Name: quantification of atherosclerosis in mice
Uploaded: 2019-06-12T15:00:00
Duration: 6 min 59 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Atherosclerosis in Mice at JoVE.com

우리는 지난 반세기 동안이 프로토콜을 개발하는 데 도움이 괴란 K 핸슨의 실험 심장 혈관 연구 단위의 모든 과거 회원에게 감사드립니다. 안토니노 니콜레티, 싱화 저우, 안나 카린 로버트슨, 잉거 보딘의 공헌에 특히 감사드립니다. 이 작품은 프로젝트 보조금 06816및 Linnaeus가 스웨덴 연구 위원회의 349-2007-8703을 지원하고 스웨덴 심장 폐 재단, 스톡홀름 카운티 위원회, 교수 난나 스바르츠 재단, 루와 한스 오스테만에서 보조금에 의해 지원되었다 카롤린스카 연구소의 의학 연구 재단, 카롤린스카 인스티튜트의 연구 재단 및 노인성 질환 재단.

<ol>
	<li>Lozano, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+and+regional+mortality+from+235+causes+of+death+for+20+age+groups+in+1990+and+2010:+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+Study+2010.">Global and regional mortality from 235 causes of death for 20 age groups in 1990 and 2010: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2010.</a> Lancet. 380 (9859), 2095-2128 (2012).</li><li>Gistera, A., Hansson, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+immunology+of+atherosclerosis.">The immunology of atherosclerosis.</a> Nature Reviews Nephrology. 13 (6), 368-380 (2017).</li><li>Hansson, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation,+atherosclerosis,+and+coronary+artery+disease.">Inflammation, atherosclerosis, and coronary artery disease.</a> New England Journal of Medicine. 352 (16), 1685-1695 (2005).</li><li>Williams, K. J., Tabas, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+response-to-retention+hypothesis+of+early+atherogenesis.">The response-to-retention hypothesis of early atherogenesis.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 15 (5), 551-561 (1995).</li><li>Pentikainen, M. O., Oorni, K., Ala-Korpela, M., Kovanen, P. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modified+LDL+-+trigger+of+atherosclerosis+and+inflammation+in+the+arterial+intima.">Modified LDL - trigger of atherosclerosis and inflammation in the arterial intima.</a> Journal of Internal Medicine. 247 (3), 359-370 (2000).</li><li>Ruuth, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Susceptibility+of+low-density+lipoprotein+particles+to+aggregate+depends+on+particle+lipidome,+is+modifiable,+and+associates+with+future+cardiovascular+deaths.">Susceptibility of low-density lipoprotein particles to aggregate depends on particle lipidome, is modifiable, and associates with future cardiovascular deaths.</a> European Heart Journal. 39 (27), 2562-2573 (2018).</li><li>Nakashima, Y., Raines, E. W., Plump, A. S., Breslow, J. L., Ross, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Upregulation+of+VCAM-1+and+ICAM-1+at+atherosclerosis-prone+sites+on+the+endothelium+in+the+ApoE-deficient+mouse.">Upregulation of VCAM-1 and ICAM-1 at atherosclerosis-prone sites on the endothelium in the ApoE-deficient mouse.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 18 (5), 842-851 (1998).</li><li>Goldstein, J. L., Ho, Y. K., Basu, S. K., Brown, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Binding+site+on+macrophages+that+mediates+uptake+and+degradation+of+acetylated+low+density+lipoprotein,+producing+massive+cholesterol+deposition.">Binding site on macrophages that mediates uptake and degradation of acetylated low density lipoprotein, producing massive cholesterol deposition.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 76 (1), 333-337 (1979).</li><li>Paigen, B., Morrow, A., Brandon, C., Mitchell, D., Holmes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variation+in+susceptibility+to+atherosclerosis+among+inbred+strains+of+mice.">Variation in susceptibility to atherosclerosis among inbred strains of mice.</a> Atherosclerosis. 57 (1), 65-73 (1985).</li><li>Russell, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origins+and+history+of+mouse+inbred+strains:+contributions+of+Clarence+Cook+Little.">Origins and history of mouse inbred strains: contributions of Clarence Cook Little.</a> Origins of Inbred Mice, Morse, HC, eds. (Academic Press, NY). , 33-43 (1978).</li><li>Waterston, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+sequencing+and+comparative+analysis+of+the+mouse+genome.">Initial sequencing and comparative analysis of the mouse genome.</a> Nature. 420 (6915), 520-562 (2002).</li><li>Gistera, A., Ketelhuth, D. F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid-driven+immunometabolic+responses+in+atherosclerosis.">Lipid-driven immunometabolic responses in atherosclerosis.</a> Current Opinion in Lipidology. 29 (5), 375-380 (2018).</li><li>Maganto-Garcia, E., Tarrio, M., Lichtman, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+atherosclerosis.">Mouse models of atherosclerosis.</a> Current Protocols in Immunology. Chapter 15, (2012).</li><li>Plump, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Severe+hypercholesterolemia+and+atherosclerosis+in+apolipoprotein+E-deficient+mice+created+by+homologous+recombination+in+ES+cells.">Severe hypercholesterolemia and atherosclerosis in apolipoprotein E-deficient mice created by homologous recombination in ES cells.</a> Cell. 71 (2), 343-353 (1992).</li><li>Zhang, S. H., Reddick, R. L., Piedrahita, J. A., Maeda, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+hypercholesterolemia+and+arterial+lesions+in+mice+lacking+apolipoprotein+E.">Spontaneous hypercholesterolemia and arterial lesions in mice lacking apolipoprotein E.</a> Science. 258 (5081), 468-471 (1992).</li><li>Ishibashi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypercholesterolemia+in+low+density+lipoprotein+receptor+knockout+mice+and+its+reversal+by+adenovirus-mediated+gene+delivery.">Hypercholesterolemia in low density lipoprotein receptor knockout mice and its reversal by adenovirus-mediated gene delivery.</a> Journal of Clinical Investigation. 92 (2), 883-893 (1993).</li><li>Ishibashi, S., Goldstein, J. L., Brown, M. S., Herz, J., Burns, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Massive+xanthomatosis+and+atherosclerosis+in+cholesterol-fed+low+density+lipoprotein+receptor-negative+mice.">Massive xanthomatosis and atherosclerosis in cholesterol-fed low density lipoprotein receptor-negative mice.</a> Journal of Clinical Investigation. 93 (5), 1885-1893 (1994).</li><li>Ketelhuth, D. F., Gistera, A., Johansson, D. K., Hansson, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cell-based+therapies+for+atherosclerosis.">T cell-based therapies for atherosclerosis.</a> Current Pharmaceutical Design. 19 (33), 5850-5858 (2013).</li><li>Skalen, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subendothelial+retention+of+atherogenic+lipoproteins+in+early+atherosclerosis.">Subendothelial retention of atherogenic lipoproteins in early atherosclerosis.