolo. Em seguida, os resultados da biodistribuição de um anticorpo conformacionalmente sensível a netrin-1, tipicamente não detectável com a imagem latente tradicional do se, usado com imagem latente molecular do ultra-som, são quantificados e apresentados nos resultados representativos19. Na conclusão deste papel do protocolo, os leitores devem sentir confortável adotar o método de IVIL para suas próprias aplicações de pesquisa anticorpo-baseadas.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:990px;" width="990">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Animal Model</td>
			<td style="width:196px;"></td>
			<td style="width:166px;"></td>
			<td style="width:334px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:22px;">FVB/N-Tg(MMTV-PyMT)634Mul/J</td>
			<td style="width:196px;">The Jackson Laboratory</td>
			<td style="width:166px;">002374</td>
			<td>Females, 4-6 weeks of age</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Animal Handling Supplies</td>
			<td style="width:196px;"></td>
			<td style="width:166px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">27G Catheter</td>
			<td style="width:196px;">VisualSonics</td>
			<td style="width:166px;">Please call to order</td>
			<td>Vevo MicroMarker Tail Vein Access Cannulation Kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Alcohol Wipes</td>
			<td style="width:196px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">22-246073</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Gauze Sponges (4&#34; x 4&#34; 16 Ply)</td>
			<td style="width:196px;">Cardinal Health</td>
			<td style="width:166px;">2913</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Heat Lamp</td>
			<td style="width:196px;">Morganville Scientific</td>
			<td style="width:166px;">&#160;HL0100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:196px;">Henry Schein Animal Health</td>
			<td style="width:166px;">29404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Ophthalmic Ointment</td>
			<td style="width:196px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">NC0490117</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Surgical Tape</td>
			<td style="width:196px;">3M</td>
			<td style="width:166px;">1530-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Tissue Collection</td>
			<td style="width:196px;"></td>
			<td style="width:166px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Disposable Base Molds</td>
			<td style="width:196px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">22-363-556</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:295px;">Optimal Cutting Temperature (OCT) Medium</td>
			<td style="width:196px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">23-730-571</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:295px;">Surgical London Forceps</td>
			<td style="width:196px;">Fine Science Tools</td>
			<td>11080-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:295px;">Surgical Scissors</td>
			<td style="width:196px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:166px;">14084-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Antibodies</td>
			<td style="width:196px;"></td>
			<td style="width:166px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">AlexaFluor-488 goat anti-rat IgG</td>
			<td style="width:196px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:166px;">A-11006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">AlexaFluor-546 goat anti-rabbit IgG</td>
			<td style="width:196px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:166px;">A-11010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">AlexaFluor-594 goat anti-human IgG</td>
			<td style="width:196px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:166px;">A11014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Human IgG Isotype Control</td>
			<td style="width:196px;">Novus Biologicals</td>
			<td style="width:166px;">NBP1-97043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Humanized anti-netrin-1 antibody&#160;</td>
			<td style="width:196px;">Netris Pharma</td>
			<td style="width:166px;"></td>
			<td>contact@netrispharma.com</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Rabbit anti-Mouse CD276 (B7-H3)</td>
			<td style="width:196px;">Abcam</td>
			<td style="width:166px;">ab134161</td>
			<td>EPNCIR122 Clone</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Rat anti-Mouse CD31</td>
			<td style="width:196px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:166px;">550274</td>
			<td>MEC 13.3 Clone</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Reagents</td>
			<td style="width:196px;"></td>
			<td style="width:166px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
			<td style="width:196px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:166px;">A2153-50G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Clear Nail Polish</td>
			<td style="width:196px;"></td>
			<td style="width:166px;"></td>
			<td>Any local drug store</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Indocyanine Green - NHS</td>
			<td style="width:196px;">Intrace Medical</td>
			<td style="width:166px;">ICG-NHS ester</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Mounting Medium</td>
			<td style="width:196px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">TA-006-FM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Normal Goat Serum</td>
			<td style="width:196px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">ICN19135680</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Paraformaldehyde (PFA)</td>
			<td style="width:196px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">AAJ19943K2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Sterile Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
			<td style="width:196px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">14190250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Triton-X 100</td>
			<td style="width:196px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:166px;">T8787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Supplies</td>
			<td style="width:196px;"></td>
			<td style="width:166px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Adhesion Glass Slides</td>
			<td style="width:196px;">VWR</td>
			<td style="width:166px;">48311-703</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Desalting Columns</td>
			<td style="width:196px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">45-000-148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Glass Cover Slips</td>
			<td style="width:196px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">12-544G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Hydrophobic Barrier Pen</td>
			<td style="width:196px;">Ted Pella</td>
			<td style="width:166px;">22311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Microcentrifuge Tubes</td>
			<td style="width:196px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">05-402-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Slide Staining Tray</td>
			<td style="width:196px;">VWR</td>
			<td style="width:166px;">87000-136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Software</td>
			<td style="width:196px;"></td>
			<td style="width:166px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">FIJI</td>
			<td style="width:196px;">LOCI, UW-Madison.</td>
			<td style="width:166px;">Version 4.0</td>
			<td>https://fiji.sc/</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo immunofluorescence localization for assessment of therapeutic and diagnostic antibody biodistribution in cancer research

