Name: cultivation of the marine pelagic tunicate dolioletta gegenbauri (uljanin 1884) for experimental studies
Uploaded: 2019-08-09T14:30:00
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G.Aを含め、長年にわたりこのプロジェクトに蓄積された知識を提供してくださった多くの方々に感謝しています。もともとこれらのプロトコルを開発したパフェンホーファーとD.デイベル。M.ケスターとL.ランボリーはまた、これらの手順の開発に大きく貢献しています。 N.B.ロペス・フィゲロアとロドリゲス・サンティアゴは、表1に提供されるドリオリッドの豊富さの推定値を生成しました。この研究は、米国国立科学財団賞OCE 082599、MEFへの1031263、MEFとOCE 14595010の共同プロジェクト、およびMEFとDMGへの米国海洋大気庁賞NA16SEC4810007によって一部支持されました。私たちは、R/Vサバンナの勤勉で専門的な乗組員に感謝しています。リー・アン・デレオがフィギュアを用意し、チャールズ・Y・ロバートソンが原稿を校正し、ジェームズ(ジミー)ウィリアムズがプランクトンホイールを製作

1. D.ゲゲンバウリの養殖施設の整備
注:必要なすべての材料と機器は、材料の表に記載されています。
<ol><li>1M水酸化ナトリウム(NaOH)、0.06 Mペルマンガン酸カリウム(KMnO4)溶液を調出します。この溶液を調剤するには、NaOHの400gを10L脱イオン水に溶解する。NaOH溶液にKMnO4の100gを追加し、よく混ぜます。</li>
	<li>NaHSO3の100gを10L脱イ?...

