Name: quantification of atherosclerosis in mice
Uploaded: 2019-06-12T15:00:00
Duration: 6 min 59 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Atherosclerosis in Mice at JoVE.com

Göran K Hansson 'ın son çeyrek yüzyıl boyunca bu protokolü geliştirmeye yardımcı olan deneysel kardiyovasküler araştırma biriminin tüm geçmiş üyelerine teşekkür ediyoruz. Özellikle Antonino Nicoletti, Xinghua Zhou, Anna-Karin Robertson ve Inger Bodin 'in katkıları için minnettarız. Bu çalışma, Isveç Araştırma Konseyi tarafından proje Grant 06816 ve Linnaeus destek 349-2007-8703 tarafından desteklenmektedir ve Isveçli kalp-akciğer Vakfı, Stockholm Ilçe Konseyi, Profesör Nanna Svartz Vakfı, Loo ve Hans Osterman gelen hibe tarafından Tıp Araştırmaları Vakfı, Karolinska Institutet 'in Araştırma Vakfı ve Karolinska Institutet 'te geriatrik hastalıklar Vakfı.

<ol>
	<li>Lozano, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+and+regional+mortality+from+235+causes+of+death+for+20+age+groups+in+1990+and+2010:+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+Study+2010.">Global and regional mortality from 235 causes of death for 20 age groups in 1990 and 2010: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2010.</a> Lancet. 380 (9859), 2095-2128 (2012).</li><li>Gistera, A., Hansson, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+immunology+of+atherosclerosis.">The immunology of atherosclerosis.</a> Nature Reviews Nephrology. 13 (6), 368-380 (2017).</li><li>Hansson, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation,+atherosclerosis,+and+coronary+artery+disease.">Inflammation, atherosclerosis, and coronary artery disease.</a> New England Journal of Medicine. 352 (16), 1685-1695 (2005).</li><li>Williams, K. J., Tabas, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+response-to-retention+hypothesis+of+early+atherogenesis.">The response-to-retention hypothesis of early atherogenesis.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 15 (5), 551-561 (1995).</li><li>Pentikainen, M. O., Oorni, K., Ala-Korpela, M., Kovanen, P. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modified+LDL+-+trigger+of+atherosclerosis+and+inflammation+in+the+arterial+intima.">Modified LDL - trigger of atherosclerosis and inflammation in the arterial intima.</a> Journal of Internal Medicine. 247 (3), 359-370 (2000).</li><li>Ruuth, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Susceptibility+of+low-density+lipoprotein+particles+to+aggregate+depends+on+particle+lipidome,+is+modifiable,+and+associates+with+future+cardiovascular+deaths.">Susceptibility of low-density lipoprotein particles to aggregate depends on particle lipidome, is modifiable, and associates with future cardiovascular deaths.</a> European Heart Journal. 39 (27), 2562-2573 (2018).</li><li>Nakashima, Y., Raines, E. W., Plump, A. S., Breslow, J. L., Ross, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Upregulation+of+VCAM-1+and+ICAM-1+at+atherosclerosis-prone+sites+on+the+endothelium+in+the+ApoE-deficient+mouse.">Upregulation of VCAM-1 and ICAM-1 at atherosclerosis-prone sites on the endothelium in the ApoE-deficient mouse.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 18 (5), 842-851 (1998).</li><li>Goldstein, J. L., Ho, Y. K., Basu, S. K., Brown, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Binding+site+on+macrophages+that+mediates+uptake+and+degradation+of+acetylated+low+density+lipoprotein,+producing+massive+cholesterol+deposition.">Binding site on macrophages that mediates uptake and degradation of acetylated low density lipoprotein, producing massive cholesterol deposition.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 76 (1), 333-337 (1979).</li><li>Paigen, B., Morrow, A., Brandon, C., Mitchell, D., Holmes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variation+in+susceptibility+to+atherosclerosis+among+inbred+strains+of+mice.">Variation in susceptibility to atherosclerosis among inbred strains of mice.</a> Atherosclerosis. 57 (1), 65-73 (1985).</li><li>Russell, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origins+and+history+of+mouse+inbred+strains:+contributions+of+Clarence+Cook+Little.">Origins and history of mouse inbred strains: contributions of Clarence Cook Little.</a> Origins of Inbred Mice, Morse, HC, eds. (Academic Press, NY). , 33-43 (1978).</li><li>Waterston, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+sequencing+and+comparative+analysis+of+the+mouse+genome.">Initial sequencing and comparative analysis of the mouse genome.</a> Nature. 420 (6915), 520-562 (2002).</li><li>Gistera, A., Ketelhuth, D. F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid-driven+immunometabolic+responses+in+atherosclerosis.">Lipid-driven immunometabolic responses in atherosclerosis.</a> Current Opinion in Lipidology. 29 (5), 375-380 (2018).</li><li>Maganto-Garcia, E., Tarrio, M., Lichtman, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+atherosclerosis.">Mouse models of atherosclerosis.</a> Current Protocols in Immunology. Chapter 15, (2012).</li><li>Plump, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Severe+hypercholesterolemia+and+atherosclerosis+in+apolipoprotein+E-deficient+mice+created+by+homologous+recombination+in+ES+cells.">Severe hypercholesterolemia and atherosclerosis in apolipoprotein E-deficient mice created by homologous recombination in ES cells.</a> Cell. 71 (2), 343-353 (1992).</li><li>Zhang, S. H., Reddick, R. L., Piedrahita, J. A., Maeda, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+hypercholesterolemia+and+arterial+lesions+in+mice+lacking+apolipoprotein+E.">Spontaneous hypercholesterolemia and arterial lesions in mice lacking apolipoprotein E.</a> Science. 258 (5081), 468-471 (1992).</li><li>Ishibashi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypercholesterolemia+in+low+density+lipoprotein+receptor+knockout+mice+and+its+reversal+by+adenovirus-mediated+gene+delivery.">Hypercholesterolemia in low density lipoprotein receptor knockout mice and its reversal by adenovirus-mediated gene delivery.</a> Journal of Clinical Investigation. 92 (2), 883-893 (1993).</li><li>Ishibashi, S., Goldstein, J. L., Brown, M. S., Herz, J., Burns, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Massive+xanthomatosis+and+atherosclerosis+in+cholesterol-fed+low+density+lipoprotein+receptor-negative+mice.">Massive xanthomatosis and atherosclerosis in cholesterol-fed low density lipoprotein receptor-negative mice.</a> Journal of Clinical Investigation. 93 (5), 1885-1893 (1994).</li><li>Ketelhuth, D. F., Gistera, A., Johansson, D. K., Hansson, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cell-based+therapies+for+atherosclerosis.">T cell-based therapies for atherosclerosis.</a> Current Pharmaceutical Design. 19 (33), 5850-5858 (2013).