Name: quantification of atherosclerosis in mice
Uploaded: 2019-06-12T15:00:00
Duration: 6 min 59 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Atherosclerosis in Mice at JoVE.com

אנו מודים לכל חברי יחידת המחקר וכלי הדם הניסיוניים של גראן ק. הנסון, שסייעה לפתח את הפרוטוקול ברבע השנה החולפת. אנו אסירי תודה במיוחד על התרומות של אנטלינו ניקולו, שינחואה ג'ואו, אנה-קארין רוברטסון ונגר בודין. עבודה זו נתמכת על ידי מענק הפרויקט 06816 ו Linnaeus תמיכה 349-2007-8703 ממועצת המחקר השבדית, ועל ידי מענקים מקרן לב-ריאות שוודית, מועצת מחוז סטוקהולם, פרופסור נאנה Svartz הקרן, לו והאנס אוסטרמן הקרן למחקר רפואי, קרן המחקר והקרן של המכון למחלות גריאטרי בקארלנסקה.

<ol>
	<li>Lozano, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+and+regional+mortality+from+235+causes+of+death+for+20+age+groups+in+1990+and+2010:+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+Study+2010.">Global and regional mortality from 235 causes of death for 20 age groups in 1990 and 2010: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2010.</a> Lancet. 380 (9859), 2095-2128 (2012).</li><li>Gistera, A., Hansson, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+immunology+of+atherosclerosis.">The immunology of atherosclerosis.</a> Nature Reviews Nephrology. 13 (6), 368-380 (2017).</li><li>Hansson, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation,+atherosclerosis,+and+coronary+artery+disease.">Inflammation, atherosclerosis, and coronary artery disease.</a> New England Journal of Medicine. 352 (16), 1685-1695 (2005).</li><li>Williams, K. J., Tabas, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+response-to-retention+hypothesis+of+early+atherogenesis.">The response-to-retention hypothesis of early atherogenesis.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 15 (5), 551-561 (1995).</li><li>Pentikainen, M. O., Oorni, K., Ala-Korpela, M., Kovanen, P. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modified+LDL+-+trigger+of+atherosclerosis+and+inflammation+in+the+arterial+intima.">Modified LDL - trigger of atherosclerosis and inflammation in the arterial intima.</a> Journal of Internal Medicine. 247 (3), 359-370 (2000).</li><li>Ruuth, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Susceptibility+of+low-density+lipoprotein+particles+to+aggregate+depends+on+particle+lipidome,+is+modifiable,+and+associates+with+future+cardiovascular+deaths.">Susceptibility of low-density lipoprotein particles to aggregate depends on particle lipidome, is modifiable, and associates with future cardiovascular deaths.</a> European Heart Journal. 39 (27), 2562-2573 (2018).</li><li>Nakashima, Y., Raines, E. W., Plump, A. S., Breslow, J. L., Ross, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Upregulation+of+VCAM-1+and+ICAM-1+at+atherosclerosis-prone+sites+on+the+endothelium+in+the+ApoE-deficient+mouse.">Upregulation of VCAM-1 and ICAM-1 at atherosclerosis-prone sites on the endothelium in the ApoE-deficient mouse.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 18 (5), 842-851 (1998).</li><li>Goldstein, J. L., Ho, Y. K., Basu, S. K., Brown, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Binding+site+on+macrophages+that+mediates+uptake+and+degradation+of+acetylated+low+density+lipoprotein,+producing+massive+cholesterol+deposition.">Binding site on macrophages that mediates uptake and degradation of acetylated low density lipoprotein, producing massive cholesterol deposition.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 76 (1), 333-337 (1979).</li><li>Paigen, B., Morrow, A., Brandon, C., Mitchell, D., Holmes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variation+in+susceptibility+to+atherosclerosis+among+inbred+strains+of+mice.">Variation in susceptibility to atherosclerosis among inbred strains of mice.</a> Atherosclerosis. 57 (1), 65-73 (1985).</li><li>Russell, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origins+and+history+of+mouse+inbred+strains:+contributions+of+Clarence+Cook+Little.">Origins and history of mouse inbred strains: contributions of Clarence Cook Little.</a> Origins of Inbred Mice, Morse, HC, eds. (Academic Press, NY). , 33-43 (1978).</li><li>Waterston, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+sequencing+and+comparative+analysis+of+the+mouse+genome.">Initial sequencing and comparative analysis of the mouse genome.</a> Nature. 420 (6915), 520-562 (2002).</li><li>Gistera, A., Ketelhuth, D. F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid-driven+immunometabolic+responses+in+atherosclerosis.">Lipid-driven immunometabolic responses in atherosclerosis.</a> Current Opinion in Lipidology. 29 (5), 375-380 (2018).</li><li>Maganto-Garcia, E., Tarrio, M., Lichtman, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+atherosclerosis.">Mouse models of atherosclerosis.</a> Current Protocols in Immunology. Chapter 15, (2012).</li><li>Plump, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Severe+hypercholesterolemia+and+atherosclerosis+in+apolipoprotein+E-deficient+mice+created+by+homologous+recombination+in+ES+cells.">Severe hypercholesterolemia and atherosclerosis in apolipoprotein E-deficient mice created by homologous recombination in ES cells.</a> Cell. 71 (2), 343-353 (1992).</li><li>Zhang, S. H., Reddick, R. L., Piedrahita, J. A., Maeda, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+hypercholesterolemia+and+arterial+lesions+in+mice+lacking+apolipoprotein+E.">Spontaneous hypercholesterolemia and arterial lesions in mice lacking apolipoprotein E.</a> Science. 258 (5081), 468-471 (1992).</li><li>Ishibashi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypercholesterolemia+in+low+density+lipoprotein+receptor+knockout+mice+and+its+reversal+by+adenovirus-mediated+gene+delivery.">Hypercholesterolemia in low density lipoprotein receptor knockout mice and its reversal by adenovirus-mediated gene delivery.</a> Journal of Clinical Investigation. 92 (2), 883-893 (1993).</li><li>Ishibashi, S., Goldstein, J. L., Brown, M. S., Herz, J., Burns, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Massive+xanthomatosis+and+atherosclerosis+in+cholesterol-fed+low+density+lipoprotein+receptor-negative+mice.">Massive xanthomatosis and atherosclerosis in cholesterol-fed low density lipoprotein receptor-negative mice.</a> Journal of Clinical Investigation. 93 (5), 1885-1893 (1994).</li><li>Ketelhuth, D. F., Gistera, A., Johansson, D. K., Hansson, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cell-based+therapies+for+atherosclerosis.">T cell-based therapies for atherosclerosis.</a> Current Pharmaceutical Design. 19 (33), 5850-5858 (2013).