Name: examination of mitotic and meiotic fission yeast nuclear dynamics by fluorescence live-cell microscopy
Uploaded: 2019-06-24T14:45:00
Duration: 12 min 4 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Examination of Mitotic and Meiotic Fission Yeast Nuclear Dynamics by Fluorescence Live-cell Microscopy at JoVE.com

يود المؤلفان أن يشكرا ناتاليا لا فوركاد ومون لافيرت على جعل إعداد هذه المخطوطة مسعى أكثر متعة. بفضل أعضاء مختبر فورسبورغ الذين ساهموا في إنجاز هذا العمل ببصيرتهم وأفكارهم التجريبية ودعمهم المعنوي. وقد تم دعم هذا المشروع من قبل NIGMS R35 GM118109 إلى SLF.

<ol>
	<li>Frigault, M. M., Lacoste, J., Swift, J. L., Brown, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live-cell+microscopy&#8211;tips+and+tools.">Live-cell microscopy&#8211;tips and tools.</a> Journal of Cell Science. 122 (6), 753-767 (2009).</li><li>Green, M. D., Sabatinos, S. A., Forsburg, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microscopy+techniques+to+examine+DNA+replication+in+fission+yeast.">Microscopy techniques to examine DNA replication in fission yeast.</a> DNA Replication. (13-41), (2015).</li><li>Lee, J. Y., Kitaoka, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+beginner&#8217;s+guide+to+rigor+and+reproducibility+in+fluorescence+imaging+experiments.">A beginner&#8217;s guide to rigor and reproducibility in fluorescence imaging experiments.</a> Molecular Biology of the Cell. 29 (13), 1519-1525 (2018).</li><li>Ohkura, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meiosis:+an+overview+of+key+differences+from+mitosis.">Meiosis: an overview of key differences from mitosis.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 7, a015859 (2015).</li><li>Sabatinos, S. A., Ranatunga, N. S., Yuan, J. P., Green, M. D., Forsburg, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Replication+stress+in+early+S+phase+generates+apparent+micronuclei+and+chromosome+rearrangement+in+fission+yeast.">Replication stress in early S phase generates apparent micronuclei and chromosome rearrangement in fission yeast.</a> Molecular Biology of the Cell. 26 (19), 3439-3450 (2015).</li><li>Ding, D. Q., Matsuda, A., Okamasa, K., Nagahama, Y., Haraguchi, T., Hiraoka, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meiotic+cohesin-based+chromosome+structure+is+essential+for+homologous+chromosome+pairing+in+Schizosaccharomyces+pombe.">Meiotic cohesin-based chromosome structure is essential for homologous chromosome pairing in Schizosaccharomyces pombe.</a> Chromosoma. 125 (2), 205-214 (2016).</li><li>Okamoto, S. Y., Sato, M., Toda, T., Yamamoto, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SCF+ensures+meiotic+chromosome+segregation+through+a+resolution+of+meiotic+recombination+intermediates.">SCF ensures meiotic chromosome segregation through a resolution of meiotic recombination intermediates.</a> PloS One. 7 (1), e30622 (2012).</li><li>Klutstein, M., Fennell, A., Fern&#225;ndez-&#193;lvarez, A., Cooper, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+telomere+bouquet+regulates+meiotic+centromere+assembly.">The telomere bouquet regulates meiotic centromere assembly.</a> Nature Cell Biology. 17 (4), 458-469 (2015).</li><li>Okamoto, S. Y., Sato, M., Toda, T., Yamamoto, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SCF+ensures+meiotic+chromosome+segregation+through+a+resolution+of+meiotic+recombination+intermediates.">SCF ensures meiotic chromosome segregation through a resolution of meiotic recombination intermediates.</a> PloS One. 7 (1), e30622 (2012).</li><li>Cooper, J. P., Watanabe, Y., Nurse, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fission+yeast+Taz1+protein+is+required+for+meiotic+telomere+clustering+and+recombination.">Fission yeast Taz1 protein is required for meiotic telomere clustering and recombination.</a> Nature. 392 (6678), 828-831 (1998).</li><li>Reyes, C., Serrurier, C., Gauthier, T., Gachet, Y., Tournier, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aurora+B+prevents+chromosome+arm+separation+defects+by+promoting+telomere+dispersion+and+disjunction.">Aurora B prevents chromosome arm separation defects by promoting telomere dispersion and disjunction.</a> Journal of Cell Biology. 208 (6), 713-727 (2015).