<ol>
	<li>Banse, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zooplankton+&#8211;+Pivotal+role+in+the+control+of+ocean+production.">Zooplankton &#8211; Pivotal role in the control of ocean production.</a> Ices Journal of Marine Science. 52 (3-4), 265-277 (1995).</li><li>Wilson, S. E., Ruhl, H. A., Smith, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zooplankton+fecal+pellet+flux+in+the+abyssal+northeast+Pacific:+A+15+year+time-series+study.">Zooplankton fecal pellet flux in the abyssal northeast Pacific: A 15 year time-series study.</a> Limnology and Oceanography. 58 (3), 881-892 (2013).</li><li>Bode, A., &#193;lvarez-Ossorio, M. T., Miranda, A., Ruiz-Villarreal, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shifts+between+gelatinous+and+crustacean+plankton+in+a+coastal+upwelling+region.">Shifts between gelatinous and crustacean plankton in a coastal upwelling region.</a> Ices Journal of Marine Science. 70 (5), 934-942 (2013).</li><li>Kiorboe, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zooplankton+body+composition.">Zooplankton body composition.</a> Limnology and Oceanography. 58 (5), 1843-1850 (2013).</li><li>Holland, L. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tunicates.">Tunicates.</a> Current Biology. 26 (4), R146-R152 (2016).</li><li>Walters, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diet+and+trophic+interactions+of+a+circumglobally+significant+gelatinous+marine+zooplankter,+Dolioletta+gegenbauri+(Uljanin,+1884).">Diet and trophic interactions of a circumglobally significant gelatinous marine zooplankter, Dolioletta gegenbauri (Uljanin, 1884).</a> Molecular Ecology. , (2018).</li><li>Piette, J., Lemaire, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thaliaceans,+the+neglected+pelagic+relatives+of+ascidians:+a+developmental+and+evolutionay+enigma.">Thaliaceans, the neglected pelagic relatives of ascidians: a developmental and evolutionay enigma.</a> Quarterly Review of Biology. 90 (2), 117-145 (2015).</li><li>Acu&#241;a, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pelagic+tunicates:+Why+gelatinous?.">Pelagic tunicates: Why gelatinous?.</a> American Naturalist. 158 (1), 100-107 (2001).</li><li>Alldredge, A. L., Madin, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pelagic+tunicates+&#8211;+unique+herivores+in+the+marine+plankton.">Pelagic tunicates &#8211; unique herivores in the marine plankton.</a> Bioscience. 32 (8), 655-663 (1982).</li><li>Wada, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolutionary+history+of+free-swimming+and+sessile+lifestyles+in+urochordates+as+deduced+from+18S+rDNA+molecular+phylogeny.">Evolutionary history of free-swimming and sessile lifestyles in urochordates as deduced from 18S rDNA molecular phylogeny.</a> Molecular Biology and Evolution. 15 (9), 1189-1194 (1998).</li><li>Zeng, L. Y., Jacobs, M. W., Swalla, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coloniality+has+evolved+once+in+stolidobranch+ascidians.">Coloniality has evolved once in stolidobranch ascidians.</a> Integrative and Comparative Biology. 46 (3), 255-268 (2006).</li><li>Delsuc, F., Brinkmann, H., Chourrout, D., Philippe, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tunicates+and+not+cephalochordates+are+the+closest+living+relatives+of+vertebrates.">Tunicates and not cephalochordates are the closest living relatives of vertebrates.</a> Nature. 439 (7079), 965-968 (2006).</li><li>Garstang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+morphology+of+the+Tunicata,+and+its+bearing+on+the+phylogeny+of+the+chordata.">The morphology of the Tunicata, and its bearing on the phylogeny of the chordata.</a> Quarterly Journal of Microscopical Science. 72 (285), 51-187 (1929).</li><li>Govindarajan, A. F., Bucklin, A., Madin, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+molecular+phylogeny+of+the+Thaliacea.">A molecular phylogeny of the Thaliacea.</a> Journal of Plankton Research. 33 (6), 843-853 (2011).</li><li>Godeaux, D., Bone, Q., Braconnot, J. C., Bone, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Biology of Pelagic Tunicates. , 1-24 (1998).</li><li>Deibel, D., Lowen, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+the+life+cycles+and+life-history+adaptations+of+pelagic+tunicates+to+environmental+conditions).">A review of the life cycles and life-history adaptations of pelagic tunicates to environmental conditions).</a> Ices Journal of Marine Science. 69 (3), 358369 (2012).</li><li>Paffenh&#246;fer, G., K&#246;ster, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+one+to+many:+on+the+life+cycle+of+Dolioletta+gegenbauri+Uljanin+(Tunicata,+Thaliacea).">From one to many: on the life cycle of Dolioletta gegenbauri Uljanin (Tunicata, Thaliacea).</a> Journal of Plankton Research. 33 (7), 1139-1145 (2011).</li><li>Paffenh&#246;fer, G. A., Gibson, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+generation+time+and+asexual+fecundity+of+doliolids+(Tunicata,+Thaliacea).">Determination of generation time and asexual fecundity of doliolids (Tunicata, Thaliacea).</a> Journal of Plankton Research. 21 (6), 1183-1189 (1999).