Name: quantification of atherosclerosis in mice
Uploaded: 2019-06-12T15:00:00
Duration: 6 min 59 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Atherosclerosis in Mice at JoVE.com

نشكر جميع الأعضاء السابقين في وحدة أبحاث القلب والأوعية الدموية التجريبية في غوران ك هانسون التي ساعدت في تطوير هذا البروتوكول على مدى ربع القرن الماضي. ونحن ممتنون بصفة خاصة للمساهمات التي قدمها أنتونيو نيكوليتي، وشينغهوا تشو، وآنا كارين روبرتسون، وإينغر بودين. وقد تم دعم هذا العمل بمنحة المشروع 06816 ودعم Linnaeus 349-2007-8703 من مجلس البحوث السويدي، ومن خلال منح من مؤسسة القلب والرئة السويدية، ومجلس مقاطعة ستوكهولم، ومؤسسة البروفيسور نانا سفارتز، ولو وهانز أوسترمان مؤسسة البحوث الطبية، مؤسسة بحوث معهد كارولينسكا ومؤسسة أمراض الشيخوخة في معهد كارولينسكا.

<ol>
	<li>Lozano, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+and+regional+mortality+from+235+causes+of+death+for+20+age+groups+in+1990+and+2010:+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+Study+2010.">Global and regional mortality from 235 causes of death for 20 age groups in 1990 and 2010: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2010.</a> Lancet. 380 (9859), 2095-2128 (2012).</li><li>Gistera, A., Hansson, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+immunology+of+atherosclerosis.">The immunology of atherosclerosis.</a> Nature Reviews Nephrology. 13 (6), 368-380 (2017).</li><li>Hansson, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation,+atherosclerosis,+and+coronary+artery+disease.">Inflammation, atherosclerosis, and coronary artery disease.</a> New England Journal of Medicine. 352 (16), 1685-1695 (2005).</li><li>Williams, K. J., Tabas, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+response-to-retention+hypothesis+of+early+atherogenesis.">The response-to-retention hypothesis of early atherogenesis.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 15 (5), 551-561 (1995).</li><li>Pentikainen, M. O., Oorni, K., Ala-Korpela, M., Kovanen, P. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modified+LDL+-+trigger+of+atherosclerosis+and+inflammation+in+the+arterial+intima.">Modified LDL - trigger of atherosclerosis and inflammation in the arterial intima.</a> Journal of Internal Medicine. 247 (3), 359-370 (2000).</li><li>Ruuth, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Susceptibility+of+low-density+lipoprotein+particles+to+aggregate+depends+on+particle+lipidome,+is+modifiable,+and+associates+with+future+cardiovascular+deaths.">Susceptibility of low-density lipoprotein particles to aggregate depends on particle lipidome, is modifiable, and associates with future cardiovascular deaths.</a> European Heart Journal. 39 (27), 2562-2573 (2018).</li><li>Nakashima, Y., Raines, E. W., Plump, A. S., Breslow, J. L., Ross, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Upregulation+of+VCAM-1+and+ICAM-1+at+atherosclerosis-prone+sites+on+the+endothelium+in+the+ApoE-deficient+mouse.">Upregulation of VCAM-1 and ICAM-1 at atherosclerosis-prone sites on the endothelium in the ApoE-deficient mouse.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 18 (5), 842-851 (1998).</li><li>Goldstein, J. L., Ho, Y. K., Basu, S. K., Brown, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Binding+site+on+macrophages+that+mediates+uptake+and+degradation+of+acetylated+low+density+lipoprotein,+producing+massive+cholesterol+deposition.">Binding site on macrophages that mediates uptake and degradation of acetylated low density lipoprotein, producing massive cholesterol deposition.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 76 (1), 333-337 (1979).</li><li>Paigen, B., Morrow, A., Brandon, C., Mitchell, D., Holmes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variation+in+susceptibility+to+atherosclerosis+among+inbred+strains+of+mice.">Variation in susceptibility to atherosclerosis among inbred strains of mice.</a> Atherosclerosis. 57 (1), 65-73 (1985).</li><li>Russell, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origins+and+history+of+mouse+inbred+strains:+contributions+of+Clarence+Cook+Little.">Origins and history of mouse inbred strains: contributions of Clarence Cook Little.</a> Origins of Inbred Mice, Morse, HC, eds. (Academic Press, NY). , 33-43 (1978).</li><li>Waterston, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+sequencing+and+comparative+analysis+of+the+mouse+genome.">Initial sequencing and comparative analysis of the mouse genome.</a> Nature. 420 (6915), 520-562 (2002).</li><li>Gistera, A., Ketelhuth, D. F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid-driven+immunometabolic+responses+in+atherosclerosis.">Lipid-driven immunometabolic responses in atherosclerosis.</a> Current Opinion in Lipidology. 29 (5), 375-380 (2018).</li><li>Maganto-Garcia, E., Tarrio, M., Lichtman, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+atherosclerosis.">Mouse models of atherosclerosis.</a> Current Protocols in Immunology. Chapter 15, (2012).</li><li>Plump, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Severe+hypercholesterolemia+and+atherosclerosis+in+apolipoprotein+E-deficient+mice+created+by+homologous+recombination+in+ES+cells.">Severe hypercholesterolemia and atherosclerosis in apolipoprotein E-deficient mice created by homologous recombination in ES cells.</a> Cell. 71 (2), 343-353 (1992).</li><li>Zhang, S. H., Reddick, R. L., Piedrahita, J. A., Maeda, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+hypercholesterolemia+and+arterial+lesions+in+mice+lacking+apolipoprotein+E.">Spontaneous hypercholesterolemia and arterial lesions in mice lacking apolipoprotein E.</a> Science. 258 (5081), 468-471 (1992).</li><li>Ishibashi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypercholesterolemia+in+low+density+lipoprotein+receptor+knockout+mice+and+its+reversal+by+adenovirus-mediated+gene+delivery.">Hypercholesterolemia in low density lipoprotein receptor knockout mice and its reversal by adenovirus-mediated gene delivery.</a> Journal of Clinical Investigation. 92 (2), 883-893 (1993).</li><li>Ishibashi, S., Goldstein, J. L., Brown, M. S., Herz, J., Burns, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Massive+xanthomatosis+and+atherosclerosis+in+cholesterol-fed+low+density+lipoprotein+receptor-negative+mice.">Massive xanthomatosis and atherosclerosis in cholesterol-fed low density lipoprotein receptor-negative mice.</a> Journal of Clinical Investigation. 93 (5), 1885-1893 (1994).</li><li>Ketelhuth, D. F., Gistera, A., Johansson, D. K., Hansson, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cell-based+therapies+for+atherosclerosis.">T cell-based therapies for atherosclerosis.</a> Current Pharmaceutical Design. 19 (33), 5850-5858 (2013).