</li><li>Mastro, T. L., Forsburg, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+meiotic+crossovers+and+reduced+genome+stability+in+absence+of+Schizosaccharomyces+pombe+Rad16+(XPF).">Increased meiotic crossovers and reduced genome stability in absence of Schizosaccharomyces pombe Rad16 (XPF).</a> Genetics. 198 (4), 1457-1472 (2014).</li><li>Escorcia, W., Forsburg, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Destabilization+of+the+replication+fork+protection+complex+disrupts+meiotic+chromosome+segregation.">Destabilization of the replication fork protection complex disrupts meiotic chromosome segregation.</a> Molecular Biology of the Cell. 28 (22), 2978-2997 (2017).</li><li>Fennell, A., Fern&#225;ndez-&#193;lvarez, A., Tomita, K., Cooper, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Telomeres+and+centromeres+have+interchangeable+roles+in+promoting+meiotic+spindle+formation.">Telomeres and centromeres have interchangeable roles in promoting meiotic spindle formation.</a> Journal of Cell Biology. 208 (4), 415-428 (2015).</li><li>Forsburg, S. L., Rhind, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+methods+for+fission+yeast.">Basic methods for fission yeast.</a> Yeast. 23 (3), 173-183 (2006).</li><li>Sabatinos, S. A., Forsburg, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+genetics+of+Schizosaccharomyces+pombe.">Molecular genetics of Schizosaccharomyces pombe.</a> Methods in enzymology. 470, 759-795 (2010).</li><li>. ImageJ User Guide &#8212; IJ&#8201;1.46 Available from: <a target="_blank" href="https://imagej.nih.gov/ij/docs/guide/146.html">https://imagej.nih.gov/ij/docs/guide/146.html</a> (2019)</li><li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li><li>De Oliveira, F. M. B., Harris, M. R., Brazauskas, P., De Bruin, R. A., Smolka, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Linking+DNA+replication+checkpoint+to+MBF+cell&#8208;cycle+transcription+reveals+a+distinct+class+of+G1/S+genes.">Linking DNA replication checkpoint to MBF cell&#8208;cycle transcription reveals a distinct class of G1/S genes.</a> The EMBO Journal. 31 (7), 1798-1810 (2012).</li><li>Ostapenko, D., Burton, J. L., Solomon, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+anaphase+promoting+complex+substrates+in+S.+cerevisiae.">Identification of anaphase promoting complex substrates in S. cerevisiae.</a> PLoS One. 7 (9), e45895 (2012).</li><li>Watanabe, Y., Nurse, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cohesin+Rec8+is+required+for+reductional+chromosome+segregation+at+meiosis.">Cohesin Rec8 is required for reductional chromosome segregation at meiosis.</a> Nature. 400 (6743), 461-464 (1999).</li><li>Zhu, Y. H., Hyun, J., Pan, Y. Z., Hopper, J. E., Rizo, J., Wu, J. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Roles+of+the+fission+yeast+UNC-13/Munc13+protein+Ync13+in+late+stages+of+cytokinesis.">Roles of the fission yeast UNC-13/Munc13 protein Ync13 in late stages of cytokinesis.</a> Molecular Biology of the Cell. 29 (19), 2259-2279 (2018).</li><li>Tay, Y. D., Leda, M., Goryachev, A. B., Sawin, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+and+global+Cdc42+guanine+nucleotide+exchange+factors+for+fission+yeast+cell+polarity+are+coordinated+by+microtubules+and+the+Tea1&#8211;Tea4&#8211;Pom1+axis.">Local and global Cdc42 guanine nucleotide exchange factors for fission yeast cell polarity are coordinated by microtubules and the Tea1&#8211;Tea4&#8211;Pom1 axis.</a> Journal of Cell Science. 131 (14), jcs216580 (2018).</li><li>Dudin, O., Bendez&#250;, F. O., Groux, R., Laroche, T., Seitz, A., Martin, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+formin-nucleated+actin+aster+concentrates+cell+wall+hydrolases+for+cell+fusion+in+fission+yeast.">A formin-nucleated actin aster concentrates cell wall hydrolases for cell fusion in fission yeast.</a> Journal of Cell Biology. 208 (7), 897-911 (2015).</li><li>Kurokawa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+secretory+cargo+transport+within+the+Golgi+apparatus.">Visualization of secretory cargo transport within the Golgi apparatus.</a> Journal of Cell Biology. , (2019).</li><li>Kraft, L. M., Lackner, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+conserved+mechanism+for+mitochondria-dependent+dynein+anchoring.">A conserved mechanism for mitochondria-dependent dynein anchoring.</a> Molecular Biology of the Cell. , (2019).</li></ol>

وليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.

التصوير بالخلايا الحية أثناء الداء الميتومي وداء الموهيوس يوفر الفرصة لدراسة الديناميات النووية دون تعطيل كبير فيزيولوجيا الخميرة الانشطارية أثناء الحصول على البيانات. ومع ذلك، يجب توخي الحذر لضمان نمو الخلايا إلى الكثافات المطلوبة خالية من الضغوط البيئية؛ وبالنسبة للداء الليهوسي، يتم تصوير الخلايا خلال وقت التمايز النهائي وليس في وقت مبكر جدا أو في وقت متأخر. الازدحام الخلوي الزائد، والمجاعة، ودرجات حرارة النمو غير المناسبة هي العوامل الشائعة التي تسهم في عمليات الرصد غير القابلة للاستنساخ. وبالإضافة إلى ذلك، خلال بناء سلالة، من المهم جدا لاختبار أن علامات الفلورسنت لا تتداخل مع وظائف الجينات المستهدفة ولا تؤثر على اللياقة البدنية الخلية عموما. قد يؤدي الفشل في فحص الأنماط الظاهرية للسلالات التي تحمل علامات الفلورسنت عن نتائج غير متناسقة وغير قابلة للمقارنة عبر الأنماط الجينية المماثلة.
على الرغم من أن منصات أجاروز المجهر بسيطة لتجميع، فإنها يمكن أن تشكل أيضا عقبة في الحصول على بيانات التصوير قيمة. إنشاء منصات أغاروز بسيط مثل وضع ثلاثة شرائح المجهر موازية لبعضها البعض، والاستغناء عن الأغروز المنصهر على الشريحة الوسطى، ووضع الشريحة التي تنقل الجزء العلوي من الشرائح الأخرى. ومع ذلك، فمن المفيد تجميع جهاز صانع الشريحة التي تسمح لتعديلات العرض لتصنيع مقاومة، ومنصات أغاروز محددة الوضع. صانع الشريحة بسيطة أن يعطي مرونة عرض وسادة يتكون من منصة (حامل نصائح ماصة أو مقاعد البدلاء)، واثنين من الشرائح المجهر، وشريط المختبر بمثابة آلية ضبط العرض وسادة (الشكل1A). سوف سمك وسادة الدقيق تعتمد على متطلبات وقت التصوير، العلامة التجارية agarose، درجة الحرارة، مانع التسرب coverslip، معدل التبخر، الخ. وبالتالي، من المهم معايرة نظام التصوير قبل الحصول على البيانات لزيادة التكرار التقني وتعزيزجودة التصوير بالخلايا الحية 1،2،3. سطح الوسادة، والصلابة، وتكوين ضرورية خلال الحصول على صورة لفترات طويلة. Agarose لديه الفلورة الخلفية منخفضة، ويمكن أن مصبوب بسهولة، وعند التركيز المناسب، ويقاوم تشوه الهيكلية بسبب التبخر. وعلاوة على ذلك، الجمع بين وسائل الإعلام الخميرة الانشطار مع أغاروز لا يضر جودة الصورة ويسمح للمراقبة الموسعة من دورات mitoses وmeiosis متعددة. أيضا، من المهم تجنب أي فقاعات الهواء للميكروسكوب الفاصل الزمني. داخل منصات أغاروز وداخل العينة، وجيوب الهواء توسيع مع مرور الوقت، مما تسبب في تحويل الخلايا وتعطيل الطائرات البؤرية. شريطة أن تنتشر الخلايا بكفاءة عن طريق دوران غطاء، يمكن للباحثين متابعة العمليات الميتومية عبر عدة أجيال والأحداث meiotic من الانصهار النووي إلى sporulation. صنع واختيار اللوحة المناسبة لتجارب التصوير يستغرق وقتا لإتقان، ولكن بمجرد تحقيقه، يمكن أن تسهم في ملاحظات المجهر مفيدة للغاية.
كما هو الحال مع طرق أخرى، المجهرية الخلية الحية ليست خالية من القيود التقنية. استخدام البروتينات ذات العلامات الفلورية يدخل الحدود إلى التجارب التي تحد من نطاق ما يمكن دراسته. تبييض الصور وسمية الصورة هي مشاكل نموذجية من اكتساب الصورة لفترات طويلة. ويمكن التصدي لها بعدم تعريض الخلايا لأطوال موجية قصيرة لفترة طويلة جدا أو في كثير من الأحيان. بالنسبة للتجارب التي تشمل GFP، CFP، YFP، mRFP، وDsRed، البروتينات الفلورية النموذجية المستخدمة في تصوير الخلايا الحية الخميرة الانشطارية، فمن الشائع استخدام 5-15٪ ضوء الإثارة و 100-500 مللي ثانية وقت التعرض للتجارب الروتينية. هذه المعلمات تتغير، ومع ذلك، وفقا لمتطلبات التجربة المحددة للباحث. وبالإضافة إلى ذلك، z-مداخن تتألف من 9-13 أقسام مع تباعد 0.5 درجة مئوية باستخدام هدف 60X يكفي لحل سمك خلية الخميرة الانشطارية. وعلاوة على ذلك، من المهم التأكد من أن علامات الفلورسنت لا تعطل التنظيم السليم أو وظيفة البروتينات المستهدفة أو تولد الأنماط الظاهرية. وبالتالي، من المستحسن بناء سلالات تحتوي على علامات فلورية وتقاربية مختلفة لنفس الجين المستهدف لدعم الملاحظات بوسائل مختلفة. وعلاوة على ذلك، تقع على عاتق الباحثين مسؤولية ضمان إعادة إنتاج البارامترات التجريبية عبر التجارب وأن تكون البيانات المجمعة ملائمة للتحليل في المراحل النهائية1و3. ولا يمكن لأي تكنولوجيا أن تحل محل الممارسة التي تم اختبارها على مر الزمن والمتمثلة في التحقق بدقة من النظم التجريبية عن طريق المراقبة الدقيقة والفحص الدقيق للخطية في الكشف عن إشارات الفلورسنت.
وأخيرا، من الأهمية بمكان تحليل البيانات المجهرية في الأشكال التي لا تعدل الصور الخام. توفر فيجي أدوات توثيق ممتازة لتتبع قياسات البيانات الخام وتسمح للباحثين بفحص معلمات الخلايا المختلفة في جلسة واحدة. هذه الميزات، فضلا عن ثروتها من الدروس على الانترنت وتغطية أدبية واسعة النطاق، وجعل فيجي أداة هامة لقياس وتحليل وتقديم بيانات التصوير بالخلايا الحية التي تصف الديناميات النووية للخميرة الانشطارية في الداء الميتوميووية وmeiosis.

