Name: cultivation of the marine pelagic tunicate dolioletta gegenbauri (uljanin 1884) for experimental studies
Uploaded: 2019-08-09T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Cultivation of the Marine Pelagic Tunicate Dolioletta gegenbauri Uljanin 1884 for Experimental Studies at JoVE.com

G.A를 포함하여 수년에 걸쳐 이 프로젝트에 축적된 지식을 기부해 주신 많은 분들에게 감사드립니다. 파펜회퍼와 D. 데이벨은 원래 이러한 프로토콜을 개발했다. M. Köster, 그리고 L. Lamboley는 또한 이 절차의 발달에 크게 기여했습니다.  N.B. 로페즈-피게로아와 아에 로드리게스-산티아고는 표 1에 제공된 돌리올리드 풍부도의 추정치를 생성했다. 이 연구는 MEF에 OCE 082599, 1031263, 공동 프로젝트 OCE 1459293 및 OCE 14595010 MEF와 DMG에, 국립 해양 및 대기 관리 상 NA16SEC4810007에 의해 부분적으로 지원되었다. 우리는 R / V 사바나의 근면하고 전문적인 승무원에게 감사드립니다. 리 앤 델레오(Lee Ann DeLeo)가 피규어를 준비했고, 찰스 Y. 로버트슨이 원고를 교정했고, 제임스(지미) 윌리엄스가 플랑크톤 휠을 제작했습니다.

1. 디게겐바우리 사육을 위한 배양시설 준비
참고: 필요한 모든 재료와 장비는 재료표에 나열되어 있습니다.
<ol><li>1 M 수산화 나트륨 (NaOH), 0.06 M 과망간산산 칼륨(KMnO 4) 용액을 준비하십시오. 이 용액을 준비하려면 NaOH 400g을 10 L 탈이온수에 녹입니다. NaOH 용액에 KMnO4 100 g을 넣고 잘 섞습니다.</li>
	<li>NaHSO3의 100 g을 10L 탈이온수로 용...

<ol>
	<li>Banse, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zooplankton+&#8211;+Pivotal+role+in+the+control+of+ocean+production.">Zooplankton &#8211; Pivotal role in the control of ocean production.</a> Ices Journal of Marine Science. 52 (3-4), 265-277 (1995).</li><li>Wilson, S. E., Ruhl, H. A., Smith, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zooplankton+fecal+pellet+flux+in+the+abyssal+northeast+Pacific:+A+15+year+time-series+study.">Zooplankton fecal pellet flux in the abyssal northeast Pacific: A 15 year time-series study.</a> Limnology and Oceanography. 58 (3), 881-892 (2013).</li><li>Bode, A., &#193;lvarez-Ossorio, M. T., Miranda, A., Ruiz-Villarreal, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shifts+between+gelatinous+and+crustacean+plankton+in+a+coastal+upwelling+region.">Shifts between gelatinous and crustacean plankton in a coastal upwelling region.</a> Ices Journal of Marine Science. 70 (5), 934-942 (2013).</li><li>Kiorboe, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zooplankton+body+composition.">Zooplankton body composition.</a> Limnology and Oceanography. 58 (5), 1843-1850 (2013).</li><li>Holland, L. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tunicates.">Tunicates.</a> Current Biology. 26 (4), R146-R152 (2016).</li><li>Walters, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diet+and+trophic+interactions+of+a+circumglobally+significant+gelatinous+marine+zooplankter,+Dolioletta+gegenbauri+(Uljanin,+1884).">Diet and trophic interactions of a circumglobally significant gelatinous marine zooplankter, Dolioletta gegenbauri (Uljanin, 1884).</a> Molecular Ecology. , (2018).</li><li>Piette, J., Lemaire, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thaliaceans,+the+neglected+pelagic+relatives+of+ascidians:+a+developmental+and+evolutionay+enigma.">Thaliaceans, the neglected pelagic relatives of ascidians: a developmental and evolutionay enigma.</a> Quarterly Review of Biology. 90 (2), 117-145 (2015).</li><li>Acu&#241;a, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pelagic+tunicates:+Why+gelatinous?.">Pelagic tunicates: Why gelatinous?.</a> American Naturalist. 158 (1), 100-107 (2001).</li><li>Alldredge, A. L., Madin, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pelagic+tunicates+&#8211;+unique+herivores+in+the+marine+plankton.">Pelagic tunicates &#8211; unique herivores in the marine plankton.</a> Bioscience. 32 (8), 655-663 (1982).</li><li>Wada, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolutionary+history+of+free-swimming+and+sessile+lifestyles+in+urochordates+as+deduced+from+18S+rDNA+molecular+phylogeny.">Evolutionary history of free-swimming and sessile lifestyles in urochordates as deduced from 18S rDNA molecular phylogeny.</a> Molecular Biology and Evolution. 15 (9), 1189-1194 (1998).</li><li>Zeng, L. Y., Jacobs, M. W., Swalla, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coloniality+has+evolved+once+in+stolidobranch+ascidians.">Coloniality has evolved once in stolidobranch ascidians.