</li><li>Conley, K. R., Lombard, F., Sutherland, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mammoth+grazers+on+the+ocean's+minuteness:+a+review+of+selective+feeding+using+mucous+meshes.">Mammoth grazers on the ocean's minuteness: a review of selective feeding using mucous meshes.</a> Proceedings of the Royal Society B-Biological Sciences. 285 (1878), (2018).</li><li>Bouquet, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+optimization+for+the+emergent+zooplanktonic+model+organism+Oikopleura+dioica.">Culture optimization for the emergent zooplanktonic model organism Oikopleura dioica.</a> Journal of Plankton Research. 31 (4), 359370 (2009).</li><li>Denoeud, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasticity+of+Animal+Genome+Architecture+Unmasked+by+Rapid+Evolution+of+a+Pelagic+Tunicate.">Plasticity of Animal Genome Architecture Unmasked by Rapid Evolution of a Pelagic Tunicate.</a> Science. 330 (6009), 1381-1385 (2010).</li><li>Harrison, P. J., Waters, R. E., Taylor, F. J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+broad-spectrum+artificial+seawater+medium+for+coastal+and+open+ocean+phytoplankton.">A broad-spectrum artificial seawater medium for coastal and open ocean phytoplankton.</a> Journal of Phycology. 16 (1), 2835 (1980).</li><li>Ohman, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zooglider:+An+autonomous+vehicle+for+optical+and+acoustic+sensing+of+zooplankton.">Zooglider: An autonomous vehicle for optical and acoustic sensing of zooplankton.</a> Limnology and Oceanography-Methods. 17 (1), 69-86 (2019).</li><li>Takahashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+observations+of+a+doliolid+bloom+in+a+warm+water+filament+using+a+video+plankton+recorder:+Bloom+development,+fate,+and+effect+on+biogeochemical+cycles+and+planktonic+food+webs.">In situ observations of a doliolid bloom in a warm water filament using a video plankton recorder: Bloom development, fate, and effect on biogeochemical cycles and planktonic food webs.</a> Limnology and Oceanography. 60 (5), 1763-1780 (2015).</li><li>Deibel, D., Bone, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The biology of pelagic tunicates. , 171-186 (1998).</li><li>Gibson, D. M., Paffenh&#246;fer, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feeding+and+growth+rates+of+the+doliolid,+Dolioletta+gegenbauri+Uljanin+(Tunicata,+Thaliacea).">Feeding and growth rates of the doliolid, Dolioletta gegenbauri Uljanin (Tunicata, Thaliacea).</a> Journal of Plankton Research. 22 (8), 1485-1500 (2000).</li><li>Haskell, A., Hofmann, E., Paffenh&#246;fer, G., Verity, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+the+effects+of+doliolids+on+the+plankton+community+structure+of+the+southeastern+US+continental+shelf.">Modeling the effects of doliolids on the plankton community structure of the southeastern US continental shelf.</a> Journal of Plankton Research. 21 (9), 1725-1752 (1999).</li><li>Gibson, D. M., Paffenh&#246;ffer, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asexual+reproduction+of+the+doliolid,+Dolioletta+gegenbauri+Uljanin+(Tunicata,+Thaliacea).">Asexual reproduction of the doliolid, Dolioletta gegenbauri Uljanin (Tunicata, Thaliacea).</a> Journal of Plankton Research. 24 (7), 703-712 (2002).</li><li>Frischer, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reliability+of+qPCR+for+quantitative+gut+content+estimation+in+the+circumglobally+abundant+pelagic+tunicate+Dolioletta+gegenbauri+(Tunicata,+Thaliacea).">Reliability of qPCR for quantitative gut content estimation in the circumglobally abundant pelagic tunicate Dolioletta gegenbauri (Tunicata, Thaliacea).</a> Food Webs. 1, 7 (2014).</li><li>K&#246;ster, M., Paffenh&#246;fer, G., Baker, C., Williams, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxygen+consumption+of+doliolids+(Tunicata,+Thaliacea).">Oxygen consumption of doliolids (Tunicata, Thaliacea).</a> Journal of Plankton Research. 32 (2), 171-180 (2010).</li><li>Paffenh&#246;fer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+hypothesis+on+the+fate+of+blooms+of+doliolids+(Tunicata,+Thaliacea).">A hypothesis on the fate of blooms of doliolids (Tunicata, Thaliacea).</a> Journal of Plankton Research. 35 (4), 919-924 (2013).</li><li>Takahashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sapphirinid+copepods+as+predators+of+doliolids:+Their+role+in+doliolid+mortality+and+sinking+flux.">Sapphirinid copepods as predators of doliolids: Their role in doliolid mortality and sinking flux.</a> Limnology and Oceanography. 58 (6), 1972-1984 (2013).</li><li>Mart&#237;-Solans, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oikopleura+dioica+Culturing+Made+Easy:+A+Low-Cost+Facility+for+an+Emerging+Animal+Model+in+EvoDevo.">Oikopleura dioica Culturing Made Easy: A Low-Cost Facility for an Emerging Animal Model in EvoDevo.</a> Genesis. 53 (1), 183-193 (2015).</li><li>Nishida, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+appendicularian+Oikopleura+dioica:+Culture,+genome,+and+cell+lineages.">Development of the appendicularian Oikopleura dioica: Culture, genome, and cell lineages.</a> Development Growth &amp; Differentiation. 50, S239-S256 (2008).</li></ol>