</li><li>Skalen, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subendothelial+retention+of+atherogenic+lipoproteins+in+early+atherosclerosis.">Subendothelial retention of atherogenic lipoproteins in early atherosclerosis.</a> Nature. 417 (6890), 750-754 (2002).</li><li>Boren, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+low+density+lipoprotein+receptor-binding+site+in+apolipoprotein+B100+and+the+modulation+of+its+binding+activity+by+the+carboxyl+terminus+in+familial+defective+apo-B100.">Identification of the low density lipoprotein receptor-binding site in apolipoprotein B100 and the modulation of its binding activity by the carboxyl terminus in familial defective apo-B100.</a> Journal of Clinical Investigation. 101 (5), 1084-1093 (1998).</li><li>Sanan, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low+density+lipoprotein+receptor-negative+mice+expressing+human+apolipoprotein+B-100+develop+complex+atherosclerotic+lesions+on+a+chow+diet:+no+accentuation+by+apolipoprotein(a).">Low density lipoprotein receptor-negative mice expressing human apolipoprotein B-100 develop complex atherosclerotic lesions on a chow diet: no accentuation by apolipoprotein(a).</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 95 (8), 4544-4549 (1998).</li><li>Gistera, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vaccination+against+T-cell+epitopes+of+native+ApoB100+reduces+vascular+inflammation+and+disease+in+a+humanized+mouse+model+of+atherosclerosis.">Vaccination against T-cell epitopes of native ApoB100 reduces vascular inflammation and disease in a humanized mouse model of atherosclerosis.</a> Journal of Internal Medicine. , (2017).</li><li>Johnson, J. L., Jackson, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atherosclerotic+plaque+rupture+in+the+apolipoprotein+E+knockout+mouse.">Atherosclerotic plaque rupture in the apolipoprotein E knockout mouse.</a> Atherosclerosis. 154 (2), 399-406 (2001).</li><li>Calara, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+plaque+rupture+and+secondary+thrombosis+in+apolipoprotein+E-deficient+and+LDL+receptor-deficient+mice.">Spontaneous plaque rupture and secondary thrombosis in apolipoprotein E-deficient and LDL receptor-deficient mice.</a> The Journal of Pathology. 195 (2), 257-263 (2001).</li><li>Caligiuri, G., Levy, B., Pernow, J., Thoren, P., Hansson, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myocardial+infarction+mediated+by+endothelin+receptor+signaling+in+hypercholesterolemic+mice.">Myocardial infarction mediated by endothelin receptor signaling in hypercholesterolemic mice.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 96 (12), 6920-6924 (1999).</li><li>Daugherty, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recommendation+on+Design,+Execution,+and+Reporting+of+Animal+Atherosclerosis+Studies:+A+Scientific+Statement+From+the+American+Heart+Association.">Recommendation on Design, Execution, and Reporting of Animal Atherosclerosis Studies: A Scientific Statement From the American Heart Association.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 37 (9), (2017).</li><li>Paigen, B., Morrow, A., Holmes, P. A., Mitchell, D., Williams, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assessment+of+atherosclerotic+lesions+in+mice.">Quantitative assessment of atherosclerotic lesions in mice.</a> Atherosclerosis. 68 (3), 231-240 (1987).</li><li>Purcell-Huynh, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+expressing+high+levels+of+human+apolipoprotein+B+develop+severe+atherosclerotic+lesions+in+response+to+a+high-fat+diet.">Transgenic mice expressing high levels of human apolipoprotein B develop severe atherosclerotic lesions in response to a high-fat diet.</a> Journal of Clinical Investigation. 95 (5), 2246-2257 (1995).</li><li>Nicoletti, A., Kaveri, S., Caligiuri, G., Bariety, J., Hansson, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunoglobulin+treatment+reduces+atherosclerosis+in+apo+E+knockout+mice.">Immunoglobulin treatment reduces atherosclerosis in apo E knockout mice.</a> Journal of Clinical Investigation. 102 (5), 910-918 (1998).</li><li>Gistera, A., Ketelhuth, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunostaining+of+Lymphocytes+in+Mouse+Atherosclerotic+Plaque.">Immunostaining of Lymphocytes in Mouse Atherosclerotic Plaque.</a> Methods in Molecular Biology. 1339, 149-159 (2015).</li><li>Gistera, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transforming+growth+factor-beta+signaling+in+T+cells+promotes+stabilization+of+atherosclerotic+plaques+through+an+interleukin-17-dependent+pathway.">Transforming growth factor-beta signaling in T cells promotes stabilization of atherosclerotic plaques through an interleukin-17-dependent pathway.</a> Science Translational Medicine. 5 (196), (2013).</li><li>Gistera, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-Density+Lipoprotein-Reactive+T+Cells+Regulate+Plasma+Cholesterol+Levels+and+Development+of+Atherosclerosis+in+Humanized+Hypercholesterolemic+Mice.">Low-Density Lipoprotein-Reactive T Cells Regulate Plasma Cholesterol Levels and Development of Atherosclerosis in Humanized Hypercholesterolemic Mice.</a> Circulation. 138 (22), 2513-2526 (2018).</li><li>Daugherty, A., Whitman, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+atherosclerosis+in+mice.">Quantification of atherosclerosis in mice.</a> Methods in Molecular Biology. 209, 293-309 (2003).</li><li>Baglione, J., Smith, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assay+for+mouse+atherosclerosis+in+the+aortic+root.">Quantitative assay for mouse atherosclerosis in the aortic root.</a> Methods in Molecular Biology. 129, 83-95 (2006).</li><li>Schiller, N. K., Kubo, N., Boisvert, W. A., Curtiss, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+gamma-irradiation+and+bone+marrow+transplantation+on+atherosclerosis+in+LDL+receptor-deficient+mice.">Effect of gamma-irradiation and bone marrow transplantation on atherosclerosis in LDL receptor-deficient mice.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 21 (10), 1674-1680 (2001).</li><li>Naghavi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+vulnerable+plaque+to+vulnerable+patient:+a+call+for+new+definitions+and+risk+assessment+strategies:+Part+I.">From vulnerable plaque to vulnerable patient: a call for new definitions and risk assessment strategies: Part I.</a> Circulation. 108 (14), 1664-1672 (2003).</li><li>Seijkens, T. T. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+CD40-Induced+TRAF6+Signaling+in+Macrophages+Reduces+Atherosclerosis.">Targeting CD40-Induced TRAF6 Signaling in Macrophages Reduces Atherosclerosis.</a> Journal of the American College of Cardiology. 71 (5), 527-542 (2018).</li></ol>

Yazarların ifşa etmesi gereken hiçbir şey yok.

