Name: in vivo immunofluorescence localization for assessment of therapeutic and diagnostic antibody biodistribution in cancer research
Uploaded: 2019-09-16T12:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Immunofluorescence Localization for Assessment of Therapeutic and Diagnostic Antibody Biodistribution in Cancer Research at JoVE.com

Dr. Andrew Olson'a (Stanford Neuroscience Mikroskopi Servisi) tartışmalar ve ekipman kullanımı için teşekkür ederiz. Dr. Juergen K. Willmann'a akıl hocalığı için teşekkür ederiz. Bu çalışma NIH R21EB022214 hibe (KEW), NIH R25CA118681 eğitim hibe (KEW) ve NIH K99EB023279 (KEW) tarafından desteklenmiştir. Stanford Nörobilim Mikroskopi Servisi NIH NS069375 tarafından desteklenmiştir.

Burada açıklanan tüm yöntemler Stanford Üniversitesi Laboratuvar Hayvan Bakımı Kurumsal İdari Paneli (APLAC) tarafından onaylanmıştır.
1. Meme kanseri gelişiminin transgenik fare modeli
<ol><li>Devam etmeden önce palpasyon veya kaliper ölçümü ile uygun tümör büyümesi için istenilen kanser modelinden fareleri gözlemleyin. NOT: Burada meme kanseri gelişiminin transgenik mürin modeli (FVB/N-Tg(MMTV-PyMT)634Mul/J) (MMTV-PyMT) kullanılmıştır. Bu hayvanlar spontan ...