</li><li>Skalen, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subendothelial+retention+of+atherogenic+lipoproteins+in+early+atherosclerosis.">Subendothelial retention of atherogenic lipoproteins in early atherosclerosis.</a> Nature. 417 (6890), 750-754 (2002).</li><li>Boren, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+low+density+lipoprotein+receptor-binding+site+in+apolipoprotein+B100+and+the+modulation+of+its+binding+activity+by+the+carboxyl+terminus+in+familial+defective+apo-B100.">Identification of the low density lipoprotein receptor-binding site in apolipoprotein B100 and the modulation of its binding activity by the carboxyl terminus in familial defective apo-B100.</a> Journal of Clinical Investigation. 101 (5), 1084-1093 (1998).</li><li>Sanan, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low+density+lipoprotein+receptor-negative+mice+expressing+human+apolipoprotein+B-100+develop+complex+atherosclerotic+lesions+on+a+chow+diet:+no+accentuation+by+apolipoprotein(a).">Low density lipoprotein receptor-negative mice expressing human apolipoprotein B-100 develop complex atherosclerotic lesions on a chow diet: no accentuation by apolipoprotein(a).</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 95 (8), 4544-4549 (1998).</li><li>Gistera, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vaccination+against+T-cell+epitopes+of+native+ApoB100+reduces+vascular+inflammation+and+disease+in+a+humanized+mouse+model+of+atherosclerosis.">Vaccination against T-cell epitopes of native ApoB100 reduces vascular inflammation and disease in a humanized mouse model of atherosclerosis.</a> Journal of Internal Medicine. , (2017).</li><li>Johnson, J. L., Jackson, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atherosclerotic+plaque+rupture+in+the+apolipoprotein+E+knockout+mouse.">Atherosclerotic plaque rupture in the apolipoprotein E knockout mouse.</a> Atherosclerosis. 154 (2), 399-406 (2001).</li><li>Calara, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+plaque+rupture+and+secondary+thrombosis+in+apolipoprotein+E-deficient+and+LDL+receptor-deficient+mice.">Spontaneous plaque rupture and secondary thrombosis in apolipoprotein E-deficient and LDL receptor-deficient mice.</a> The Journal of Pathology. 195 (2), 257-263 (2001).</li><li>Caligiuri, G., Levy, B., Pernow, J., Thoren, P., Hansson, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myocardial+infarction+mediated+by+endothelin+receptor+signaling+in+hypercholesterolemic+mice.">Myocardial infarction mediated by endothelin receptor signaling in hypercholesterolemic mice.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 96 (12), 6920-6924 (1999).</li><li>Daugherty, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recommendation+on+Design,+Execution,+and+Reporting+of+Animal+Atherosclerosis+Studies:+A+Scientific+Statement+From+the+American+Heart+Association.">Recommendation on Design, Execution, and Reporting of Animal Atherosclerosis Studies: A Scientific Statement From the American Heart Association.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 37 (9), (2017).</li><li>Paigen, B., Morrow, A., Holmes, P. A., Mitchell, D., Williams, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assessment+of+atherosclerotic+lesions+in+mice.">Quantitative assessment of atherosclerotic lesions in mice.</a> Atherosclerosis. 68 (3), 231-240 (1987).</li><li>Purcell-Huynh, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+expressing+high+levels+of+human+apolipoprotein+B+develop+severe+atherosclerotic+lesions+in+response+to+a+high-fat+diet.">Transgenic mice expressing high levels of human apolipoprotein B develop severe atherosclerotic lesions in response to a high-fat diet.</a> Journal of Clinical Investigation. 95 (5), 2246-2257 (1995).</li><li>Nicoletti, A., Kaveri, S., Caligiuri, G., Bariety, J., Hansson, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunoglobulin+treatment+reduces+atherosclerosis+in+apo+E+knockout+mice.">Immunoglobulin treatment reduces atherosclerosis in apo E knockout mice.</a> Journal of Clinical Investigation. 102 (5), 910-918 (1998).</li><li>Gistera, A., Ketelhuth, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunostaining+of+Lymphocytes+in+Mouse+Atherosclerotic+Plaque.">Immunostaining of Lymphocytes in Mouse Atherosclerotic Plaque.</a> Methods in Molecular Biology. 1339, 149-159 (2015).</li><li>Gistera, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transforming+growth+factor-beta+signaling+in+T+cells+promotes+stabilization+of+atherosclerotic+plaques+through+an+interleukin-17-dependent+pathway.">Transforming growth factor-beta signaling in T cells promotes stabilization of atherosclerotic plaques through an interleukin-17-dependent pathway.</a> Science Translational Medicine. 5 (196), (2013).</li><li>Gistera, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-Density+Lipoprotein-Reactive+T+Cells+Regulate+Plasma+Cholesterol+Levels+and+Development+of+Atherosclerosis+in+Humanized+Hypercholesterolemic+Mice.">Low-Density Lipoprotein-Reactive T Cells Regulate Plasma Cholesterol Levels and Development of Atherosclerosis in Humanized Hypercholesterolemic Mice.</a> Circulation. 138 (22), 2513-2526 (2018).</li><li>Daugherty, A., Whitman, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+atherosclerosis+in+mice.">Quantification of atherosclerosis in mice.</a> Methods in Molecular Biology. 209, 293-309 (2003).</li><li>Baglione, J., Smith, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assay+for+mouse+atherosclerosis+in+the+aortic+root.">Quantitative assay for mouse atherosclerosis in the aortic root.</a> Methods in Molecular Biology. 129, 83-95 (2006).</li><li>Schiller, N. K., Kubo, N., Boisvert, W. A., Curtiss, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+gamma-irradiation+and+bone+marrow+transplantation+on+atherosclerosis+in+LDL+receptor-deficient+mice.">Effect of gamma-irradiation and bone marrow transplantation on atherosclerosis in LDL receptor-deficient mice.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 21 (10), 1674-1680 (2001).</li><li>Naghavi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+vulnerable+plaque+to+vulnerable+patient:+a+call+for+new+definitions+and+risk+assessment+strategies:+Part+I.">From vulnerable plaque to vulnerable patient: a call for new definitions and risk assessment strategies: Part I.</a> Circulation. 108 (14), 1664-1672 (2003).</li><li>Seijkens, T. T. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+CD40-Induced+TRAF6+Signaling+in+Macrophages+Reduces+Atherosclerosis.">Targeting CD40-Induced TRAF6 Signaling in Macrophages Reduces Atherosclerosis.</a> Journal of the American College of Cardiology. 71 (5), 527-542 (2018).</li></ol>