Kardiyovasküler hastalık dünyadaki ana katildir ve yeni önleyici ölçümler gereklidir2. Hastalığın fare modelleri, patofizyoloji ve deneysel tedavilerin incelenmesi için kapsamlı bir platform sağlar13. Bu yaklaşım için güvenilir lezyon boyutu ölçülmesini gereklidir. Ancak, ölçme yöntemleri laboratuvarlar arasında farklılık gösterir. Standardizasyon ve optimizasyon 1980 ' den beri devam eden bir süreç olmuştur13,27,33,34. Aort kökleri deneysel ateroskleroz ölçmek için en popüler site olarak ortaya çıkmıştır. Plakların çapraz bölümleri gruplar arasında plak hacminin karşılaştırılması sağlar. En yüz preparatları aort büyük segmentlerinde lezyon ölçümü için tercih edilir. En yüz yöntemi plak miktarını görselleştirir ve plak alanı kapsamının ölçülmesini sağlar, ancak plak kalınlığı dikkate almaz. Gözlenen farklılıklar için biyolojik alaka damar ağacında farklı yerlerde tutarlı sonuçlar tarafından kanıtlanmış. Farklı konumlarda ateroskleroz gelişimini değerlendirmek olası site spesifik etkileri adresleri. Nakledilen hematopoetik hücrelerin ateroskleroz gelişimi üzerine etkisi, hiperkolesterolemik ldlr-/- Chimeras 'da değerlendirilebilir. Ancak, tüm vücut ışınlama site spesifik etkileri ile ateroskleroz sürecini etkiler. Aort kökünde daha belirgin aterosklerotik lezyonlar gelişirken, aort kemerinde azaltılmış lezyon gelişimi görülür35.
Daha da önemlisi, sadece lezyon büyüklüğü deneysel ateroskleroz çalışmalarında ele alınması gerekir. Lezyon bileşimi de anahtar bir parametredir. Çeşitli plak özellikleri insanlarda hastalığın belirtileri ile ilişkili olmuştur36. Aort kökü seri bölümleme plak kompozisyon dikkatli analizi için kullanılabilir birkaç bölüm bırakır. İnsanlarda Plak rüptürü birkaç pürüzsüz Kas hücreleri, seyrek kollajen içeriği ve plaklar36inflamasyon belirtileri ile ince bir fibröz kap ile karakterize edilir. Plak rüptür ateroskleroz fare modellerinde nadir bir olay olmasına rağmen, plak stabilitesi için belirteçler değerlendirmek için bilgilendirici. Translasyonel yaklaşımlar fare modellerinden mekanik bulguları teyit ve insan hastalığının önemli özelliklerini ortaya çıkarabilir31. Aterosklerotik plakların inflamatuar durumu VCAM-1, MHC sınıf II, makrofajlar ve lenfosit30' a ait immünhistokimya boyama ile tespit edilebilir. Bazı protokoller, aterosklerotik lezyon büyüklüğü ve kompozisyon37ölçümü için aort kemerinin koronal düzleminde boyuna bölümler veya brachiocephalik arter kullanır. Ancak, bu alternatif yöntem yalnızca birkaç bölümleri analiz edilecek, hangi sınırlamaları uygulamaları bırakır.
Bu protokolde ilk kritik adım AAS verimli hasat yeteneğidir. Mikroskop altında el-göz koordinasyonu uygulama gerektirir ve hem mikrodiseksiyon hem de aort kemerinin sonraki sabitleme için çok önemlidir. Bu protokoldeki bir sonraki kritik adım, aort kökünden seri bölümler koleksiyonudur. 80 her iki odak ve sabır gerektiren her fare için ardışık bölümler toplanmalıdır. Metodolojik yeterlilik açıklanan süreçleri önemli ölçüde hızlandırabilir. Yine de, aterosklerotik lezyon ölçümü hala zaman alan bir görevdir. Yeni teknoloji, otomatik taşıma ve küçük hayvan görüntüleme, gelecekte deneysel ateroskleroz miktarını kolaylaştırabilir. Aterosklerozun ilerlemesi yavaştır ve fare modellerinde en deneysel protokoller13tamamlamak için dört aydan fazla sürer. Bu nedenle, AAS çalışma uç noktalarında optimize edilmiş bir şekilde toplanması gerekir. Bu protokol, aort kökü, Aort kemer ve brachiocephalik arter lezyonunun ölçülmesini de dahil olmak üzere çok amaçlı kullanım için AAS hazırlar ve önerilen işleme, diseksiyonlarının verimli hasat için kapsamlı bir kılavuz sağlar. Umarım protokol deneysel değişkenliği azaltabilir, sonuçların güvenilirliğini artırabilir ve ateroskleroza karşı yeni tedaviler için yol açacak bulgulara yol açabilir.