Os anticorpos monoclonais (mAbs) são ferramentas importantes na deteção, no diagnóstico, e no tratamento do cancro. São usados para desvendar o papel das proteínas no tumorigenesis, podem ser dirigidos aos biomarcadores do cancro permitindo a deteção e a caracterização do tumor, e podem ser usados para a terapia do cancro como mAbs ou os conjugados da anticorpo-droga para ativar pilhas do efetoras imune, para inibir vias de sinalização, ou matar diretamente as células que transportam o antígeno específico. Apesar dos avanços clínicos no desenvolvimento e na produção de mAbs novos e altamente específicos, as aplicações diagnósticas e terapêuticas podem ser prejudicadas pela complexidade e pela heterogeneidade do microambiente do tumor. Assim, para o desenvolvimento de terapias e diagnósticos eficientes baseados em anticorpos, é crucial avaliar a biodistribuição e a interação do conjugado anticorpo-baseado com o microambiente vivo do tumor. Aqui, nós descrevemos in vivo a localização da imunofluorescência (IVIL) como uma aproximação nova para estudar interações da terapêutica e do diagnóstico anticorpo-baseados nas circunstâncias fisiológicas e patológicas in vivo. Nesta técnica, um anticorpo antígeno-específico terapêutico ou diagnóstico é injetado intravenosamente in vivo e ex vivo localizado com um anticorpo secundário em tumores isolados. O IVIL, portanto, reflete a biodistribuição in vivo de medicamentos à base de anticorpos e agentes de segmentação. Duas aplicações do IVIL são descritas avaliando a biodistribuição e a acessibilidade de agentes de contraste anticorpo-baseados para a imagem latente molecular do cancro da mama. Este protocolo permitirá que os usuários futuros adaptem o método de IVIL para suas próprias aplicações de pesquisa anticorpo-baseadas.

O método de IVIL foi utilizado aqui para examinar a biodistribuição in vivo e a interação tecidual de B7-H3-ICG e ISO-ICG, permitindo que os agentes, após injeção intravenosa em um animal vivo, interajam com o tecido alvo por 96 h, e depois os tecidos são para atuar como os anticorpos primários durante a imunomarcação ex vivo. O método de IVIL também foi comparado com a coloração padrão ex vivo IF dos tecidos para o marcador B7-H3. As glândulas mamárias murinas normais ...