يسمح الفحص المجهري للخلايا الحية للباحثين بفحص الديناميات النووية دون قتل خلايا الخميرة الانشطارية ويزيل الحاجة إلى المثبتات والبقع القاتلة. من الممكن ملاحظة استقرار وحركة وتوطين وتوقيت البروتينات ذات العلامات الفلورية التي تشارك في أحداث هامة مثل النسخ المتماثل للكروموسوم، وإعادة التركيب، والفصل، بالإضافة إلى الغشاء والخلايا الهيكلية الحركات. من خلال الحفاظ على صلاحية الخلية والكشف عن إشارة غير سامة، هناك الحد الأدنى من التسلل الفسيولوجية. عند تنفيذها بشكل صحيح، يمكن أن تقلل هذه الطريقة المجهرية من الآثار المربكة التي تنشأ عن المعالجة التقنية الموسعة أو من التفاعل الكيميائي الهامشي. وعلاوة على ذلك، خلال تجربة، يمكن للباحثين جعل الملاحظات ذات الصلة من خميرة الانشطار التغذية وحالات الإجهاد، وكفاءة التكاثر، والحالة المبرمجة التي تشير إلى معلمات التصوير غير المناسب أو علم وظائف الأعضاء الخلية غير طبيعية1 ،2،3.
يتميز الانقسام النووي والخلوي بالانقسام المنوّع والانقسام. في meiosis ، على عكس الداء الميتومي ، يتم خفض المحتوى الجيني إلى النصف حيث أن الخلايا الأم تؤدي إلى خلايا الابنة4. نظرًا لأن التصوير بالخلايا الحية يوفر بعدًا زمنيًا بالإضافة إلى العلاقة المكانية، يمكن فحص أعداد كبيرة من الخلايا في الوقت الحقيقي. وقد مكنت مجهرية الخلية الحية الباحثين لدراسة ديناميات التقسيمالنووي باستخدام علامات الفلورسنت للهيستون5 , cohesin الوحدات الفرعية6, microtubules7, centromeres8, kinetochores9, مكونات جسم القطب المغزل (SPB)10، وتلك من مجمع الركاب كروموسوم (CPC)11. خارج جهاز فصل الكروموسوم، التقط التصوير بالخلايا الحية أيضًا سلوك البروتينات الضرورية، ولكن لم يشارك مباشرة في فصل الكروموسومات. وقد ثبت أن وظيفة هذه البروتينات تؤثر على النسخ المتماثل، وإعادة تركيب الكروموسوم، والحركة النووية، وارتباط الكروموسوم بالأنابيب الدقيقة12،13،14. وقد أسهمت هذه الملاحظات في تحسين فهم الأحداث الخلوية التي لم تكن مكوناتها الوظيفية قابلة للفحص البيوكيميائي أو الجيني. مع التقدم الجديد في تكنولوجيا الفحص المجهري، سوف تنخفض القيود مثل ضعف الدقة، وتبييض الصور، والسمية الضوئية، والاستقرار التركيز، وبالتالي تسهيل أفضل في الوقت الحقيقي ملاحظات الديناميات النووية mitotic وmeiotic1، 2،3. Meiosis هو التحدي بشكل خاص لأنه مسار التمايز النهائي الذي يتطلب اهتماما وثيقا بالتوقيت.
والهدف من هذا البروتوكول هو تقديم طريقة بسيطة نسبيا لدراسة الديناميات النووية الخميرة الانشطارية في الوقت الحقيقي في الداء الميتوميوية وmeiosis. لتحقيق ذلك، من الضروري استخدام الخلايا التي لم تتعرض للإجهاد البيئي، وإعداد منصات أجاروز التي يمكن أن تصمد أمام التصوير لفترات طويلة، وجبل الخلايا في الكثافات التي تسهل تصور ديناميات خلية واحدة. وعلاوة على ذلك، فإن هذا البروتوكول يستخدم الخلايا التي تحمل بروتينات ذات علامات فلورية تعمل كعلامات مفيدة للحركية النووية (Hht1-mRFP أو Hht1-GFP)، والفصل الكروموسومي (Sad1-DsRed)، وديناميات الهيكل الخلوي (Atb2-mRFP)، والنسخ التنشيط في G1 / S (Tos4-GFP)، والاستقرار التماسك في meiosis (Rec8-GFP). كما تقدم هذه الطريقة علامات نووية ودورية إضافية (الجدولالأول)التي يمكن استخدامها في مجموعات مختلفة لمعالجة الأسئلة حول عمليات خلوية محددة. وعلاوة على ذلك، تُظهر أدوات فيجي الأساسية لمساعدة الباحثين على معالجة صور الخلايا الحية وتحليل أنواع مختلفة من البيانات. وتنبع قوة هذا النهج من استخدام الملاحظات في الوقت الحقيقي لديناميات البروتين، والتوقيت، والاستقرار لوصف العمليات التي هي جزء لا يتجزأ من التنفيذ السليم للميثوسيس وداء الميوسيس.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>60x Plan Apochromat objective lens</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>AMEP4694</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A-8751</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>7558B</td>
			<td>IB4917-10 kg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9539-500g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Belly Dancer rotator</td>
			<td>Stovall</td>
			<td>US Patent #4.702.610</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>B-4501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Boric acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>B-6768-5kg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2&#183;2H20,</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C3306-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citric acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C-0759</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Convolve 3D software plug-in</td>
			<td>OptiNav, Inc.</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CoolSnap HQ CCD camera</td>
			<td>Roper</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover slip</td>
			<td>VWR</td>
			<td>16004-302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CuSO4&#183;5H20,</td>
			<td>END</td>
			<td>CX-2185-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DeltaVision deconvolution fluorescence microscope</td>
			<td>GE Healthcare/Applied Precision</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diffraction PSF 3D software plug-in</td>
			<td>OptiNav, Inc.</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Edinburgh minimal medium (EMM) Notrogen</td>
			<td>Sunrise</td>
			<td>2023;1kg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FeCl2&#183;6H2O</td>
			<td>END</td>
			<td>FX9259-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G-7021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat plate</td>
			<td>Barnstead</td>
			<td>Thermo Lyne</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histidine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H8125-100g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Huygens deconvolution software</td>
			<td>SVI</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaris deconvolution software</td>
			<td>Bitplane</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Shell lab</td>
			<td>#3015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inositol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I-5125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iterative Deconvolve 3D software plug-in</td>
			<td>OptiNav, Inc.</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Mallinckvadt</td>
			<td>6858-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lanolin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>L7387-1kg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leucine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>L8912-100g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lysine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>L5626-500g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Malt extract (ME)</td>
			<td>MP</td>
			<td>4103-032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2&#183;6H20</td>
			<td>AMRESCO</td>
			<td>0288-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MetaMorph</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope slides</td>
			<td>VWR</td>
			<td>16004-422</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MnSO4,</td>
			<td>Mallinckvadt</td>
			<td>6192-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Molybdic acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M-0878</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na2S04</td>
			<td>Mallinckvadt</td>
			<td>8024-03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nicotinic acid,</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>N-4126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pantothenic acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P-5161</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin wax</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>s80119WX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pombe glutamate medium (PMG)</td>
			<td>Sunrise</td>
			<td>2060-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>softWorx v3.3 image processing software</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sporulation Medium powder</td>
			<td>Sunrise</td>
			<td>1821-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temperature controlled centrifuge</td>
			<td>Beckman</td>
			<td>Allwgra 6KR xentrifuge</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uracil</td>
			<td>AMRESCO</td>
			<td>0847-500g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vaseline</td>
			<td>Equaline</td>
			<td>F79658</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>yeast extract</td>
			<td>EMD</td>
			<td>1.03753.0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast extract plus supplements (YES)</td>
			<td>Sunrise</td>
			<td>2011-1kg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZnSO4&#183;7H2O</td>
			<td>J.T.Baker</td>
			<td>4382-04</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