</a> Integrative and Comparative Biology. 46 (3), 255-268 (2006).</li><li>Delsuc, F., Brinkmann, H., Chourrout, D., Philippe, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tunicates+and+not+cephalochordates+are+the+closest+living+relatives+of+vertebrates.">Tunicates and not cephalochordates are the closest living relatives of vertebrates.</a> Nature. 439 (7079), 965-968 (2006).</li><li>Garstang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+morphology+of+the+Tunicata,+and+its+bearing+on+the+phylogeny+of+the+chordata.">The morphology of the Tunicata, and its bearing on the phylogeny of the chordata.</a> Quarterly Journal of Microscopical Science. 72 (285), 51-187 (1929).</li><li>Govindarajan, A. F., Bucklin, A., Madin, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+molecular+phylogeny+of+the+Thaliacea.">A molecular phylogeny of the Thaliacea.</a> Journal of Plankton Research. 33 (6), 843-853 (2011).</li><li>Godeaux, D., Bone, Q., Braconnot, J. C., Bone, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Biology of Pelagic Tunicates. , 1-24 (1998).</li><li>Deibel, D., Lowen, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+the+life+cycles+and+life-history+adaptations+of+pelagic+tunicates+to+environmental+conditions).">A review of the life cycles and life-history adaptations of pelagic tunicates to environmental conditions).</a> Ices Journal of Marine Science. 69 (3), 358369 (2012).</li><li>Paffenh&#246;fer, G., K&#246;ster, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+one+to+many:+on+the+life+cycle+of+Dolioletta+gegenbauri+Uljanin+(Tunicata,+Thaliacea).">From one to many: on the life cycle of Dolioletta gegenbauri Uljanin (Tunicata, Thaliacea).</a> Journal of Plankton Research. 33 (7), 1139-1145 (2011).</li><li>Paffenh&#246;fer, G. A., Gibson, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+generation+time+and+asexual+fecundity+of+doliolids+(Tunicata,+Thaliacea).">Determination of generation time and asexual fecundity of doliolids (Tunicata, Thaliacea).</a> Journal of Plankton Research. 21 (6), 1183-1189 (1999).</li><li>Conley, K. R., Lombard, F., Sutherland, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mammoth+grazers+on+the+ocean's+minuteness:+a+review+of+selective+feeding+using+mucous+meshes.">Mammoth grazers on the ocean's minuteness: a review of selective feeding using mucous meshes.</a> Proceedings of the Royal Society B-Biological Sciences. 285 (1878), (2018).</li><li>Bouquet, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+optimization+for+the+emergent+zooplanktonic+model+organism+Oikopleura+dioica.">Culture optimization for the emergent zooplanktonic model organism Oikopleura dioica.</a> Journal of Plankton Research. 31 (4), 359370 (2009).</li><li>Denoeud, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasticity+of+Animal+Genome+Architecture+Unmasked+by+Rapid+Evolution+of+a+Pelagic+Tunicate.">Plasticity of Animal Genome Architecture Unmasked by Rapid Evolution of a Pelagic Tunicate.</a> Science. 330 (6009), 1381-1385 (2010).</li><li>Harrison, P. J., Waters, R. E., Taylor, F. J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+broad-spectrum+artificial+seawater+medium+for+coastal+and+open+ocean+phytoplankton.">A broad-spectrum artificial seawater medium for coastal and open ocean phytoplankton.</a> Journal of Phycology. 16 (1), 2835 (1980).</li><li>Ohman, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zooglider:+An+autonomous+vehicle+for+optical+and+acoustic+sensing+of+zooplankton.">Zooglider: An autonomous vehicle for optical and acoustic sensing of zooplankton.</a> Limnology and Oceanography-Methods. 17 (1), 69-86 (2019).