Kardiyovasküler hastalık her dört ölüm1biri için iskemik kalp hastalığı ve inme muhasebe ile dünyada ölüm ana nedenidir. Çoğu olguda ateroskleroz, büyük ve orta ölçekli arterlerde kronik inflamasyon belirtileri ile lipid yüklü plaklar yavaş birikme ile karakterize bir hastalık neden olur2. Hastalık genellikle birkaç on yıl içinde fark edilmeden bir yırtılması veya plak erozyonu iskemik doku hasarına yol açan bir arteriyel tromboz verir kadar kalır.
Normal bir arter endotel hücreleri ile intima tabakadan oluşur ve seyrek dağıtılmış pürüzsüz Kas hücreleri, pürüzsüz Kas hücreleri ve elastik Lamellae ile bir medya katmanı, ve gevşek bağ dokusu ile çevreleyen adventisyal tabaka3. LDL ofset ateroskleroz gelişimi intimal tutma4. Lipoproteinlerin birikmesi ve değiştirilmesi, arteriyel intima5içinde toplama ve tuzağa yol açar. Sıkışan ve değiştirilmiş lipoproteinler6' da enflamatuar bir tepki uyarıldı. Endotel hücreler yapışma molekülleri ifade etmeye başlar, VCAM-1 gibi türbüstart kan akımı ile arter ağacında sitelerinde, dolaşan monositler ve diğer lökositlerin işe önde gelen7. İnfiltrasyon monositler makrofajlar arasında farklılaştırarak lipid içeren makrofaj köpük hücrelerine dönüşen dönüşüm8.
Ateroskleroz, 1980 ' lerin ortalarında beri frekans artan fare modellerinde incelenmiştir. C57BL/6 Bu çalışmalar için en sık kullanılan doğuştan fare gerinim, ve genetiği değiştirilmiş suşların çoğunluğu için genetik arka plan olarak kullanılır9. Bu gerinim 1920 ' li10' da kuruldu ve genomu112002 yılında yayınlandı. Fare modellerinde deneyler çeşitli faydalar vardır: koloniler hızlı yeniden, konut alan verimli ve üreme deneysel değişkenlik azaltır. Model aynı zamanda hedeflenen gen silmeleri ve transgenler ekleme gibi genetik manipülasyon sağlar. Bu, hastalığın yeni patofizyolojik anlayışına ve yeni tedavi hedeflerini12' ye götürdü.
Vahşi tip C57BL/6 fareler doğal olarak ateroskleroza dayanıklıdır. Onlar HDL içinde dolaşım kolesterol çoğu var, ve karmaşık aterosklerotik lezyonlar bile yüksek yağ ve yüksek kolesterol diyet beslenen oluşturulmaz13. C57BL/6-arka planda ApoE-/- gibi hiperkolesterolemik fareler, bu nedenle ateroskleroz14,15deneysel modeller olarak kullanılır. ApoE eksikliği, kalıntı lipoproteinleri ve ciddi perturbs lipid metabolizması hepatik alımı zarar. ApoE-/- fareler, dolaşım kolesterol ağırlıklı olarak VLDL partikülleri, ve fareler düzenli bir Chow diyet karmaşık aterosklerotik plaklar geliştirmek.
Ldlr-/- fareler ailesel hiperkolesterolemi16olan insanlarda görülen ateroskleroz gelişimini taklit. Ldlr-/- fareler ateroskleroz geliştirmek için Batı tipi diyet gerekir17. Batı diyet insan gıda alımı taklit ve genellikle% 0,15 kolesterol içerir. LDL reseptörü ApoB100 ve ApoE 'yu tanır ve endossitoz yoluyla LDL parçacıklarının alımı için aracılık eder. LDL reseptörleri, hematopoetik hücrelerde LDL reseptör ifadesi bu süreci etkilemez iken, LDL karaciğer Temizleme için temeldir. Bu, ldlr+/+ hücrelerinin kemik iliği nakli olasılığını hiperkolesterolemik ldlr-/- alıcılar ve ateroskleroz gelişiminin değerlendirilmesi için açar. Kemik iliği Chimeras yaygın deneysel ateroskleroz hematopoetik hücrelerin katılımı incelemek için kullanılmıştır. Ancak kemik iliği nakli, aterosklerotik plakların boyutunu ve bileşimini etkileyebilir, sonuçların yorumlanmasını belirsiz hale gelebilir.
Ek genetik değişikliklerle ApoE-/- ve ldlr-/- fareler farklı türevleri hastalığın belirli süreçleri incelemek için geliştirilmiştir18. Bir örnek, insan APOB100-transjenik ldlr-/- (Hubl) fareler olan tam uzunlukta insan APOB100 geni taşır19,20. Bu fareler düzenli bir Chow diyet hiperkolesterolemi ve ateroskleroz gelişir. Ancak, kompleks aterosklerotik plakların geliştirilmesi en az altı ay sürer ve daha kısa deneysel protokoller genellikle Batı diyeti21' i kullanır. Plazma kolesterolün büyük bir kısmı LDL partikülleri içinde dolaşıyor, bu da Hubl farelerine ApoE-/- ve ldlr-/- Mice ile karşılaştırıldığında daha insan benzeri dislipidemik lipoprotein profili verir. Hubl fareler de ınsan ApoB bir otoantijen olarak çalışmalara izin22.
Ateroskleroz fare modelleri insan hastalığının ortak özellikleri ile karmaşık aterosklerotik plaklar geliştirir. Ancak plaklar, ortaya çıkan miyokard infarktüsü ile rüptüre oldukça dayanıklıdır. Atherothrombosis sadece spor algılanan ve deneysel değerlendirmek için zorlu23,24,25. Özel plak rüptür modelleri geliştirilmiştir, ancak deneysel alan, plak stabilize edici ajanların değerlendirilmesi için güvenilir ve tekrarlanabilir bir modelden yoksun.
Literatürde birçok şekilde aterosklerozun ölçülmesini bildirilmiştir. Son çalışmalar deneysel tasarım, yürütme ve hayvan çalışmaları26raporlama standartlaştırmak etmeye çalıştı. Müfettişlerin laboratuvarlarına uyarlanmış farklı tercihleri ve teknikleri vardır. Çoğu araştırma projeleri de bazı protokol değişiklikleri gerektiren bir şekilde benzersizdir. Hastalığın multiffakyel doğası nedeniyle, optimum kontroller projeler arasında farklılık gösterir. Yerel koşullar ve standardizasyon eksikliği, araştırma alanının gelişmeleri engelleyen hastalık gelişiminde gözlenen farklılıklara neden olabilir. Deneysel değişkenlik farklılıkları da istatistiksel güç hesaplamalarının yerel koşullar altında pilot çalışmalara dayalı olması gerektiği anlamına gelir.
Damar ağacında çeşitli yerlerde aterosklerozun ölçülmesini tavsiye edilir. Bu protokol, tek bir fareyle aort kökü, aort kemeri ve brachioksefalik arter sonuçlarının nasıl elde edileceği açıklanmaktadır, diğer analizler için torakoabdominal aort geri kalanı bırakarak ek olarak. En yüz preparatları, aort kemerinin içinde lipid yüklü plakların hızlı ölçülmesine olanak sağlar. Numuneler dikkatle görüntüleniyorsa, brachioksefalik arter hastalığı yükü de nicelik olabilir. Daha fazla zaman alıcı çapraz kesitleme aort kökü plak kompozisyon ayrıntılı değerlendirme için kullanılabilir birkaç bölüm bırakır.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acetone</td>
			<td>VWR Chemicals</td>
			<td>20066.296</td>
			<td>For fixation of sections for immunohistochemistry.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Black electrical insulation tape (50 mm wide)</td>
			<td>Any specialized retailer</td>
			<td>-</td>
			<td>To create pinning beds for aortic arches.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5417C</td>
			<td>Benchtop microcentrifuge.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cork board</td>
			<td>Any specialized retailer</td>
			<td>-</td>
			<td>For cutting hearts in the preparation to cryomount aortic roots.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryostat</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>Microm HM 560</td>