</li><li>Skalen, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subendothelial+retention+of+atherogenic+lipoproteins+in+early+atherosclerosis.">Subendothelial retention of atherogenic lipoproteins in early atherosclerosis.</a> Nature. 417 (6890), 750-754 (2002).</li><li>Boren, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+low+density+lipoprotein+receptor-binding+site+in+apolipoprotein+B100+and+the+modulation+of+its+binding+activity+by+the+carboxyl+terminus+in+familial+defective+apo-B100.">Identification of the low density lipoprotein receptor-binding site in apolipoprotein B100 and the modulation of its binding activity by the carboxyl terminus in familial defective apo-B100.</a> Journal of Clinical Investigation. 101 (5), 1084-1093 (1998).</li><li>Sanan, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low+density+lipoprotein+receptor-negative+mice+expressing+human+apolipoprotein+B-100+develop+complex+atherosclerotic+lesions+on+a+chow+diet:+no+accentuation+by+apolipoprotein(a).">Low density lipoprotein receptor-negative mice expressing human apolipoprotein B-100 develop complex atherosclerotic lesions on a chow diet: no accentuation by apolipoprotein(a).</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 95 (8), 4544-4549 (1998).</li><li>Gistera, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vaccination+against+T-cell+epitopes+of+native+ApoB100+reduces+vascular+inflammation+and+disease+in+a+humanized+mouse+model+of+atherosclerosis.">Vaccination against T-cell epitopes of native ApoB100 reduces vascular inflammation and disease in a humanized mouse model of atherosclerosis.</a> Journal of Internal Medicine. , (2017).</li><li>Johnson, J. L., Jackson, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atherosclerotic+plaque+rupture+in+the+apolipoprotein+E+knockout+mouse.">Atherosclerotic plaque rupture in the apolipoprotein E knockout mouse.</a> Atherosclerosis. 154 (2), 399-406 (2001).</li><li>Calara, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+plaque+rupture+and+secondary+thrombosis+in+apolipoprotein+E-deficient+and+LDL+receptor-deficient+mice.">Spontaneous plaque rupture and secondary thrombosis in apolipoprotein E-deficient and LDL receptor-deficient mice.</a> The Journal of Pathology. 195 (2), 257-263 (2001).</li><li>Caligiuri, G., Levy, B., Pernow, J., Thoren, P., Hansson, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myocardial+infarction+mediated+by+endothelin+receptor+signaling+in+hypercholesterolemic+mice.">Myocardial infarction mediated by endothelin receptor signaling in hypercholesterolemic mice.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 96 (12), 6920-6924 (1999).</li><li>Daugherty, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recommendation+on+Design,+Execution,+and+Reporting+of+Animal+Atherosclerosis+Studies:+A+Scientific+Statement+From+the+American+Heart+Association.">Recommendation on Design, Execution, and Reporting of Animal Atherosclerosis Studies: A Scientific Statement From the American Heart Association.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 37 (9), (2017).</li><li>Paigen, B., Morrow, A., Holmes, P. A., Mitchell, D., Williams, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assessment+of+atherosclerotic+lesions+in+mice.">Quantitative assessment of atherosclerotic lesions in mice.</a> Atherosclerosis. 68 (3), 231-240 (1987).</li><li>Purcell-Huynh, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+expressing+high+levels+of+human+apolipoprotein+B+develop+severe+atherosclerotic+lesions+in+response+to+a+high-fat+diet.">Transgenic mice expressing high levels of human apolipoprotein B develop severe atherosclerotic lesions in response to a high-fat diet.</a> Journal of Clinical Investigation. 95 (5), 2246-2257 (1995).</li><li>Nicoletti, A., Kaveri, S., Caligiuri, G., Bariety, J., Hansson, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunoglobulin+treatment+reduces+atherosclerosis+in+apo+E+knockout+mice.">Immunoglobulin treatment reduces atherosclerosis in apo E knockout mice.</a> Journal of Clinical Investigation. 102 (5), 910-918 (1998).</li><li>Gistera, A., Ketelhuth, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunostaining+of+Lymphocytes+in+Mouse+Atherosclerotic+Plaque.">Immunostaining of Lymphocytes in Mouse Atherosclerotic Plaque.</a> Methods in Molecular Biology. 1339, 149-159 (2015).</li><li>Gistera, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transforming+growth+factor-beta+signaling+in+T+cells+promotes+stabilization+of+atherosclerotic+plaques+through+an+interleukin-17-dependent+pathway.">Transforming growth factor-beta signaling in T cells promotes stabilization of atherosclerotic plaques through an interleukin-17-dependent pathway.</a> Science Translational Medicine. 5 (196), (2013).</li><li>Gistera, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-Density+Lipoprotein-Reactive+T+Cells+Regulate+Plasma+Cholesterol+Levels+and+Development+of+Atherosclerosis+in+Humanized+Hypercholesterolemic+Mice.">Low-Density Lipoprotein-Reactive T Cells Regulate Plasma Cholesterol Levels and Development of Atherosclerosis in Humanized Hypercholesterolemic Mice.</a> Circulation. 138 (22), 2513-2526 (2018).</li><li>Daugherty, A., Whitman, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+atherosclerosis+in+mice.">Quantification of atherosclerosis in mice.</a> Methods in Molecular Biology. 209, 293-309 (2003).</li><li>Baglione, J., Smith, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assay+for+mouse+atherosclerosis+in+the+aortic+root.">Quantitative assay for mouse atherosclerosis in the aortic root.</a> Methods in Molecular Biology. 129, 83-95 (2006).</li><li>Schiller, N. K., Kubo, N., Boisvert, W. A., Curtiss, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+gamma-irradiation+and+bone+marrow+transplantation+on+atherosclerosis+in+LDL+receptor-deficient+mice.">Effect of gamma-irradiation and bone marrow transplantation on atherosclerosis in LDL receptor-deficient mice.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 21 (10), 1674-1680 (2001).</li><li>Naghavi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+vulnerable+plaque+to+vulnerable+patient:+a+call+for+new+definitions+and+risk+assessment+strategies:+Part+I.">From vulnerable plaque to vulnerable patient: a call for new definitions and risk assessment strategies: Part I.</a> Circulation. 108 (14), 1664-1672 (2003).</li><li>Seijkens, T. T. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+CD40-Induced+TRAF6+Signaling+in+Macrophages+Reduces+Atherosclerosis.">Targeting CD40-Induced TRAF6 Signaling in Macrophages Reduces Atherosclerosis.</a> Journal of the American College of Cardiology. 71 (5), 527-542 (2018).</li></ol>

وليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.