</a> Nature. 417 (6890), 750-754 (2002).</li><li>Boren, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+low+density+lipoprotein+receptor-binding+site+in+apolipoprotein+B100+and+the+modulation+of+its+binding+activity+by+the+carboxyl+terminus+in+familial+defective+apo-B100.">Identification of the low density lipoprotein receptor-binding site in apolipoprotein B100 and the modulation of its binding activity by the carboxyl terminus in familial defective apo-B100.</a> Journal of Clinical Investigation. 101 (5), 1084-1093 (1998).</li><li>Sanan, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low+density+lipoprotein+receptor-negative+mice+expressing+human+apolipoprotein+B-100+develop+complex+atherosclerotic+lesions+on+a+chow+diet:+no+accentuation+by+apolipoprotein(a).">Low density lipoprotein receptor-negative mice expressing human apolipoprotein B-100 develop complex atherosclerotic lesions on a chow diet: no accentuation by apolipoprotein(a).</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 95 (8), 4544-4549 (1998).</li><li>Gistera, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vaccination+against+T-cell+epitopes+of+native+ApoB100+reduces+vascular+inflammation+and+disease+in+a+humanized+mouse+model+of+atherosclerosis.">Vaccination against T-cell epitopes of native ApoB100 reduces vascular inflammation and disease in a humanized mouse model of atherosclerosis.</a> Journal of Internal Medicine. , (2017).</li><li>Johnson, J. L., Jackson, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atherosclerotic+plaque+rupture+in+the+apolipoprotein+E+knockout+mouse.">Atherosclerotic plaque rupture in the apolipoprotein E knockout mouse.</a> Atherosclerosis. 154 (2), 399-406 (2001).</li><li>Calara, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+plaque+rupture+and+secondary+thrombosis+in+apolipoprotein+E-deficient+and+LDL+receptor-deficient+mice.">Spontaneous plaque rupture and secondary thrombosis in apolipoprotein E-deficient and LDL receptor-deficient mice.</a> The Journal of Pathology. 195 (2), 257-263 (2001).</li><li>Caligiuri, G., Levy, B., Pernow, J., Thoren, P., Hansson, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myocardial+infarction+mediated+by+endothelin+receptor+signaling+in+hypercholesterolemic+mice.">Myocardial infarction mediated by endothelin receptor signaling in hypercholesterolemic mice.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 96 (12), 6920-6924 (1999).</li><li>Daugherty, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recommendation+on+Design,+Execution,+and+Reporting+of+Animal+Atherosclerosis+Studies:+A+Scientific+Statement+From+the+American+Heart+Association.">Recommendation on Design, Execution, and Reporting of Animal Atherosclerosis Studies: A Scientific Statement From the American Heart Association.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 37 (9), (2017).</li><li>Paigen, B., Morrow, A., Holmes, P. A., Mitchell, D., Williams, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assessment+of+atherosclerotic+lesions+in+mice.">Quantitative assessment of atherosclerotic lesions in mice.</a> Atherosclerosis. 68 (3), 231-240 (1987).</li><li>Purcell-Huynh, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+expressing+high+levels+of+human+apolipoprotein+B+develop+severe+atherosclerotic+lesions+in+response+to+a+high-fat+diet.">Transgenic mice expressing high levels of human apolipoprotein B develop severe atherosclerotic lesions in response to a high-fat diet.</a> Journal of Clinical Investigation. 95 (5), 2246-2257 (1995).</li><li>Nicoletti, A., Kaveri, S., Caligiuri, G., Bariety, J., Hansson, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunoglobulin+treatment+reduces+atherosclerosis+in+apo+E+knockout+mice.">Immunoglobulin treatment reduces atherosclerosis in apo E knockout mice.</a> Journal of Clinical Investigation. 102 (5), 910-918 (1998).</li><li>Gistera, A., Ketelhuth, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunostaining+of+Lymphocytes+in+Mouse+Atherosclerotic+Plaque.">Immunostaining of Lymphocytes in Mouse Atherosclerotic Plaque.</a> Methods in Molecular Biology. 1339, 149-159 (2015).</li><li>Gistera, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transforming+growth+factor-beta+signaling+in+T+cells+promotes+stabilization+of+atherosclerotic+plaques+through+an+interleukin-17-dependent+pathway.">Transforming growth factor-beta signaling in T cells promotes stabilization of atherosclerotic plaques through an interleukin-17-dependent pathway.</a> Science Translational Medicine. 5 (196), (2013).</li><li>Gistera, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-Density+Lipoprotein-Reactive+T+Cells+Regulate+Plasma+Cholesterol+Levels+and+Development+of+Atherosclerosis+in+Humanized+Hypercholesterolemic+Mice.">Low-Density Lipoprotein-Reactive T Cells Regulate Plasma Cholesterol Levels and Development of Atherosclerosis in Humanized Hypercholesterolemic Mice.</a> Circulation. 138 (22), 2513-2526 (2018).</li><li>Daugherty, A., Whitman, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+atherosclerosis+in+mice.">Quantification of atherosclerosis in mice.</a> Methods in Molecular Biology. 209, 293-309 (2003).</li><li>Baglione, J., Smith, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assay+for+mouse+atherosclerosis+in+the+aortic+root.">Quantitative assay for mouse atherosclerosis in the aortic root.</a> Methods in Molecular Biology. 129, 83-95 (2006).</li><li>Schiller, N. K., Kubo, N., Boisvert, W. A., Curtiss, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+gamma-irradiation+and+bone+marrow+transplantation+on+atherosclerosis+in+LDL+receptor-deficient+mice.">Effect of gamma-irradiation and bone marrow transplantation on atherosclerosis in LDL receptor-deficient mice.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 21 (10), 1674-1680 (2001).</li><li>Naghavi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+vulnerable+plaque+to+vulnerable+patient:+a+call+for+new+definitions+and+risk+assessment+strategies:+Part+I.">From vulnerable plaque to vulnerable patient: a call for new definitions and risk assessment strategies: Part I.</a> Circulation. 108 (14), 1664-1672 (2003).</li><li>Seijkens, T. T. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+CD40-Induced+TRAF6+Signaling+in+Macrophages+Reduces+Atherosclerosis.">Targeting CD40-Induced TRAF6 Signaling in Macrophages Reduces Atherosclerosis.</a> Journal of the American College of Cardiology. 71 (5), 527-542 (2018).</li></ol>

저자는 공개 할 것이 없다.