<ol>
	<li>Forthal, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functions+of+Antibodies.">Functions of Antibodies.</a> Microbiology Spectrum. 2 (4), 1-17 (2014).</li><li>Boder, E. T., Midelfort, K. S., Wittrup, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directed+evolution+of+antibody+fragments+with+monovalent+femtomolar+antigen-binding+affinity.">Directed evolution of antibody fragments with monovalent femtomolar antigen-binding affinity.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (20), 10701-10705 (2000).</li><li>K&#246;hler, G., Milstein, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous+cultures+of+fused+cells+secreting+antibody+of+predefined+specificity.">Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity.</a> Nature. 256 (5517), 495-497 (1975).</li><li>Lonberg, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen-specific+human+antibodies+from+mice+comprising+four+distinct+genetic+modifications.">Antigen-specific human antibodies from mice comprising four distinct genetic modifications.</a> Nature. 368 (6474), 856-859 (1994).</li><li>McCafferty, J., Griffiths, A. D., Winter, G., Chiswell, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phage+antibodies:+filamentous+phage+displaying+antibody+variable+domains.">Phage antibodies: filamentous phage displaying antibody variable domains.</a> Nature. 348 (6301), 552-554 (1990).</li><li>Ferlay, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+incidence+and+mortality+worldwide:+sources,+methods+and+major+patterns+in+GLOBOCAN+2012.">Cancer incidence and mortality worldwide: sources, methods and major patterns in GLOBOCAN 2012.</a> International Journal of Cancer. 136 (5), E359-E386 (2015).</li><li>Reichert, J. M., Valge-Archer, V. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+trends+for+monoclonal+antibody+cancer+therapeutics.">Development trends for monoclonal antibody cancer therapeutics.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 6 (5), 349-356 (2007).</li><li>Kircher, M. F., Willmann, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+Body+Imaging:+MR+Imaging,+CT,+and+US.+Part+I.+Principles.">Molecular Body Imaging: MR Imaging, CT, and US. Part I. Principles.</a> Radiology. 263 (3), 633-643 (2012).</li><li>Fleuren, E. D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Theranostic+applications+of+antibodies+in+oncology.">Theranostic applications of antibodies in oncology.</a> Molecular Oncology. 8 (4), 799-812 (2014).</li><li>Forsstr&#246;m, B., Bis&#322;awska Axn&#228;s, B., Rockberg, J., Danielsson, H., Bohlin, A., Uhlen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissecting+Antibodies+with+Regards+to+Linear+and+Conformational+Epitopes.">Dissecting Antibodies with Regards to Linear and Conformational Epitopes.</a> PLoS ONE. 10 (3), (2015).</li><li>Woof, J. M., Burton, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+antibody-Fc+receptor+interactions+illuminated+by+crystal+structures.">Human antibody-Fc receptor interactions illuminated by crystal structures.</a> Nature Reviews Immunology. 4 (2), 89-99 (2004).</li><li>Brooks, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translational+genomics:+The+challenge+of+developing+cancer+biomarkers.">Translational genomics: The challenge of developing cancer biomarkers.</a> Genome Research. 22 (2), 183-187 (2012).</li><li>Tabrizi, M., Bornstein, G. G., Suria, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodistribution+Mechanisms+of+Therapeutic+Monoclonal+Antibodies+in+Health+and+Disease.">Biodistribution Mechanisms of Therapeutic Monoclonal Antibodies in Health and Disease.</a> The AAPS Journal. 12 (1), 33-43 (2009).</li><li>Duraiyan, J., Govindarajan, R., Kaliyappan, K., Palanisamy, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+immunohistochemistry.">Applications of immunohistochemistry.</a> Journal of Pharmacy &amp; Bioallied Sciences. 4 (Suppl 2), S307-S309 (2012).</li><li>Gambhir, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+imaging+of+cancer+with+positron+emission+tomography.">Molecular imaging of cancer with positron emission tomography.</a> Nature Reviews. Cancer. 2 (9), 683-693 (2002).</li><li>Freise, A. C., Wu, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+Imaging+with+Antibodies+and+Engineered+Fragments.">In vivo Imaging with Antibodies and Engineered Fragments.</a> Molecular Immunology. 67 (200), 142-152 (2015).</li><li>Cilliers, C., Menezes, B., Nessler, I., Linderman, J., Thurber, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+Tumor+Penetration+and+Single-Cell+Targeting+of+Antibody-Drug+Conjugates+Increases+Anticancer+Efficacy+and+Host+Survival.">Improved Tumor Penetration and Single-Cell Targeting of Antibody-Drug Conjugates Increases Anticancer Efficacy and Host Survival.</a> Cancer Research. 78 (3), 758-768 (2018).</li><li>Wilson, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectroscopic+Photoacoustic+Molecular+Imaging+of+Breast+Cancer+using+a+B7-H3-targeted+ICG+Contrast+Agent.">Spectroscopic Photoacoustic Molecular Imaging of Breast Cancer using a B7-H3-targeted ICG Contrast Agent.</a> Theranostics. 7 (6), 1463-1476 (2017).</li><li>Wischhusen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+molecular+imaging+as+a+non-invasive+companion+diagnostic+for+netrin-1+interference+therapy+in+breast+cancer.">Ultrasound molecular imaging as a non-invasive companion diagnostic for netrin-1 interference therapy in breast cancer.</a> Theranostics. 8 (18), 5126-5142 (2018).</li><li>Guy, C. T., Cardiff, R. D., Muller, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+mammary+tumors+by+expression+of+polyomavirus+middle+T+oncogene:+a+transgenic+mouse+model+for+metastatic+disease.">Induction of mammary tumors by expression of polyomavirus middle T oncogene: a transgenic mouse model for metastatic disease.</a> Molecular and Cellular Biology. 12 (3), 954-961 (1992).</li><li>Hober, S., Nord, K., Linhult, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+A+chromatography+for+antibody+purification.">Protein A chromatography for antibody purification.</a> Journal of Chromatography B. 848 (1), 40-47 (2007).</li><li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+Animal+Perfusion+Fixation+for+Rodents.">Whole Animal Perfusion Fixation for Rodents.</a> Journal of Visualized Experiments JoVE. (65), (2012).</li><li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li><li>Bachawal, S. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Earlier+detection+of+breast+cancer+with+ultrasound+molecular+imaging+in+a+transgenic+mouse+model.">Earlier detection of breast cancer with ultrasound molecular imaging in a transgenic mouse model.</a> Cancer Research. 73, 1689-1698 (2013).</li><li>Fitamant, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Netrin-1+expression+confers+a+selective+advantage+for+tumor+cell+survival+in+metastatic+breast+cancer.">Netrin-1 expression confers a selective advantage for tumor cell survival in metastatic breast cancer.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 105 (12), 4850-4855 (2008).</li><li>Kennedy, T. E., Serafini, T., de la Torre, J. R., Tessier-Lavigne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Netrins+are+diffusible+chemotropic+factors+for+commissural+axons+in+the+embryonic+spinal+cord.">Netrins are diffusible chemotropic factors for commissural axons in the embryonic spinal cord.</a> Cell. 78 (3), 425-435 (1994).</li><li>Ryman, J. T., Meibohm, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacokinetics+of+Monoclonal+Antibodies.">Pharmacokinetics of Monoclonal Antibodies.</a> CPT: Pharmacometrics &amp; Systems Pharmacology. 6 (9), 576-588 (2017).</li><li>Scalia, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen+Masking+During+Fixation+and+Embedding,+Dissected.">Antigen Masking During Fixation and Embedding, Dissected.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 65 (1), 5-20 (2017).</li><li>Robertson, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+labeled+tomato+lectin+for+imaging+vasculature+structures.">Use of labeled tomato lectin for imaging vasculature structures.</a> Histochemistry and Cell Biology. 143 (2), 225-234 (2015).</li><li>Chen, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+flow+reprograms+lymphatic+vessels+to+blood+vessels.">Blood flow reprograms lymphatic vessels to blood vessels.</a> The Journal of Clinical Investigation. 122 (6), 2006-2017 (2012).</li><li>Anderson, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravascular+staining+for+discrimination+of+vascular+and+tissue+leukocytes.">Intravascular staining for discrimination of vascular and tissue leukocytes.</a> Nature Protocols. 9 (1), 209-222 (2014).</li><li>de Boer, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Vivo+Fluorescence+Immunohistochemistry:+Localization+of+Fluorescently+Labeled+Cetuximab+in+Squamous+Cell+Carcinomas.">In Vivo Fluorescence Immunohistochemistry: Localization of Fluorescently Labeled Cetuximab in Squamous Cell Carcinomas.</a> Scientific Reports. 5, (2015).</li><li>Jenkins, R. W., Barbie, D. A., Flaherty, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+resistance+to+immune+checkpoint+inhibitors.">Mechanisms of resistance to immune checkpoint inhibitors.</a> British Journal of Cancer. 118 (1), 9-16 (2018).</li><li>Rexer, B. N., Arteaga, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrinsic+and+acquired+resistance+to+HER2-targeted+therapies+in+HER2+gene-amplified+breast+cancer:+mechanisms+and+clinical+implications.">Intrinsic and acquired resistance to HER2-targeted therapies in HER2 gene-amplified breast cancer: mechanisms and clinical implications.</a> Critical Reviews in Oncogenesis. 17 (1), 1-16 (2012).</li></ol>