أمراض القلب والأوعية الدموية هو القاتل الرئيسي في العالم وهناك حاجة إلى قياسات وقائية جديدة2. نماذج الماوس من المرض توفر منصة شاملة للتحقيق في الفيزيولوجيا المرضية والعلاجات التجريبية13. يمكن الاعتماد عليها حجم الآفة القياس الكمي ضروري لهذا النهج. غير أن أساليب القياس الكمي تختلف بين المختبرات. التوحيد والتحسين كانت عملية مستمرة منذ 198013،27،33،34. ظهرت جذور الأبهر كالموقع الأكثر شعبية لتحديد كمية تصلب الشرايين التجريبية. تتيح المقاطع العرضية من اللويحات مقارنة حجم البلاك بين المجموعات. ويفضل En الاستعدادات الوجه للقياس الكمي الآفة في قطاعات أكبر من الأبهر. طريقة أون الوجه تصور كمية البلاك وتمكن من القياس الكمي لتغطية منطقة البلاك، ولكن لا تأخذ سمك البلاك في الاعتبار. وتُدعم الأهمية البيولوجية للاختلافات الملاحظة بنتائج متسقة في مواقع مختلفة في شجرة الأوعية الدموية. تقييم تطوير تصلب الشرايين في مواقع مختلفة يعالج الآثار المحتملة للموقع. يمكن تقييم تأثير الخلايا المكونة للدم المزروعة على تطور تصلب الشرايين في اللاوسير ة فرط الكوليسترول -/- تشيميراس. ومع ذلك، يؤثر التشعيع لكامل الجسم على عملية تصلب الشرايين مع تأثيرات محددة للموقع. يتم تطوير الآفات التصلب الشرايين أكثر بروزا في الجذر الأبهري ، في حين لوحظ انخفاض تطور الآفة في الأقواس الأبهرية35.
الأهم من ذلك، ليس فقط حجم الآفة يحتاج إلى معالجة في دراسات تصلب الشرايين التجريبية. تكوين الآفة هو أيضا معلمة رئيسية. وقد ارتبطت العديد من ملامح البلاك مع مظاهر المرض في البشر36. المقطع التسلسلي للجذر الأبهري يترك عدة أقسام متاحة لتحليل دقيق لتكوين البلاك. يتميز تمزق البلاك في البشر بغطاء ليفي رفيع مع عدد قليل من خلايا العضلات الملساء، ومحتوى الكولاجين المتناثر وعلامات الالتهاب في لويحات36. على الرغم من أن تمزق البلاك هو حدث نادر في نماذج الماوس من تصلب الشرايين، وعلامات لاستقرار البلاك هي مفيدة لتقييم. يمكن للنهج المترجمة تأكيد النتائج الميكانيكية من نماذج الماوس وكشف السمات الهامة للأمراض البشرية31. يمكن تحديد الحالة الالتهابية لللويحات تصلب الشرايين عن طريق تلطيخ الكيمياء المناعية من VCAM-1، MHC الفئة الثانية، الضامة، والخلايا الليمفاوية30. بعض البروتوكولات استخدام المقاطع الطولية في الطائرة الإكليلية من القوس الأبهري أو الشريان الصدري لقياس حجم الآفة تصلب الشرايين وتكوين37. ومع ذلك، يترك هذا الأسلوب البديل مقاطع قليلة فقط لتحليلها، مما يحد من تطبيقاته.
وتتمثل الخطوة الحاسمة الأولية في هذا البروتوكول في القدرة على حصاد الأبهر بكفاءة. التنسيق بين اليد والعين تحت المجهر يتطلب الممارسة وهو أمر بالغ الأهمية لكل من الاستئصال الجزئي والغزل اللاحق للقوس الأبهري. الخطوة الهامة التالية في هذا البروتوكول هي مجموعة المقاطع التسلسلية من الجذر الأبهري. وينبغي جمع ثمانين قسما ً متتالياً لكل فأر، الأمر الذي يتطلب التركيز والصبر على حد سواء. ويمكن أن تؤدي الكفاءة المنهجية إلى تسريع العمليات الموصوفة إلى حد كبير. ومع ذلك، لا يزال تحديد كمية الآفات تصلب الشرايين مهمة تستغرق وقتا طويلا. قد تسهل التكنولوجيا الجديدة والمناولة الآلية والتصوير الحيواني الصغير التحديد الكمي لتصلب الشرايين التجريبية في المستقبل. تطور تصلب الشرايين بطيء ومعظم البروتوكولات التجريبية في نماذج الماوس يستغرق أكثر من أربعة أشهر لإكمال13. لذلك، يجب جمع الأبهر بطريقة مثلى في نقاط نهاية الدراسة. يوفر هذا البروتوكول دليلشامل لحصاد الأبهر بكفاءة، كما أن المعالجة المقترحة تعد الأبهر للاستخدام متعدد الأغراض بما في ذلك تحديد كمية الآفات في الجذر الأبهري والقوس الأبهري والشريان البعية. نأمل أن البروتوكول يمكن أن تقلل من التباين التجريبي، وتعزيز موثوقية النتائج، ويؤدي إلى نتائج من شأنها أن تمهد الطريق لعلاجات جديدة ضد تصلب الشرايين.