. למחברים אין מה לגלות

מחלות לב וכלי דם הוא הרוצח העיקרי בעולם ומדידות מניעה חדשה נדרשים2. מודלים של עכבר המחלה לספק פלטפורמה מקיפה לחקירת פתופסיולוגיה וטיפולים ניסיוניים13. מידת הקוונדות אמינה חיונית לגישה זו. עם זאת, שיטות קוונפיקציה שונות בין מעבדות. סטנדרטיזציה ואופטימיזציה כבר תהליך מתמשך מאז 1980 של13,27,33,34. שורשי אבי העורקים התפתחה כאתר הפופולרי ביותר לכמת טרשת עורקים ניסיוני. חלקים צולבים של שלטים מאפשרים השוואה בין היקף הפלאק לבין קבוצות. En ההכנות הפנים הם המועדף על כימות הנגעים בחלקים גדולים יותר של העורקים. השיטה הפנים מפעילה את כמות הפלאק ומאפשרת לכמת את הכיסוי בשטח הפלאק, אך לא לקחת את עובי הפלאק בחשבון. הרלוונטיות הביולוגית של הבדלים שנצפו מתימוכין על ידי תוצאות ברורות במקומות שונים בעץ כלי הדם. הערכת פיתוח טרשת עורקים במיקומים שונים מטפלת באפקטים אפשריים של אתר מסוים. ההשפעה של תאים מושתלים המטפאות על פיתוח טרשת עורקים ניתן להעריך hypercholesterolemic Ldlr-/- כימטיים. עם זאת, הקרנה כל הגוף משפיע על תהליך טרשת עורקים עם אפקטים ספציפיים לאתר. נגעים טרשת עורקים בולטים יותר מפותחים בשורש אבי העורקים, בעוד פיתוח נגעים מופחת נצפה בקשתות האבי העורקים35.
חשוב מכך, לא רק גודל הנגע צריך להיות ממוען במחקרים של טרשת עורקים ניסיוניים. הרכב הנגע הוא גם פרמטר מפתח. כמה תכונות פלאק הקשורים ביטויים של המחלה בבני אדם36. בנייה סדרתית של שורש אבי העורקים משאיר מספר סעיפים זמינים לניתוח קפדני של הרכב פלאק. קרע בפלאק בבני אדם מאופיין כיפה סיבי דק עם כמה תאים שריר חלק, התוכן קולגן דליל סימנים של דלקת בפלאק36. למרות הקרע בפלאק הוא אירוע נדיר בדגמי העכבר של טרשת עורקים, סמנים ליציבות פלאק הם אינפורמטיביים כדי להעריך. גישות טרנסלסטיות יכול לאשר ממצאים מכניסטיים מדגמי העכבר ולחשוף תכונות חשובות של מחלת האדם31. מצב דלקתי של שלטים טרשת עורקים יכול להיקבע על ידי כתמים אימונוהיסטוכימיה של VCAM-1, MHC class II, מקרופאגים, ו לימפוציטים30. פרוטוקולים מסוימים להשתמש בסעיפים האורך במישור הטבעי של קשת אבי העורקים או את העורק ברכבעית למדידת גודל טרשת עורקים הנגע והרכב37. עם זאת, שיטה חלופית זו משאירה רק חלקים ספורים שניתן לנתח, המגבילים את יישומיה.
צעד קריטי ראשוני בפרוטוקול זה הוא היכולת לקצור aortas ביעילות. תיאום עין יד מתחת למיקרוסקופ דורש אימון והוא חיוני הן עבור ניתוח מיקרו והצמדה לאחר מכן של קשת אבי העורקים. השלב הקריטי הבא בפרוטוקול זה הוא האוסף של מקטעים סדרתיים משורש אבי העורקים. 80 סעיפים רציפים יש לאסוף עבור כל עכבר, אשר דורש הן מיקוד וסבלנות. מיומנות מתודולוגי יכולה להאיץ את התהליכים המתוארים באופן משמעותי. אף על פי כן, כימות הנגעים הטרשת עורקים. עדיין משימה גוזלת זמן טכנולוגיה חדשה, טיפול אוטומטי, הדמיה בעלי חיים קטנים עשוי להקל על כימות טרשת עורקים ניסיוניים בעתיד. ההתקדמות של טרשת עורקים הוא הפרוטוקולים הניסיוניים ביותר איטי וניסיוני בדגמי העכבר לוקח יותר מארבעה חודשים כדי להשלים13. לכן, יש לאסוף aortas באופן מיטבי בנקודות הקצה של הלמידה. פרוטוקול זה מספק מדריך מקיף למסוק aortas ביעילות והעיבוד המוצע מכין aortas לשימוש רב תכליתי כולל כימות הנגעים בשורש אבי העורקים, קשת אבי העורקים, ועורק ברכבעית. בתקווה הפרוטוקול יכול להפחית את ההבדלים הניסיוניים, לשפר את האמינות של תוצאות, ולהוביל ממצאים כי יהיה לסלול את הדרך עבור טיפולים חדשים נגד טרשת עורקים.