Bu yöntem birkaç kritik adıma sahiptir ve başarılı bir uygulama sağlamak için olası değişiklikler gerektirir. İlk olarak, antikor/antikor konjuge intravenöz enjeksiyonun dozajı ve zamanlaması özel uygulamaya uygun olmalıdır. Genellikle, dozlar antikor konjuge genellikle nasıl kullanılacağı ile tutarlı kullanılmalıdır, yani, terapötik antikor veya antikor tabanlı kontrast ajan eşleşen dozlarda. Ayrıca, hedef dokuların toplanmasının zamanlaması dikkatle düşünülmelidir. Antikorlar ve a...

Monoklonal antikorlar (mAb) b hücreleri tarafından salgılanan ve bağışıklık sisteminde biyolojik işlevini belirlemek ve inhibe etmek için birincil bir fonksiyona sahip immünglobulin süper familyasının büyük glikoproteinleridir (yaklaşık 150 kDa) yıkım, bakteriyel veya viral patojenler, ve kanser hücrelerinde anormal protein ekspresyonu tanıyabilir1. Antikorlar femtomolar konsantrasyonları onları biyotıp2son derece umut verici araçlar yapma kendi özel epitopsiçin son derece yüksek bir yakınlık olabilir. Milstein ve Köhler tarafından hibridoma teknolojisinin gelişmesiile (1984 yılında Nobel Ödülü) ile mAbs üretimi mümkün oldu3. Daha sonra, insan mAbs faj ekran teknolojisi veya transgenik fare suşları kullanılarak oluşturulan ve yeni araştırma araçları ve terapötik4,5olarak kullanım devrim .
Kanser dünya çapında bir sağlık sorunu ve önleme, algılama vetedavi6 için yeni yaklaşımlar için ihtiyaç yaratarak ölüm önemli bir nedenidir. Bugüne kadar, mAbs tümörigenez genlerin rolü ve proteinlerin extrication izin verdi ve kanser biyobelirteçleri karşı yönlendirildiğinde, hasta tabakalaşma için tümör tespiti ve karakterizasyonu sağlayabilir. Kanser tedavisi için, bispesifik mAbs, antikor-ilaç konjugeler, ve küçük antikor parçaları terapötik olarak geliştirilmektedir, ve terapötiketkinliğiniartırmak için hedeflenen ilaç teslim imiş 7 . Buna ek olarak, antikorlar floresan güdümlü cerrahi, fotoakustik (PA) görüntüleme, ultrason (ABD) moleküler görüntüleme ve klinik olarak kullanılan pozitron emisyonu gibi moleküler görüntüleme yöntemleri için kontrast ajanların biyomarker hedeflemeiçin hizmet tomografi (PET) veya tek foton emisyon bilgisayarlı tomografi (SPECT)8. Son olarak, antikorlar da hedeflenen tedaviler için hastaların tabakalaşma ve yanıt izleme sağlayan teranostik ajanlar olarak kullanılabilir9. Bu nedenle, yeni mAbs kanser tespiti, tanı ve tedavisinde kritik bir rol oynamaya başlıyor.
Yeni ve son derece spesifik mGe'lerin geliştirilmesi ve üretimindeki kritik gelişmelere rağmen, tanı ve tedavi uygulamaları tümör ortamının karmaşıklığı nedeniyle etkisiz hale getirilebilir. Antikor etkileşimleri epitop türüne bağlıdır,yani,doğrusal veya konformasyonel10olup olmadığını. Antijenlerin tanınmasına ek olarak, antikorlar damar duvarları gibi doğal engelleri aşmak gerekir, bazal membranlar, ve tümör stroma antijen ifade hedef hücrelere ulaşmak için. Antikorlar doku ile sadece değişken parça antijen bağlama (Fab) etki alanı yoluyla değil, aynı zamanda sabit kristal in parçası (Fc) ile etkileşime hangi daha da off-site etkileşimleri yol açar11. Tümör vaskülarizasyonunda tümör toplu ve heterojenlik ve lenfatik sistemde tümör belirteçlerinin heterojen ekspresyonu ile de hedefleme karmaşıktır12,13. Buna ek olarak, tümör mikroçevre tümör hücrelerini destekleyen kanser ilişkili fibroblastlar oluşur, anti-tümör bağışıklık reaksiyonları bastırmak tümör bağışıklık hücreleri, ve oksijen ve besin naklini destekleyen tümör endotel, tüm antikor bazlı terapötik lerin veya tanıların penetrasyonunu, dağılımını ve kullanılabilirliğini engelleyen. Genel olarak, bu hususlar terapötik veya tanısal etkinliği sınırlayabilir, tedavi yanıtını azaltabilir ve tümör direncine neden olabilir.
Bu nedenle, etkili antikor tabanlı tedaviler ve tanı ların geliştirilmesi için, tümör mikroortamında antikor bazlı konjuge biyodağılımı ve etkileşiminin değerlendirilmesi çok önemlidir. Şu anda klinik öncesi çalışmalarda tümör araştırma modellerinde belirteç ekspresyonu, tümörkesitlerininimmünoresans (IF) boyaması ile ex vivo olarak analiz edilir. Standart IF boyama, hayvandan izole edilmiş ekstrem tümör doku dilimlerinde sekonder floresan etiketli antikorlar ile vurgulanan primer marker spesifik antikorlarla yapılır. Bu teknik, doku fiksasyonu sırasında belirteç statik konumunu vurgular ve antikor tabanlı terapötik veya tanı fizyolojik koşullarda dağıtmak veya etkileşim nasıl içgörü sağlamaz. PET, SPECT, ABD ve PA tarafından moleküler görüntüleme yaşayan preklinik modellerde antikor konjuge kontrast madde dağılımı hakkında bilgi sağlayabilir8,15. Bu görüntüleme yöntemleri non-invaziv olduğundan, boylamsal çalışmalar yapılabilir ve zamana duyarlı veriler grup başına en az sayıda hayvan ile toplanabilir. Ancak, bu non-invaziv moleküler görüntüleme yaklaşımları yeterince duyarlı değildir ve hücresel düzeyde antikor dağılımının lokalizasyonu için yeterli çözünürlüğe sahip değildir. Ayrıca, birincil antikor fiziksel ve biyolojik özellikleri büyük ölçüde bir kontrast madde16konjugasyonu ile değiştirilebilir.
İn vivo fizyolojik ve patolojik durumları göz önünde bulundurarak antikor bazlı terapötik ve tanıların tümör ortamında nasıl etkileştiğini göz önünde bulundurmak ve yüksek çözünürlüklü hücresel ve hatta hücre altı dağılım elde etmek için konjuge olmayan antikor profilleri, antijene özgü antikorin intravenöz olarak intravenöz olarak intravenöz olarak enjekte edildiği Vivo İmmünofloresan Lokalizasyonunda (IVIL) kabul edilen bir IF yaklaşımı öneriyoruz. Antikor bazlı terapötik veya tanısal, birincil antikor olarak hareket, fonksiyonel kan damarlarında dolaşır ve son derece doğru, yaşayan tümör ortamında hedef protein bağlanır. İn vivo etiketli tümörlerin primer antikorile izole edilmesinden sonra, birikmiş ve korunmuş antikor konjugatörlerinin lokalize edilmesi nde ikincil bir antikor kullanılır. Bu yaklaşım, floresan olarak etiketlenmiş antikorenjekte eden if histoloji yaklaşımına daha önce tanımlanmış bir yaklaşıma benzer17. Burada ise, konjuge olmayan antikorların kullanımı antikor modifikasyonu ile indüklenen biyodağıtım özelliklerinde potansiyel bir değişiklik önler. Ayrıca floresan sekonder antikorların ex vivo uygulaması doku toplama ve işleme sırasında olası bir floresan sinyali kaybını önler ve floresan sinyal yoğunluğunun arttırılmasını sağlar. Etiketleme yaklaşımımız antikor bazlı ilaçların ve hedefli ajanların canlı biyodağılımını yansıtır ve yeni tanı ve tedavi edici ajanların gelişimi için önemli bilgiler sağlayabilir.
Burada, meme kanseri saptanması için moleküler görüntüleme yaklaşımları için antikor bazlı kontrast ajanların biyodağılımı nı ve erişilebilirliğini araştıran önceki çalışmalarda uygulandığı gibi IVIL yönteminin iki uygulamasını açıklıyoruz. İlk olarak, bir antikor-yakın kızılötesi boya konjuge biyodağılımı (anti-B7-H3 antikor yakın kızılötesi floresan boya bağlı, indosiyane yeşili, B7-H3-ICG) ve izotip kontrol ajanı (Iso-ICG) floresan ve fotoakustik moleküler moleküler için görüntüleme18araştırılır. Bu uygulamanın yöntemi protokolde açıklanmıştır. Daha sonra, netrin-1 bir konformasyonel duyarlı antikor biyodağıtım sonuçları, genellikle geleneksel IF görüntüleme ile tespit edilemez, ultrason moleküler görüntüleme ile kullanılan, sayısallaştırılmış ve temsili sonuçlarda sunulan19. Bu protokol makalesinin sonunda, okuyucular kendi antikor tabanlı araştırma uygulamaları için IVIL yöntemini benimseyerek rahat hissetmelidir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:990px;" width="990">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Animal Model</td>