심혈관 질환은 세계의 주요 살인자이며 새로운 예방 측정이 필요합니다2. 질병의 마우스 모델은 병리생리학 및 실험 적 치료의 조사를위한 포괄적 인 플랫폼을 제공합니다13. 신뢰할 수 있는 병변 크기 정량화는 이 접근을 위해 필수적입니다. 그러나 정량화 방법은 실험실마다 다릅니다. 표준화 및 최적화는 1980년대13,27,33,34이후 지속적인 프로세스였습니다. 대동맥 뿌리는 실험적인 죽상 동맥 경화증을 정량화하는 가장 인기있는 사이트로 부상했습니다. 플라크의 단면은 그룹 간의 플라크 볼륨을 비교할 수 있습니다. En 얼굴 제제는 대류의 더 큰 세그먼트에서 병변 정량화를 선호한다. en face 방법은 플라크 수량을 시각화하고 플라크 영역 커버리지의 정량화를 가능하게 하지만 플라크 두께를 고려하지 않습니다. 관찰된 차이에 대한 생물학적 관련성은 혈관 트리의 상이한 위치에서 일관된 결과에 의해 입증됩니다. 다른 위치에서 동맥 경화 증 개발 평가 가능한 사이트 특정 효과 해결. 죽상 동맥 경화증 발달에 이식 된 조혈 세포의 효과는 콜레스테롤 성 Ldlr-/- 키메라에서 평가 될 수있다. 그러나, 전신 조사는 사이트 특정 효력을 가진 동맥 경화증 프로세스에 영향을 미칩니다. 더 눈에 띄는 죽상 경화성 병변은 대동맥 근에서 개발되고, 감소 된 병변 발달은 대동맥 아치(35)에서관찰된다.
중요한 것은 병변 크기뿐만 아니라 실험적 죽상 동맥 경화증의 연구에서 다루어져야한다는 것입니다. 병변 조성물은 또한 중요한 매개변수이다. 몇몇 패는 인간36에있는 질병의 표현과 연관되었습니다. 대동맥 근의 직렬 단면은 플라크 조성물을 주의 깊게 분석하는 데 사용할 수 있는 여러 섹션을 남깁니다. 인간에서플라크 파열은 평활근 세포가 거의 없는 얇은 섬유질 캡, 플라크(36)에서의콜라겐 함량 및 염증의 징후를 특징으로 한다. 플라크 파열은 동맥 경화증의 마우스 모델에서 드문 사건이지만, 플라크 안정성을위한 마커는 평가하는 유익한. 번역 접근법은 마우스 모형에서 기계론적인 사실 인정을 확인하고 인간 질병31의중요한 특징을 밝힐 수 있었습니다. 죽상 경화성 플라크의 염증 상태는 VCAM-1, MHC 클래스 II, 대식세포 및 림프구30의면역 성 화학 염색에 의해 결정될 수 있었다. 일부 프로토콜은 동맥 경화성 병변 크기 및 조성물37을측정하기 위한 대동맥 아치 또는 brachiocephalic 동맥의 관상 측면에서 세로 절편을 사용한다. 그러나 이 대체 방법은 분석할 섹션이 거의 남지 므로 응용 프로그램이 제한됩니다.
이 프로토콜의 초기 중요한 단계는 대류물을 효율적으로 수확하는 기능입니다. 현미경의 밑에 손 과 눈 조정은 연습을 요구하고 현미경 과 대동맥 아치의 후속 고정을 위해 둘 다 중요합니다. 이 프로토콜의 다음 중요한 단계는 대동맥 루트의 직렬 섹션 모음입니다. 각 마우스에 대해 80개의 연속 섹션을 수집해야 하며, 이 섹션은 초점과 인내심이 모두 필요합니다. 방법론적 숙련도는 설명된 프로세스의 속도를 상당히 높일 수 있습니다. 그럼에도 불구하고, 죽상 경화성 병변 정량화는 여전히 시간이 많이 걸리는 작업입니다. 새로운 기술, 자동 취급 및 작은 동물 화상 진찰은 미래에 실험적인 동맥 경화증의 정량화를 촉진할 수 있습니다. 동맥 경화증의 진행은 느리고 마우스 모형에 있는 대부분의 실험적인 프로토콜은13를완료하는 4 달 이상 걸립니다. 따라서 대원수는 스터디 엔드포인트에서 최적화된 방식으로 수집되어야 합니다. 이 프로토콜은 대동맥을 효율적으로 수확하는 포괄적 인 가이드를 제공하며 제안 된 처리는 대동맥 뿌리, 대동맥 아치 및 brachiocephalic 동맥의 병변 정량을 포함한 다목적 용도로 대동맥을 준비합니다. 바라건대 프로토콜은 실험 적 가변성을 감소시킬 수 있습니다, 결과의 신뢰성을 향상, 동맥 경화증에 대한 새로운 치료에 대한 길을 열 것입니다 연구 결과로 이어질.