</li><li>Takahashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+observations+of+a+doliolid+bloom+in+a+warm+water+filament+using+a+video+plankton+recorder:+Bloom+development,+fate,+and+effect+on+biogeochemical+cycles+and+planktonic+food+webs.">In situ observations of a doliolid bloom in a warm water filament using a video plankton recorder: Bloom development, fate, and effect on biogeochemical cycles and planktonic food webs.</a> Limnology and Oceanography. 60 (5), 1763-1780 (2015).</li><li>Deibel, D., Bone, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The biology of pelagic tunicates. , 171-186 (1998).</li><li>Gibson, D. M., Paffenh&#246;fer, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feeding+and+growth+rates+of+the+doliolid,+Dolioletta+gegenbauri+Uljanin+(Tunicata,+Thaliacea).">Feeding and growth rates of the doliolid, Dolioletta gegenbauri Uljanin (Tunicata, Thaliacea).</a> Journal of Plankton Research. 22 (8), 1485-1500 (2000).</li><li>Haskell, A., Hofmann, E., Paffenh&#246;fer, G., Verity, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+the+effects+of+doliolids+on+the+plankton+community+structure+of+the+southeastern+US+continental+shelf.">Modeling the effects of doliolids on the plankton community structure of the southeastern US continental shelf.</a> Journal of Plankton Research. 21 (9), 1725-1752 (1999).</li><li>Gibson, D. M., Paffenh&#246;ffer, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asexual+reproduction+of+the+doliolid,+Dolioletta+gegenbauri+Uljanin+(Tunicata,+Thaliacea).">Asexual reproduction of the doliolid, Dolioletta gegenbauri Uljanin (Tunicata, Thaliacea).</a> Journal of Plankton Research. 24 (7), 703-712 (2002).</li><li>Frischer, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reliability+of+qPCR+for+quantitative+gut+content+estimation+in+the+circumglobally+abundant+pelagic+tunicate+Dolioletta+gegenbauri+(Tunicata,+Thaliacea).">Reliability of qPCR for quantitative gut content estimation in the circumglobally abundant pelagic tunicate Dolioletta gegenbauri (Tunicata, Thaliacea).</a> Food Webs. 1, 7 (2014).</li><li>K&#246;ster, M., Paffenh&#246;fer, G., Baker, C., Williams, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxygen+consumption+of+doliolids+(Tunicata,+Thaliacea).">Oxygen consumption of doliolids (Tunicata, Thaliacea).</a> Journal of Plankton Research. 32 (2), 171-180 (2010).</li><li>Paffenh&#246;fer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+hypothesis+on+the+fate+of+blooms+of+doliolids+(Tunicata,+Thaliacea).">A hypothesis on the fate of blooms of doliolids (Tunicata, Thaliacea).</a> Journal of Plankton Research. 35 (4), 919-924 (2013).</li><li>Takahashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sapphirinid+copepods+as+predators+of+doliolids:+Their+role+in+doliolid+mortality+and+sinking+flux.">Sapphirinid copepods as predators of doliolids: Their role in doliolid mortality and sinking flux.</a> Limnology and Oceanography. 58 (6), 1972-1984 (2013).</li><li>Mart&#237;-Solans, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oikopleura+dioica+Culturing+Made+Easy:+A+Low-Cost+Facility+for+an+Emerging+Animal+Model+in+EvoDevo.">Oikopleura dioica Culturing Made Easy: A Low-Cost Facility for an Emerging Animal Model in EvoDevo.</a> Genesis. 53 (1), 183-193 (2015).</li><li>Nishida, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+appendicularian+Oikopleura+dioica:+Culture,+genome,+and+cell+lineages.">Development of the appendicularian Oikopleura dioica: Culture, genome, and cell lineages.</a> Development Growth &amp; Differentiation. 50, S239-S256 (2008).</li></ol>

문화 doliolids 수용량은 지난 수십 년 동안 설립되었으며 여러 분야에서 연구를 지원하는 데 사용되었습니다. 우리의 실험실에서 실험 연구는 먹이 와 성장에 초점을 맞춘 적어도 15 과학 연구의 출판을 지원 했다18,26,재생18,28,다이어트6, 29,생리학30,</su...

동물플랑크톤은 바다에서 가장 큰 동물 바이오매스를 차지하고 있으며, 해양 식품 거미줄의 핵심 구성요소이며 해양 생물지구화학 주기 1,2에서중요한 역할을 한다. 동물플랑크톤은 생물체의 거대한 다양성으로 구성되어 있지만, 두 가지 범주로 크게 구별 될 수있다 :몇 중간 택시 3,4와젤라틴과 비 젤라틴 . 젤라틴 동물플랑크톤이 아닌 동물성 동물플랑크톤에 비해, 젤라틴 동물플랑크톤은 복잡한 삶의역사5 때문에 공부하기가 특히 어렵고, 포획 및 취급 중에 섬세한 조직이 쉽게 손상됩니다. 젤라틴 동물플랑크톤 종은, 따라서, 실험실에서 배양하기가 어렵고 일반적으로 비젤라틴종6에 비해 덜 연구된다.