ドリオリッドを培養する能力は、過去数十年にわたって確立され、いくつかの分野での研究を支援するために使用されています。私たちの研究室での実験的研究は、摂食と成長に焦点を当てた少なくとも15の科学的研究の出版をサポートしています18,26, 生殖18,28, 食事6, <sup class="...

海洋で最大の動物バイオマスを占める動物プランクトンは、海洋食物網の重要な構成要素であり、海洋生物地球化学サイクル1、2において重要な役割を果たしている。動物プランクトンは、生物の巨大な多様性で構成されているが、ゼラチン状と非ゼラチン性の2つのカテゴリーに大きく区別することができる:少数の中間タキサ3、4とゼラチン状。非ゼラチン性動物プランクトンと比較して、ゼラチン状の動物プランクトンは、その複雑な生命史5のために研究することは特に困難であり、その繊細な組織は捕獲および取り扱いの間に容易に損傷を受ける。ゼラチン性動物プランクトン種は、したがって、実験室で培養することが悪名高く、一般的に非ゼラチン種6と比較して研究が少ない。
ゼラチン状の動物プランクトン群の中で、世界の海洋における生態学的重要性の1つがタリア人である。サリアセアンは、サルピダ、ピロソミダ、およびドリオリダ7の命令を含むペラジックチュニケートのクラスです。ドリオリダは、総称してドリオリッドと呼ばれ、亜熱帯海洋の生産的な神経領域で高い豊富に達することができる小さなバレル状の自由水泳ペラジック生物です。ドリオリッドは、すべての動物プランクトングループの中で最も豊富なの一つである4、8.懸濁フィーダーとして、ドリオリッドは、フィルター電流を作成し、粘液ネット9上でそれらを捕捉することにより、水柱から食品粒子を収集します。分類的には、ドリオリッドは、フィルムウロホボルデータ10に分類される。タリアテスの祖先、および海洋ペラジック系の主要な構成要素としての生態学的意義に加えて、タリアセアンは植民地時代の生命史10、11および進化の起源を理解する上で重要である。コードの5,7,10,12,13,14.
ドリオリッドの人生の歴史は複雑であり、彼らのライフサイクルを通じてそれらを培養し、維持することの難しさに貢献しています。ドリウリッドのライフサイクルと解剖学のレビューは、Godeauxら15で見つけることができます.性的および無性の生命史段階の間の義務的な交互を伴うドリオリッドのライフサイクルは、図1に示される。卵子と精子は、ライフサイクルの唯一の孤独な段階であるヘルマフロジティック・ゴノズーイドによって産生される。Gonozooidsは水柱に精子を放出し、卵子は内部受精し、幼虫に成長するために放出される。幼虫の孵化と変態は、1〜2ミリメートルに達することができるウーズイドに変身し、環境条件と栄養を仮定すると、oozooidは20°Cで1〜2日以内に早期看護師となり、ライフサイクルの植民地段階を開始します。ウーズーイドは、腹部のストロンに芽を性的に産生する。これらの芽は、ストロンを残し、彼らは3つのペアの行に並んで後部カドフォアに移行します。中央の二重行はホロズーイドになり、外側の2つの二重列はトロフォズーイドになります。後者は、看護師とフォロズイド16、17の両方に食べ物を提供します。トロフォズーイドは、彼女がすべての内臓を失うように栄養を看護師に供給します。トロフォズイドの豊富さが増加するにつれて、看護師のサイズは実験室で15ミリメートルに達することができます。ハロズイドが成長するにつれて、彼らはますますプランクトンの獲物を摂取し、個人17として放出される前に約1.5ミリメートルの大きさに達する。単一の看護師は、その寿命18の間に>100のフォロズーイドを解放するかもしれません。ハロゾードがカドフォアから放出された後、彼らは成長し続け、ライフサイクルの第二の植民地段階です。彼らはサイズが〜5ミリメートルに達すると、各フォロズーイドは、彼らの腹部のペダンクル上のゴノズーイドのクラスターを開発します。これらのゴノズーイドは、長さが約1mmに達すると粒子を摂取することができます。gonozooidsが2〜3ミリメートルの大きさに達した後、彼らはフォロズイドから解放され、ライフサイクルの唯一の孤独な段階になります。彼らはサイズが〜6ミリメートルに達すると、gonozooidは性的に成熟した17になります。ゴノズーイドは9mm以上の長さに達することができます。ゴノズーイドは、ヘルマフロジティックであり、精子は卵子の受精が内部的に起こる間断続的に放出される16、17である。ゴノズーイドの大きさが≥6mmの場合、それは6個まで受精卵を放出する。培養を成功させるには、これらのユニークなライフヒストリーステージのそれぞれに固有のニーズをサポートする必要があります。
ドリオリッドを含むタリアセアンの生態学的、進化的意義により、この生物の固有の生物学、生理学、生態学、進化史の理解を進めるための栽培方法論が必要である19.ドリオリッドは、発生生物学および機能的ゲノミクスにおける実験モデル生物としてかなりの期待を持っている。しかし、信頼性の高い栽培方法の欠如は、実験室モデルとしての有用性を阻害する。少数の研究室が培養ドリオリッドに基づいて結果を発表しているが、我々の知識栽培アプローチと詳細なプロトコルは以前に発表されていない。長年の経験と試行錯誤の栽培の試みに基づいて、この研究の目的は、経験を見直し、ドリオリッドの収集と栽培のためのプロトコルを共有することであった, 特に種ドリオレッタゲゲンバウリ.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1860px;" width="1860">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:681px;">Algal culture tubes (55 mL sterile disposable glass culture tubes)</td>
			<td style="width:417px;">Any</td>
			<td style="width:167px;">NA</td>
			<td style="width:595px;">For algal cultures</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:681px;">Autoclave</td>
			<td style="width:417px;">Any</td>
			<td style="width:167px;">NA</td>
			<td>For sterilizing equipment and seawater for algal cultures</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:681px;">Beakers (2 L glass)</td>
			<td style="width:417px;">Any</td>
			<td style="width:167px;">NA</td>
			<td>For sorting diluted plankton net tow contents</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:681px;">Buckets (5 gallon, ~20L)</td>
			<td style="width:417px;">Any</td>
			<td style="width:167px;">NA</td>
			<td>For diluting contents of planton net tow - should be seawater conditioned before first use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:681px;">Carboys (20 L)&#160;</td>
			<td style="width:417px;">Any</td>
			<td style="width:167px;">NA</td>
			<td>For storing seawater</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Doliolid glass culturing jar (1.9 L narrow mouth glass jar with cap)</td>
			<td>Qorpak</td>
			<td>GLC-01882</td>
			<td>Container for culture</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Doliolid glass culturing jar (3.8 L narrow mouth glass jar with cap)</td>
			<td>Qorpak</td>
			<td>GLC-01858</td>
			<td>Container for culture</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:681px;">Environmental Chamber (Temperature controlled enviromental chamber)</td>
			<td style="width:417px;">Any</td>
			<td style="width:167px;">NA</td>
			<td>To accommodate plankton wheel and culture maintenance</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:681px;">Filtration apparatus for 47 mm filters</td>