أمراض القلب والأوعية الدموية هي السبب الرئيسي للوفاة في العالم مع أمراض القلب الإقفارية والسكتة الدماغية التي تمثل واحدة من كل أربع وفيات1. تحدث معظم الحالات بسبب تصلب الشرايين، وهو مرض يتميز بتراكم بطيء لللويحات المحملة بالدهون مع علامات الالتهاب المزمن في الشرايين الكبيرة والمتوسطة الحجم2. يبقى المرض عادة دون أن يلاحظها أحد على مدى عدة عقود حتى تمزق أو تآكل البلاك يثير تجلط الشرايين الذي يؤدي إلى تلف الأنسجة الإقفارية.
يتكون الشريان الطبيعي من طبقة إنتيما مع الخلايا البطانية وخلايا العضلات الملساء الموزعة بشكل ضئيل، وطبقة وسائل الإعلام مع خلايا العضلات الملساء وlamellae مرنة، وطبقة adventitial المحيطة مع النسيج الضام فضفاضة3. الاحتفاظ بالقيمة العلفية من LDL يعوض تطور تصلب الشرايين4. تراكم وتعديل البروتينات الدهنية يؤدي إلى التجميع والفخ داخل intima الشرياني5. ويثير استجابة التهابية من قبل البروتينات الدهنية المحاصرين والمعدلة6. الخلايا البطانية تبدأ في التعبير عن جزيئات التصاق، مثل VCAM-1 في مواقع في شجرة الشرايين مع تدفق الدمالمضطرب، مما يؤدي إلى تجنيد الخلايا الأحادية المتداولة وغيرها من الكريات البيض 7. الخلايا الأحادية المتسللة تميز إلى الضامة التي تغمر الدهون مع التحول الذي أعقب ذلك إلى خلايا رغوة الضامة8.
وقد درست تصلب الشرايين في نماذج الماوس مع زيادة وتيرة منذ منتصف الثمانينات. C57BL/6 هو سلالة الماوس الأصيلة الأكثر استخداما لهذه الدراسات، ويستخدم كخلفية وراثية لغالبية السلالات المعدلة وراثيا9. تأسست هذه السلالة في101920 ، ونشرت جينومها في عام 200211. التجارب في نماذج الماوس لها العديد من الفوائد: المستعمرات تتكاثر بسرعة، والإسكان هو الفضاء كفاءة، والتوالد يقلل من التباين التجريبي. ويسمح النموذج أيضا بالتلاعب اتّهاب اتّساهية وراثيّة، مثل حذف الجينات المستهدفة وإدراج الجينات المتحولة. وقد أدى هذا إلى فهم جديد للأمراض الفسيولوجية للمرض وأهداف العلاج الجديد12.
الفئران من النوع البري C57BL/6 مقاومة طبيعية لتصلب الشرايين. لديهم معظم الكولسترول المتداول في HDL، ولا يتم تشكيل الآفات المعقدة تصلب الشرايين حتى عندما تتغذى على نظام غذائي عالي الدهون والكوليسترول العالي13. الفئران ارتفاع الكوليسترول، مثل Apoe-/- على C57BL/6-الخلفية، وبالتالي تستخدم كنماذج تجريبية من تصلب الشرايين14،15. عدم وجود ApoE يضعف التناول الكبدي من البروتينات الدهنية المتبقية ويزعج بشدة التمثيل الغذائي للدهون. في Apoe-/- الفئران، والكوليسترول المتداولة هو في الغالب في جزيئات VLDL، والفئران تطوير لويحات تصلب الشرايين معقدة على نظام غذائي تشاو العادية.
Ldlr-/- الفئران تحاكي تطور تصلب الشرايين ينظر في البشر مع ارتفاع الكوليسترول العائلي16. ال [لورد]-/- يحتاج فأرات غربيّة نوع حمية أن يطوّر تصلب الشرايين17. النظام الغذائي الغربي يحاكي تناول الطعام البشري وعادة ما يحتوي على الكوليسترول 0.15٪. مستقبلات LDL يعترف ApoB100 وApoE وتوسط في تناول جزيئات LDL من خلال بطانة الرحم. مستقبلات LDL أساسية لإزالة الكبد من LDL من الدورة الدموية، في حين أن التعبير مستقبلات LDL في الخلايا المكونة للدم لا يؤثر على هذه العملية. وهذا يفتح إمكانية زرع نخاع العظم من خلايا Ldlr+/+ إلى اللاوسير الكولسترول الزائد -/- المتلقين وتقييم تطور تصلب الشرايين. وقد استخدمت عادة chimeras نخاع العظام لدراسة مشاركة الخلايا المكونة للدم في تصلب الشرايين التجريبية. ومع ذلك، يمكن أن يؤثر زرع نخاع العظام على حجم وتكوين لويحات تصلب الشرايين، مما يجعل تفسير النتائج غامضاً.
وقد تم تطوير متغيرات مختلفة من Apoe-/- وLdlr-/- الفئران مع تغييرات وراثية إضافية لدراسة عمليات محددة من المرض18. ومن الأمثلة على ذلك الفئران البشرية APOB100-المعدلة وراثيا ً Ldlr -/- (HuBL) التي تحمل جين APOB100 البشري الكاملالطول 19و20. هذه الفئران تطوير ارتفاع الكوليسترول في الدم وتصلب الشرايين على نظام غذائي تشاو العادية. ومع ذلك، فإن تطوير لويحات تصلب الشرايين المعقدة يستغرق ما لا يقل عن ستة أشهر والبروتوكولات التجريبية أقصر عادة ما تستخدم النظام الغذائي الغربي21. يتم تداول جزء كبير من الكوليسترول في البلازما في جزيئات LDL، مما يعطي الفئران HuBL أكثر الإنسان مثل البروتين الدهني مثل الإنسان مقارنة مع Apoe-/- وLdlr -/- الفئران. الفئران HuBL تسمح أيضا دراسات apoB الإنسان كمستضد ذاتي22.
نماذج الماوس من تصلب الشرايين تطوير لويحات تصلب الشرايين معقدة مع السمات المشتركة للمرض البشري. ومع ذلك، فإن لويحات مقاومة إلى حد ما لتمزق مع احتشاء عضلة القلب التي تلت ذلك. يتم الكشف عن Atherothrombosis فقط بشكل متقطع وتحديا تجريبيا لتقييم23،24،25. وقد وضعت نماذج خاصة من تمزق البلاك، ولكن المجال التجريبي يفتقر إلى نموذج موثوق واستنساخ لتقييم عوامل استقرار البلاك.
وقد تم الإبلاغ عن القياس الكمي لتصلب الشرايين بطرق عديدة في الأدب. وقد حاولت الجهود الأخيرة توحيد التصميم التجريبي، والتنفيذ، والإبلاغ عن الدراسات الحيوانية26. وللمحققين أفضليات وتقنيات مختلفة تتكيف مع مختبراتهم. كما أن معظم المشاريع البحثية فريدة من نوعها بطريقة تتطلب بعض التعديلات البروتوكولية. بسبب الطبيعة المتعددة العوامل للمرض ، تختلف الضوابط المثلى بين المشاريع. وقد تتسبب الظروف المحلية وعدم التوحيد القياسي في حدوث اختلافات ملحوظة في تطور الأمراض، مما يعوق التقدم في مجال البحوث. وتعني الاختلافات في التغير التجريبي أيضا أن حسابات الطاقة الإحصائية ينبغي أن تستند إلى دراسات تجريبية في ظل الظروف المحلية.
ينصح بالقياس الكمي لتصلب الشرايين في عدة مواقع في شجرة الأوعية الدموية. يصف هذا البروتوكول كيفية الحصول على نتائج من الجذر الأبهري، والقوس الأبهري، والشريان البشّيق في فأر واحد، بالإضافة إلى ترك بقية الشريان الأبهري البطني للتحليلات الأخرى. في مواجهة الاستعدادات تسمح التحديد الكمي السريع لللويحات المحملة بالدهون في القوس الأبهري. يمكن أيضًا تحديد عبء المرض في الشريان العضدي الرأسي كمياً إذا تم عرض العينات بعناية. أكثر تستغرق وقتا ً طويلاً المقطع العرضي للجذر الأبهري يترك عدة أقسام متاحة للتقييم التفصيلي لتكوين البلاك.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acetone</td>
			<td>VWR Chemicals</td>
			<td>20066.296</td>
			<td>For fixation of sections for immunohistochemistry.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Black electrical insulation tape (50 mm wide)</td>
			<td>Any specialized retailer</td>
			<td>-</td>
			<td>To create pinning beds for aortic arches.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5417C</td>
			<td>Benchtop microcentrifuge.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cork board</td>
			<td>Any specialized retailer</td>
			<td>-</td>
			<td>For cutting hearts in the preparation to cryomount aortic roots.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryostat</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>Microm HM 560</td>
			<td>For serial cryosectioning of aortic roots.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deionized water</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>For rinsing and preparation of solutions.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital camera</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>DC480</td>
			<td>5.1 megapixel CCD for high-resolution images of aortic arches and aortic root sections.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting scissors (10 cm, straight)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>14393</td>
			<td>For general dissection of organs.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont forceps #5 (11 cm, straight)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>500341</td>
			<td>For microdissection of aorta.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 70% (v/v)</td>
			<td>VWR Chemicals</td>
			<td>83801.290</td>
			<td>Highly flammable liquid and vapour, store in a well-ventilated place, and keep cool.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute &#8805;99.8%</td>
			<td>VWR Chemicals</td>
			<td>20821.310</td>
			<td>Highly flammable liquid and vapour, store in a well-ventilated place, and keep cool.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde 4% stabilised, buffered (pH 7.0)</td>
			<td>VWR Chemicals</td>
			<td>9713.1000</td>
			<td>Harmful by inhalation, in contact with skin and if swallowed.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td>NIH</td>
			<td>-</td>
			<td>Image analysis software.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris forceps (10 cm, curved, serrated)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>15915-G</td>
			<td>Used as anatomical forceps.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1096341011</td>
			<td>Flammable liquid, causes serious eye irritation, and may cause drowsiness or dizziness.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kaiser&#39;s glycerol gelatine</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1092420100</td>
			<td>Aqueous mounting medium containing phenol. Suspected of causing genetic defects.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>DM LB2</td>
			<td>For analysis during sectioning and documentation of Oil Red O stained micrographs.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayer&#39;s hematoxylin</td>
			<td>Histolab</td>
			<td>1820</td>
			<td>Non-toxic staining solution without chloral hydrate, but causes serious eye irritation.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayo scissors (17 cm, straight)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501751-G</td>
			<td>For general dissection.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Castroviejo needle holder (9 cm, straight)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>503376</td>
			<td>For pinning of aortic arches.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tubes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>MCT-175-C</td>
			<td>Polypropylene microtubes with snaplock cap.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microlance 3 needles, 23 gauge</td>
			<td>BD</td>
			<td>300800</td>
			<td>For blood collection.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microlance 3 needles, 27 gauge</td>
			<td>BD</td>
			<td>302200</td>
			<td>For perfusion of mice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microvette 500 &#181;L, K3 EDTA</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>20.1341.100</td>
			<td>For blood collection.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microvette 500 &#181;L, Lithium Heparin</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>20.1345.100</td>
			<td>For blood collection.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minutien insect pins, 0.10 mm</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>26002-10</td>
			<td>For pinning of aortic arches.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oil Red O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>O0625</td>
			<td>Not classified as a hazardous substance or mixture.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optimum cutting temperature (OCT) cryomount</td>
			<td>Histolab</td>
			<td>45830</td>
			<td>For embedding tissue.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm M</td>
			<td>Bemis</td>
			<td>PM992</td>
			<td>Paraffin wax film used to create pinning beds for aortic arches.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes (100x20 mm)</td>
			<td>Any cell culture supplier</td>
			<td>-</td>
			<td>Proposed as a storage container for pinned aortas.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>Sterile and RNase-free solution is required for perfusion of mice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Qualitative filter paper (grade 1001)</td>
			<td>Munktell</td>
			<td>120006</td>
			<td>For filtering Oil Red O working solution (typical retention 2-3 &#181;m).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAlater RNA stabilization reagent</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>76106</td>
			<td>For stabilization of RNA in tissue samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNaseZap RNase Decontamination Solution</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM9780</td>
			<td>A surface decontamination solution that destroys RNases on contact.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel handle #3 (13 cm)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>500236</td>
			<td>For cutting hearts in the preparation to cryomount aortic roots.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard scalpel blade #10</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>500239</td>
			<td>For cutting hearts in the preparation to cryomount aortic roots.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>MZ6</td>
			<td>For dissection and en face documentation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sudan IV</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S4261</td>
			<td>Not classified as a hazardous substance or mixture.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrost Plus microscope slides</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>J1800AMNZ</td>
			<td>To collect aortic root sections.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue forceps (15 cm)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501741-G</td>
			<td>For general dissection.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek cryomolds (10x10x5 mm)</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4565</td>
			<td>For embedding aortic roots in OCT.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas scissors (8 cm, straight)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>503378</td>
			<td>For microdissection of aorta.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantification of atherosclerosis in mice