젤라틴 동물플랑크톤 그룹 중 에는 전 세계 바다에서 풍부하고 생태학적으로 중요한 것이 탈리아세안(Thaliaceans)입니다. 탈리아세산은 살피다, 피로소미다, 돌리오리다 7의 주문을 포함하는 원골 잡화의한 등급이다. 돌리올리다(Doliolida)는 아열대 바다의 생산적인 네릭 지역에서 높은 풍부에 도달할 수 있는 작은 배럴 모양의 자유 수영 펠라그 생물입니다. 돌리올리드는 모든 동물플랑크톤 그룹4,8중 가장 풍부하다. 서스펜션 피더로서, doliolids는 필터 전류를 생성하고 점액 그물9에캡처하여 물 기둥에서 음식 입자를 수집합니다. 분류학적으로, 돌리올리드는 phylum Urochordata10에서분류된다. 조상은 코르다테에 대한 조상이며, 해양 펠라그 시스템의 핵심 구성 요소로서의 생태학적 중요성외에도, 탈리아세산은 식민지 생명의 역사10,11 및 진화의 기원을 이해하는 데 중요합니다. 5,7,10,12,13,14.
doliolids의 생활 역사는 복잡 하 고 그들의 수명 주기를 통해 그들을 배양 하 고 유지에 어려움에 기여. 돌리오리드 수명 주기와 해부학에 대한 리뷰는 Godeaux 외15에서찾을 수 있습니다. 성및 무성생애주기간의 의무적인 교대를 수반하는 돌리올리드 수명주기는 그림1에 제시되어 있다. 계란과 정자는 생애 주기의 유일한 고독한 단계인 헤르마로디틱 고노주이드에 의해 생성됩니다. Gonozooids는 물 기둥에 정액을 풀어 놓이고 계란은 내부적으로 기름지게 하고 애벌레로 발전하기 위하여 풀어 놓입니다. 유충 해치와 1-2 mm에 도달 할 수있는 oozooids로 변신. 도움이 환경 조건과 영양을 가정, oozooids는 20 °C에서 1-2 일 이내에 초기 간호사가되고 수명 주기의 식민지 단계를 시작합니다. Oozooids 무성 그들의 복부 stolon에 싹을 생산. 이 싹은 stolon을 떠나 그들이 세 개의 쌍을 이루는 행에 줄 등도 카도포어로 마이그레이션합니다. 중앙 이중 행은 공포증이 되고 바깥쪽 두 개의 이중 행은 트로포주이드가 됩니다. 후자는 간호사와 포로주시드 모두에게 음식을 제공합니다16,17. 트로포주이드는 간호사에게 모든 내부 장기를 잃으면서 영양을 공급합니다. trophozooids의 풍부가 증가함에 따라, 간호사의 크기는 실험실에서 15mm에 도달 할 수 있습니다. 포로주이드가 자라면서, 그들은 점점 플랑크토닉 먹이를 섭취하고 개인17로출시되기 전에 ~ 1.5 mm 크기에 도달한다. 한 명의 간호사가 수명18동안 > 100 개의 포지주이드를 방출 할 수 있습니다. 공포증이 카도포어에서 풀어 놓인 후에, 그(것)들은 성장을 계속하고 생활 주기의 두 번째 식민지 단계입니다. 일단 그들이 ~ 5mm 크기에 도달하면, 각 포주이드는 복부 페던클에 고노 주이드의 클러스터를 개발합니다. 이 고지체는 길이가 ~1mm에 도달하면 입자를 섭취 할 수 있습니다. gonozooids가 크기에 ~ 2 ~ 3mm에 도달 한 후 그들은 광주체이드에서 방출되고 수명 주기의 유일한 독방 단계가됩니다. 일단 그들이 도달하면 ~ 6mm 크기로, 고노 주이드는 성적으로 성숙17이된다 . 고노주이드는 길이가 9mm 이상에 달할 수 있습니다. 고노주이드는 헤르마로디틱이며, 정자는 간헐적으로 방출되고, 난자의 수정은 내부적으로16,17에서발생한다. 가노주이드의 크기가 ≥ 6 mm일 때, 최대 6개의 수정란을 방출합니다. 성공적인 배양은 이러한 독특한 삶의 역사 단계각각의 특정 한 요구를 지원해야 합니다.