			<td style="width:417px;">Any</td>
			<td style="width:167px;">NA</td>
			<td>For filtering seawater for cultures</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glass microfiber filters, 47 mm</td>
			<td>Whatman</td>
			<td>1825-047</td>
			<td>For filtering seawater for cultures</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glass pipette (borosillicate glass pipette (glass tubing), OD 10mm, ID 8 mm, wall thickness 1mm)</td>
			<td>Science Company</td>
			<td>NC-10894</td>
			<td>Custom cut and edges polished</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:681px;">Hose clamps, stainless steel, #104 (178 mm)</td>
			<td style="width:417px;">Any</td>
			<td style="width:167px;">NA</td>
			<td>For holding culturing jars to the plankton wheel</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isochrysis galbana strain CCMP1323</td>
			<td>National Center for Marine Algae and Microbiota (NCMA)</td>
			<td>strain CCMP1323</td>
			<td>For feeding doliolid cultures</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">L1 Media Kit, 50 L</td>
			<td>National Center for Marine Algae and Microbiota (NCMA)</td>
			<td>MKL150L</td>
			<td>For culturing algae</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:681px;">Lamp (Fluorescent table lamp with an adjustable arm)</td>
			<td style="width:417px;">Any</td>
			<td style="width:167px;">NA</td>
			<td>For illuminating doliolids in the jars and beakers</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:681px;">Lighted temperature controlled incubator</td>
			<td style="width:417px;">Any</td>
			<td style="width:167px;">NA</td>
			<td>For algal cultures</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:681px;">Micropipettes and sterile tips (0-20 &#181;l, 20-200 &#181;l, 200-1000&#160;&#181;l)</td>
			<td style="width:417px;">Any</td>
			<td style="width:167px;">NA</td>
			<td>For algal cultures</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Plankton Net (202 &#181;m 0.5 m, 5:1 length) with cod end ring and &#160;4 L aquarium cod-end</td>
			<td>Sea-Gear Corporation</td>
			<td>90-50x5-200-4A/BB</td>
			<td>For collecting living doliolids (see Figure 4)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:681px;">Plankton Wheel</td>
			<td style="width:417px;">NA</td>
			<td style="width:167px;">NA</td>
			<td>Custom built (see Figure 2)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Plastic wrap</td>
			<td>Any</td>
			<td>NA</td>
			<td>To cover inside of lid of doliolid culture jars</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Potassium Permanganate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>P279-500</td>
			<td>Reagent for cleaning jars and glassware</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rhodomonas&#160;sp. strain CCMP740</td>
			<td>National Center for Marine Algae and Microbiota (NCMA)</td>
			<td>strain CCMP740</td>
			<td>For feeding doliolid cultures</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:681px;">Rubber Tubing</td>
			<td style="width:417px;">NA</td>
			<td style="width:167px;">NA</td>
			<td>For holding culturing jars to the plankton wheel (can be made from tygon tubing)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Bisulfite</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S654-500</td>
			<td>Reagent for cleaning jars and glassware</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Hydroxide</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP359-212</td>
			<td>Reagent for cleaning jars and glassware</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:681px;">Sterile serological pipettes (1 mL, 5 mL, 10 mL, 25 mL)</td>
			<td style="width:417px;">Any</td>
			<td style="width:167px;">NA</td>
			<td>For algal cultures</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Thalassiosira weissflogii strain CCMP1051</td>
			<td>National Center for Marine Algae and Microbiota (NCMA)</td>
			<td>strain CCMP1051</td>
			<td>For feeding doliolid cultures</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:681px;">Tissue culture flasks (250 mL)</td>
			<td style="width:417px;">Any</td>
			<td style="width:167px;">NA</td>
			<td>For algal cultures</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