			<td>For serial cryosectioning of aortic roots.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deionized water</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>For rinsing and preparation of solutions.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital camera</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>DC480</td>
			<td>5.1 megapixel CCD for high-resolution images of aortic arches and aortic root sections.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting scissors (10 cm, straight)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>14393</td>
			<td>For general dissection of organs.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont forceps #5 (11 cm, straight)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>500341</td>
			<td>For microdissection of aorta.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 70% (v/v)</td>
			<td>VWR Chemicals</td>
			<td>83801.290</td>
			<td>Highly flammable liquid and vapour, store in a well-ventilated place, and keep cool.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute &#8805;99.8%</td>
			<td>VWR Chemicals</td>
			<td>20821.310</td>
			<td>Highly flammable liquid and vapour, store in a well-ventilated place, and keep cool.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde 4% stabilised, buffered (pH 7.0)</td>
			<td>VWR Chemicals</td>
			<td>9713.1000</td>
			<td>Harmful by inhalation, in contact with skin and if swallowed.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td>NIH</td>
			<td>-</td>
			<td>Image analysis software.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris forceps (10 cm, curved, serrated)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>15915-G</td>
			<td>Used as anatomical forceps.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1096341011</td>
			<td>Flammable liquid, causes serious eye irritation, and may cause drowsiness or dizziness.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kaiser&#39;s glycerol gelatine</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1092420100</td>
			<td>Aqueous mounting medium containing phenol. Suspected of causing genetic defects.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>DM LB2</td>
			<td>For analysis during sectioning and documentation of Oil Red O stained micrographs.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayer&#39;s hematoxylin</td>
			<td>Histolab</td>
			<td>1820</td>
			<td>Non-toxic staining solution without chloral hydrate, but causes serious eye irritation.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayo scissors (17 cm, straight)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501751-G</td>
			<td>For general dissection.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Castroviejo needle holder (9 cm, straight)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>503376</td>
			<td>For pinning of aortic arches.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tubes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>MCT-175-C</td>
			<td>Polypropylene microtubes with snaplock cap.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microlance 3 needles, 23 gauge</td>
			<td>BD</td>
			<td>300800</td>
			<td>For blood collection.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microlance 3 needles, 27 gauge</td>
			<td>BD</td>
			<td>302200</td>
			<td>For perfusion of mice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microvette 500 &#181;L, K3 EDTA</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>20.1341.100</td>
			<td>For blood collection.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microvette 500 &#181;L, Lithium Heparin</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>20.1345.100</td>
			<td>For blood collection.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minutien insect pins, 0.10 mm</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>26002-10</td>
			<td>For pinning of aortic arches.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oil Red O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>O0625</td>
			<td>Not classified as a hazardous substance or mixture.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optimum cutting temperature (OCT) cryomount</td>
			<td>Histolab</td>
			<td>45830</td>
			<td>For embedding tissue.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm M</td>
			<td>Bemis</td>
			<td>PM992</td>
			<td>Paraffin wax film used to create pinning beds for aortic arches.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes (100x20 mm)</td>
			<td>Any cell culture supplier</td>
			<td>-</td>
			<td>Proposed as a storage container for pinned aortas.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>Sterile and RNase-free solution is required for perfusion of mice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Qualitative filter paper (grade 1001)</td>
			<td>Munktell</td>
			<td>120006</td>
			<td>For filtering Oil Red O working solution (typical retention 2-3 &#181;m).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAlater RNA stabilization reagent</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>76106</td>
			<td>For stabilization of RNA in tissue samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNaseZap RNase Decontamination Solution</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM9780</td>
			<td>A surface decontamination solution that destroys RNases on contact.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel handle #3 (13 cm)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>500236</td>
			<td>For cutting hearts in the preparation to cryomount aortic roots.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard scalpel blade #10</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>500239</td>
			<td>For cutting hearts in the preparation to cryomount aortic roots.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>MZ6</td>
			<td>For dissection and en face documentation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sudan IV</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S4261</td>
			<td>Not classified as a hazardous substance or mixture.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrost Plus microscope slides</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>J1800AMNZ</td>
			<td>To collect aortic root sections.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue forceps (15 cm)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501741-G</td>
			<td>For general dissection.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek cryomolds (10x10x5 mm)</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4565</td>
			<td>For embedding aortic roots in OCT.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas scissors (8 cm, straight)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>503378</td>
			<td>For microdissection of aorta.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantification of atherosclerosis in mice