돌리올리드를 포함한 탈리아세산의 생태학적, 진화적 중요성으로 인해, 이 유기체의 독특한 생물학, 생리학, 생태학 및 진화역사의 이해를 증진시키기 위한 재배 방법론이 필요하다19 . Doliolids는 발달 생물학 및 기능성 유전체학에 있는 실험적인 모형 유기체로 상당한 약속이 있기 때문에 투명하고 가능성이 유전체20,21. 그러나 신뢰할 수있는 재배 방법의 부족은 실험실 모델로의 유용성을 방해합니다. 소수의 실험실이 배양 된 돌리오 리드를 기반으로 결과를 발표했지만, 우리의 지식 재배 접근 법 및 자세한 프로토콜은 이전에 출판되지 않았습니다. 다년간의 경험과 시행착오 배양 시도를 바탕으로, 이 연구의 목적은 경험을 검토하고 돌리올라이드, 특히 돌리오레타 게겐바우리종의 수집 및 재배를 위한 프로토콜을 공유하는 것이었다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1860px;" width="1860">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:681px;">Algal culture tubes (55 mL sterile disposable glass culture tubes)</td>
			<td style="width:417px;">Any</td>
			<td style="width:167px;">NA</td>
			<td style="width:595px;">For algal cultures</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:681px;">Autoclave</td>
			<td style="width:417px;">Any</td>
			<td style="width:167px;">NA</td>
			<td>For sterilizing equipment and seawater for algal cultures</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:681px;">Beakers (2 L glass)</td>
			<td style="width:417px;">Any</td>
			<td style="width:167px;">NA</td>
			<td>For sorting diluted plankton net tow contents</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:681px;">Buckets (5 gallon, ~20L)</td>
			<td style="width:417px;">Any</td>
			<td style="width:167px;">NA</td>
			<td>For diluting contents of planton net tow - should be seawater conditioned before first use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:681px;">Carboys (20 L)&#160;</td>
			<td style="width:417px;">Any</td>
			<td style="width:167px;">NA</td>
			<td>For storing seawater</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Doliolid glass culturing jar (1.9 L narrow mouth glass jar with cap)</td>
			<td>Qorpak</td>
			<td>GLC-01882</td>
			<td>Container for culture</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Doliolid glass culturing jar (3.8 L narrow mouth glass jar with cap)</td>
			<td>Qorpak</td>
			<td>GLC-01858</td>
			<td>Container for culture</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:681px;">Environmental Chamber (Temperature controlled enviromental chamber)</td>
			<td style="width:417px;">Any</td>
			<td style="width:167px;">NA</td>
			<td>To accommodate plankton wheel and culture maintenance</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:681px;">Filtration apparatus for 47 mm filters</td>
			<td style="width:417px;">Any</td>
			<td style="width:167px;">NA</td>
			<td>For filtering seawater for cultures</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glass microfiber filters, 47 mm</td>
			<td>Whatman</td>
			<td>1825-047</td>
			<td>For filtering seawater for cultures</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glass pipette (borosillicate glass pipette (glass tubing), OD 10mm, ID 8 mm, wall thickness 1mm)</td>
			<td>Science Company</td>
			<td>NC-10894</td>
			<td>Custom cut and edges polished</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:681px;">Hose clamps, stainless steel, #104 (178 mm)</td>
			<td style="width:417px;">Any</td>
			<td style="width:167px;">NA</td>
			<td>For holding culturing jars to the plankton wheel</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isochrysis galbana strain CCMP1323</td>
			<td>National Center for Marine Algae and Microbiota (NCMA)</td>
			<td>strain CCMP1323</td>
			<td>For feeding doliolid cultures</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">L1 Media Kit, 50 L</td>
			<td>National Center for Marine Algae and Microbiota (NCMA)</td>
			<td>MKL150L</td>
			<td>For culturing algae</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:681px;">Lamp (Fluorescent table lamp with an adjustable arm)</td>
			<td style="width:417px;">Any</td>
			<td style="width:167px;">NA</td>