			<td style="width:196px;"></td>
			<td style="width:166px;"></td>
			<td style="width:334px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:22px;">FVB/N-Tg(MMTV-PyMT)634Mul/J</td>
			<td style="width:196px;">The Jackson Laboratory</td>
			<td style="width:166px;">002374</td>
			<td>Females, 4-6 weeks of age</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Animal Handling Supplies</td>
			<td style="width:196px;"></td>
			<td style="width:166px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">27G Catheter</td>
			<td style="width:196px;">VisualSonics</td>
			<td style="width:166px;">Please call to order</td>
			<td>Vevo MicroMarker Tail Vein Access Cannulation Kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Alcohol Wipes</td>
			<td style="width:196px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">22-246073</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Gauze Sponges (4&#34; x 4&#34; 16 Ply)</td>
			<td style="width:196px;">Cardinal Health</td>
			<td style="width:166px;">2913</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Heat Lamp</td>
			<td style="width:196px;">Morganville Scientific</td>
			<td style="width:166px;">&#160;HL0100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:196px;">Henry Schein Animal Health</td>
			<td style="width:166px;">29404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Ophthalmic Ointment</td>
			<td style="width:196px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">NC0490117</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Surgical Tape</td>
			<td style="width:196px;">3M</td>
			<td style="width:166px;">1530-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Tissue Collection</td>
			<td style="width:196px;"></td>
			<td style="width:166px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Disposable Base Molds</td>
			<td style="width:196px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">22-363-556</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:295px;">Optimal Cutting Temperature (OCT) Medium</td>
			<td style="width:196px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">23-730-571</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:295px;">Surgical London Forceps</td>
			<td style="width:196px;">Fine Science Tools</td>
			<td>11080-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:295px;">Surgical Scissors</td>
			<td style="width:196px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:166px;">14084-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Antibodies</td>
			<td style="width:196px;"></td>
			<td style="width:166px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">AlexaFluor-488 goat anti-rat IgG</td>
			<td style="width:196px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:166px;">A-11006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">AlexaFluor-546 goat anti-rabbit IgG</td>
			<td style="width:196px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:166px;">A-11010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">AlexaFluor-594 goat anti-human IgG</td>
			<td style="width:196px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:166px;">A11014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Human IgG Isotype Control</td>
			<td style="width:196px;">Novus Biologicals</td>
			<td style="width:166px;">NBP1-97043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Humanized anti-netrin-1 antibody&#160;</td>
			<td style="width:196px;">Netris Pharma</td>
			<td style="width:166px;"></td>
			<td>contact@netrispharma.com</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Rabbit anti-Mouse CD276 (B7-H3)</td>
			<td style="width:196px;">Abcam</td>
			<td style="width:166px;">ab134161</td>
			<td>EPNCIR122 Clone</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Rat anti-Mouse CD31</td>
			<td style="width:196px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:166px;">550274</td>
			<td>MEC 13.3 Clone</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Reagents</td>
			<td style="width:196px;"></td>
			<td style="width:166px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
			<td style="width:196px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:166px;">A2153-50G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Clear Nail Polish</td>
			<td style="width:196px;"></td>
			<td style="width:166px;"></td>
			<td>Any local drug store</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Indocyanine Green - NHS</td>
			<td style="width:196px;">Intrace Medical</td>
			<td style="width:166px;">ICG-NHS ester</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Mounting Medium</td>
			<td style="width:196px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">TA-006-FM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Normal Goat Serum</td>
			<td style="width:196px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">ICN19135680</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Paraformaldehyde (PFA)</td>
			<td style="width:196px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">AAJ19943K2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Sterile Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
			<td style="width:196px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">14190250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Triton-X 100</td>
			<td style="width:196px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:166px;">T8787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Supplies</td>
			<td style="width:196px;"></td>
			<td style="width:166px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Adhesion Glass Slides</td>
			<td style="width:196px;">VWR</td>
			<td style="width:166px;">48311-703</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Desalting Columns</td>
			<td style="width:196px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">45-000-148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Glass Cover Slips</td>
			<td style="width:196px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">12-544G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Hydrophobic Barrier Pen</td>
			<td style="width:196px;">Ted Pella</td>
			<td style="width:166px;">22311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Microcentrifuge Tubes</td>
			<td style="width:196px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:166px;">05-402-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Slide Staining Tray</td>
			<td style="width:196px;">VWR</td>
			<td style="width:166px;">87000-136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Software</td>
			<td style="width:196px;"></td>
			<td style="width:166px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">FIJI</td>
			<td style="width:196px;">LOCI, UW-Madison.</td>
			<td style="width:166px;">Version 4.0</td>
			<td>https://fiji.sc/</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo immunofluorescence localization for assessment of therapeutic and diagnostic antibody biodistribution in cancer research