Kardiyovasküler hastalık dünyada ölümün ana nedenidir. Çoğu durumda temel neden ateroskleroz, kısmen kronik inflamatuar bir hastalıktır. Deneysel ateroskleroz çalışmaları, hastalık sürecinde kolesterol ve inflamasyonun rolünü aydınlatılamamıştır. Bu, aterosklerozun klinik bulgularının azalmasına neden olan ilaç ajanları ile başarılı klinik deneyler yaptı. Hastalığın fare modellerinde dikkatli ve iyi kontrollü deneyler, tam olarak anlaşılmayan hastalığın patogenezini daha da aydınlatabilir. Standartlaştırılmış lezyon Analizi deneysel varyasyon azaltmak ve yeniden üretilebilirliği artırmak için önemlidir. Aort kökü, aort kemerinde ve brachioksefalik arter lezyonunun büyüklüğü, deneysel aterosklerozda ortak uç noktalarıdır. Bu protokol, tek bir fareyle tüm bu sitelerde ateroskleroz değerlendirilmesi için teknik bir açıklama sağlar. İletişim kuralı özellikle, genetik olarak değiştirilmiş hayvanların karakterize edildiği durumlarda sıklıkla olduğu gibi malzeme sınırlı olduğunda yararlıdır.

Ateroskleroz fare modellerinde en belirgin lezyonlar aort kökü ve aort kemerinin geliştirilmesi eğilimindedir. Bu protokol, aort kökü, aort kemerinde ateroskleroz ve tek bir fareyle brachiocephalik arter miktarını açıklar. Torasik inen aort ve karın aortunda ölçülebilir lezyonlar sadece önceden hastalık olan hayvanlarda bulunur. Bu protokolde, bu parçalar aterosklerotik yük için analiz edilmez, ancak mRNA düzeylerinin veya diğer analizlerin sonraki analizi için kaydedildi. Aort kökündeki aterosklerotik lezyonların seri bölümleri genellikle yekseninde lezyon büyüklüğü ve x-ekseni28' deki aort sinüs mesafesi ile bir grafikte görüntülenir. Gerçek çapraz bölümler lezyon boyutu ölçümleştirme için çok önemlidir. Eğik bölümler lezyon boyutlarını aşırı tahmin edebilir ve sadece 20 ° ' lik bir eğme mutlak lezyon yüzeyini% 1529oranında abartabilir. Bununla birlikte, toplam damar alanının lezyon fraksiyonu hesaplanırken sonuç, seksiyonlama sırasında olası açı farklılıklarına daha az duyarlı hale getirir (Şekil 4A). Gruplar arasındaki farklılıkları algılamak için uygun bir istatistiksel yöntem genellikle normal 2 yönlü bir varyans (ANOVA) analizdir. Bonferroni Post-testler daha sonra belirli düzeylerde farklılıkları algılamak için gerçekleştirilir. Fisher 'ın en az önemli farkı da ANOVA için bir takip testi olarak kullanılabilir. Bu tür II istatistiksel hataların olasılığını azaltır, ancak birden çok karşılaştırmalar için hesap yok. Buna ek olarak, eğrisi veya fare başına ortalama lezyon boyutu altında alan hesaplamak için açıklayıcı olabilir ve daha fazla gruplar içinde bireysel varyasyon görselleştirmek için bir nokta Plot veri mevcut (Şekil 4b).
Yağ kırmızı O nötr lipidler lekeleri yağ çözünür parlak kırmızı Diazo boya olduğunu. Hücre membranlarındaki Polar lipidler lekelenmez. Yağlı kırmızı O boyama, taze, dondurulmuş veya formalin-sabit örneklerinde yapılabilir, ancak gerekli deparafinizasyonda sürecinde lipidlerin çıkarılması nedeniyle parafin-katıştırılmış numuneler üzerinde kullanılamaz. Toplam lezyon alanının yağ kırmızısı O pozitif alanı renk eşik tarafından lezyon lipid birikiminin bir Miktarlama yapılabilir (Şekil 4c). Hematoxylin hücre çekirdekleri mavi bir boyama üretir, hangi plak morfolojisi görselleştirmek için yararlıdır. Sağ ve sol koroner arterlerin genellikle en belirgin lezyon boyutları ile çakıştığı aort sinüs27, yaklaşık 250 μm civarında aortdan sapmak. Bu bölgeden çapraz bölümler genellikle temsili sonuçlar olarak görüntülenir (Şekil 4d).
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59828/59828fig4.jpg"> Şekil 4: aort kökündeki aterosklerotik lezyonlar. (A) yirmi sekiz haftalık erkek kemik iliği Chimeras sekiz hafta boyunca Batı diyet beslenen Smad7-eksikliği T hücrelerinin ateroskleroz gelişimi üzerinde etkisini belirlemek için değerlendirildi. Deneysel ldlr-/- Chimeras alınan CD4-CRE+Smad7fl/fl kemik iliği ve kontrol alınan CD4-CRE+Smad7fl/+ kemik iliği. Grafik, toplam damar yüzeyinin lezyon fraksiyonu olarak görüntülenen aort sinüs 100-800 μm, ardışık sekiz bölümden aterosklerotik lezyon alanının miktarını gösterir (Cd4-CRE+Smad7fl/+/ldlr-/- n = 6, Cd4-CRE+Smad7fl/fl/ldlr-/- n = 9, 2-yolu ANOVA Bonferroni 'nin sonrası testi ile, grafik ortalama ± SEM gösterir, parantez gerinim karşılaştırması için önem düzeyini gösterir). (B) kombine nokta arsa ve çubuk grafik aort kök bölümlerinden ortalama aterosklerotik lezyon alanı gösterir (Cd4-CRE+Smad7fl/+/ldlr-/- n = 6, CD4-CRE+Smad7fl/fl/ Ldlr-/- n = 9, öğrencinin t-test) (C) lezyonlarda yağ kırmızı O-lekelenmiş alan kesir (Cd4-CRE+Smad7fl/+/ldlr-/- n = 4, Cd4-CRE+Smad7fl/fl /Ldlr-/- n = 6, öğrencinin t-testi, NS = önemli olmayan) (B-C) dots bireysel fareler ve çubukları temsil eder ortalama ± SEM. (D) petrol kırmızı O boyama gösteren temsili MİKROGRAFİ (kırmızı renk) aort kökündeki nötr lipidlerin 300 μm ' den aort sinüs (50x büyütme), ölçek çubuğu = 500 μm. *p ≤ 0,05, * * *p ≤ 0,001. Bu rakam Gisterå ve al.31' den değiştirildi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59828/59828fig4large.jpg" target="_blank">Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek Için lütfen tıklayınız.</a>
Yağ kırmızı O en yüz hazırlanmış AAS boyama için kullanılabilir, ancak bu protokol sudan IV, başka bir uygun yağ çözünür Diazo boya kullanır. Sudan IV, lipidler, trigliserid ve lipoproteinleri boyama yoluyla aterosklerotik plakları turuncu-kırmızı renkte açıkça görselleştiriyor. En yüz aort kemerlerinin temsili görüntülerde koyu arka plan çıkarılması görsel ekranı artırabilir (Şekil 5A). Genellikle lezyonlar grup içinde dağıtılır ve gruplar arasında öğrenci t-testi ile istatistiksel testler sağlar. Hem bireysel fareler hem de gruplar arasında karşılaştırıldığında ortalama gösteren bir nokta çizimi, sonuçları görüntülemek için bilgilendirici bir yoldur (Şekil 5B-C). Gruplar içindeki varyasyon genellikle damar ağacında konumlar arasında farklı olduğundan, ayrı güç hesaplamaları genellikle gereklidir. Gereksiz varyasyon yöntemi yeterlilik ve protokol standardizasyon tarafından önlenebilir. İstatistiksel olarak önemli sonuçlar elde etmek önemlidir, ancak gözlenen bir fark için biyolojik alaka her zaman da dikkate alınması gerekir.
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59828/59828fig5.jpg"> Şekil 5: aort kemerinde ve brachioksefalik arter aterosklerotik lezyonlar. (A) 20 haftalık fareden sudan IV (turuncu renkte) ile lekelenmiş lipid yüklü plaklar ile aort kemerlerinin yüz mikrografisini temsil eden 10 hafta boyunca Batı diyetini besleyen, birlikte görselleştirildi. Ölçek çubuğu = 2 mm. insan APOB100-transjenik ldlr-/- (Hubl) fareler kontrol olarak kullanılmış ve deneysel grup LDL-reaktif T hücreleri ile TCR-transjenik fareler oluşuyordu (BT1) Hubl fareler için melez. (B) aort kemerinin aterosklerotik lezyonlar (Hubl n = 10, BT1xHuBL n = 12; Öğrenci t-test). (C) brachioksefalik arter aterosklerotik lezyonlar (Hubl n = 8, BT1xHuBL n = 9, öğrencinin t-testi). (B-C) Noktalar bireysel fareler temsil, barlar ortalama ± SEM gösterir. *p ≤ 0,05. Bu rakam Gisterå ve al.32güncellenmiştir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59828/59828fig5large.jpg" target="_blank">Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek Için lütfen tıklayınız.</a>
Ek Şekil 1: aort kökü seri bölümler için slaytlar alternatif organizasyon. Aort kökünden bölümler toplanması için basitleştirilmiş bir sistematik slayt organizasyonu. Koleksiyon lipidler ve immünhistokimya veya immünofluoresesans boyama için yağlı kırmızı O boyama sağlar. Kollajen Picrosirius kırmızı boyama için adanmış slaytlar atlanıyor. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59828/2019-JoVE-Figure-S1.eps">Bu dosyayı indirmek Için lütfen buraya tıklayın.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Atherosclerosis in Mice at JoVE.com