أمراض القلب والأوعية الدموية هي السبب الرئيسي للوفاة في العالم. السبب الأساسي في معظم الحالات هو تصلب الشرايين، وهو في جزء منه مرض التهابي مزمن. وقد أوضحت الدراسات التجريبية تصلب الشرايين دور الكوليسترول والالتهاب في عملية المرض. وقد أدى هذا إلى تجارب سريرية ناجحة مع العوامل الصيدلانية التي تقلل من المظاهر السريرية لتصلب الشرايين. يمكن للتجارب المتأنية والخاضعة للرقابة جيدا في نماذج الماوس من المرض مزيد من توضيح مسببات الأمراض من المرض، وهو أمر غير مفهوم تماما. تحليل الآفات موحدة من المهم للحد من التباين التجريبي وزيادة استنساخ. تحديد حجم الآفة في الجذر الأبهري، والقوس الأبهري، والشريان البعية هي نقاط النهاية الشائعة في تصلب الشرايين التجريبية. يوفر هذا البروتوكول وصفًا تقنيًا لتقييم تصلب الشرايين في جميع هذه المواقع في ماوس واحد. ويفيد البروتوكول بشكل خاص عندما تكون المواد محدودة، كما هو الحال في كثير من الأحيان عندما يتم وصف الحيوانات المعدلة وراثيا.