			<td>For illuminating doliolids in the jars and beakers</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:681px;">Lighted temperature controlled incubator</td>
			<td style="width:417px;">Any</td>
			<td style="width:167px;">NA</td>
			<td>For algal cultures</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:681px;">Micropipettes and sterile tips (0-20 &#181;l, 20-200 &#181;l, 200-1000&#160;&#181;l)</td>
			<td style="width:417px;">Any</td>
			<td style="width:167px;">NA</td>
			<td>For algal cultures</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Plankton Net (202 &#181;m 0.5 m, 5:1 length) with cod end ring and &#160;4 L aquarium cod-end</td>
			<td>Sea-Gear Corporation</td>
			<td>90-50x5-200-4A/BB</td>
			<td>For collecting living doliolids (see Figure 4)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:681px;">Plankton Wheel</td>
			<td style="width:417px;">NA</td>
			<td style="width:167px;">NA</td>
			<td>Custom built (see Figure 2)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Plastic wrap</td>
			<td>Any</td>
			<td>NA</td>
			<td>To cover inside of lid of doliolid culture jars</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Potassium Permanganate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>P279-500</td>
			<td>Reagent for cleaning jars and glassware</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rhodomonas&#160;sp. strain CCMP740</td>
			<td>National Center for Marine Algae and Microbiota (NCMA)</td>
			<td>strain CCMP740</td>
			<td>For feeding doliolid cultures</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:681px;">Rubber Tubing</td>
			<td style="width:417px;">NA</td>
			<td style="width:167px;">NA</td>
			<td>For holding culturing jars to the plankton wheel (can be made from tygon tubing)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Bisulfite</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S654-500</td>
			<td>Reagent for cleaning jars and glassware</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Hydroxide</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP359-212</td>
			<td>Reagent for cleaning jars and glassware</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:681px;">Sterile serological pipettes (1 mL, 5 mL, 10 mL, 25 mL)</td>
			<td style="width:417px;">Any</td>
			<td style="width:167px;">NA</td>
			<td>For algal cultures</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Thalassiosira weissflogii strain CCMP1051</td>
			<td>National Center for Marine Algae and Microbiota (NCMA)</td>
			<td>strain CCMP1051</td>
			<td>For feeding doliolid cultures</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:681px;">Tissue culture flasks (250 mL)</td>
			<td style="width:417px;">Any</td>
			<td style="width:167px;">NA</td>
			<td>For algal cultures</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

cultivation of the marine pelagic tunicate dolioletta gegenbauri (uljanin 1884) for experimental studies

젤라틴 동물원 플랑크는 해양 생태계에서 중요한 역할을합니다. 그러나, 그들의 생리학을 조사 하는 것이 일반적으로 어렵다, 성장, fecundity, 그리고 영양 상호 작용 주로 방법론 적 도전으로 인해, 그들을 배양 하는 능력을 포함 하 여. 이것은 돌리올리드, 돌리올레타 게겐바우리에 특히 사실이다. D. gegenbauri 일반적으로 생산적인 아열대 대륙 선반 시스템에서 발생, 종종 매일 기본 생산의 큰 부분을 소비 할 수있는 꽃 농도에서. 이 연구에서는 실험실 기반 연구를 수행하기 위한 목적으로 D. 게겐바우리(Gegenbauri)를 수집, 사육 및 유지 관리하는 재배 방법을 설명합니다. D. 게겐바우리 및 기타 돌리올리드 종은 표류하는 선박으로부터 202 μm 메쉬 플랑크톤 그물을 비스듬히 견인하여 살아서 포획할 수 있다. 배양은 수온이 21 °C 이하이고 미성숙한 여조, 숙성 포로주이드 및 대형 간호사로부터 시작될 때 가장 안정적으로 확립됩니다. 배양은 천천히 회전하는 플랑크톤 휠에 둥근 배양 용기에서 유지될 수 있으며 여러 세대에 걸쳐 천연 해수에서 배양된 조류의 식단을 유지할 수 있습니다. D. 게겐바우리(D. gegenbauri)의실험실 배양을 확립하는 능력 외에도, 우리는 자연적으로 조절된 바닷물에 대한 수집 상태, 조류 농도, 온도 및 노출이 모두 문화에 중요하다는 것을 입증합니다. D. 게겐바우리의 설립, 성장, 생존 및 번식.

도3에 기재된 돌리올리드를 수집하고 배양하기 위한 기술된 절차에 따라, D. 게겐바우리의 복잡한 수명 역사를 통틀어 D. 게겐바우리의 배양을 유지할 수 있다(도1)및 여러 세대에 걸쳐 그것을 지탱해 주시고 있습니다. D. 게겐바우리 재배는 여기에 설명되어 있지만, 이러한 절차는 다른 돌리올라이드 종의 재배와도 관련이 있어야합?...