심혈관 질환은 허혈성 심장 질환과 뇌졸중으로 세계에서 사망의 주요 원인은 4 명 중 1 명에 대한1. 대부분의 경우 동맥 경화증에 의해 발생, 큰 및 중간 크기의 동맥에 만성 염증의 징후와 지질 라덴 플라크의 느린축적을 특징으로하는 질병 2. 질병은 일반적으로 패의 파열 또는 침식이 허혈성 조직 손상으로 이끌어 내는 동맥 혈전증을 이끌어 내릴 때까지 수십 년 동안 주목되지 않는 남아 있습니다.
정상적인 동맥은 내피 세포가있는 인티마 층과 드물게 분포된 평활근 세포, 평활근 세포및 탄성 라멜라를 가진 미디어 층, 느슨한결합 조직을 가진 주변의 출현 층 3으로 구성됩니다. LDL의 친밀한 유지는 동맥 경화증 개발을상쇄 4. 지단백질의 축적 및 수정은 동맥 인두 내의 응집 및 함정으로 이어진다5. 염증 반응은 갇혀 수정 된 지단백질 6에의해 유발됩니다. 내피 세포는 난류 혈류를 가진 동맥 나무의 부위에서 VCAM-1과 같은 접착 분자를 발현하기 시작하여 순환 단핵구 및 기타백혈구 7의 모집으로 이어진다. 침투 하는 단핵구는 대 식 세포에 후속 변환으로 지질을 삼켜대 식 세포로 분화 8.
죽상 동맥 경화증은 1980 년대 중반 이후 증가 주파수와 마우스 모델에서 공부 하고있다. C57BL/6은 이러한 연구를 위해 가장 일반적으로 사용되는 근친 마우스 균주이며, 유전자 변형 균주9의 대부분에 대한 유전 적 배경으로 사용된다. 이 균주는 1920 년대10에서설립되었으며, 그 게놈은 2002년 11년에 발표되었다. 마우스 모델의 실험에는 여러 가지 이점이 있습니다: 식민지는 빠르게 재현되고, 하우징은 공간 효율적이며, 근친 교배는 실험적 변동성을 감소시킵니다. 모형은 또한 표적한 유전자 삭제 및 전이유전자의 삽입과 같은 유전 조작을 허용합니다. 이것은 질병 및 새로운 치료 표적12의새로운 병리생리학 이해로 이끌어 냈습니다.
야생형 C57BL/6 마우스는 동맥경화증에 자연적으로 내성이 있습니다. 그(것)들은 HDL에 있는 순환 하는 콜레스테롤의 대부분을 가지고 있고, 복잡한 동맥 경화성 병변은 고지방 및 고콜레스테롤규정식13를공급하더라도 형성되지 않습니다. 고콜레스테롤 마우스, 예민한 마우스, 예민한-apoe--- C57BL/6-배경에, 따라서 죽상 동맥 경화증의 실험 적인 모형으로 사용된다14, 15. ApoE의 부족은 잔여 지단백질의 간 섭취를 손상시키고 가혹하게 지질 물질 대사를 교배합니다. Apoe-/- 마우스에서, 순환 콜레스테롤은 VLDL 입자에서 주로, 마우스는 일반 차우 다이어트에 복잡 한 죽상 경화 증크를 개발.
Ldlr-/- 마우스는 가족성 콜레스테롤 혈증을 가진 인간에서 보인 동맥 경화증의 발달을 모방합니다16. Ldlr-/- 마우스는 죽상 동맥 경화증을 개발하기 위하여 서양 형 규정식이 필요합니다17. 서양 식단은 인간의 음식 섭취량을 모방하고 일반적으로 0.15 % 콜레스테롤을 포함합니다. LDL 수용체는 ApoB100 및 ApoE를 인식하고 내분비증을 통해 LDL 입자의 섭취를 중재합니다. LDL 수용 체는 순환에서 LDL의 간 정리에 대 한 기본, 조혈 세포에서 LDL 수용 체 수용 체 발현이이 과정에 영향을 하지 않는 동안. 이것은 콜레스테롤 성 Ldlr에 Ldlr+/+ 세포의 골수 이식에 대 한 가능성을 엽니다 -/- 받는 사람 및 동맥 경화 증 개발의 평가. 골수 키메라는 일반적으로 실험적인 죽상 동맥 경화증에 있는 조혈 세포의 참가를 공부하기 위하여 이용되었습니다. 그러나, 골수 이식 은 죽상 경화성 플라크의 크기와 구성에 영향을 미칠 수 있습니다.
추가 유전 변경을 가진 Apoe-/- 및 Ldlr-/- 마우스의 다른 변이체는 질병의 특정 프로세스를 공부하기 위하여 개발되었습니다18. 일례로 인간 APOB100-형질전환 Ldlr-/- (HuBL)마우스는 전신 인간 APOB100 유전자 를 운반하는19,20이다. 이 마우스는 정규 차우 규정식에 콜레스테롤 혈증 및 동맥 경화증을 개발합니다. 그러나, 복잡한 죽상 경화성 플라크의 발달은 적어도 6 달 및 짧은 실험 프로토콜은 일반적으로 서양 규정식21를이용합니다. 혈장 콜레스테롤의 큰 분율은 LDL 입자에서 순환하고, 이는 HuBL 마우스에게 Apoe-/- 및 Ldlr-/- 마우스에 비해 더 인간적인 dyslipidemic 지단백질 단면도를 줍니다. HuBL 마우스는 또한 자가 항원 (22)으로 인간 apoB의 연구를 허용합니다.
죽상 동맥 경화증의 마우스 모델은 인간의 질병의 공유 기능을 가진 복잡한 죽상 경화성 플라크를 개발합니다. 그러나, 플라크는 계속되는 심근 경색으로 파열에 상당히 저항합니다. 아테로스롬보전증은23,24,25를평가하기 위해 산발적으로 검출되고 실험적으로 도전적이다. 플라크 파열의 특수 모델이 개발되었지만 실험 분야는 플라크 안정화 제의 평가를위한 신뢰할 수 있고 재현 가능한 모델이 부족합니다.
죽상 동맥 경화증의 정량화는 문헌에서 여러 가지 방법으로 보고되었습니다. 최근 동물 연구의 실험 설계, 실행 및 보고를 표준화하기 위한 노력26. 조사관은 그들의 실험실에 적응하는 다른 환경 설정 및 기술이 있습니다. 대부분의 연구 프로젝트는 또한 일부 프로토콜 수정을 요구하는 방식으로 고유합니다. 질병의 다인성 특성으로 인해 최적의 제어는 프로젝트마다 다릅니다. 현지 조건 및 표준화의 부족은 연구 필드의 진보를 방해하는 질병 발달에 있는 관찰한 다름을 일으키는 원인이 될 수 있습니다. 실험 적 가변성의 차이는 또한 통계적 전력 계산이 현지 조건하에서 파일럿 연구를 기반으로 해야 한다는 것을 의미합니다.
동맥 경화증의 정량화는 혈관 나무의 여러 위치에서 권장됩니다. 이 프로토콜은 대동맥 뿌리, 대동맥 아치 및 brachiocephalic 동맥에서 단일 마우스에서 결과를 얻는 방법뿐만 아니라 다른 분석을 위해 나머지 thoraco복부 대동맥을 떠나는 방법을 설명합니다. En 얼굴 제제는 대동맥 아치에서 지질 함유 플라크의 신속한 정량화를 허용합니다. 검체 세포막 동맥의 질병 부담은 표본이 신중하게 표시되는 경우 정량화 될 수 있습니다. 대동맥 근의 시간이 더 소요될수록 플라크 조성물의 상세한 평가에 사용할 수 있는 여러 섹션이 남습니다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acetone</td>
			<td>VWR Chemicals</td>
			<td>20066.296</td>
			<td>For fixation of sections for immunohistochemistry.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Black electrical insulation tape (50 mm wide)</td>
			<td>Any specialized retailer</td>
			<td>-</td>
			<td>To create pinning beds for aortic arches.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5417C</td>
			<td>Benchtop microcentrifuge.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cork board</td>
			<td>Any specialized retailer</td>
			<td>-</td>
			<td>For cutting hearts in the preparation to cryomount aortic roots.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryostat</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>Microm HM 560</td>
			<td>For serial cryosectioning of aortic roots.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deionized water</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>For rinsing and preparation of solutions.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital camera</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>DC480</td>
			<td>5.1 megapixel CCD for high-resolution images of aortic arches and aortic root sections.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting scissors (10 cm, straight)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>14393</td>
			<td>For general dissection of organs.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont forceps #5 (11 cm, straight)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>500341</td>
			<td>For microdissection of aorta.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 70% (v/v)</td>
			<td>VWR Chemicals</td>
			<td>83801.290</td>
			<td>Highly flammable liquid and vapour, store in a well-ventilated place, and keep cool.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute &#8805;99.8%</td>
			<td>VWR Chemicals</td>
			<td>20821.310</td>
			<td>Highly flammable liquid and vapour, store in a well-ventilated place, and keep cool.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde 4% stabilised, buffered (pH 7.0)</td>
			<td>VWR Chemicals</td>
			<td>9713.1000</td>
			<td>Harmful by inhalation, in contact with skin and if swallowed.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td>NIH</td>
			<td>-</td>