cultivation of the marine pelagic tunicate dolioletta gegenbauri (uljanin 1884) for experimental studies

ゼラチン状の動物プランクトンは、海洋生態系において重要な役割を果たしています。しかし、一般的に、生理学、成長、性感、栄養相互作用を調べることは、主に培養能力を含む方法論的な課題に起因する。これは特にドリオリッド、ドリオレッタゲゲンバウリに当てはまります。D. ゲゲンバウリは、一般的に世界中の生産的な亜熱帯大陸棚システムで発生し、多くの場合、毎日の一次生産の大部分を消費することができるブルーム濃度で発生します。本研究では、実験室ベースの研究を行う目的で、D.ゲゲンバウリを収集、飼育、維持するための栽培アプローチについて述べた。D.ゲゲンバウリおよび他のドリオリッド種は、漂流船から斜めに牽引された円錐形202μmメッシュプランクトンネットを使用して生きて捕獲することができる。水温が21°Cを下回り、未熟なゴノズーイド、成熟したハロゾイド、および大きな看護師から始まる培養物は、最も確実に確立されます。培養は、ゆっくりと回転するプランクトンホイール上の丸みを帯びた培養船で維持され、何世代にもわたって天然海水で培養藻類の食事に維持することができます。D.ゲゲンバウリの実験室培養を確立する能力に加えて、我々は、採取条件、藻類濃度、温度、および自然条件付き海水への暴露がすべて文化にとって重要であることを実証する。D.ゲゲンバウリの確立、成長、生存、および再生。

ドリオリッドを収集および培養するための記載された手順に従って、図3に概説されたD.ゲゲンバウリは、その複雑な生涯の歴史を通じてD.ゲゲンバウリの培養を維持することができる(図1)。何世代にもわたってそれを維持する。D.ゲゲンバウリの栽培はここで説明するが、これらの手順は、他のドリオリッド種の栽培にも関連す...

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Cultivation of the Marine Pelagic Tunicate Dolioletta gegenbauri Uljanin 1884 for Experimental Studies

実験研究のための海洋ペラジック・チュニケート・ドリオレッタ・ゲゲンバウリ(ウルジャニン1884)の栽培

ドリオレッタゲゲンバウリ種を含むドリオリッドは、世界中の生産的な亜大陸棚システムに見られる生態学的意義の小さなゼラチン状の海洋動物プランクトンです。これらの繊細な生物を培養することの難しさは、彼らの調査を制限します。本研究では、ドリオリッド・ドリオレッタ・ゲゲンバウリを収集、飼育、維持するための栽培アプローチについて述べた。

Gelatinous zooplanktons play a crucial role in ocean ecosystems. However, it is generally difficult to investigate their physiology, growth, fecundity, ...