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Cultivation of the Marine Pelagic Tunicate Dolioletta gegenbauri Uljanin 1884 for Experimental Studies

실험 연구를 위한 해양 펠라기 투니케이트 돌리오레타 게겐바우리 재배 (울자닌 1884)

돌리올리다 게겐바우리종을 포함한 돌리올리드는 전 세계적으로 생산적인 아대륙 선반 시스템에서 발견되는 생태학적 중요성의 작은 젤라틴 해양 동물플랑크톤이다. 이 섬세한 유기체를 배양하는 어려움은 그들의 조사를 제한합니다. 본 연구에서는 돌리올리야게겐바우리(doliolid Dolioletta gegenbauri)를수집, 사육 및 유지하기 위한 재배 접근법을 설명합니다.

Gelatinous zooplanktons play a crucial role in ocean ecosystems. However, it is generally difficult to investigate their physiology, growth, fecundity, ...

컬터 가능한 모델 유기체의 가용성은 많은 연구 분야의 발전에 근본적이었습니다. 이 프로토콜은 우리의 지식에, Doliolids를 배양할 수 있는 유일한 접근 방식입니다. 신뢰할 수 있는 Doliolid 배양 기술은 바다의 가장 생산적인 지역 중 일부에 중요하고 척추 동물의 초기 진화 조상을 나타내는 유기체를 연구하는 독특한 실험 모델을 제공합니다.이 기술은 조류 식품 입자와 유기체가 자연에서 경험하는 컨테이너의 벽과 접촉하지 않고 물 기둥에 매달려 있기 때문에 독특합니다. 이 배양 방법은 다른 작은 젤라틴 및 갑각류 또는 플랑크톤 종의 배양에 적용 될 수있다. Doliolids는 복잡한 수명 주기를 가지고 있기 때문에 각 수명 단계의 요구를 이해하고 인식하는 것이 중요합니다.라이프 사이클과 이를 인식하고 처리하는 방법을 배우는 것은 많은 연습을 합니다. 우리의 경험에서,이 배양 기술을 배울 수있는 유일한 방법은 그것을보고 그것을 하는 것입니다. 에린 아르네슨, 니콜라스 카스탈레인, 나탈리아 로페즈, 로렌 램보이, 브리아나 피어스, 아리아 로드리게스-산티아고, 테렐 스카버러 등 여러 프로젝트 참가자들도 이 영상에 짧게 나타났다.실험실에서 Doliolid 배양을 확립하고 사육하기 전에, 심산수화 칼륨 을 심망가네이트 용액에 담그어 1.9 리터 와 3.8 리터 유리 배양 항아리를 청소하고 살균하십시오. 항아리가 하룻밤 사이에 몸을 담글 수 있도록 하십시오. 그런 다음 항아리를 비설피트 나트륨 용액으로 옮춥니까.항아리가 하룻밤 사이에 몸을 담글 수 있도록 하십시오. 다음으로 산화된 물로 항아리를 완전히 헹구십시오. 항아리가 마르도록 합니다.주식 문화를 유지하려면 엄격한 축 문화 기술을 사용하십시오. 2주마다 멸균 55 밀리리터 유리 배양 튜브에서 신선한 성장 매체의 25 밀리리터에 오래된 노화 배양의 0.5 밀리리터를 전송합니다. Doliolids를 먹이기 위한 더 많은 양의 식물성 플랑크톤을 준비하기 위해, 도끼 에서 500 밀리리터의 플라스틱 조직 배양 플라스크로 식물성 플랑크톤의 4 밀리리터를 1~50희석시 접종하도록 한다.평방 미터당 65~85마이크로아인슈타인의 시원한 백색광 조명 아래 12~12시간 밝은 주기로 환경 인큐베이터 또는 워크인 환경 챔버에서 문화를 배양합니다. 평신도 문화 플라스크는 조명을 최대화합니다. 매일 부드럽게 배회합니다.바다로 나가라. 대륙 선반에서 Doliolids를 찾으려면 수온, 염도 및 엽록소 A 형광을 프로파일링하여 Doliolids의 존재에 도움이되는 물 조건을 식별하기 위해 해양 기기 CTD를 배포하십시오. 특화된 플랑크톤 그물로 탐사 그물 견인을 수행하여 물 상태를 확인합니다.