			<td>Image analysis software.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris forceps (10 cm, curved, serrated)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>15915-G</td>
			<td>Used as anatomical forceps.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1096341011</td>
			<td>Flammable liquid, causes serious eye irritation, and may cause drowsiness or dizziness.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kaiser&#39;s glycerol gelatine</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1092420100</td>
			<td>Aqueous mounting medium containing phenol. Suspected of causing genetic defects.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>DM LB2</td>
			<td>For analysis during sectioning and documentation of Oil Red O stained micrographs.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayer&#39;s hematoxylin</td>
			<td>Histolab</td>
			<td>1820</td>
			<td>Non-toxic staining solution without chloral hydrate, but causes serious eye irritation.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayo scissors (17 cm, straight)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501751-G</td>
			<td>For general dissection.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Castroviejo needle holder (9 cm, straight)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>503376</td>
			<td>For pinning of aortic arches.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tubes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>MCT-175-C</td>
			<td>Polypropylene microtubes with snaplock cap.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microlance 3 needles, 23 gauge</td>
			<td>BD</td>
			<td>300800</td>
			<td>For blood collection.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microlance 3 needles, 27 gauge</td>
			<td>BD</td>
			<td>302200</td>
			<td>For perfusion of mice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microvette 500 &#181;L, K3 EDTA</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>20.1341.100</td>
			<td>For blood collection.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microvette 500 &#181;L, Lithium Heparin</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>20.1345.100</td>
			<td>For blood collection.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minutien insect pins, 0.10 mm</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>26002-10</td>
			<td>For pinning of aortic arches.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oil Red O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>O0625</td>
			<td>Not classified as a hazardous substance or mixture.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optimum cutting temperature (OCT) cryomount</td>
			<td>Histolab</td>
			<td>45830</td>
			<td>For embedding tissue.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm M</td>
			<td>Bemis</td>
			<td>PM992</td>
			<td>Paraffin wax film used to create pinning beds for aortic arches.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes (100x20 mm)</td>
			<td>Any cell culture supplier</td>
			<td>-</td>
			<td>Proposed as a storage container for pinned aortas.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>Sterile and RNase-free solution is required for perfusion of mice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Qualitative filter paper (grade 1001)</td>
			<td>Munktell</td>
			<td>120006</td>
			<td>For filtering Oil Red O working solution (typical retention 2-3 &#181;m).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAlater RNA stabilization reagent</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>76106</td>
			<td>For stabilization of RNA in tissue samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNaseZap RNase Decontamination Solution</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM9780</td>
			<td>A surface decontamination solution that destroys RNases on contact.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel handle #3 (13 cm)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>500236</td>
			<td>For cutting hearts in the preparation to cryomount aortic roots.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard scalpel blade #10</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>500239</td>
			<td>For cutting hearts in the preparation to cryomount aortic roots.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>MZ6</td>
			<td>For dissection and en face documentation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sudan IV</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S4261</td>
			<td>Not classified as a hazardous substance or mixture.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrost Plus microscope slides</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>J1800AMNZ</td>
			<td>To collect aortic root sections.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue forceps (15 cm)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501741-G</td>
			<td>For general dissection.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek cryomolds (10x10x5 mm)</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4565</td>
			<td>For embedding aortic roots in OCT.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas scissors (8 cm, straight)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>503378</td>
			<td>For microdissection of aorta.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantification of atherosclerosis in mice