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In Vivo Immunofluorescence Localization for Assessment of Therapeutic and Diagnostic Antibody Biodistribution in Cancer Research

O método de localização de imunofluorescência in vivo (IVIL) pode ser usado para examinar a biodistribuição in vivo de anticorpos e conjugados de anticorpo para fins oncológicos em organismos vivos usando uma combinação de segmentação tumoral in vivo e imunocoloração ex vivo Métodos.

In vivo localização de imunofluorescência para avaliação de anticorpo terapêutico e diagnóstico biodistribuição em pesquisa de câncer

Monoclonal antibodies (mAbs) are important tools in cancer detection, diagnosis, and treatment. They are used to unravel the role of proteins in ...

Este protocolo de localização in vivo de imunofluorescência, ou IVIL, avalia a biodistribuição in vivo de anticorpos diagnósticos e terapêuticos ou agentes baseados em anticorpos para pesquisa, detecção e tratamento do câncer. Em contraste com a coloração imunofluorescente convencional onde a expressão celular de antígenos é revelada ex vivo, o método IVIL elucida como anticorpos e agentes à base de anticorpos se distribuem no animal vivo. Este vídeo ajudará a entender o fluxo de trabalho global do método IVIL.Ele mostra detalhes importantes para a reprodução bem sucedida do protocolo para outras aplicações e anticorpos. Observe os camundongos do modelo de câncer desejado para o crescimento adequado do tumor através da medição de palpação ou pinça antes de prosseguir. Purificar anticorpos de controle de isótipo de coelho anti-rato B7-H3 e coelho IgG em uma coluna de desalte para remover conservantes e buffers de armazenamento seguindo as instruções do fabricante.Dosagens de 33 microgramas de cada anticorpo conjugado em tubos de microcentrifuuagem individuais. Após a anestesia, conforme descrito no protocolo de texto, prepare-se para a inoculação da veia traseira das soluções de anticorpos. Desinfete a cauda do animal limpando três vezes com um lenço de álcool.Dilatar as veias da cauda aquecendo com uma almofada de calor por aproximadamente 30 segundos. Evite aquecer todo o animal. Usando um cateter de veias da cauda de calibre 27, insira a agulha borboleta em uma das duas veias laterais da cauda.Visualize o fluxo sanguíneo no cateter para garantir que a agulha esteja bem colocada para que as soluções entrem totalmente no animal versus sejam capturadas na cauda. Use um pedaço de fita cirúrgica para fixar cuidadosamente a cauda com a agulha inserida ao palco. Lave o cateter com 25 microlitadores de soro fisiológico estéril tamponado com fosfato.Em seguida, injete a solução de anticorpos no cateter usando seringas de insulina. Lave o cateter mais uma vez com 25 microliters de PBS estéreis. Retire a agulha da cauda e aplique pressão para parar qualquer sangramento.Realize a eutanásia humana do mouse, conforme descrito no protocolo de texto, e coloque o rato na posição supina. Use tesoura cirúrgica e fórceps para extirir tecidos tumorais. Use fórceps para agarrar apenas a camada externa da pele entre o conjunto de glândulas mamárias mais próximas da cauda, e faça uma pequena incisão com um par de tesouras cirúrgicas.Introduza a tesoura fechada no corte e abra lentamente a ponta para separar cuidadosamente a pele da membrana da parede abdominal subjacente, mantendo-a intacta. Faça uma incisão vertical no abdômen, continuando a separar a pele da membrana interna. Entre a terceira e quarta glândulas mamárias, faça um corte horizontal no abdômen para permitir a retração da pele e a visualização das glândulas mamárias.Agarrando cada tumor ou glândula normal com fórceps, corte cuidadosamente a pele presa usando uma tesoura cirúrgica. Coloque tecidos excisados em moldes de base descartáveis de tecido que são pré-rotulados e preenchidos com temperatura de corte ideal incorporando meio. Congele rapidamente os moldes por colocação em gelo seco.Para estudar a entrega fora do alvo, extirto outros tecidos ou órgãos de interesse. Usando um criostat, se sectionia blocos de tecido congelado com espessura de 10 mícrons e coloque seções adjacentes em lâminas de vidro de adesão pré-rotuladas. Enxágüe lâminas de tecido congelado com PBS de temperatura ambiente por cinco minutos