מחלות לב וכלי דם היא הגורם העיקרי של המוות בעולם עם מחלות לב האיסכמי שבץ וחשבונאות קו אחד בכל ארבעה מקרי מוות1. רוב המקרים נגרמים על ידי טרשת עורקים, מחלה המאופיינת על ידי הצטברות איטית של לוחיות השומנים למעלה עם סימנים של דלקת כרונית בעורקים גדולים בגודל בינוני2. המחלה בדרך כלל נותרת בלתי מודעת במשך כמה עשורים עד קרע או שחיקה של הפלאק מעורר פקקת עורקים שמוביל נזק לרקמות.
עורק רגיל מורכב שכבה אינטימה עם תאים אנדותל ו בדלילות שרירים החלקה תאים, שכבת מדיה עם תאים שריר חלקה ולאמפיליות אלסטי, ושכבה האדואנבית שמסביב עם רקמת חיבור רופף3. שמירה של אינטימיות של הסטת LDL התפתחות טרשת עורקים4. הצטברות ושינוי של ליפופרוטאינים להוביל צבירה ומלכודת בתוך אינטימה העורקים5. תגובה דלקתית מעורר על ידי ליפופרוטאינים לכודים ושונה6. תאים אנדותל מתחילים לבטא מולקולות הדבקה, כגון VCAM-1 באתרים בעץ העורקים עם זרימת דם סוערת, המובילה לגיוס של מונוציטים במחזור ולוקיציטים אחרים7. החדירה מונוולוציטים הבדיל לתוך מקרופאגים כי ליפיד שומנים עם שלאחר השינוי מקרופאג בתאי קצף8.
טרשת עורקים נחקרו בדגמי העכבר עם תדירות גוברת מאז אמצע שנות ה-80. C57BL/6 הוא זן הנפוץ ביותר בשימוש בעכבר למחקרים אלה, והוא משמש כרקע גנטי עבור רוב זנים ששונו גנטית9. זן זה הוקם ב10של 1920, ואת הגנום שלה פורסם ב 200211. ניסויים במודלים של העכבר יש מספר יתרונות: המושבות לשכפל מהר, הדיור הוא יעיל בחלל, ו נישואים מפחית את השונות הניסיונית. המודל גם מאפשר מניפולציות גנטיות, כגון מחיקות גנים ממוקדות והחדרת הטרנסגנים. זה הוביל הבנה פתופסולוגית חדשה של המחלה ומטרות טיפול חדש12.
פראי סוג C57BL/6 עכברים הם עמידים באופן טבעי טרשת עורקים. יש להם את רוב הכולסטרול מחזורי ב-HDL, ו נגעים טרשת עורקים מורכבים אינם נוצרים גם כאשר הוזן גבוהה שומן וכולסטרול גבוה דיאטה13. עכברים Hypercholesterolemic, כגון apoe-/- על C57BL/6-רקע, משמשים אפוא מודלים ניסיוניים של טרשת עורקים14,15. חוסר ApoE פוגע ספיגת הכבד של ליפופרוטאינים שארית ומטבוליזם קשה perturbs שומנים. ב apoe-/- עכברים, במחזור הכולסטרול הוא בעיקר חלקיקים vldl, ואת העכברים לפתח שלטים טרשת עורקים מורכבים על דיאטה רגיל צ'או.
Ldlr-/- עכברים לחקות את ההתפתחות של טרשת עורקים לראות בבני אדם עם היפרכולסטרולמיה משפחתית16. Ldlr-/- עכברים צריכים סוג מערבי דיאט לפתח טרשת עורקים17. תזונה מערבית מחקה צריכת המזון האנושי ובדרך כלל מכיל 0.15% כולסטרול. קולטן LDL מזהה ApoB100 ו-ApoE ואת ספיגת המדיטים של חלקיקי LDL באמצעות אנדוקציטוזה. קולטני LDL הם בסיסיים לסיווג כבד של LDL ממחזור הדם, ואילו ביטוי קולטן LDL בתאים המטבטיים אינו משפיע על תהליך זה. זה פותח את האפשרות של השתלת מח עצם של Ldlr+/+ תאים לתוך hypercholesterolemic Ldlr-/- מקבלי הערכה של פיתוח טרשת עורקים. מח עצם הזמן השתמשו בדרך כלל כדי ללמוד את השתתפות של תאים המטבטיים ב טרשת עורקים ניסיוני. עם זאת, השתלת מח עצם יכול להשפיע על גודל והרכב של הפלאק טרשת עורקים, ביצוע פרשנות של תוצאות רב-משמעיים.
גרסאות שונות של apoe-/- ו Ldlr-/- עכברים עם שינויים גנטיים נוספים פותחו כדי ללמוד תהליכים ספציפיים של המחלה18. דוגמה אחת היא APOB100-transgenic Ldlr-/- (hubl) עכברים הנושאים את האדם באורך מלא APOB100 gene19,20. עכברים אלה לפתח היפרכולסטרולמיה טרשת עורקים על דיאטה רגיל צ'או. עם זאת, התפתחות של שלטים טרשת עורקים מורכבים לוקח לפחות שישה חודשים ופרוטוקולים ניסיוני קצר יותר להשתמש בדיאטה המערבית21. חלק גדול של כולסטרול פלזמה הוא במחזור חלקיקי ה-LDL, אשר נותן hubl עכברים יותר אנושי כמו dyslipidemic ליפופרוטאין פרופיל לעומת apoe-/- ו Ldlr- עכברים. עכברים Hubl גם לאפשר מחקרים של apob אנושי כמו אוטואנטיגן22.
מודלים של העכבר טרשת עורקים לפתח שלטים טרשת עורקים מורכבים עם תכונות משותפות של המחלה האנושית. עם זאת, הפלאק עמיד למדי לקרוע עם אוטם שריר הלב. "Atherothrombosis" מזוהה רק בכדי להעריך23,24,25. מודלים מיוחדים של קרע בפלאק פותחו, אבל השדה הנסיוני חסר מודל אמין ומלא לצורך הערכה של הפלאק ייצוב חומרים.
הקוונפיקציה של טרשת עורקים דווחה בדרכים רבות בספרות. מאמצים אחרונים ניסו לתקנן תכנון ניסיוני, ביצוע ודיווח על מחקרי בעלי חיים26. לחוקרים יש העדפות שונות וטכניקות המותאמות למעבדות שלהם. רוב פרוייקטי המחקר הם ייחודיים גם בדרך שהם דורשים כמה שינויים בפרוטוקול. בשל האופי הרב של המחלה, הפקדים האופטימליים משתנים בין פרוייקטים. תנאים מקומיים וחוסר סטנדרטיזציה עלולים לגרום להבדלים הנצפים בהתפתחות המחלה, אשר הסלים מתקדם בתחום המחקר. הבדלים בהבדלים ניסיוניים משמעו גם שחישובי כוח סטטיסטיים צריכים להיות מבוססים על לימודי פיילוט בתנאים מקומיים.
קוונפיקציה של טרשת עורקים מומלץ במספר מיקומים בעץ כלי הדם. פרוטוקול זה מתאר כיצד להשיג תוצאות של שורש אבי העורקים, את קשת אבי העורקים, ואת העורק הראשי בתוך בעכבר בודד, בנוסף לעזוב את שאר העורקים הבטן הת'ורבית לניתוחים אחרים. En ההכנות הפנים לאפשר כימות מהירה של שומנים למעלה הפלאק לאדן בקשת אבי העורקים. ניתן גם לכמת את נטל המחלה בעורקים הרכבתית אם הדגימות מוצגות בקפידה. זמן רב יותר לצרוך הצלבה של שורש אבי העורקים משאיר מספר סעיפים זמינים להערכה מפורטת של הרכב פלאק.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acetone</td>
			<td>VWR Chemicals</td>
			<td>20066.296</td>
			<td>For fixation of sections for immunohistochemistry.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Black electrical insulation tape (50 mm wide)</td>
			<td>Any specialized retailer</td>
			<td>-</td>
			<td>To create pinning beds for aortic arches.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5417C</td>
			<td>Benchtop microcentrifuge.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cork board</td>
			<td>Any specialized retailer</td>
			<td>-</td>
			<td>For cutting hearts in the preparation to cryomount aortic roots.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryostat</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>Microm HM 560</td>
			<td>For serial cryosectioning of aortic roots.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deionized water</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>For rinsing and preparation of solutions.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital camera</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>DC480</td>
			<td>5.1 megapixel CCD for high-resolution images of aortic arches and aortic root sections.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting scissors (10 cm, straight)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>14393</td>
			<td>For general dissection of organs.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont forceps #5 (11 cm, straight)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>500341</td>
			<td>For microdissection of aorta.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 70% (v/v)</td>
			<td>VWR Chemicals</td>
			<td>83801.290</td>
			<td>Highly flammable liquid and vapour, store in a well-ventilated place, and keep cool.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute &#8805;99.8%</td>
			<td>VWR Chemicals</td>
			<td>20821.310</td>
			<td>Highly flammable liquid and vapour, store in a well-ventilated place, and keep cool.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde 4% stabilised, buffered (pH 7.0)</td>
			<td>VWR Chemicals</td>
			<td>9713.1000</td>
			<td>Harmful by inhalation, in contact with skin and if swallowed.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td>NIH</td>
			<td>-</td>
			<td>Image analysis software.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris forceps (10 cm, curved, serrated)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>15915-G</td>
			<td>Used as anatomical forceps.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1096341011</td>
			<td>Flammable liquid, causes serious eye irritation, and may cause drowsiness or dizziness.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kaiser&#39;s glycerol gelatine</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1092420100</td>
			<td>Aqueous mounting medium containing phenol. Suspected of causing genetic defects.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>DM LB2</td>
			<td>For analysis during sectioning and documentation of Oil Red O stained micrographs.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayer&#39;s hematoxylin</td>
			<td>Histolab</td>
			<td>1820</td>
			<td>Non-toxic staining solution without chloral hydrate, but causes serious eye irritation.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayo scissors (17 cm, straight)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501751-G</td>
			<td>For general dissection.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Castroviejo needle holder (9 cm, straight)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>503376</td>
			<td>For pinning of aortic arches.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tubes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>MCT-175-C</td>
			<td>Polypropylene microtubes with snaplock cap.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microlance 3 needles, 23 gauge</td>
			<td>BD</td>
			<td>300800</td>
			<td>For blood collection.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microlance 3 needles, 27 gauge</td>
			<td>BD</td>
			<td>302200</td>
			<td>For perfusion of mice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microvette 500 &#181;L, K3 EDTA</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>20.1341.100</td>
			<td>For blood collection.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microvette 500 &#181;L, Lithium Heparin</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>20.1345.100</td>
			<td>For blood collection.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minutien insect pins, 0.10 mm</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>26002-10</td>
			<td>For pinning of aortic arches.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oil Red O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>O0625</td>
			<td>Not classified as a hazardous substance or mixture.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optimum cutting temperature (OCT) cryomount</td>
			<td>Histolab</td>
			<td>45830</td>
			<td>For embedding tissue.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm M</td>
			<td>Bemis</td>
			<td>PM992</td>
			<td>Paraffin wax film used to create pinning beds for aortic arches.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes (100x20 mm)</td>
			<td>Any cell culture supplier</td>
			<td>-</td>
			<td>Proposed as a storage container for pinned aortas.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>Sterile and RNase-free solution is required for perfusion of mice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Qualitative filter paper (grade 1001)</td>
			<td>Munktell</td>
			<td>120006</td>
			<td>For filtering Oil Red O working solution (typical retention 2-3 &#181;m).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAlater RNA stabilization reagent</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>76106</td>
			<td>For stabilization of RNA in tissue samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNaseZap RNase Decontamination Solution</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM9780</td>
			<td>A surface decontamination solution that destroys RNases on contact.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel handle #3 (13 cm)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>500236</td>
			<td>For cutting hearts in the preparation to cryomount aortic roots.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard scalpel blade #10</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>500239</td>
			<td>For cutting hearts in the preparation to cryomount aortic roots.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>MZ6</td>
			<td>For dissection and en face documentation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sudan IV</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S4261</td>
			<td>Not classified as a hazardous substance or mixture.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrost Plus microscope slides</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>J1800AMNZ</td>
			<td>To collect aortic root sections.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue forceps (15 cm)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501741-G</td>
			<td>For general dissection.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek cryomolds (10x10x5 mm)</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4565</td>
			<td>For embedding aortic roots in OCT.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas scissors (8 cm, straight)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>503378</td>
			<td>For microdissection of aorta.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantification of atherosclerosis in mice