في نماذج الماوس من تصلب الشرايين الآفات الأكثر بروزا تميل إلى التطور في الجذر الأبهري والقوس الأبهري. يصف هذا البروتوكول التحديد الكمي لتصلب الشرايين في الجذر الأبهري، والقوس الأبهري، والشريان البشّع في فأر واحد. الآفات القابلة للقياس في الشريان الأبهر الصدري التنازلي والشريان الأبهري البطني موجودة فقط في الحيوانات التي توجد فيها أمراض متقدمة. في هذا البروتوكول، لا يتم تحليل هذه الأجزاء لعبء تصلب الشرايين، ولكن حفظها للتحليل اللاحق لمستويات mRNA أو تحليلات أخرى. عادة ما يتم عرض المقاطع التسلسلية للآفات التصلب الشرايين في الجذر الأبهري في رسم بياني مع حجم الآفة على محور yوالمسافة إلى الجيوب الأبهرية على محورx-محور28. المقاطع المتقاطعة الحقيقية حاسمة لحجم الآفة. يمكن للأقسام المائلة المبالغة في تقدير أحجام الآفات وإمالة 20 درجة فقط يمكن أن تبالغ في تقدير سطح الآفة المطلقة بنسبة 15٪29. ومع ذلك، فإن حساب جزء الآفة من إجمالي مساحة السفينة يجعل النتيجة أقل حساسية للاختلافات المحتملة في الزاوية أثناء القسم (الشكل4A). وعادة ما تكون الطريقة الإحصائية المناسبة للكشف عن الاختلافات بين المجموعات هي تحليل منتظم للتباين في اتجاهين (ANOVA). ثم يتم إجراء اختبارات ما بعد بونفيرونى للكشف عن الاختلافات على مستويات معينة. ويمكن أيضا استخدام الفرق الأقل أهمية فيشر كاختبار متابعة لANOVA. فهو يقلل من احتمال حدوث أخطاء إحصائية من النوع الثاني، ولكنه لا يفسر المقارنات المتعددة. وبالإضافة إلى ذلك، يمكن أن يكون من التوضيح لحساب المنطقة تحت المنحنى أو متوسط حجم الآفة لكل ماوس وتقديم البيانات في مؤامرة نقطة لمزيد من تصور التباين الفردي داخل المجموعات (الشكل4B).
زيت أحمر O هو صبغة ديازو حمراء زاهية قابلة للذوبان في الدهون، والتي تلطيخ الدهون المحايدة. الدهون القطبية في أغشية الخلايا ليست ملطخة. يمكن إجراء تلطيخ الزيت الأحمر O على عينات طازجة أو مجمدة أو ثابتة فورمالين، ولكن ليس على عينات جزءا لا يتجزأ من البارافين بسبب إزالة الدهون في عملية إزالة البارافينية المطلوبة. ويمكن إجراء تحديد كمية من تراكم الدهون الآفات عن طريق عتبة اللون النفط الأحمر O المنطقة الإيجابية من إجمالي منطقة الآفة (الشكل4C). ينتج الهيماتوكسيلين تلطيخ أزرق لنواية الخلايا، وهو أمر مفيد لتصور مورفولوجيا البلاك. الشرايين التاجية اليمنى واليسرى عادة ما تختلف عن الشريان الأبهري حوالي 250 ميكرومتر من الجيوب الأبهرية27، والتي غالبا ما تتزامن مع أحجام الآفات الأكثر بروزا. غالبًا ما يتم عرض المقاطع العرضية من هذه المنطقة كنتائج تمثيلية (الشكل4D).
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59828/59828fig4.jpg"> الشكل 4: الآفات تصلب الشرايين في الجذر الأبهري. (أ) تم تقييم 28 أسبوعا من العمر الذكور نخاع العظام chimeras تغذية النظام الغذائي الغربي لمدة ثمانية أسابيع لتحديد تأثير Smad7 نقص الخلايا T على تطوير تصلب الشرايين. [لورد] تجريبيّة -/- استلم [شمرس] [كد4-كر]+[سمد7][فل/فل] عظمة نخاع وتحكمات يستلم [كد4-كر]+[سمد7][فل/غ] عظمة نخاع. يظهر الرسم البياني القياس الكمي لمنطقة الآفة تصلب الشرايين من ثمانية أقسام متتالية، 100 - 800 ميكرومتر من الجيوب الأبهرية المعروضة كجزء آفة من سطح السفينة الكلي(Cd4-Cre+Smad7فلوريدا / +/ Ldlr-/- n = 6، Cd4-Cre+Smad7فلوريدا / فلوريدا/ Ldlr-/- ن = 9، 2-طريقة ANOVA مع اختبار آخر بونفيرونى، ويبين الرسم البياني يعني ± SEM، الأقواس تشير إلى مستوى الأهمية لمقارنة سلالة). (B) رسم نقطة مجتمعة وشريط الرسم البياني يظهر متوسط منطقة الآفة تصلب الشرايين من أقسام الجذر الأبهري (Cd4-Cre+Smad7فلوريدا / +Ldlr-/- ن = 6، Cd4-Cre+Smad7 فلوريدا / فلوريدا /فلوريدا/ Ldlr-/- n = 9، الطالب t-test) (C) جزء من النفط الأحمر O-ملطخة المنطقة في الآفات (Cd4-Cre+Smad7فلوريدا / +/ Ldlr-/- ن = 4، Cd4-Cre+Smad7 فلوريدا/ فلوريدا /Ldlr-/- n = 6، الطالب ر-اختبار، ns = غير الهامة) (B -C)النقاط تمثل الفئران الفردية والحانات تظهر يعني ± SEM. (D) الميكروغرافيا التمثيلية التي تظهر النفط الأحمر O تلطيخ (باللون الأحمر اللون) من الدهون المحايدة في الجذر الأبهري 300 ميكرومتر من الجيوب الأبهرية (التكبير 50X)، شريط مقياس = 500 ميكرومتر. *ع ≤ 0.05، ***ف ≤ 0.001. وقد تم تعديل هذا الرقم من Gisterå وآخرون31. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59828/59828fig4large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
يمكن استخدام النفط الأحمر O لتلطيخ الأبهر المعدة للوجه، ولكن هذا البروتوكول يستخدم السودان الرابع، آخر صبغة ديازو مريحة قابلة للذوبان في الدهون. السودان الرابع تصور بوضوح لويحات تصلب الشرايين في اللون البرتقالي والأحمر عن طريق تلطيخ الدهون، والدهون الثلاثية، والبروتينات الدهنية. إزالة الخلفية الداكنة في الصور التمثيلية للأقواس الأبهرية الوجه en يمكن أن تعزز العرض البصري (الشكل5A). عادة ما يتم توزيع حجم الآفة داخل المجموعات، مما يسمح بإجراء اختبار إحصائي مع اختبار t-test بين المجموعات. مؤامرة نقطة التي تظهر كل من الفئران الفردية والمتوسط، والتي يتم مقارنتها بين المجموعات، هو وسيلة مفيدة لعرض النتائج (الشكل5B-C). وبما أن التباين داخل المجموعات يختلف عادة بين المواقع في شجرة الأوعية الدموية، عادة ما تكون هناك حاجة إلى حسابات طاقة منفصلة. ويمكن تجنب الاختلاف غير الضروري عن طريق إتقان الأساليب وتوحيد البروتوكولات. ومن المهم الحصول على نتائج ذات دلالة إحصائية، ولكن الأهمية البيولوجية للفرق الملاحظ تحتاج دائما إلى النظر فيها أيضا.
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59828/59828fig5.jpg"> الشكل 5: الآفات التصلب الشرايين في القوس الأبهري والشريان الصدري. (أ) ممثل في وجه الميكروغرافيا من الأقواس الأبهرية مع لويحات محملة بالدهون ملطخة بالسودان الرابع (باللون البرتقالي) من 20 أسبوعا الفئران القديمة تغذية النظام الغذائي الغربي لمدة عشرة أسابيع، تصور معا. شريط مقياس = 2 ملم. (B) الآفات تصلب الشرايين في القوس الأبهري (HuBL n = 10، BT1xHuBL ن = 12؛ اختبار الطالب. (C) الآفات تصلب الشرايين في الشريان العضدي (HuBL n = 8، BT1xHuBL ن = 9، الطالب t-اختبار). (باء-جيم) النقاط تمثل الفئران الفردية، وتظهر الحانات يعني ± SEM. *ع ≤ 0.05. وقد تم تعديل هذا الرقم من Gisterå وآخرون32. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59828/59828fig5large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
الشكل التكميلي 1: التنظيم البديل للشرائح للمقاطع التسلسلية من الجذر الأبهري. تنظيم شرائح منهجي مبسط لجمع المقاطع من الجذر الأبهري. تمكن المجموعة من تلطيخ الزيت الأحمر O للدهون والكيمياء المناعية أو تلطيخ الفلورة المناعية. يتم حذف الشرائح المخصصة لتلطيخ الأحمر Picrosirius من الكولاجين. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59828/2019-JoVE-Figure-S1.eps">الرجاء النقر هنا لتحميل هذا الملف.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Atherosclerosis in Mice at JoVE.com