examination of mitotic and meiotic fission yeast nuclear dynamics by fluorescence live-cell microscopy

التصوير بالخلايا الحية هو تقنية مجهرية تستخدم لفحص ديناميات الخلايا والبروتين في الخلايا الحية. هذه الطريقة التصوير ليست سامة، عموما لا تتداخل مع فسيولوجيا الخلية، ويتطلب الحد الأدنى من المناولة التجريبية. المستويات المنخفضة من التداخل التقني تمكن الباحثين من دراسة الخلايا عبر دورات متعددة من الداء الميتوميوتلاحظ من البداية إلى النهاية. باستخدام علامات الفلورسنت مثل بروتين الفلورسنت الأخضر (GFP) وبروتين الفلورسنت الأحمر (RFP)، يمكن للباحثين تحليل العوامل المختلفة التي تكون وظائفها مهمة لعمليات مثل النسخ، وتكرار الحمض النووي، والتماسك، والفصل العنصري. جنبا إلى جنب مع تحليل البيانات باستخدام فيجي (نسخة مجانية والأمثل ImageJ)، يقدم التصوير بالخلايا الحية طرق مختلفة لتقييم حركة البروتين، والتوطين، والاستقرار، والتوقيت، فضلا عن الديناميات النووية والفصل الكروموسومي. ومع ذلك، كما هو الحال مع أساليب الفحص المجهري الأخرى، يقتصر التصوير بالخلايا الحية بالخصائص الجوهرية للضوء، والتي تضع حداً لقوة الدقة عند التكبير العالي، كما أنها حساسة لتبييض الصور الضوئية أو السمية الضوئية على طول موجة عالية الترددات. ومع ذلك، مع بعض العناية، يمكن للمحققين تجاوز هذه القيود المادية عن طريق اختيار بعناية الظروف الصحيحة، وسلالات، وعلامات الفلورسنت للسماح للتصور المناسب للأحداث mitotic وmeiotic.

Watch this Scientific Journal Video about Examination of Mitotic and Meiotic Fission Yeast Nuclear Dynamics by Fluorescence Live-cell Microscopy at JoVE.com

Examination of Mitotic and Meiotic Fission Yeast Nuclear Dynamics by Fluorescence Live-cell Microscopy

هنا، نقدم التصوير بالخلايا الحية وهو طريقة مجهرية غير سامة تسمح للباحثين بدراسة سلوك البروتين والديناميات النووية في خلايا الخميرة الانشطارية الحية أثناء الداء الميتوميوميس.

فحص الديناميات النووية الخميرة الانشطارية الميتومية وMeiotic عن طريق الفلورة الخلية الحية المجهرية

Live-cell imaging is a microscopy technique used to examine cell and protein dynamics in living cells. This imaging method is not toxic, generally does ...