מחלת לב וכלי דם היא הגורם העיקרי למוות בעולם. הגורם הבסיסי ברוב המקרים הוא טרשת עורקים, אשר בחלק מחלה דלקתית כרונית. מחקרים כטרשת עורקים ניסויית הובהר את התפקיד של כולסטרול ודלקת בתהליך המחלה. זה הוביל ניסויים קליניים מוצלחים עם סוכני התרופות כי להפחית את הביטויים הקליניים של טרשת עורקים. ניסויים זהירים ומבוקרת היטב בדגמי העכבר של המחלה יכולים להבהיר עוד יותר את הפתוגנזה של המחלה, אשר אינו מובן במלואו. ניתוח הנגע מתוקננת חשוב להפחית את השונות הניסיונית ולהגדיל את התוכנות. קביעת גודל הנגע בשורש אבי העורקים, קשת אבי העורקים, ועורק ברכבעית הם נקודות קצה נפוצות ב טרשת עורקים ניסיוניים. פרוטוקול זה מספק תיאור טכני עבור הערכה של טרשת עורקים בכל האתרים האלה בעכבר אחד. הפרוטוקול שימושי במיוחד כאשר החומר מוגבל, כמו לעתים קרובות המקרה כאשר בעלי חיים מהונדסים גנטית מאופיינים.