Monoklonal antikorlar (mAbs) kanser teşhisi, tanısı ve tedavisinde önemli araçlardır. Onlar tümörigenez proteinlerin rolünü çözmek için kullanılır, tümör tespiti ve karakterizasyonu sağlayan kanser biyobelirteçleri yönlendirilebilir, ve mAbs veya antikor-ilaç conjugates olarak kanser tedavisi için kullanılabilir bağışıklık etkileyici hücreleri etkinleştirmek için, inhibe etmek sinyal yolları, ya da doğrudan belirli antijen taşıyan hücreleri öldürmek. Yeni ve son derece spesifik mGe'lerin geliştirilmesi ve üretimindeki klinik gelişmelere rağmen, tanı ve tedavi uygulamaları tümör mikroortamının karmaşıklığı ve heterojenliği ile bozulabilir. Bu nedenle, etkili antikor bazlı tedaviler ve tanıların geliştirilmesi için, antikor bazlı konjuge'nin canlı tümör mikroortamı ile biyodağılımı ve etkileşiminin değerlendirilmesi çok önemlidir. Burada In Vivo Immunofluorescence Localization (IVIL) in vivo fizyolojik ve patolojik koşullarda antikor bazlı terapötik ve tanı etkileşimlerini incelemek için yeni bir yaklaşım olarak tanımlıyoruz. Bu teknikte, terapötik veya tanısal antijene özgü antikor intravenöz olarak invivo ve lokalize ex vivo izole tümörlerde ikincil antikor ile enjekte edilir. Bu nedenle IVIL, antikor bazlı ilaçların ve hedefleme ajanlarının in vivo biyodağılımını yansıtmaktadır. İki IVIL uygulaması meme kanserinin moleküler görüntülemesi için antikor bazlı kontrast ajanların biyodağılımı ve erişilebilirliğini değerlendirirken tanımlanmıştır. Bu protokol, gelecekteki kullanıcıların IVIL yöntemini kendi antikor tabanlı araştırma uygulamaları için uyarlamalarına olanak sağlayacaktır.