可分化モデル生物の利用可能性は、多くの研究分野における進歩の基本となってきた。このプロトコルは、私たちの知る限り、ドリオリッドを培養するために利用可能な唯一のアプローチです。信頼できるドリオライドの文化技術は、海洋の最も生産的な地域のいくつかにとって重要であり、脊椎動物の最も初期の進化の祖先を表す生物を研究するためのユニークな実験モデルを提供します。この技術は、藻類の食品粒子と生物が自然界で経験する容器の壁に接触することなく、水柱に浮遊し続けるのでユニークです。この培養方法は、他の小さなゼラチン系および甲殻類またはプランクトン種の培養に適用することができる。Doliolidsは複雑なライフサイクルを持っているので、各ライフステージのニーズを理解し、認識することが重要です。ライフサイクルを学び、それらを認識して処理する方法を学ぶには、多くの練習が必要です。私たちの経験では、この培養技術を学ぶ唯一の方法は、それを見てそれを行うです。エリン・アルネソン、ニコラス・カスタリン、ナタリア・ロペス、ローレン・ランボイエ、ブリアナ・ピアース、アーヤ・ロドリゲス=サンティアゴ、テレル・スカボローを含む他のいくつかのプロジェクト参加者も、このビデオに短時間登場しました。実験室でドリオリッド培養を確立し、飼育する前に、1.9リットルおよび3.8リットルのガラス培養瓶を過マンガン酸ナトリウム溶液に浸して洗浄し、殺菌する。瓶を一晩浸します。その後、亜硫酸ナトリウム溶液に瓶を移します。瓶を一晩浸します。次に、脱イオン水で瓶を十分に洗い流します。瓶を乾かします。ストックカルチャを維持するには、厳格な無数の培養技術を使用します。2週間ごとに、古い老化培養の0.5ミリリットルを無菌55ミリリットルガラス培養チューブ中の新鮮な成長培地の25ミリリットルに移す。ドリオリッドに供給するための植物プランクトンの大量を調製するには、植物プランクトンの4ミリリットルを無分離株から200ミリリットルの成長培地を含む500ミリリットルのプラスチック組織培養フラスコに移し、1〜50希釈で接種する。1平方メートルあたり65〜85マイクロEinsteinのクールな白色光照明の下で12〜12時間の明暗サイクルで20°Cの環境インキュベーターまたはウォークイン環境室で培養します。培養フラスコを平らにして、照明を最大限に引き出します。毎日、穏やかに文化を渦巻く。海に向かおう。大陸棚にドリオリッドを配置するには、水温、塩分、クロロフィルA蛍光をプロファイリングすることによって、ドリオリッドの存在に資する水の状態を特定するための海洋機器CTDを展開します。専用プランクトンネットで探索的ネットトウを行うことで、水の状態を確認します。あるいは、ドリオリッドを検出するためにin situプロファイリングイメージングシステムを使用する。今度は、CTDを取得するためにウィンチを操作します。CTDロゼットに取り付けられたニスキンボトルは、ドリオリッドがある場所とクロロフィルの最も高い推定値を含む深さから海水を収集しました。海水で3つの22リットルのバケツをすすいで、海水で満タンに半分以上いっぱいにします。網タラの端を海水で完全に満たし、タラの端をネットに取り付けます。ネットを展開します。水柱を通してネットを下げて上げ、斜めの牽引角度を15〜25度、垂直展開と検索速度を1分あたり15メートル以下に保ちます。ネットがボード上に入ると、タラの端の内容物をサイトから収集した表面海水を含むプラスチック製のバケツにそっと移して分割します。広孔ガラスピペットを使用して、垂直および水平の動きを使用して、ビーカーの内容物とピペットを穏やかに混ぜます。人差し指を使用して、毛細管吸引を作成してドリオリッドを捕獲し、移送する。ビーカーの混合植物プランクトンからドリオリッドを捕獲する。ドリオリッドを添加した後、ロドドニアス培養液を瓶に加え、1ミリリットル当たり4番目の細胞に約10〜3番目から10の最終濃度に加える。ドリオリッドの消化管の色を確認してください。赤い色はドリオリッドが積極的に供給していることを決定します。ドリオリッドが空気と水の界面に閉じ込められるのを防ぐために、ヘッドスペースを避けるために、濾過されていない粒子が豊富な海水で瓶を完全に満たします。瓶の開口部にラップを置きます。動物にダメージを与える可能性のある気泡を作らないようにしてください。慎重に瓶にキャップをねじ込み、そっと瓶を反転して、泡が存在するかどうかを判断します。気泡が存在する場合は、それらを除去するために、より多くの海水を埋めます。瓶を充填した後、蓋で再シールし、瓶の外側から余分な水を拭きます。各瓶をプランクトンホイールに取り付け、ゴムチューブで覆われた垂直金属バーとステンレス製のホースクランプの間にジャーを置きます。瓶の裏がゴムチューブにクッションされていることを確認します。ねじを調整して、ホースクランプを締めます。瓶を0.3 rpmで回転させ、ドリオリッドをサスペンションに保ちます。実験室条件に3日間順応した後、瓶から100〜150ミリリットルの培養水をサンプル容器に移し、コールターカウンターを使用して藻類濃度を測定する。藻類濃度の推定に基づいて、培養瓶中の濃度を1リットル当たり40〜95マイクログラムにする十分な藻類を加える。ドリオリッドが餌を与えた後の藻類濃度を監視するために粒子カウンターを使用して、藻類が培養にどの程度の頻度で添加するかを決定します。1リットル当たり40~95マイクログラムの培養瓶中の植物プランクトン濃度を維持する。ドリオリッドを培養するには、複雑なライフサイクルを通じてそれらをサポートする必要があります。幼虫とウーズーイドと初期の看護師を開発する。看護師のカタプホルに少なくとも8人の栄養動物が見えたら、少なくとも4人の看護師を新しい培養瓶に移す。蓄音動物の大きさが3ミリメートルに達したら、瓶の中の動物の数を減らします。時に、ホスホウズイドが5ミリメートルより大きくなり、ゴノズーイドクラスターが開発された場合、4つの動物を除くすべてが除去されます。このプロトコルは、ドリオレッタ・ゲゲンバウリの収集と栽培アプローチの概要を提供します。藻類クリアランス率は、1リットル当たり炭素の20〜60マイクログラムの濃度で類似し、食品濃度が増加するにつれて減少した。クリアランス率は、D.gegenbauriの成長を支持する温度範囲に比例して増加した。温度と食料の利用可能性の関数として、1日あたり0.1〜0.7ミリメートルの成長率が観察された。ドリオリッドの栽培は、海洋条件を正常に複製し、複雑なライフサイクルを通じて動物のニーズに対応することに依存しています。その結果、捕獲、隔離、および畜産の間に動物の穏やかな取り扱いが必要である。食品濃度は頻繁に監視し、調整する必要があります。これは、発達中の幼虫およびウーズーイドの生命段階において特に当てはまる。この方法は、海洋食物網の基部にある小さな動物プランクトン種の飼育のために特別に設計されている。この方法は、例えば、気候変動に対する動物プランクトンの反応を調査する上で有用である。開発以来、この技術は、動物プランクトン生態学者がドリオリッドの実験室ベースの摂食、成長、および繁殖率を決定する道を開いた。さらに、この方法は、自然界のドリオリッド食の革命的な分子ベースの調査への道を開いた。ガラス洗浄プロトコルには呼吸刺激薬であり、換気の良い場所で使用する試薬が含まれることを思い出させてください。海上での作業も危険であるため、船の安全規則に従ってください。