Quantification of Atherosclerosis in Mice

نماذج مورين من تصلب الشرايين هي أدوات مفيدة للتحقيق في المسارات المسببة للأمراض على المستوى الجزيئي، ولكن تتطلب قياس اقاصي موحد لتطوير الآفات. يصف هذا البروتوكول طريقة محسنة لتحديد حجم الآفة في الأوعية الشريانية الرئيسية بما في ذلك الجذر الأبهري والقوس الأبهري والشريان البشعي.

القياس الكمي لتصلب الشرايين في الفئران

Cardiovascular disease is the main cause of death in the world. The underlying cause in most cases is atherosclerosis, which is in part a chronic ...

أمراض القلب والأوعية الدموية هي السبب الرئيسي للوفاة على الصعيد العالمي. نماذج الماوس هي أدوات مفيدة لدراسة هذا المرض ويمكن استخدام بروتوكول لدينا لتحديد تصلب الشرايين في الفئران. باستخدام هذا البروتوكول، يمكن قياس حجم الآفة في ثلاثة مواقع الأوعية الدموية.جذر الأبهري، القوس الأبهري والشريان brachiocephalic. يمكن أن يكون القياس الكمي لتصلب الشرايين في الفئران مهمة شاقة. وقد قدمنا خطوات مفصلة نأمل أن تسرع العملية.ومن الصعب وصف بعض هذه الخطوات كتابة. نأمل أن يساعدك هذا الفيديو في الحصول على تحليل قوي لحجم الآفة التهتر. بعد حصاد قلب الماوس وفقا للبروتوكولات القياسية، ووضع القلب على سرير الفلين، الجانب البطني تحت المجهر تشريح واستخدام إبرة لإصلاح القلب إلى الفلين من خلال قمة.عقد قاعدة القلب مع ملقط التشريحية، واستخدام مشرط عقد في زاوية 20 درجة caudally في الطائرة القوس، و 20 درجة الجمجمة في الطائرة عرضية، لقطع بعيدا apical ثلثي القلب. تضمين جذر الأبهري وقاعدة القلب في مجمع درجة الحرارة القطع الأمثل، أو أكتوبر، والضغط بلطف على القلب مع ملقط لملء الجذر الأبهري مع مركب وإزالة أي فقاعات الهواء. نقل العينة إلى الجزء السفلي من cryomold مليئة أكتوبر مع الجذر الأبهري عمودي على السطح السفلي وتجميد المجمع على الجليد الجاف.ثم تخزين عينة الأنسجة في كيس الفريزر في ناقص 80 درجة مئوية حتى اكيت. لإعداد سرير التثبيت لتحليل الوجه en، أضعاف جزء من فيلم الشمع البارافين ثماني مرات لجعل سطح مسطحة 25 من 25 ملم والتفاف شريط العزل الكهربائي الأسود حول الفيلم لجعل خلفية داكنة للأبهر. ضع ملصقًا على الجانب الخلفي من سرير التثبيت واستخدم قلم رصاص لتسجيل رقم تعريف الماوس.نقل القوس الأبهري إلى السرير التثبيت وإضافة قطرة من برنامج تلفزيوني إلى الأنسجة. باستخدام مجهر ستيريو، تنظيف الشريان الأورطي من الأنسجة الدهنية periadventitial المتبقية واستخدام مقص Vannas والملقط دومون لقشر بلطف بعيدا كل من الأنسجة الدهنية المحيطة دون التلاعب أو إتلاف الشريان الأبهر. المقبل، أدخل مقص Vannas في تجويف الأبهر لفضح سطح intimal.ابدأ في قطع الانحناء الخارجي للقوس الصاعد في الاتجاه القعد، والاستمرار في قطع الفروع المفتوحة، بما في ذلك الشريان البرازي والجزئي وتجنيب الجزء الظهري من المنطقة الصدرية النازلة. لعرض سطح intimal، وقطع فتح انحناء أقل وأضعاف فتح الشريان الأبهر. باستخدام حامل إبرة كاستروفيجو الصغيرة ، قم بتأمين القوس المفتوح على السرير المعلق مع الطرف الحاد لدبابيس الحشرات مينين دون تمديد العينة ، وثني الدبابيس بلطف بعيدًا عن العينة حيث يتم الاحتفاظ بالأنسجة في مكانها.ثم تخزين القوس المعلقة facedown في طبق بيتري من برنامج تلفزيوني في أربع درجات مئوية. بالنسبة إلى تلطيخ السودان الرابع، شطف العينة لمدة خمس دقائق في طبق بيتري من 70٪ الإيثانول مع القوس المواجهة إلى أسفل، قبل نقل العينة إلى طبق من السودان الرابع حل العمل لمدة سبع دقائق. في نهاية الحضانة، شطف العينة مع اثنين من يغسل لمدة ثلاث دقائق في 80٪ الإيثانول لإزالة وصمة عار سطح إيثي العادي، تليها شطف النهائي في برنامج تلفزيوني قبل إعادة الأنسجة إلى طبق بيتري الأصلي.ثم الحصول على micrographs تحت مجهر ستيريو متصلة بكاميرا رقمية في التكبير 10X، والحصول على صور من القوس المعلقة المغمورة في برنامج تلفزيوني، وذلك باستخدام الأوزان المعدنية الصغيرة لعقد السرير التثبيت إلى الجزء السفلي من طبق بيتري. للحصول على اكشنات اسخائية من الجذر الاههري المضمّن، قم بتعيين درجة حرارة البُرَث إلى ناقص 20 درجة مئوية وسمك القسم إلى 10 ميكرومترات. جبل كتلة أكتوبر التي تحتوي على الجذر الأبهري على حامل العينة مع الأنسجة البطينية التي تواجه الخارج.تأمين تحديد المواقع مع بعض OCT إضافية إذا لزم الأمر. يجب الآن وضع الجذر الأبهري عمودي على شفرة السكين. جمع أقسام التحكم الأولية التي تحتوي على أنسجة عضلة القلب على شرائح المجهر العادية، والتحقق من التقدم من خلال الأنسجة كل 200 ميكرومتر تحت مجهر خفيف.عندما يظهر أول أعتاب الأبهر، إمالة العينة نحو نقطة الصفر cusp لمحاذاة مستوى القسم مع اثنين من cusps الأخرى والعد كل قسم 10 ميكرومتر التي يتم قطع من نقطة الصفر فصاعدا. البدء في جمع أقسام للتحليل من 90 ميكرومتر وما بعدها وفقا للشريحة المخطط لها، حتى تم التوصل إلى 800 ميكرومتر من نقطة الصفر. حساب جزء الآفة من مجموع مساحة السفينة من الجذر الأبهري يجعل البيانات أقل حساسية للاختلافات زاوية ممكن أثناء تجزئة.وبالإضافة إلى ذلك، يمكن أن يكون من التوضيحي لحساب المنطقة تحت المنحنى أو حجم آفة atheroto لكل فأرة وتقديم البيانات في مؤامرة نقطة لمزيد من تصور الاختلافات الفردية داخل المجموعات. يمكن قياس تراكم الدهون الآفة عن طريق اللون عتبة النفط الأحمر O المناطق الإيجابية من منطقة الآفة الكلية. الشرايين التاجية اليمنى واليسرى عادة ما تختلف عن الشريان الأورطي حوالي 250 ميكرومتر من الجيوب الأنفية الأبهري الذي يتزامن في كثير من الأحيان مع أحجام الآفة الأكثر بروزا.إزالة الخلفية الداكنة في صور تمثيلية للأقواس الأبهرية في مواجهة en يمكن أن تعزز العرض المرئي. عادة ما يتم توزيع حجم الآفة داخل المجموعات ، مما يسمح بإجراء تحليل إحصائي باستخدام اختبار t للطالب بين المجموعات. نوصي بممارسة بعض المواد الاختبارية حتى تحصل على مهارات كافية لمعالجة العينات التجريبية الخاصة بك.إذا كان حجم الآفة يختلف بين المجموعات ، فيجب عليك تحديد الآلية ، حيث أن تحليل تكوين الآفة عادة ما يكون الخطوة التالية لمتابعة.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Measurement of &#947;HV68 Infection in Mice