심혈관 질환은 세계에서 사망의 주요 원인입니다. 대부분의 경우 근본 원인은 동맥 경화증이며, 이는 부분적으로 만성 염증성 질환입니다. 실험적인 죽상 동맥 경화증 연구는 질병 과정에서 콜레스테롤과 염증의 역할을 해명했습니다. 이것은 죽상 동맥 경화증의 임상 표현을 감소시키는 약제와 성공적인 임상 시험으로 이끌어 냈습니다. 질병의 마우스 모형에 있는 신중하고 잘 통제된 실험은 완전히 이해되지 않는 질병의 병인을 더 해명할 수 있었습니다. 표준화된 병변 분석은 실험적 변동성을 줄이고 재현성을 높이는 데 중요합니다. 대동맥 근, 대동맥 아치 및 brachiocephalic 동맥에 있는 병변 크기를 결정하는 것은 실험적인 동맥 경화증에 있는 일반적인 종점입니다. 이 프로토콜은 단일 마우스에서 이러한 모든 부위에서 동맥경화증의 평가를 위한 기술적 설명을 제공한다. 이 프로토콜은 유전자 변형 동물이 특징지어지는 경우가 많듯이 물질이 제한될 때 특히 유용합니다.

죽상 동맥 경화증의 마우스 모델에서 가장 눈에 띄는 병변은 대동맥 뿌리와 대동맥 아치에서 발생하는 경향이 있다. 이 프로토콜은 대동맥 근, 대동맥 아치 및 단일 마우스에서 brachiocephalic 동맥의 동맥 경화증의 정량화를 설명합니다. 흉부 하강 대류와 복부 대류의 측정 가능한 병변은 사전 질병이있는 동물에서만 존재합니다. 이 프로토콜에서는, 이 부분은 죽상 경화성 부담을 위해 분석되지 않으며, mRNA 수준 또는 그밖 분석의 후속 분석을 위해 저장됩니다. 대동맥 근에 있는 죽상 경화성 병변의 직렬 단면도는 일반적으로 x축28에 있는대동맥 부비동에 y-축 및 거리에 병변 크기로 그래프에 표시됩니다. 진정한 단면은 병변 크기 정량화에 매우 중요합니다. 경사 섹션은 병변 크기를 과대 평가 할 수 있으며 20 °의 기울기는 절대 병변 표면을 15 %29로과대 평가 할 수 있습니다. 그러나, 전체 혈관 영역의 병변 분율을 계산하면 단면화 동안가능한 각도 차이에 대한 결과가 덜 민감해진다(도 4A). 그룹 간의 차이를 감지하는 적절한 통계 방법은 일반적으로 분산(ANOVA)의 정기적인 2방향 분석입니다. 본페로니 사후 검사는 특정 수준에서 차이를 감지하기 위해 수행됩니다. 피셔의 가장 유의한 차이는 ANOVA에 대한 후속 테스트로도 사용될 수 있습니다. 형식 II 통계 적 오류의 가능성을 줄이지만 여러 비교를 고려하지 않습니다. 또한, 마우스당 곡선 또는 평균 병변 크기 하에서 영역을 계산하고 도트 플롯에 데이터를 제시하여 그룹 내의 개별변동을 더욱 시각화하는 것을 예시할 수 있다(도 4B).
오일 레드 O는 중성 지질을 염색하는 지용성 밝은 붉은 색소 염료입니다. 세포막의 극성 지질은 얼룩지지 않습니다. 오일 레드 O 염색은 신선, 냉동 또는 포르말린 고정 샘플에서 수행될 수 있지만 필요한 탈파라핀화 공정에서 지질제거로 인해 파라핀이 내장된 샘플에서는 수행되지 않습니다. 레시오날 지질 축적의 정량화는 총 병변 영역의 오일 레드 O 양성영역을 임계값화하여 수행될 수 있었다(도 4C). 헤마톡실린은 세포 핵의 파란색 염색을 생성하며, 이는 플라크 형태를 시각화하는 데 도움이됩니다. 좌우 관상 동맥은 일반적으로 대동맥에서 약 250 μm에서 대동맥에서 발산하는 대동맥부비동 27,이는 수시로 가장 눈에 띄는 병변 크기와 일치합니다. 이 영역의 횡단면은 종종 대표적인결과로 표시됩니다(그림 4D).
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59828/59828fig4.jpg"> 그림 4: 대동맥 근에 있는 죽상 경화성 병변. (a) 28주령의 남성 골수 키메라를 8주 동안 서양 식단에 공급하여 Smad7-결핍T 세포가 동맥경화증 발달에 미치는 영향을 확인하기 위해 평가하였다. 실험적 Ldlr-/- 키메라는 Cd4-Cre+Smad7fl/fl 골수를 받았으며, 대조군은 Cd4-Cre+Smad7fl/+ 골수를 받았습니다. 그래프는 총 혈관 표면의 병변 분율로 표시된 대동맥 부비동으로부터 8개의 연속적인 섹션으로부터 죽상 경화성 병변 영역의 정량화를보여줍니다(Cd4-Cre+Smad7fl/+/Ldlr-/- n=6, Cd4-Cre+Smad7fl/fl/Ldlr-/- n = 9, 본페로니의 사후 테스트가 있는 2방향 ANOVA, 그래프는 ±SEM을 의미하며, 중괄호는 변형률 비교에 대한 유의 수준을 나타낸다. (B) 결합 된 도트 플롯과 막대 그래프는 대동맥 뿌리 섹션에서 평균 죽상 경화성 병변 영역을 보여줍니다 (Cd4-Cre+Smad7fl /+/ Ldlr-/- n =6, Cd4-Cre+Smad7fl/fl/ Ldlr-/- n = 9, 학생의 t-test) (C) 병변의 오일 레드 O 염색 영역 (Cd4-Cre+Smad7fl/+/Ldlr-/- n = 4, Cd4-Cre+Smad7fl/fl/fl /Ldlr-/- n = 6, 학생의 t-test, ns=비유의미) (B -C)도트는 개별 마우스를 나타내고 바는 ±SEM을 나타내며 (D) 오일 레드 O 염색을 보여주는 대표적인 현미경 사진 (빨간색) color) 대동맥 부비동으로부터 300 μm의 대동맥 근에서 중성 지질의 (50배 배율), 스케일 바 = 500 μm. *p ≤ 0.05, ***p ≤ 0.001. 이 그림은 Gisterå 외31에서수정되었습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59828/59828fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
오일 레드 O는 앙페이스 준비 대단표의 염색에 사용될 수 있지만,이 프로토콜은 수단 IV, 또 다른 편리한 지용성 디아조 염료를 사용합니다. 수단 IV는 지질, 트리글리세라이드 및 지단백질을 염색하여 주황색-붉은 색의 죽상 경화성 플라크를 명확하게 시각화합니다. en 얼굴 대동맥 아치의 대표적인 이미지에서 어두운 배경을 제거하면시각적 디스플레이가 향상될 수 있습니다(도 5A). 일반적으로 병변 크기는 일반적으로 그룹 사이 학생의 t-테스트를 가진 통계적인 시험을 허용하는 단 내의 분배됩니다. 개별 마우스와 그룹 간에 비교되는 평균을 모두 보여주는 점 도표는 결과를 표시하는 유익한 방법입니다(그림5B-C). 그룹 내의 변화는 일반적으로 혈관 트리의 위치 간에 다르기 때문에 일반적으로 별도의 전력 계산이 필요합니다. 방법 숙련도와 프로토콜 표준화를 통해 불필요한 변형을 피할 수 있습니다. 통계적으로 유의한 결과를 얻는 것도 중요하지만 관찰된 차이에 대한 생물학적 관련성도 항상 고려해야 합니다.
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59828/59828fig5.jpg"> 그림 5: 대동맥 및 brachiocephalic 동맥에 있는 죽상 경화성 병변. (A) 대표적인 en 얼굴 대동맥 아치의 현미경 사진으로 20주 령생생에서 수단 IV(주황색)로 염색된 지질 함유 플라크를 10주 동안 서양 식단을 함께 가시화하였다. 스케일 바 = 2 mm. 인간 APOB100-형질전환 Ldlr-/- (HuBL)마우스를 대조군으로 사용하였고, 실험군은 LDL 반응성 T 세포를 가진 TCR-형질전환 마우스로 구성되었다(BT1) HuBL 마우스에 교배하였다. (B) 대동맥 경화성 병변 (HuBL n = 10, BT1xHuBL n = 12; 학생의 t-test). (C) brachiocephalic 동맥에 있는 동맥 경화성 병변 (HuBL n = 8, BT1xHuBL n = 9, 학생의 t-test). (B-C) 도트는 개별 마우스를 나타내고, 바는 ±SEM. *p ≤ 0.05를 나타낸다. 이 그림은 Gisterå 외32에서수정되었습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59828/59828fig5large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
추가 그림 1: 대동맥 루트의 직렬 섹션에 대한 슬라이드의 대체 조직입니다. 대동맥 루트에서 섹션을 수집하기위한 단순화 된 체계적인 슬라이드 조직. 이 컬렉션은 지질 및 면역 기능 화학 또는 면역 형광 염색을 위한 오일 레드 O 염색을 가능하게 합니다. 콜라겐의 피크로시리우스 레드 염색전용 슬라이드는 생략됩니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59828/2019-JoVE-Figure-S1.eps">이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Atherosclerosis in Mice at JoVE.com