IVIL yöntemi burada, b7-H3-ICG ve Iso-ICG'nin in vivo biyodağılımı nı ve doku etkileşimini incelemek için, canlı bir hayvana intravenöz enjeksiyondan sonra, 96 saat boyunca hedef doku ile etkileşime girebilmelerine izin vererek ve dokular hasat, ex vivo immünboyama sırasında birincil antikorlar olarak hareket etmek. IVIL yöntemi ayrıca B7-H3 marker için dokuların standart ex vivo IF boyama ile karşılaştırıldı. Normal murine meme bezleri B7-H3 belirteci ifade etmez,...

Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Immunofluorescence Localization for Assessment of Therapeutic and Diagnostic Antibody Biodistribution in Cancer Research at JoVE.com

In Vivo Immunofluorescence Localization for Assessment of Therapeutic and Diagnostic Antibody Biodistribution in Cancer Research

In vivo immünfloresans lokalizasyonu (IVIL) yöntemi, in vivo tümör hedeflemesi ve ekzo immünboyama kombinasyonu nu kullanarak canlı organizmalarda onkolojik amaçlarla antikor ve antikor konjugatörlerinin in vivo biyodağılımını incelemek için kullanılabilir. Yöntemler.

Kanser Araştırmalarında Terapötik ve Tanısal Antikor Biyodağılımının Değerlendirilmesi için In Vivo Immunofluoresence Lokalizasyonu

Monoclonal antibodies (mAbs) are important tools in cancer detection, diagnosis, and treatment. They are used to unravel the role of proteins in ...