Quantification of Atherosclerosis in Mice

Ateroskleroz murine modelleri, moleküler düzeyde patojenik yolları araştırmak için yararlı araçlardır, ancak lezyon gelişimi için standartlaştırılmış bir ölçmek gerektirir. Bu protokol, aort kökü, Aort kemer ve brachioksefalik arter dahil olmak üzere ana arter damarlarında lezyon boyutunu belirlemek için optimize edilmiş bir yöntem açıklanmaktadır.

Fareler içinde ateroskleroz ölçümü

Cardiovascular disease is the main cause of death in the world. The underlying cause in most cases is atherosclerosis, which is in part a chronic ...

Kardiyovasküler hastalık küresel ölüm ana nedenidir. Fare modelleri bu hastalığı incelemek için yararlı araçlardır ve protokolümüz farelerde ateroskleroz ölçmek için kullanılabilir. Bu protokol kullanılarak lezyon büyüklüğü üç vasküler yerde ölçülebilir.Aort kökü, aort kemeri ve brakiyosefalik arter. Farelerde ateroskleroz un ölçülmesi sıkıcı bir görev olabilir. Süreci hızlandırabileceğini umduğumuz ayrıntılı adımlar attık.Bu adımlardan bazılarını yazılı olarak açıklamak zordur. Biz bu video sağlam aterosklerotik lezyon boyutu analizi elde size yardımcı olacağını umuyoruz. Standart protokollere göre bir fare kalp hasat sonra, bir mantar yatak üzerinde kalp yerleştirin, bir diseksiyon mikroskop altında ventral tarafı ve apeks aracılığıyla mantar için kalp düzeltmek için bir iğne kullanın.Anatomik forseps ile kalbin tabanını tutarak, sagital düzlemde caudally 20 derecelik açıda düzenlenen bir neşter kullanın, ve transversal düzlemde 20 derece kranial, kalbin apikal üçte ikisini kesmek için. Optimum kesme sıcaklığı bileşik aort kökü ve kalbin tabanını gömmek veya OKT, ve yavaşça bileşik ile aort kökü doldurmak ve herhangi bir hava kabarcıkları kaldırmak için forceps ile kalp sıkmak. Örneği, aort kökü dik olarak alt yüzeye dik olan OCT ile dolu bir kriyomoldun dibine aktarın ve bileşimi kuru buz üzerinde dondurun.Daha sonra doku örneğini dondurucu torbasında eksi 80 derecede kriyokesit e kadar saklayın. En yüz analizi için bir sabitleme yatağı hazırlamak için, düz bir 25 x 25 mm yüzey yapmak ve aort için koyu bir arka plan yapmak için film etrafında siyah elektrik yalıtım bandı sarın parafin balmumu film sekiz kez bir segment katlayın. Sabitleme yatağının arka tarafına bir etiket yerleştirin ve fare kimlik numarasını kaydetmek için kurşun kalem kullanın.Sabitleme yatağına aort kemer iaktarın ve dokuya PBS bir damla ekleyin. Stereo mikroskop kullanarak, kalan periadventiyal yağ dokusundan aortu temizleyin ve vannas makasını ve Dumont forceps'u kullanarak aortu manipüle etmeden veya zarar vermeden çevredeki tüm yağ dokusunu nazikçe soyup kullanın. Daha sonra, intimal yüzeyi ortaya çıkarmak için aort lümen içine Vannas makas tanıtmak.Distal yönde yükselen kemer dış eğrilik kesme başlayın, brakiyosefalik arter de dahil olmak üzere dalları açık kesmeye devam ve azalan torasik bölgenin dorsal kısmı koruyucu. Intimal yüzeyi görüntülemek için, daha az eğriliği açın ve aort açık katlayın. Mikro Castroviejo iğne tutucusu kullanarak, numuneyi germeden, numuneyi germeden, doku yerinde tutulurken pimleri numuneden hafifçe bükerek, açık kemeri sabitleme yatağına sabitleyerek sabitletir.Sonra dört santigrat derece PBS bir Petri çanak iğneli kemer yüzüstü saklayın. Sudan IV boyama için, numuneyi sudan IV çalışma solüsyonuna yedi dakika boyunca aktarmadan önce, numuneyi kemer aşağı bakacak şekilde %70 etanollü bir Petri kabında beş dakika durulayın. Kuluçka sonunda, normal intimal yüzeyi lekeden arındırmak için %80 etanolte iki üç dakikalık yıkama ile numuneyi durulayın ve ardından dokuyu orijinal Petri kabına geri döndürmeden önce PBS'de son bir durulama yapın.Daha sonra 10X büyütme de dijital kameraya bağlı bir stereo mikroskop altında mikrograflar elde, PBS batık iğnelenmiş kemer görüntüleri elde, Petri çanak altına sabitleme yatağı tutmak için küçük metal ağırlıkları kullanarak. Gömülü aort kökünün kriyokesitlerini elde etmek için kriyostat sıcaklığını eksi 20 dereceye, kesit kalınlığını da 10 mikrometreye ayarlayın. Ventriküler doku dışa bakacak şekilde numune tutucuüzerinde aort kökünü içeren OCT bloğunu monte edin.Gerekirse bazı ek OCT ile konumlandırma güvenli. Aort kökü artık bıçak dik konumlandırılmalıdır. Sıradan mikroskop slaytlar üzerinde kalp kas dokusu içeren ilk kontrol bölümleri toplamak, bir ışık mikroskop altında doku ile ilerlemesini kontrol 200 mikrometre.