para remover o meio de incorporação.Demarcar seções teciduais com caneta de barreira hidrofóbica para reduzir o volume de soluções necessárias durante a coloração. Fixar as seções teciduais com solução de paraformaldeído de 4% por cinco minutos. Depois de enxaguar os slides em PBS por cinco minutos, permeabilize seções teciduais com 0,5% Triton X-100 em PBS por 15 minutos.Enxágüe os slides novamente em PBS por cinco minutos. Bloqueie os tecidos com PBS contendo 3% de peso por volume de gógo bovino albumina e 5% de volume por volume de soro de cabra por uma hora à temperatura ambiente. Depois de enxaguar os slides em PBS por cinco minutos, incubar as seções com anticorpos primários que mantêm registros, como um marcador nuclear, vascular ou citoplasmista comum.Aqui, o CD31 anti-rato de rato é usado em uma diluição de um a 100 na solução de bloqueio. Os slides com anticorpo primário são deixados durante a noite a quatro graus Celsius, protegidos da desidratação em uma bandeja de slides. Após a incubação, enxágue os slides em PBS por cinco minutos três vezes.Mude o PBS cada vez. Incubar os slides com anticorpos secundários para rotular os anticorpos primários. Para esta aplicação, visualize o anticorpo anti-B7-H3 usando o anticorpo anti-coelho de cabra conjugado Alexa Fluor 546, e visualize CD31 com o anticorpo anti-rato de cabra Alexa Fluor 488 na solução de bloqueio.Proteja os slides da luz e desidratação em uma bandeja de slides durante uma hora em temperatura ambiente. Depois de enxaguar os slides em PBS como antes, aplique uma gota do meio de montagem no centro da fatia de tecido. Coloque cuidadosamente uma mancha de cobertura, evitando a armadilha de bolhas de ar.Sele as bordas da tampa com esmalte transparente e deixe secar. Proceder com imagens de microscopia confocal e análise quantitativa de imagem conforme descrito no protocolo de texto. Micrografias confocal representativas mostram a comparação de anticorpos B7-H3 específicos conjugados e isótipos não específicos de controle de anticorpos-ICG conjugados em glândulas mamárias murinas contendo tecidos normais ou carcinoma.As glândulas mamárias murinas normais de um animal injetou intravenosamente com Iso-ICG ou B7-H3-ICG e contra-manchadas com CD31 não mostram nenhuma coloração dos conjugados de anticorpos. Os tecidos normais mostraram-se não ter expressão de B7-H3 pela coloração padrão de imunofluorescência ex vivo. Em tumores mamários invasivos, b7-H3-ICG se liga fortemente à vasculatura, o primeiro ponto de contato in vivo, e depois é capaz de extravasar da vasculatura para manchar heterogeneamente o epitélio tumoral.Iso-ICG mostra acúmulo inespecífico dentro dos tecidos tumorais. A coloração imunofluorescente ex vivo padrão mostra expressão uniforme do marcador B7-H3 em células epiteliais e endoteliais. Micrografias confocal representativas mostram o método de localização da imunofluorescência in vivo para detectar expressão de netrin-1 ou expressão de controle isótipo em carcinoma murino e glândulas mamárias normais.A localização da imunofluorescência in vivo confirma o sinal epitelial para netrin-1 em tumores MMTV-PyMT, mas não em glândulas mamárias normais. Além disso, há um forte sinal netrin-1 nas células endoteliais em tumores mamários, como indicado pelo sinal amarelo colocalizado. O sinal é significativamente mais fraco nas glândulas mamárias normais.O método IVIL precisará ser otimizado em termos de dosagem de anticorpos, tempo de coleta de tecidos e diluição de anticorpos secundários para implementação bem-sucedida. O IVIL permite o direcionamento de epítopos conformais que não podem ser detectados usando a coloração padrão da imunofluorescência, que requer processamento tecidual. Além disso, órgãos saudáveis de camundongos portadores de tumores podem ser coletados para avaliar a entrega fora do alvo de anticorpos terapêuticos.Com o aumento do uso de terapêuticas baseadas em anticorpos e agentes de contraste na pesquisa e gerenciamento do câncer, o método IVIL é altamente aplicável à pesquisa e desenvolvimento farmacêutico. Pesquisadores em terapias contra o câncer, imagem molecular, inflamação e outras áreas podem descobrir que o método IVIL fornece informações úteis.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