In vivo immünoresans lokalizasyonu veya IVIL için bu protokol, kanser araştırma, tespit ve tedavisi için tanı ve tedavi antikorlarının veya antikor bazlı ajanların in vivo biyodağılımını değerlendirir. Antijenlerin hücresel ekspresyonu ex vivo ortaya konan konvansiyonel immünoresan boyama aksine, IVIL yöntemi antikorların ve antikor bazlı ajanların canlı hayvanda nasıl dağıtıldığını açıklar. Bu video, IVIL yönteminin genel iş akışının anlaşılmasına yardımcı olacaktır.Diğer uygulamalar ve antikorlar için protokolün başarılı bir şekilde çoğaltılması için önemli ayrıntılar gösterir. Devam etmeden önce palpasyon veya kaliper ölçümü ile uygun tümör büyümesi için istenilen kanser modelinden fareleri gözlemleyin. Üretici talimatları aşağıdaki koruyucu ve depolama tamponları kaldırmak için bir tuzsuzlama sütunüzerinde tavşan anti-fare B7-H3 ve tavşan IgG izotip kontrol antikorları arındırın.Her antikor 33 mikrogram Aliquot dozajları bireysel mikrosantrifüj tüplerde eşleşin. Metin protokolünde açıklandığı gibi anesteziyi takiben, antikor solüsyonlarının kuyruk damar ısülasyonuna hazırlanın. Bir alkol mendili ile üç kez silerek hayvanın kuyruğunu dezenfekte.Yaklaşık 30 saniye boyunca bir ısı yastığı ile ısıtarak kuyruk damarları dilate. Tüm hayvan ısıtma kaçının. 27-gauge kuyruk damar kateter kullanarak, iki lateral kuyruk damarları içine kelebek iğne takın.İğnenin düzgün yerleştirildiğinden emin olmak için katetere kan geri akışını görselleştirin, böylece çözeltiler hayvana tam olarak girsin ve kuyrukta yakalanır. Sahneye yerleştirilen iğneyle kuyruğu dikkatlice onarmak için bir parça cerrahi bant kullanın. Kateteri 25 mikrolitre steril fosfat tamponlu salinile yıkayın.Daha sonra, insülin şırıngaları kullanarak kateter içine antikor solüsyonu enjekte edin. Kateteri bir kez daha 25 mikrolitre steril PBS ile yıkayın. İğneyi kuyruktan çıkarın ve kanamayı durdurmak için basınç uygulayın.Metin protokolünde açıklandığı gibi farenin insancıl ötenazisini gerçekleştirin ve fareyi supine konumuna getirin. Tümör dokularını çıkarmak için cerrahi makas ve forceps kullanın. Kuyruk en yakın meme bezleri kümesi arasında cildin sadece dış tabakası kavramak için forceps kullanın ve cerrahi makas bir çift ile küçük bir kesi yapmak.Kesim içine kapalı makas tanıtın ve yavaş yavaş dikkatle altta yatan karın duvarı zarından cildi ayırmak için ucu açın, bozulmadan tutmak. Karın kadar dikey bir kesi yapmak, iç membran deri ayırmaya devam. Üçüncü ve dördüncü meme bezleri arasında, cildin geri çekilmesi ve meme bezlerinin görüntülenmesi sağlamak için karın boyunca yatay bir kesim yapmak.Her tümör veya normal bezi forceps ile kavrayarak, dikkatle cerrahi makas kullanarak bağlı cilt kesip. Önceden etiketlenmiş ve optimum kesme sıcaklığı gömme ortamı ile doldurulmuş doku tek kullanımlık baz kalıpları içine excised dokular yerleştirin. Hızlı kuru buz üzerine yerleştirerek kalıpları dondurun.Hedef dışı teslimatı incelemek için, diğer doku ları veya ilgili organları çıkarın. Bir kriyostat kullanarak, 10 mikron kalınlığında dondurulmuş doku blokları bölüm, ve önceden etiketlenmiş yapışma cam slaytlar üzerine bitişik bölümleri yerleştirin. Dondurularak dondurulmuş doku slaytlarını oda sıcaklığında PBS ile beş dakika boyunca durulayın.Boyama sırasında ihtiyaç duyulan çözeltilerin hacmini azaltmak için doku kesitlerini hidrofobik bariyer kalemle ayırın. Doku bölümlerini %4 paraformaldehit solüsyonu ile beş dakika boyunca düzeltin. PBS'deki slaytları beş dakika erittikten sonra, PBS'de %0.5 Triton X-100 ile doku kesitlerini 15 dakika permeabilize edin.Slaytları PBS'de beş dakika boyunca tekrar durulayın. Oda sıcaklığında bir saat boyunca hacim başına %3 büyükbaş serum albumin ve hacim başına %5 hacim içeren PBS içeren dokuları bloke edin. PBS'deki slaytları beş dakika boyunca duruladıktan sonra, ortak bir nükleer, vasküler veya sitoplazmik belirteç gibi kayıt tutan primer antikorlarla bölümleri kuluçkaya yatırın.Burada, fare anti-fare CD31 engelleme çözeltisi bir-100 seyreltme kullanılır. Birincil antikor içeren slaytlar bir gecede dört santigrat derecede bırakılır ve slayt tepsisinde susuzluktan korunur. Kuluçkadan sonra, PBS'deki slaytları beş dakika üç kez durulayın.PBS'yi her seferinde değiştirin. Birincil antikorları etiketlemek için slaytları ikincil antikorlarla kuluçkaya yatırın. Bu uygulama için, Alexa Fluor kullanarak anti-B7-H3 antikor görselleştirmek 546 konjuge keçi anti-tavşan antikor, ve engelleme çözeltisi Alexa Fluor 488 keçi anti-sıçan ikincil antikor ile CD31 görselleştirmek.Oda sıcaklığında bir saat boyunca bir slayt tepsisindeki ışık ve susuzluktan kaydırakları koruyun. Daha önce olduğu gibi PBS slaytlar durulama sonra, doku diliminin ortasına montaj ortamının bir damla uygulayın. Dikkatlice hava kabarcıkları tuzak kaçınarak, bir coverslip yerleştirin.Açık oje ile coverslip kenarları mühür ve kurumasını bekleyin. Metin protokolünde açıklandığı gibi konfokal mikroskopi görüntüleme ve nicel görüntü analizi ile devam edin. Temsili konfokal mikrograflar, normal veya karsinom dokuları içeren murine meme bezlerinde spesifik B7-H3 antikor-ICG konjuge ve nonspesifik izotip kontrol antikor-ICG konjuge lokalizasyonunun karşılaştırılmasını göstermektedir.Iso-ICG veya B7-H3-ICG enjekte edilen ve CD31 ile karşılanmış bir hayvanın normal meme bezleri antikor konjugates hiçbir boyama göstermektedir. Normal dokuların standart ex vivo immünfloresans boyama ile B7-H3 ekspresyonu olmadığı gösterilmiştir. İnvaziv meme tümörlerinde, B7-H3-ICG güçlü vaskülatür bağlanır, in vivo temas ilk noktası, ve daha sonra heterojen tümör epitel leke için vaskülatür ekstravaza yapabiliyor.İzo-ICG tümör dokuları içinde nonspesifik birikimi gösterir. Standart ex vivo immünfloresan boyama epitel ve endotel hücrelerinde B7-H3 belirteci düzgün ekspresyonu gösterir. Temsili konfokal mikrograflar, minnetkarsinom ve normal meme bezlerinde netrin-1 ekspresyonu veya izotip kontrol ekspresyonunu saptamak için in vivo immünfloresans lokalizasyon yöntemini göstermektedir.In vivo immünoresans lokalizasyonu MMTV-PyMT tümörlerinde netrin-1 için epitel sinyali doğrular ancak normal meme bezlerinde doğrulanmaz. Ayrıca, kolokalize sarı sinyal ile gösterildiği gibi, meme tümörlerinde endotel hücrelerinde güçlü bir netrin-1 sinyali vardır. Sinyal normal meme bezlerinde önemli ölçüde zayıftır.IVIL yöntemi nin başarılı bir uygulama için antikor dozu, doku toplama zamanlaması ve sekonder antikor seyreltme açısından optimize edilmesi gerekecektir. IVIL doku işleme gerektiren standart immünororesans boyama kullanılarak tespit edilemeyen konformasyonel epitopresiflerin hedefalınmasına izin verir. Ayrıca, terapötik antikorların hedef dışı teslimini değerlendirmek için tümör taşıyan farelerin sağlıklı organları toplanabilir.Kanser araştırma ve yönetiminde antikor bazlı terapötik ve kontrast maddelerin artan kullanımı ile, IVIL yöntemi son derece farmasötik araştırma ve geliştirme için geçerlidir. Kanser tedavileri araştırmacılar, moleküler görüntüleme, inflamasyon, ve diğer alanlarda IVIL yöntemi yararlı bilgiler sağlar bulabilirsiniz.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