يسمح المجهر الحي للخلايا للباحثين بدراسة الديناميكيات النووية للخميرة الانشطارية في الانقسام وmiiosis في الوقت الحقيقي. قوة هذه الطريقة تأتي من دراسة العمليات النووية في الخلايا الحية في ظل الظروف الفسيولوجية العادية التي تلغي الحاجة إلى تثبيتات سامة والبقع. تتناول هذه التقنية الأسئلة المتعلقة بتوقيت البروتين، والاستقرار، والتنقل التي قد لا تكون قابلة للتلاعب الجيني أو البيوميكانيكية.من الأهمية بمكان أن تولي اهتماما وثيقا لصحة ولياقة خلايا الخميرة الانشطار قبل التصوير. دائماً فحص مورفولوجيا وخصائص النمو لضمان اتساق النتائج عبر التجارب. هذا البروتوكول يظهر طريقة بسيطة نسبيا لإعداد الشرائح المجهر أنه عندما يتقن بشكل صحيح يمكن أن تعزز الاتساق والتكرار من التصوير الخلية الحية لفترات طويلة.للبدء في التقاط المادة الخلية من التبريد استيقظ لوحة، خط على لوحات نعم، واحتضان لهم في 25 درجة مئوية أو 32 درجة مئوية اعتمادا على نمط الجينوم الخميرة لإيقاظ سلالات الخميرة الانشطار من الحفاظ على المبرد. ثم استخدام حلقة معقمة لاختيار الخلايا من المستعمرات الفردية في سلالات الخميرة الانشطار awakened وتطعيمها في أنابيب الاختبار التي تحتوي على ثلاثة ملليلترات من وسيط السائل نعم. ضع الأنابيب في شاكر عند 150 إلى 220 دورة في الدقيقة لتنمو عند 25 أو 32 درجة مئوية بين عشية وضحاها إلى مرحلة التسجيل المتأخر مع قراءة الكثافة البصرية المرغوبة من 0.7 إلى 1.0.نقل 10 ميكرولترات من الثقافة إلى شريحة المجهر. وضع غطاء على ووضعه تحت المجهر للتحقق من مورفولوجيا الخلايا السليمة وحالة التغذية. لإعداد شريحة المجهر لتحليل الانقسام أو الانقسام أو أول إضافة غرامين من agarose في قارورة 500 ملليلتر تحتوي على 100 ملليلتر من إما الحد الأدنى من المتوسط بالإضافة إلى ملاحق ل mitosis أو وسيط sporulating السائل لداء الزفير.سخني محلول agarose في فرن ميكروويف بنسبة 60٪ بزيادات 10 ثوان أو ضع القارس في حمام مائي 55 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. دوامة الحل لضمان ذوبان فعالة. قم بإعداد إثنين من شرائح المجهر على حامل رأس ماص مع الشريحة العلوية التي تقع على رصتين من شريط المختبر في كلا الطرفين كدعم لصنع شكل متقاطع.اضبط المسافة بين الشرائح إلى أكثر من مليمترين حتى تكوّن لوحة سميكة في الخطوات التالية للتصوير المطول. بعد تبريد agarose المنصهر لمدة دقيقة واحدة في درجة حرارة الغرفة، وإزالة الشريحة العلوية واستخدام طرف ماصة تتحمل واسعة للاستغناء عن 50 إلى 100 ميكروليترس على الشريحة السفلي لجعل بقعة. قبل أن يبرد agarose وضع الشريحة العليا على القمة لتوليد منصة انتشار من حوالي واحد و 1/2 إلى اثنين من سنتيمتر في القطر.التصوير الأمثل للخلايا الحية أمر بالغ الأهمية بالنسبة لخطوات معالجة البيانات اللاحقة. تأكد من القضاء على أي من الحلي الهوائية في agarose المنصهرة وإنشاء لوحة رقيقة لفترات التصوير أطول من أربع ساعات. لفحص الأحداث الميتوتك تنمو الخلايا من الثقافات بداية في إما EMM السائل أو PMG بالإضافة إلى ملاحق بين عشية وضحاها.نقل ملليلتر واحد من الثقافة إلى cuvette، وقياس على مقياس الطيفي في الطول الموجي من 595 نانومتر. ويعتبر نمو الخلية منتصف مرحلة السجل عندما تصل الكثافة البصرية 0.4. ثم جهاز طرد مركزي ملليلتر واحد من تعليق الخلية في 1، 375 مرات ز لمدة دقيقة واحدة.إزالة عظمى و resuspend بيليه الخلية في الحد الأدنى المتوسطة بالإضافة إلى ملاحق إلى حجم النهائي من 100 ميكرولترات. لصورة الأحداث meiotic تنمو الخلايا من الثقافات بداية في الحد الأدنى من المتوسطة بالإضافة إلى ملاحق بين عشية وضحاها. ويعتبر نمو الخلايا مرحلة تسجيل متأخرة عندما تكون الكثافة البصرية عند 595 نانومتر بين 0.7 و 1.بعد ذلك ، من الثقافات سجل في وقت متأخر الحصول على 500 microliters من كل سلالة نوع ميت ، H السلبية وH إيجابية ، والجمع بين لجعل تعليق خلية ملليلتر واحد. أجهزة الطرد المركزي الخلايا في 1، 375 مرات ز لمدة دقيقة واحدة. إزالة افرنح و resuspend بيليه في ملليلتر واحد من استخراج مالتوس السائل.كرر غسل استخراج المالتوز ثلاث مرات أخرى لضمان إزالة المغذيات فعالة. بعد آخر استخراج maltose غسل resuspend الخلايا في ملليلتر واحد من استخراج مالتوس ونقل الخليط إلى قارورة 50 ملليلتر تحتوي على تسعة ملليلتر من استخراج المالتوز. احتضان لمدة 12 إلى 16 ساعة في 22 إلى 25 درجة مئوية على سرعة دوران الحد الأدنى بين 50 و 100 دورة في الدقيقة.ظهور العديد من كتل الخميرة الانشطار جولة الناتجة عن وفرة الذاتي flocculation يشير إلى التزاوج كفاءة. بعد ذلك، خذ عينة من ميلليلتر واحد من ثقافة التزاوج والطرد المركزي في 1، 375 مرة ز لمدة دقيقة واحدة. إزالة 750 ميكرولترات من السوبر و resuspend الخلايا في ناظر المتبقية.