בדגמי העכבר של טרשת עורקים הנגעים הבולטים ביותר נוטים להתפתח בשורש אבי העורקים וקשת אבי העורקים. פרוטוקול זה מתאר כימות טרשת עורקים בשורש אבי העורקים, קשת אבי העורקים, והעורק הראשי בעכבר בודד. נגעים מדידה בתוך החזה בסדר העורקים ואת אבי העורקים הבטן נמצאים רק בבעלי חיים עם מחלות מראש. בפרוטוקול זה, חלקים אלה אינם מנותח עבור נטל טרשת עורקים, אך נשמר עבור ניתוח עוקבות של רמות mRNA או ניתוחים אחרים. סעיפים סידוריים של נגעים טרשת עורקים בשורש אבי העורקים מוצגים בדרך כלל בגרף עם גודל הנגע על ציר yומרחק לסינוס האבי העורקים על ציר ה-x28. מחתך אמיתי הוא חיוני לכימות גודל הנגעים. מקטעים אלכסוניים יכולים להיות באופן מיותר בגודל של הנגעים והטיה של 20 ° בלבד יכול להיות באופן מושלם משטח נגע מוחלט על ידי 15%29. עם זאת, חישוב החלק הנגעים של אזור כולל כלי הקיבול הופך את התוצאה פחות רגיש להבדלים זווית אפשרית במהלך בנייה (איור 4A). שיטה סטטיסטית מתאימה לזיהוי הבדלים בין קבוצות היא בדרך כלל ניתוח שתי כיוון רגיל של סטיה (ANOVA). בונפררוני פוסט בדיקות מתבצעות אז כדי לזהות הבדלים ברמות מסוימות. ההבדל הפחות משמעותי של פישר יכול לשמש גם כמבחן מעקב ל-ANOVA. הוא מפחית את הסבירות של שגיאות סטטיסטיות מסוג II, אך אין להתחשב בהשוואות מרובות. בנוסף, זה יכול להיות להמחשה כדי לחשב את האזור תחת עקומת או את גודל הנגע הממוצע לכל עכבר ולהציג את הנתונים בעלילה נקודה כדי להמחיש עוד וריאציה בודדת בתוך הקבוצות (איור 4B).
שמן אדום O הוא צבע מסיס שומן אדום בהיר, אשר כתמי שומנים ניטרליים. שומנים קוטביים בקרום התא אינם מוכתמים. שמן אדום כתמים ניתן לבצע על טרי, קפוא, או בדיקות קבוע, אבל לא על פרפין-מוטבע דגימות עקב הסרת שומנים בתהליך הנדרש היחידזציה. כימות של הצטברות השומנים המסיביות יכול להתבצע על ידי צבע סף אזור הנפט האדום החיובי של אזור הנגע הכולל (איור 4C). המטאוקסילין מייצרת כתמים כחולים של גרעיני תאים, העוזר להמחיש מורפולוגיה של הפלאק. העורקים הימניים והשמאליים בדרך כלל מתפצלים מאבי העורקים סביב 250 יקרומטר מתוך סינוס של אבי העורקים27, אשר לעתים קרובות חופפים עם הגדלים הבולטים ביותר של נגעים. חלקים צולבים מאזור זה מוצגים לעתים קרובות כתוצאות מייצגות (איור 4D).
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59828/59828fig4.jpg"> איור 4: נגעים טרשת עורקים בשורש אבי העורקים. (א) 23 שבועות מוח עצם הזכר המזון המערבי התזונה המערבית במשך שמונה שבועות הוערכו כדי לקבוע את ההשפעה של תאי T Smad7-לקויה על פיתוח טרשת עורקים. ניסיוני Ldlr-/- כימניות קיבל Cd4-היצורים+Smad7fl/fl מח עצם ושולטת קיבל Cd4-יצורים+Smad7fl/+ מח עצם. הגרף מראה כימות של אזור טרשת עורקים נגעים משמונה סעיפים רצופים, 100-800 יקרומטר מן הסינוס של אבי העורקים מוצג כחלק הנגעים של משטח הספינה סה כ (Cd4-היצורים+Smad7fl/+/Ldlr-/- n = 6, Cd4-Smad7+fl/fl/Ldlr-/- n = 9, 2-way ANOVA עם מבחן post של bonferroni, גרף מראה ממוצע ± SEM, סוגריים מסולסלים מציינים רמת משמעות עבור השוואת הזנים). (ב) העלילה נקודה משולבת וגרף בר מראה את האזור ממוצע טרשת עורקים נגעים מתוך סעיפים השורש של אבי העורקים (Cd4-היצור+Smad7fl/+/Ldlr-/- n = 6, Cd4-יצור+Smad7fl/fl/ Ldlr-/- n = 9, ה- t-test של הסטודנט) (C) חלק של שמן אדום ויטראז ' בנגעים (Cd4-היצורים+Smad7fl/+/Ldlr-/- n = 4, Cd4-יצור+Smad7fl/חליל /Ldlr-/- n = 6, t-test של סטודנט, ns = לא משמעותי) (B-C) נקודות מייצגות עכברים בודדים ובארים מראה משמעות ± SEM. (ד) מיקרוגרפים נציג מראה שמן אדום O כתמים (באדום צבע) של שומנים ניטרליים בשורש אבי העורקים 300 יקרומטר מן הסינוס של אבי העורקים (50x הגדלה), סרגל קנה מידה = 500 יקרומטר. *p ≤ 0.05, * * *p ≤ 0.001. דמות זו שונתה מ-Gisterå ואח '31. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59828/59828fig4large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
שמן אדום O יכול לשמש עבור כתמים של פנים en הכין aortas, אבל הפרוטוקול הזה משתמש בסודאן IV, אחרת צבע diazo נוח מסיסים שומן. סודן הרביעי בבירור לדמיין טרשת עורקים לוחות בצבע כתום אדום על ידי צביעת שומנים, טריגליצרידים, וליפופרוטאינים. הסרת הרקע האפל בתמונות מייצגות של קשתות האבי העורקים הפנים יכול לשפר את התצוגה החזותית (איור 5A). בדרך כלל הנגע מופץ בדרך כלל בתוך קבוצות, המאפשר בדיקות סטטיסטיות עם t-test של הסטודנט בין קבוצות. העלילה נקודה המציגה הן עכברים בודדים ואת הממוצע, אשר מושווה בין קבוצות, היא דרך אינפורמטיבית להציג את התוצאות (איור 5B-C). מאחר והווריאציה בתוך קבוצות בדרך כלל שונה בין מיקומים בעץ כלי הדם, יש צורך בדרך כלל בחישובי צריכת חשמל נפרדים. וריאציה מיותרת ניתן למנוע על ידי מיומנות השיטה וסטנדרטיזציה פרוטוקול. השגת תוצאות משמעותיות סטטיסטית חשוב, אבל הרלוונטיות הביולוגית של הבדל נצפה תמיד צריך להיחשב גם.
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59828/59828fig5.jpg"> איור 5: נגעים טרשת עורקים בקשת אבי העורקים בעורק ברכבעית. (א) נציג בפנים מיקרוגרפים האבי העורקים עם שלטים מלאים השומנים מוכתם עם סודן IV (בצבע כתום) מ 20 שבועות עכברים ישנים האכילו את הדיאטה המערבית במשך עשרה שבועות, דמיינו יחד. סרגל בקנה מידה = 2 מ"מ. האדם APOB100- transgenic-/- (hubl) עכברים שימשו כפקדים ואת הקבוצה הניסיונית היתה מורכבת עכברים tcr-transgenic עם תאי T מגיבים LDL (BT1) crossbred עכברים hubl . (ב) טרשת עורקים נגעים בקשת אבי העורקים (hubl n = 10, BT1xHuBL n = 12; מבחן tשל הסטודנט). (ג) טרשת עורקים נגעים בעורק הראשי (hubl n = 8, BT1xHuBL n = 9, מבחן t-הסטודנט). (B-C) נקודות מייצגות עכברים בודדים, משמעות המייצגי פעילויות היא ± SEM. *p ≤ 0.05. דמות זו השתנתה מגיסטרזה ואח '32. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59828/59828fig5large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
משלים איור 1: ארגון אלטרנטיבי של שקופיות עבור סעיפים סדרתיים של שורש אבי העורקים. ארגון שקופיות פשוט ושיטתי לאיסוף מקטעים משורש אבי העורקים. האוסף מאפשר כתמים של שמן אדום או עבור שומנים ואימונוהיסטוכימיה או אימונוofor, כתמים. שקופיות ייעודיות עבור כתמים אדומים Picrosirius של קולגן מושמטים. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59828/2019-JoVE-Figure-S1.eps">אנא לחץ כאן כדי להוריד קובץ זה.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Atherosclerosis in Mice at JoVE.com