Quantification of Atherosclerosis in Mice

죽상 동맥 경화증의 뮤린 모형은 분자 수준에 병원성 통로를 조사하기 위하여 유용한 공구입니다, 그러나 병변 발달의 표준화한 정량화가 요구됩니다. 이 프로토콜은 대동맥 근, 대동맥 아치 및 brachiocephalic 동맥을 포함하여 주요 동맥 혈관에 있는 병변 크기를 결정하기 위하여 최적화된 방법을 기술합니다.

마우스에서 동맥 경화증의 정량화

Cardiovascular disease is the main cause of death in the world. The underlying cause in most cases is atherosclerosis, which is in part a chronic ...

심혈관 질환은 전 세계적으로 사망의 주요 원인입니다. 마우스 모델은이 질병을 연구하기위한 유용한 도구이며, 우리의 프로토콜은 마우스에서 동맥 경화증을 정량화하는 데 사용할 수 있습니다. 이 프로토콜을 사용하여 병변 크기를 세 가지 혈관 위치에서 측정할 수 있습니다.대동맥 뿌리, 대동맥 아치, 브라치오세팔릭 동맥. 마우스에서 죽상 동맥 경화증의 정량화는 지루한 작업일 수 있습니다. 우리는 프로세스속도를 높일 수 있기를 바랍니다 상세한 단계를 제공했습니다.이러한 단계 중 일부는 서면으로 설명하기가 어렵습니다. 이 비디오가 강력한 죽상 경화성 병변 크기 분석을 얻는 데 도움이되기를 바랍니다. 표준 프로토콜에 따라 마우스 심장을 수확한 후, 코르크 침대에 심장을 놓고, 복부 쪽을 해부 현미경 아래에 놓고 바늘을 사용하여 정점을 통해 코르크에 심장을 고정시하십시오.해부학 적 집게로 심장의 기초를 잡고, 처진 평면에서 20도 각도로 유지 메스를 사용, 및 트랜스 버사 체평면에 20도, 심장의 정포 2/3을 잘라. 대동맥 뿌리와 심장의 베이스를 최적의 절삭 온도 화합물 또는 OCT에 포함하고, 부드럽게 대동맥 뿌리를 채우고 기포를 제거하기 위해 집게로 심장을 짜냅니다. 표본을 100월로 채워진 극저온의 바닥으로 옮기고, 바닥면에 수직으로 대동맥 뿌리가 있고, 건조한 얼음에 화합물을 동결한다.그런 다음 티슈 샘플을 냉동고 가방에 영하 80도의 냉동고 백에 보관하여 저온분면까지 보관합니다. en 얼굴 분석을 위한 고정 침대를 준비하려면 파라핀 왁스 필름 세그먼트를 8번 접어 평평한 25mm 표면을 만들고 필름 주위에 검은 전기 절연 테이프를 감싸 대어 어두운 배경을 만듭니다. 고정 침대의 뒷면에 라벨을 놓고 리드 연필을 사용하여 마우스 식별 번호를 기록합니다.대동맥 아치를 고정 침대로 옮기고 조직에 PBS 한 방울을 추가합니다. 스테레오 현미경을 사용하여, 나머지 주변 지방 조직에서 대동맥을 청소하고 부드럽게 대동맥을 조작하거나 손상시키지 않고 주변 지방 조직을 모두 벗겨 바나 스 가위와 듀몬트 집게를 사용합니다. 다음으로, 반나스 가위를 대동맥 루멘에 도입하여 동적인 표면을 노출시한다.승천 아치의 외부 곡률을 탈방향으로 자르고, 브라치오세팔릭 동맥을 포함하여 가지를 계속 자르고 내림차순 흉부의 등쪽 부분을 아끼기 시작합니다. 친밀감 표면을 표시하려면 곡률을 적게 자르고 대어를 엽니다. 마이크로 카스트로비에호 바늘 홀더를 사용하여, 시편을 스트레칭하지 않고 분 곤충 핀의 무딘 끝으로 고정 침대에 열린 아치를 고정하고, 조직이 제자리에 고정될 때 시편에서 핀을 부드럽게 구부립니다.그런 다음 고정 된 아치 페이스다운을 PBS의 페트리 접시에 섭씨 4도에 보관하십시오. 수단 IV 염색의 경우, 아치가 아래로 향하고 70 %에탄올의 페트리 접시에 5 분 동안 표본을 헹구고, 7 분 동안 수단 IV 작업 용액의 접시에 표본을 전송합니다. 인큐베이션의 끝에서, 80%에탄올에 2개의 3분 세척으로 샘플을 헹구고, PBS에서 최종 헹구는 다음 원래 페트리 접시로 조직을 되돌려 보도록 합니다.그런 다음 10배율로 디지털 카메라에 연결된 스테레오 현미경으로 현미경을 획득하여 PBS에 잠긴 고정 된 아치의 이미지를 얻고 작은 금속 무게를 사용하여 고정 침대를 페트리 접시의 바닥에 고정하십시오. 내장된 대동맥 뿌리의 저온절을 얻으려면 극저온 온도를 영하 20도, 단면 두께를 10 마이크로미터로 설정합니다. 심실 조직이 바깥쪽으로 향하는 시편 홀더에 대동맥 뿌리를 포함하는 OCT 블록을 마운트한다.필요한 경우 10월을 추가하여 포지셔닝을 확보하십시오. 대동맥 뿌리는 이제 칼날에 수직으로 배치되어야 합니다. 일반 현미경 슬라이드에 심장 근육 조직을 포함하는 초기 통제 단면을 수집하고, 가벼운 현미경의 밑에 200 마이크로미터마다 조직을 통해 진행을 확인합니다.첫 번째 대동맥 커프가 나타나면 시편을 0점 커프쪽으로 기울여 섹션 평면을 다른 두 커프스와 정렬하고 0점 부터 잘라낸 10 마이크로미터 섹션마다 계산합니다. 계획된 슬라이드에 따라 90 마이크로미터에서 이후 분석을 위한 섹션을 수집하기 시작하여 0점부터 800 마이크로미터에 도달했습니다. 대동맥 뿌리의 전체 용기 영역의 병변 분획을 계산하면 단면화 중 가능한 각도 차이에 데이터가 덜 민감해집니다.또한, 마우스당 곡선 또는 아테로토 병변 크기 하에서 영역을 계산하고 그룹 내의 개별 변형을 더욱 시각화하기 위해 점 플롯에 데이터를 제시하는 것이 예시적일 수 있다. 레시오날 지질 축적은 전체 병변 영역의 색 임계값 오일 레드 O 양성 영역에 의해 정량화될 수 있다. 오른쪽 및 왼쪽 관상 동맥은 일반적으로 종종 가장 눈에 띄는 병변 크기와 일치하는 대동맥 부비동에서 약 250 마이크로 미터 대동맥에서 분기합니다.en face 대동맥 아치의 대표적인 이미지에서 어두운 배경을 제거하면 시각적 디스플레이가 향상될 수 있습니다. 병변 크기는 일반적으로 그룹 내에서 분포되어 그룹 간에 학생의 t-테스트를 사용하여 통계 분석을 허용합니다. 실험 샘플을 처리하기에 충분한 기술을 습득할 때까지 일부 테스트 자료로 연습하는 것이 좋습니다.병변 크기가 그룹 간에 다른 경우, 병변 조성 해석이 일반적으로 추구하는 다음 단계이기 때문에 메커니즘을 결정해야 합니다.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Measurement of &#947;HV68 Infection in Mice