دوامة بقوة لمدة خمس ثوان لتعطيل كتل. الاستغناء 20 ميكرولترات إما تعليق الخلية الميتة أو meiotic على وسادة agarose 2٪. إزالة أي وسيلة زائدة عن طريق عكس الشريحة ووضعها على الجزء العلوي من منشفة ورقية خالية من الوبر لمدة ثانيتين إلى ثلاث ثوان.اقلب الشريحة وضع غطاء زجاجي بلطف على الجزء العلوي من اللوحة، مما يضمن عدم توليد فقاعات الهواء. لإنشاء خلية أحادية الطبقات تدوير غطاء في اتجاه عقارب الساعة مع السبابة لواحدة بدوره الكامل لخلايا الانقسام أو اثنين من المنعطفات الكاملة لخلايا ميوز. تأكد من أن المادة الخلية يتفرق عبر لوحة agarose السماح لفصل أفضل من الخلايا المفردة أو asci.مع المعونة من عصا خشبية صغيرة الاستغناء عن تسرب الهيدروكربون المنصهر على طول حواف الغطاء لختم كل وسادة agarose. مرة واحدة يتم ختم لوحة agarose وضعه على مرحلة المجهر. التبديل على غرفة درجة الحرارة وتعيينه إلى درجة الحرارة المطلوبة.وضع لوحة مع منشفة ورقية مبللة في الغرفة للسيطرة على الرطوبة من نظام المجهر. اتركه اِهزِم لمدة 10 إلى 15 دقيقة في ظروف التصوير المناسبة. وهذا يسمح لأي فقاعات الهواء المتبقية لتبديد وأي التحولات agarose في اللحظة الأخيرة أن يحدث.استخدم الهدف 40X للعثور على حقول الرؤية المناسبة للصورة. قم بالتبديل إلى الهدف 60X لبدء الحصول على البيانات. في البرنامج الذي يتحكم وظيفة المجهر اختيار مجموعات مرشح المجهر التي تطابق أفضل الفلوروفوريس تحت المراقبة.ضبط الأطوال الموجية الإثارة لتتناسب مع الفلوروفورات المستخدمة، واستخدام أدنى قوة الإثارة التي تنتج إشارة متسقة، واستخدام أوقات التعرض من أربع إلى ثماني ساعات لتوليد بيانات التصوير مقبولة ولكن قابلة للقياس الكمي وقابلة للتكرار. جمع ما لا يقل عن ست نقاط وقت الاكتساب كل ساعة. في برنامج جمع الصور اختيار قناة واحدة على الأقل fluorescence من خلالها للحصول على البيانات وتوظيف Z- الأسهم تتألف من 13 قسما مع 0.5 ميكرومتر التباعد.في فيجي تحميل البرمجيات صورة deconvolved عن طريق تحديد ميزة Bio-Formats Importer ضمن القائمة المكونات الإضافية. في النافذة المنبثقة خيارات الاستيراد، حدد Hyperstack، وضع اللون الافتراضي، تحقق من المقياس التلقائي واضغط على الزر موافق. تأكد من أن النافذة المعروضة تحتوي على العدد الصحيح من قنوات الفلوريسنس والأُطر الزمنية عن طريق التمرير الجانبي على القضبان ذات الصلة في الأسفل.حفظ كملف Tiff الذي لا ضغط البيانات. ثم تحت القائمة تحليل استخدام خيار تعيين القياسات لاختيار معلمات مختلفة. على سبيل المثال: المساحة، الحد الأدنى من قيمة الرمادي الأقصى، الكثافة المتكاملة، متوسط قيمة الرمادي، متوسط، موضع المكدس، محيط، وتسمية العرض.حدد اللون وانقر على أداة القنوات. في نافذة القنوات المنبثقة تحقق من قناة اللون التي سيتم قياس شدتها أو المنطقة الخاصة بها. حدد صورة، ثم اكتب وانقر على 32 بت.اختر ميزات الضبط والعتبة ضمن قائمة الصورة. حدد مربع الخلفية الداكنة، وحدد الطريقة الافتراضية، ثم اختر الأحمر لتتراكب إشارات الاهتمام. استخدم أداة العصا لتمييز كل بنية ذات أهمية واضغط على الحرف T على لوحة المفاتيح لإضافة عائد الاستثمار المحدد إلى نافذة مدير عائد الاستثمار المنبثقة.بعد ذلك، افتح مجلد ROI المضغوط لتحميل مدير عائد الاستثمار وانقر على كل معرف عائد الاستثمار في اللوحة الجانبية اليمنى. حدد قياس من القائمة تحليل وكرر هذا الأمر على كل معرف عائد الاستثمار لتحديد الكائنات ذات الأهمية في جميع شرائح كومة الصور. حفظ النتائج كملف CSV للتحليل الإحصائي.في هذه الدراسة إذا الخلايا تجويع بسبب نقص المغذيات أو فرط النمو، فإنها تظهر vacuoles الزائدة وانخفاض حجم الخلية. تظهر الخلايا اللوغاريتمية تكرار الحمض النووي النشط وتقسيم الخلايا، وكذلك التعبير النووي Tos4-GFP وفصل ساد1-DsRed. الفشل في التزاوج ، كما هو الحال عندما لا تكون الخلايا جائعة بما فيه الكفاية من النيتروجين ، سيمنعها من دخول الداء الوسيم.يظهر زوج من الخلايا الانشطارية التي تخضع للكاروغامي. و يعزز التزاوج القوي لتعليق خلايا التزاوج التفاعل بين خلية وخلية، وبالتالي يشير إلى نجاح التزاوج والحث الويني الفعال. Zygotic asci اتخاذ أشكال متعددة، بما في ذلك الأشكال الخلوية متعرج والموز.في الانقسام مع انتقال الخلايا من ميتافاتاز إلى التيلواز، ينطوي التغيير الأول على انكماش الحجم النووي في ميتافالوز، في حين يظهر الثاني انقسام النواة أثناء الphase. وإلى جانب مشاركة بعض ديناميات الفصل مع الخلايا الميتوطية، تظهر الخلايا النانوية تذبذباً نووياً أثناء إعادة التركيب المتماثلة المتجانسة، والمزيد من الحد من النيوكليوسيدات في نهاية II.It الphase هي مسؤولية الباحثين لضمان إمكانية استنساخ بارامترات التجربة عبر التجارب، وأن البيانات التي تم جمعها صالحة للتحليل في المصب. وقد سمح التصوير الحي للخلايا للمحققين بفحص دقيق لميكانيكا الانقسام النووي في الانقسام الانقسامي وداء اليونيوس.كما العلامات الفلورسنت وقدرات المجهر تحسين عدد ونوع العمليات التي يمكن أن نلاحظ زيادة.