o<em&gt; Drosophila</em&gt; Imaginal Modelo Disc Tumor: visualização e quantificação da expressão gênica e invasão tumoral Usando Mosaicos Genéticos

Drosophila melanogaster has emerged as a powerful experimental system for functional and mechanistic studies of tumor development and progression in the ...

Pesquisa do câncer

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

Na Vivo Avaliação de EPR de pH, pO2, Status Redox e as concentrações de fosfato e glutationa no microambiente do Tumor

This protocol demonstrates the capability of low-field electron paramagnetic resonance (EPR)-based techniques in combination with functional paramagnetic ...

Assessment of Resistance to Tyrosine Kinase Inhibitors by an Interrogation of Signal Transduction Pathways by Antibody Arrays

Avaliação da resistência aos inibidores de tirosina quinase por um interrogatório das vias de transdução de sinal por matrizes de anticorpo

Cancer patients with an aberrant regulation of the protein phosphorylation networks are often treated with the tyrosine kinase inhibitors. Response rates ...

Using 22C3 Anti-PD-L1 Antibody Concentrate on Biopsy and Cytology Samples from Non-small Cell Lung Cancer Patients

Usando 22 3 anticorpo Anti-PD-L1 concentrar-se na biópsia e citologia amostras de pacientes de câncer de pulmão não-pequenas células

Pembrolizumab monotherapy has been approved for the first- and second-line treatment of patients with PD-L1-expressing advanced non-small cell lung cancer ...

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

Estabelecimento de modelos de xenoenxertos derivados de câncer gástrico e linhas celulares primárias

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Semi-automatic PD-L1 Characterization and Enumeration of Circulating Tumor Cells from Non-small Cell Lung Cancer Patients by Immunofluorescence

Caracterização e enumeração semiautomáticas de PD-L1 de células tumorais circulantes de pacientes com câncer de pulmão de células não pequenas por imunofluorescência

Circulating tumor cells (CTCs) derived from the primary tumor are shed into the bloodstream or lymphatic system. These rare cells (1&#8722;10 cells per mL ...

Analyzing Tumor and Tissue Distribution of Target Antigen Specific Therapeutic Antibody

Analisando tumor e distribuição de tecidos de anticorpo terapêutico específico de antígeno alvo

Monoclonal antibodies are high affinity multifunctional drugs that work by variable independent mechanisms to eliminate cancer cells. Over the last few ...

Enhanced Viability for Ex vivo 3D Hydrogel Cultures of Patient-Derived Xenografts in a Perfused Microfluidic Platform

Viabilidade aprimorada para culturas de hidrogel 3D Ex vivo de xenoenxertos derivados do paciente em uma plataforma microfluida perfusada

Patient-derived xenografts (PDX), generated when resected patient tumor tissue is engrafted directly into immunocompromised mice, remain biologically ...

Immunofluorescence Imaging of DNA Damage and Repair Foci in Human Colon Cancer Cells

Imagens de imunofluorescência de dna dano e reparo de focos em células cancerígenas de cólon humano

The purpose of the manuscript is to provide a step-by-step protocol for performing immunofluorescence microscopy to study the radiation-induced DNA damage ...