Measurement of ÃƒÅ½Ã‚Â³HV68 Infection in Mice

마우스에 γHV68 감염의 측정

&gamma;-Herpesviruses (&gamma;-HVs) are notable for their ability to establish latent infections of lymphoid cells1. The narrow host range of human ...

연구

면역학 및 감염병학

Depletion and Reconstitution of Macrophages in Mice

마우스의 Macrophages의 고갈과 Reconstitution

Macrophages are critical players in the innate  immune response to infectious challenge or injury, initiating the innate immune  response and directing ...

Measuring Local Anaphylaxis in Mice

마우스에 현지 아나필락시스 측정

Allergic responses are the result of the activation of mast cells and basophils, and the subsequent release of vasoactive and proinflammatory mediators. ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

이펙터 CD4의 입양 전송하여 쥐과 장내 염증의 유도<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; 높은</sup&gt; 면역 결핍 마우스에게 T 세포

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

Culture of Macrophage Colony-stimulating Factor Differentiated Human Monocyte-derived Macrophages

대 식세포 콜로니 자극 인자 차별화 된 인간 단핵구 유래 대 식세포의 문화

A protocol is presented for cell culture of macrophage colony-stimulating factor (M-CSF) differentiated human monocyte-derived macrophages. For initiation ...

Noninvasive Sampling of Mucosal Lining Fluid for the Quantification of In Vivo Upper Airway Immune-mediator Levels

Noninvasive Sampling of Mucosal Lining Fluid for the Quantification of In Vivo Upper Airway Immune-mediator Levels

상부 기도 면역 중재자 수준 Vivo에서 의 정량화에 대 한 점 막 안 대기의 비 침범 성 샘플링

This protocol describes noninvasive sampling of undisturbed upper airway mucosal lining fluid. It also details the extraction procedure used prior to the ...

Characterization of Thymus-dependent and Thymus-independent Immunoglobulin Isotype Responses in Mice Using Enzyme-linked Immunosorbent Assay

Thymus 종속 및 독립 Thymus 면역 글로불린 Isotype 반응 효소 연결 된 Immunosorbent 분석 결과 사용 하 여 마우스의 특성

Antibodies, also termed as immunoglobulins (Ig), secreted by differentiated B lymphocytes, plasmablasts/plasma cells, in humoral immunity provide a ...

Quantification of Antibody-dependent Enhancement of the Zika Virus in Primary Human Cells

기본 인간 세포에서 Zika 바이러스의 항 체 의존 향상의 정량화

The recent emergence of the flavivirus Zika and neurological complications, such as Guillain-Barr&#233; syndrome and microcephaly in infants, has brought ...

Isolation and Quantification of Zika Virus from Multiple Organs in a Mouse

마우스의 여러 장기에서 Zika 바이러스의 격리 및 정량화

The methods being presented demonstrate laboratory procedures for the isolation of organs from Zika virus infected animals and the quantification of viral ...