Quantification of Atherosclerosis in Mice

מודלים murine של טרשת עורקים הם כלים שימושיים כדי לחקור מסלולים פתוגניים ברמה מולקולרית, אבל דורשים קוונפיקציה סטנדרטית של פיתוח נגעים. פרוטוקול זה מתאר שיטה ממוטבת כדי לקבוע את גודל הנגעים בכלי העורקים העיקריים, כולל שורש אבי העורקים, קשת אבי העורקים, ועורק ברככתית.

קוונפיקציה של טרשת עורקים בעכברים

Cardiovascular disease is the main cause of death in the world. The underlying cause in most cases is atherosclerosis, which is in part a chronic ...

מחלות לב וכלי דם היא הגורם העיקרי למוות ברחבי העולם. מודלים עכבר הם כלים שימושיים לחקר מחלה זו ואת הפרוטוקול שלנו ניתן להשתמש כדי לכמת טרשת עורקים בעכברים. באמצעות פרוטוקול זה, גודל הנגע ניתן למדוד בשלושה מיקומי כלי דם.שורש העורק, קשת העורק העורקי ועורק הברכיוצפלי. כימות טרשת עורקים בעכברים יכול להיות משימה מייגעת. סיפקנו צעדים מפורטים שאנו מקווים שיכולים להאיץ את התהליך.חלק מצעדים אלה קשה לתאר בכתב. אנו מקווים כי וידאו זה יעזור לך בהשגת ניתוח גודל נגע טרשת יותרת התריס חזק. לאחר קצירת לב העכבר על פי פרוטוקולים סטנדרטיים, מניחים את הלב על מיטת פקק, צד הגחוני מתחת למיקרוסקופ ניתוח ולהשתמש במחט כדי לתקן את הלב לתערם דרך הבייפקס.מחזיקים את בסיס הלב במטלפים אנטומיים, משתמשים באזמל המוחזק בזווית של 20 מעלות במישור הסגיטלי, וב-20 מעלות במישור ההפוך, כדי לחתוך את שני שליש מהלב. להטמיע את שורש האאורטיק ואת הבסיס של הלב תרכובת טמפרטורת חיתוך אופטימלית, או OCT, בעדינות לסחוט את הלב עם המלקחיים כדי למלא את שורש האאורטיק עם תרכובת ולהסיר את כל בועות האוויר. מעבירים את הדגימה לתחתית קריומאולד מלא OCT עם שורש האורטי בניצב אל פני השטח התחתונים ולהקפיא את המתחם על קרח יבש.לאחר מכן לאחסן את דגימת הרקמה בשקית מקפיא במינוס 80 מעלות צלזיוס עד קריוסקציה. כדי להכין מיטת הצמדה לניתוח פנים en, קפל קטע של סרט שעווה פרפין שמונה פעמים כדי להפוך משטח שטוח 25 על 25 מ"מ לעטוף סרט בידוד חשמלי שחור סביב הסרט כדי להפוך רקע כהה עבור aorta. מקם תווית בצד האחורי של מיטת ההצמידים ולהשתמש בעיפרון הפניה כדי להקליט את מספר הזיהוי של העכבר.מעבירים את קשת העורקים למיטת ההצמיד ומוסיפים טיפה של PBS לרקמה. באמצעות מיקרוסקופ סטריאו, לנקות את העורקים מן רקמת השומן periadventitial הנותרים ולהשתמש מספריים Vannas ו מדפים Dumont לקלף בעדינות את כל רקמת השומן שמסביב מבלי לתפעל או לפגוע בעצם העורקים. לאחר מכן, הציגו את המספריים של ואנה לתוך לומן העורק כדי לחשוף את המשטח האטימלי.התחילו לחתוך את העקמומיות החיצונית של הקשת העולה בכיוון הדיסטלי, ממשיכים לחתוך את הענפים, כולל העורק הברכיוצפלי וחוסכים את החלק הגבי של אזור בית החזה היורד. כדי להציג את המשטח האטימלי, חותכים את העקמומיות הפחותה ומקפלים את העורקים. באמצעות מחזיק מחט Micro Castroviejo, לאבטח את הקשת הפתוחה למיטת ההצמיד עם הקצה הקהה של סיכות חרקים minuten מבלי למתוח את הדגימה, בעדינות לכופף את הסיכות מן הדגימה כמו הרקמה מוחזקת במקום.לאחר מכן אחסן את הקשת המוצמדת עם הפנים כלפי מטה בצלחת פטרי של PBS בארבע מעלות צלזיוס. עבור סודאן הרביעי הכתמת, לשטוף את הדגימה במשך חמש דקות בצלחת פטרי של 70% אתנול עם הקשת פונה כלפי מטה, לפני העברת הדגימה לצלחת של סודן הרביעי עובד פתרון במשך שבע דקות. בסוף הדגירה, שטפו את הדגימה בשתי שטיפות של שלוש דקות באתנול של 80% כדי להכתים את המשטח האטימלי הרגיל, ואחריו שטיפה סופית ב- PBS לפני החזרת הרקמה לצלחת פטרי המקורית שלה.לאחר מכן לרכוש מיקרוגרפים תחת מיקרוסקופ סטריאו מחובר למצלמה דיגיטלית בהגדלה 10X, קבלת תמונות של הקשת מוצמד שקוע PBS, באמצעות משקולות מתכת קטנות להחזיק את מיטת הצמדה לתחתית צלחת פטרי. כדי להשיג קריוסקופים של שורש האאורטיק המוטבע, הגדר את טמפרטורת ההקפאה למינוס 20 מעלות צלזיוס ואת עובי החלק ל -10 מיקרומטר. הר את בלוק OCT המכיל את שורש האב העורקים על מחזיק הדגימה עם רקמת החדר פונה כלפי חוץ.אבטח את המיקום עם עוד כמה OCT במידת הצורך. שורש האאורטיק צריך להיות ממוקם כעת בניצב ללהב הסכין. לאסוף את קטעי הבקרה הראשוניים המכילים רקמת שריר הלב על שקופיות מיקרוסקופ רגיל, בדיקת ההתקדמות דרך הרקמה כל 200 מיקרומטר תחת מיקרוסקופ אור.כאשר מופיעה סף האאורטיק הראשון, הטה את הדגימה לכיוון סף הנקודה אפס כדי ליישר את מישור המקטע עם שני ההקשה האחרים וספיר כל קטע מיקרומטר שנחתך מנקודה אפס ואילך. התחילו לאסוף מקטעים לניתוח מ-90 מיקרומטר ואילך בהתאם לשקופית המתוכננת, עד שהושגו 800 מיקרומטר מנקודת האפס. חישוב שבר הנגע של שטח כלי השיט הכולל של שורש בית הדם הופך את הנתונים לפחות רגישים להבדלי זווית אפשריים במהלך ההקטעה.בנוסף, זה יכול להיות המחשה כדי לחשב את האזור מתחת לעקומה או את גודל ההנעה atheroto לכל עכבר ולהציג את הנתונים בעלילת נקודה כדי להמחיש עוד יותר וריאציות בודדות בתוך קבוצות. הצטברות שומנים נגע ניתן לכמת על ידי צבע סף שמן אדום O אזורים חיוביים של אזור ההיתוך הכולל. העורקים הכליליים מימין ומשמאל בדרך כלל לסטות מן העורקים סביב 250 מיקרומטר מן סינוס העורקים אשר לעתים קרובות עולה בקנה אחד עם גדלי הנגע הבולטים ביותר.הסרת הרקע הכהה בתמונות מייצגות של קשתות אאורטיק הפנים en יכול לשפר את התצוגה החזותית. גודל ההיתוך מופץ בדרך כלל בקבוצות, ומאפשר ניתוח סטטיסטי באמצעות מבחן t של סטודנט בין קבוצות. אנו ממליצים להתאמן עם חומר בדיקה כלשהו עד שתשיג כישורים מספיקים לעיבוד הדגימות הניסיוניות שלך.אם גודל הנגע שונה בין קבוצות, אתה צריך לקבוע את המנגנון, כמו ניתוח הרכב נגע הוא בדרך כלל הצעד הבא להמשיך.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Measurement of &#947;HV68 Infection in Mice