Research

JoVE Journal

Environment

Cultivation of the Marine Pelagic Tunicate Dolioletta gegenbauri (Uljanin 1884) for Experimental Studies

A Noninvasive Method For In situ Determination of Mating Success in Female American Lobsters (Homarus americanus)

A Noninvasive Method For In situ Determination of Mating Success in Female American Lobsters Homarus americanus

非侵襲的方法<em&gt;その場で</em&gt;女性アメリカンロブスターにおける交配の成功（の決定<em&gt;ロブスターのamericanus</em&gt;）

Despite being one of the most productive fisheries in the Northwest Atlantic, much remains unknown about the natural reproductive dynamics of American ...

A Fish-feeding Laboratory Bioassay to Assess the Antipredatory Activity of Secondary Metabolites from the Tissues of Marine Organisms

海洋生物の組織からの二次代謝産物のAntipredatory活性を評価するために魚の供給研究所バイオアッセイ

Marine chemical ecology is a young discipline, having emerged from the collaboration of natural products chemists and marine ecologists in the 1980s with ...

Clean Sampling and Analysis of River and Estuarine Waters for Trace Metal Studies

きれいなサンプリングと微量金属の研究のために川や河口ウォーターズの分析

Most of the trace metal concentrations in ambient waters obtained a few decades ago have been considered unreliable owing to the lack of contamination ...

Experimental Protocol for Biodiesel Production with Isolation of Alkenones as Coproducts from Commercial Isochrysis Algal Biomass

Experimental Protocol for Biodiesel Production with Isolation of Alkenones as Coproducts from Commercial Isochrysis Algal Biomass

コマーシャルからの副産物としてアルケノンの単離とバイオディーゼル生産のための実験プロトコール<em&gt;イソクリシス</em&gt;藻類バイオマス

The need to replace petroleum fuels with alternatives from renewable and more environmentally sustainable sources is of growing importance. ...

VacuSIP, an Improved InEx Method for In Situ Measurement of Particulate and Dissolved Compounds Processed by Active Suspension Feeders

VacuSIP, an Improved InEx Method for In Situ Measurement of Particulate and Dissolved Compounds Processed by Active Suspension Feeders

VacuSIP、のための改良INEX方法<em&gt;その場で</em&gt;微粒子と溶解した化合物の測定は、アクティブサスペンションフィーダによって処理します

Benthic suspension feeders play essential roles in the functioning of marine ecosystems. By filtering large volumes of water, removing plankton and ...

Ecotoxicological Method with Marine Bacteria Vibrio anguillarum to Evaluate the Acute Toxicity of Environmental Contaminants

Ecotoxicological Method with Marine Bacteria Vibrio anguillarum to Evaluate the Acute Toxicity of Environmental Contaminants

海洋細菌の生態毒性学的方法<em&gt; Vibrio anguillarum</em&gt;環境汚染物質の急性毒性を評価する

Bacteria are an important component of the ecosystem, and microbial community alterations can have a significant effect on biogeochemical cycling and food ...

Vegetated Treatment Systems for Removing Contaminants Associated with Surface Water Toxicity in Agriculture and Urban Runoff

農業および都市流出における地表水毒性に伴う汚染物質除去のための植物処理システム

Urban stormwater and agriculture irrigation runoff contain a complex mixture of contaminants that are often toxic to adjacent receiving waters. Runoff may ...

Extraction of Organochlorine Pesticides from Plastic Pellets and Plastic Type Analysis

プラスチックペレットからの有機塩素系農薬の抽出と塑性解析

Plastic resin pellets, categorized as microplastics (&#8804;5 mm in diameter), are small granules that can be unintentionally released to the environment ...

Development of New Methods for Quantifying Fish Density Using Underwater Stereo-video Tools

水中ステレオ ビデオのツールを使用して魚の密度を定量化する新方式の開発

The use of video camera systems in ecological studies of fish continues to gain traction as a viable, non-extractive method of measuring fish lengths and ...

Methods for Image-based Surveys of Benthic Macroinvertebrates and Their Habitat Exemplified by the Drop Camera Survey for the Atlantic Sea Scallop

底生動物とその生息地大西洋帆立て貝のドロップ カメラ調査による例示のイメージ調査法

Underwater imaging has long been used in the field of marine ecology but decreasing costs of high-resolution cameras and data storage have made the ...