Measurement of ÃƒÅ½Ã‚Â³HV68 Infection in Mice

قياس γHV68 العدوى في الفئران

&gamma;-Herpesviruses (&gamma;-HVs) are notable for their ability to establish latent infections of lymphoid cells1. The narrow host range of human ...

Depletion and Reconstitution of Macrophages in Mice

نضوب وإعادة إعماره الضامة في الفئران

Macrophages are critical players in the innate  immune response to infectious challenge or injury, initiating the innate immune  response and directing ...

Measuring Local Anaphylaxis in Mice

قياس الحساسية المفرطة المحلية في الفئران

Allergic responses are the result of the activation of mast cells and basophils, and the subsequent release of vasoactive and proinflammatory mediators. ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

تحريض الفئران المعوية التهاب عن طريق نقل بالتبني من المستجيب CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; عالية</sup&gt; خلايا T في الفئران العوز المناعي

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

Culture of Macrophage Colony-stimulating Factor Differentiated Human Monocyte-derived Macrophages

ثقافة الضامة الوحيدات المستمدة-بلعم مستعمرة تحفيز عامل متباينة الإنسان

A protocol is presented for cell culture of macrophage colony-stimulating factor (M-CSF) differentiated human monocyte-derived macrophages. For initiation ...

Noninvasive Sampling of Mucosal Lining Fluid for the Quantification of In Vivo Upper Airway Immune-mediator Levels

Noninvasive Sampling of Mucosal Lining Fluid for the Quantification of In Vivo Upper Airway Immune-mediator Levels

موسع لأخذ العينات من السوائل البطانة المخاطية للتحديد الكمي للمناعة-الوسيط في فيفو مجرى الهواء العلوي في مستويات

This protocol describes noninvasive sampling of undisturbed upper airway mucosal lining fluid. It also details the extraction procedure used prior to the ...

Characterization of Thymus-dependent and Thymus-independent Immunoglobulin Isotype Responses in Mice Using Enzyme-linked Immunosorbent Assay

وصف الاستجابات ايستب الغلوبولين المناعي تعتمد على الغدة الصعترية، والغدة الصعترية مستقلة في الفئران باستخدام مقايسة الممتز المرتبط بالانزيم

Antibodies, also termed as immunoglobulins (Ig), secreted by differentiated B lymphocytes, plasmablasts/plasma cells, in humoral immunity provide a ...

Quantification of Antibody-dependent Enhancement of the Zika Virus in Primary Human Cells

التحديد الكمي لتعزيز تعتمد على جسم مضاد الفيروس Zika في خلايا الإنسان الأولية

The recent emergence of the flavivirus Zika and neurological complications, such as Guillain-Barr&#233; syndrome and microcephaly in infants, has brought ...

Isolation and Quantification of Zika Virus from Multiple Organs in a Mouse

عزل وتقدير كمية لفيروس زيكا من أجهزة متعددة في الماوس

The methods being presented demonstrate laboratory procedures for the isolation of organs from Zika virus infected animals and the quantification of viral ...