Measurement of ÃƒÅ½Ã‚Â³HV68 Infection in Mice

מדידה של זיהום γHV68 ב עכברים

&gamma;-Herpesviruses (&gamma;-HVs) are notable for their ability to establish latent infections of lymphoid cells1. The narrow host range of human ...

Depletion and Reconstitution of Macrophages in Mice

דלדול המשאבים ואת הכינון מחדש של מקרופאגים בעכברים

Macrophages are critical players in the innate  immune response to infectious challenge or injury, initiating the innate immune  response and directing ...

Measuring Local Anaphylaxis in Mice

מדידת אנפילקסיס המקומי בעכברים

Allergic responses are the result of the activation of mast cells and basophils, and the subsequent release of vasoactive and proinflammatory mediators. ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

אינדוקציה של Murine דלקת מעיים על ידי העברת המאמצת של מפעיל CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; גבוה</sup&gt; תאי T לעכברי immunodeficient

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

Culture of Macrophage Colony-stimulating Factor Differentiated Human Monocyte-derived Macrophages

תרבות של Macrophage מושבה מגרה פקטור בדיל אדם המקרופאגים מונוציטים הנגזר

A protocol is presented for cell culture of macrophage colony-stimulating factor (M-CSF) differentiated human monocyte-derived macrophages. For initiation ...

Noninvasive Sampling of Mucosal Lining Fluid for the Quantification of In Vivo Upper Airway Immune-mediator Levels

Noninvasive Sampling of Mucosal Lining Fluid for the Quantification of In Vivo Upper Airway Immune-mediator Levels

לא פולשנית דגימה של נוזל שורות Mucosal עבור כימות של In Vivo דרכי הנשימה העליונות החיסון-מגשרת רמות

This protocol describes noninvasive sampling of undisturbed upper airway mucosal lining fluid. It also details the extraction procedure used prior to the ...

Characterization of Thymus-dependent and Thymus-independent Immunoglobulin Isotype Responses in Mice Using Enzyme-linked Immunosorbent Assay

אפיון של אימונוגלובולינים התימוס תלוית ועצמאי התימוס תגובות Isotype בעכברים באמצעות אנזים-מקושרים Immunosorbent Assay

Antibodies, also termed as immunoglobulins (Ig), secreted by differentiated B lymphocytes, plasmablasts/plasma cells, in humoral immunity provide a ...

Quantification of Antibody-dependent Enhancement of the Zika Virus in Primary Human Cells

כימות של נוגדנים תלויי שיפור של הנגיף Zika בתאי אדם ראשי

The recent emergence of the flavivirus Zika and neurological complications, such as Guillain-Barr&#233; syndrome and microcephaly in infants, has brought ...

Isolation and Quantification of Zika Virus from Multiple Organs in a Mouse

בידוד וקוונפיקציה של וירוס Zika ממספר איברים בעכבר

The methods being presented demonstrate laboratory procedures for the isolation of organs from Zika virus infected animals and the quantification of viral ...