<em&gt; Drosophila</em&gt; Hayali Disk Tümör Modeli: Genetik Mozaikler kullanma Gen İfade ve Tümör invazivliğinin Görselleştirme ve

Drosophila melanogaster has emerged as a powerful experimental system for functional and mechanistic studies of tumor development and progression in the ...

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

Vivo EPR pH, pO2, Redox durumu ve fosfat konsantrasyonları ve glutatyon tümör Microenvironment olarak değerlendirilmesi

This protocol demonstrates the capability of low-field electron paramagnetic resonance (EPR)-based techniques in combination with functional paramagnetic ...

Assessment of Resistance to Tyrosine Kinase Inhibitors by an Interrogation of Signal Transduction Pathways by Antibody Arrays

Direnç Tirozin kinaz inhibitörleri sinyal iletim yollarının antikor dizileri tarafından bir sorgulama tarafından değerlendirilmesi

Cancer patients with an aberrant regulation of the protein phosphorylation networks are often treated with the tyrosine kinase inhibitors. Response rates ...

Using 22C3 Anti-PD-L1 Antibody Concentrate on Biopsy and Cytology Samples from Non-small Cell Lung Cancer Patients

22C 3 kullanarak Anti-PD-L1 antikor konsantre biyopsi ve küçük hücreli dışı akciğer kanserli hastalarda sitoloji örnekleri

Pembrolizumab monotherapy has been approved for the first- and second-line treatment of patients with PD-L1-expressing advanced non-small cell lung cancer ...

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

Mide kanseri hasta-türetilen xenograft modelleri ve primer hücre hatları kurulması

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Semi-automatic PD-L1 Characterization and Enumeration of Circulating Tumor Cells from Non-small Cell Lung Cancer Patients by Immunofluorescence

İmmünfluoresans Ile Küçük Hücreli Olmayan Akciğer Kanseri Hastalarından Dolaşımdaki Tümör Hücrelerinin Yarı Otomatik PD-L1 Karakterizasyonu ve Numaralandırılması

Circulating tumor cells (CTCs) derived from the primary tumor are shed into the bloodstream or lymphatic system. These rare cells (1&#8722;10 cells per mL ...

Analyzing Tumor and Tissue Distribution of Target Antigen Specific Therapeutic Antibody

Hedef Antijen Spesifik Terapötik Antikor tümör ve doku dağılımının analizi

Monoclonal antibodies are high affinity multifunctional drugs that work by variable independent mechanisms to eliminate cancer cells. Over the last few ...

Enhanced Viability for Ex vivo 3D Hydrogel Cultures of Patient-Derived Xenografts in a Perfused Microfluidic Platform

Perfüzyonlu Mikroakışkan Platformda Hasta Kaynaklı Ksenogreftlerin Ex vivo 3D Hidrojel Kültürleri için Geliştirilmiş Canlılık

Patient-derived xenografts (PDX), generated when resected patient tumor tissue is engrafted directly into immunocompromised mice, remain biologically ...

Immunofluorescence Imaging of DNA Damage and Repair Foci in Human Colon Cancer Cells

İnsan Kolon Kanseri Hücrelerinde DNA Hasarı ve Onarım Foci İmmünofloresan Görüntüleme

The purpose of the manuscript is to provide a step-by-step protocol for performing immunofluorescence microscopy to study the radiation-induced DNA damage ...