İlk aort cusp göründüğünde, kesit düzlemini diğer iki tepeyle hizalamak için örneği sıfır noktasına doğru yatırın ve sıfır noktasından itibaren kesilen her 10 mikrometrelik bölümü sayın. Planlanan slayta göre 90 mikrometreden ve ileriye doğru analiz için bölümleri toplamaya başlayın, ta ki sıfır noktasından 800 mikrometreye ulaşılınana kadar. Aort kökündeki toplam damar alanının lezyon fraksiyonunun hesaplanması, verilerin kesit leme sırasında olası açı farklılıklarına karşı daha az duyarlı olmasını sağlar.Buna ek olarak, eğri nin altındaki alanı veya fare başına atheroto lezyon boyutunu hesaplamak ve gruplar içindeki bireysel varyasyonları daha fazla görselleştirmek için verileri nokta çiziminde sunmak açıklayıcı olabilir. Lezyonal lipid birikimi, toplam lezyon alanının renk eşikli yağı kırmızı O pozitif alanları ile ölçülebilir. Sağ ve sol koroner arterler genellikle aort sinüs yaklaşık 250 mikrometre aort farklılaşmak genellikle en belirgin lezyon boyutları ile çakışıyor.En face aort kemerlerinin temsili görüntülerinde koyu arka plan kaldırılması görsel ekran artırabilir. Lezyon boyutu genellikle gruplar içinde dağıtılır ve öğrencinin gruplar arasındaki t-testi kullanılarak istatistiksel analize izin verilir. Deneysel numunelerinizi işlemek için yeterli beceri elde edene kadar bazı test materyalleri ile pratik yapmanızı öneririz.Lezyon boyutu gruplar arasında farklıise, mekanizmayı belirlemeniz gerekir, çünkü lezyon kompozisyonu analizi genellikle takip etmek için bir sonraki adımdır.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Measurement of &#947;HV68 Infection in Mice

Measurement of ÃƒÅ½Ã‚Â³HV68 Infection in Mice

Farelerde γHV68 Enfeksiyon ölçümü

&gamma;-Herpesviruses (&gamma;-HVs) are notable for their ability to establish latent infections of lymphoid cells1. The narrow host range of human ...

Depletion and Reconstitution of Macrophages in Mice

Farelerde Makrofajlar tükenmesi ve Sulandırma

Macrophages are critical players in the innate  immune response to infectious challenge or injury, initiating the innate immune  response and directing ...

Measuring Local Anaphylaxis in Mice

Farelerde Yerel Anafilaksi Ölçme

Allergic responses are the result of the activation of mast cells and basophils, and the subsequent release of vasoactive and proinflammatory mediators. ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Efektör CD4 Evlatlık transferi ile Kemirgen Bağırsak Enflamasyon indüksiyonu<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; Yüksek</sup&gt; Bağışık yetmezliği olan farelere içine T Hücreleri

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

Culture of Macrophage Colony-stimulating Factor Differentiated Human Monocyte-derived Macrophages

Makrofaj koloni stimüle edici faktör farklılaştırılmış insan monosit türevli makrofajlar Kültür

A protocol is presented for cell culture of macrophage colony-stimulating factor (M-CSF) differentiated human monocyte-derived macrophages. For initiation ...

Noninvasive Sampling of Mucosal Lining Fluid for the Quantification of In Vivo Upper Airway Immune-mediator Levels

Noninvasive Sampling of Mucosal Lining Fluid for the Quantification of In Vivo Upper Airway Immune-mediator Levels

Mukozal astar sıvı noninvaziv örnekleme için In Vivo üst solunum yolu bağışıklık arabulucu düzeyleri miktar

This protocol describes noninvasive sampling of undisturbed upper airway mucosal lining fluid. It also details the extraction procedure used prior to the ...

Characterization of Thymus-dependent and Thymus-independent Immunoglobulin Isotype Responses in Mice Using Enzyme-linked Immunosorbent Assay

Timus bağlı ve timus bağımsız immünglobulin izotip yanıt Immunosorbent Assay enzim bağlı kullanarak farelerde karakterizasyonu

Antibodies, also termed as immunoglobulins (Ig), secreted by differentiated B lymphocytes, plasmablasts/plasma cells, in humoral immunity provide a ...

Quantification of Antibody-dependent Enhancement of the Zika Virus in Primary Human Cells

Antikor-bağımlı donanýmýn birincil insan hücrelerinde Zika şunun miktar

The recent emergence of the flavivirus Zika and neurological complications, such as Guillain-Barr&#233; syndrome and microcephaly in infants, has brought ...

Isolation and Quantification of Zika Virus from Multiple Organs in a Mouse

Farede Birden Fazla Organdan Zika Virüsünün İzolasyon ve Nicelikselleştirilmesi

The methods being presented demonstrate laboratory procedures for the isolation of organs from Zika virus infected animals and the quantification of viral ...