Research

JoVE Journal

Biology

Live Cell Imaging of F-actin Dynamics via Fluorescent Speckle Microscopy (FSM)

Live Cell Imaging of F-actin Dynamics via Fluorescent Speckle Microscopy FSM

يعيش التصوير خلية من طراز F - أكتين حيوية عن طريق الميكروسكوب الرقطة نيون (FSM)

In this protocol we describe the use of Fluorescent Speckle Microscopy (FSM) to capture high-resolution images of actin dynamics in PtK1 cells. A unique ...

Time-lapse Imaging of Mitosis After siRNA Transfection

الوقت الفاصل بين التصوير من الانقسام الميتوزي بعد ترنسفكأيشن سيرنا

Changes in cellular organization and chromosome dynamics that occur during mitosis are tightly coordinated to ensure accurate inheritance of genomic and ...

Quantitative Live Cell Fluorescence-microscopy Analysis of Fission Yeast

الكمية خلية حية الإسفار - المجهري تحليل الخميرة الانشطار

Several microscopy techniques are available today that can detect a specific protein within the cell. During the last decade live cell imaging using ...

Acquiring Fluorescence Time-lapse Movies of Budding Yeast and Analyzing Single-cell Dynamics using GRAFTS

الحصول على الإسفار الوقت الفاصل بين الأفلام من الخميرة في مهدها وتحليل ديناميات وحيدة الخلية باستخدام الطعوم

Fluorescence time-lapse microscopy has become a powerful tool in the study of many biological processes at the single-cell level. In particular, movies ...

Examination of Drosophila Larval Tracheal Terminal Cells by Light Microscopy

Examination of Drosophila Larval Tracheal Terminal Cells by Light Microscopy

فحص<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; اليرقات الخلايا الطرفية الرغامي بواسطة المجهر الضوئي

Cell shape is critical for cell function. However, despite the importance of cell morphology, little is known about how individual cells generate specific ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

في فيفو تتبع 4 الأبعاد للالجذعية المكونة للدم والسلف الكبار في خلايا الفأر قبي نخاع العظم

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Microscopy of Fission Yeast Sexual Lifecycle

المجهر من دورة حياة الجنسية الانشطار الخميرة

The fission yeast Schizosaccharomyces pombe has been an invaluable model system in studying the regulation of the mitotic cell cycle progression, the ...

Spatiotemporal Analysis of Cytokinetic Events in Fission Yeast

تحليل الزمانية المكانية من Cytokinetic الأحداث في الخميرة الانشطار

Cytokinesis, the final step in cell division is critical for maintaining genome integrity. Proper cytokinesis is important for cell differentiation and ...

Live Cell Fluorescence Microscopy to Observe Essential Processes During Microbial Cell Growth

يعيش خلية Fluorescence مجهرية لمراقبة العمليات الأساسية أثناء نمو الخلايا الميكروبية

Core cellular processes such as DNA replication and segregation, protein synthesis, cell wall biosynthesis, and cell division rely on the function of ...

Live Cell Imaging to Assess the Dynamics of Metaphase Timing and Cell Fate Following Mitotic Spindle Perturbations

التصوير بالخلايا الحية لتقييم ديناميات توقيت الطور ومصير الخلية بعد اضطرابات المغزل الميتوتيك

Live cell time-lapse imaging is an important tool in cell biology that provides insight into cellular processes that might otherwise be overlooked, ...