또는, Doliolids를 검출하기 위하여 시투 프로파일링 화상 진찰 시스템을 이용하십시오. 이제 윈치를 작동하여 CTD를 검색합니다. CTD 로제트에 장착된 니스킨 병은 Doliolids가 있는 부지와 엽록소의 가장 높은 추정치를 포함하는 깊이에서 바닷물을 수집했습니다.바닷물로 22리터 양동이 3개를 헹구고 바닷물로 채워서 절반 이상을 채웁니다. 그물 대구 끝을 바닷물로 완전히 채우고 대구 끝을 그물에 부착합니다. 그물을 배포합니다.15~25도의 경사 견인 각도와 수직 배치 및 검색 속도를 분당 15m 이상유지하여 물 기둥을 통해 그물을 낮추고 들어올립니다. 그물이 보드에 있으면 대구 끝의 내용을 부드럽게 옮기고 사이트에서 수집한 표면 해수를 포함하는 플라스틱 양동이로 나눕니다. 넓은 보어 유리 파이펫을 사용하여 수직 및 수평 동작을 사용하여 비커의 내용과 피펫을 부드럽게 혼합합니다.검지 손가락을 사용하여 모세관 흡입을 만들어 Doliolids를 캡처하고 전송합니다. 비커에 혼합 식물 플랑크톤에서 돌리오리드를 캡처합니다. Doliolids의 추가 후에, 밀리리터 당 네 번째 세포에 3-10에 약 5 시간 10의 최종 농도에 항아리에 로도모나스 문화를 추가합니다.돌리오리드의 소화관의 색상을 확인하십시오. 붉은 색은 Doliolids가 적극적으로 먹이를 주고 있음을 결정합니다. Doliolids가 공기 용수 인터페이스에 갇히지 않도록하기 위해 머리 공간을 피하기 위해 여과되지 않은 입자가 풍부한 바닷물로 항아리를 완전히 채웁니다.항아리 개구부 위에 플라스틱 랩 을 놓습니다. 동물을 손상시킬 수 있는 기포를 만들지 마십시오. 조심스럽게 항아리에 모자를 나사와 거품이 존재하는지 확인하기 위해 항아리를 부드럽게 반전.거품이 있는 경우 더 많은 바닷물을 채우면 제거하십시오. 항아리가 뚜껑으로 다시 밀봉하고 항아리 의 외부에서 여분의 물을 닦아 후. 각 항아리를 고무 튜브로 덮인 수직 금속 막대와 스테인레스 스틸 호스 클램프 사이에 배치하여 플랑크톤 휠에 장착하십시오.항아리 뒤쪽이 고무 튜브에 대해 쿠션되어 있는지 확인합니다. 나사를 조정하여 항아리 주위의 호스 클램프를 조입니다. 항아리가 0.3 rpm에서 회전하여 Doliolids를 서스펜션상태로 유지하도록 허용합니다.실험실 조건에 3일 간의 적응 후 100~150밀리리터의 배양물을 항아리에서 샘플 용기로 이송하고 쿨터 카운터를 이용하여 조류 농도를 측정한다. 조류 농도의 추정에 기초하여, 리터당 40~95마이크로그램의 배양 항아리의 농도를 가져오기에 충분한 조류를 첨가한다. Doliolids가 배양에 추가할 조류의 빈도와 얼마나 많은 의 결정을 안내하기 위하여 공급된 후에 조류 농도를 감시하기 위하여 입자 카운터를 사용합니다.리터당 40~95마이크로그램의 배양 항아리에 식물성 플랑크톤 농도를 유지한다. Doliolids를 배양하려면 복잡한 수명 주기를 통해 이를 지원해야 합니다. 애벌레와 oozooids 및 초기 간호사를 개발.간호사의 투석기에서 최소 8개의 트로포주이드가 보이면 적어도 4명의 간호사를 새로운 배양 병으로 옮기게 됩니다. 포로주이드의 크기가 3밀리미터에 도달하면 항아리에 있는 동물의 수를 줄입니다. phorozooids가 5 밀리미터 보다 커지고 고노주이드 클러스터를 개발했을 때 4 개의 phorozooids를 제외한 모든 것을 제거합니다.이 프로토콜은 Dolioletta gegenbauri 수집 및 재배 접근 방식에 대한 개요를 제공합니다. 조류 통관 속도는 리터 당 탄소의 20 에서 60 마이크로 그램의 농도에서 유사하 고 음식 농도 증가 로 감소. D.gegenbauri 성장을 지지하는 온도 범위에 비해 통관 률이 비례적으로 증가했습니다.온도 및 식품 가용성의 기능으로 하루 0.1에서 0.7 밀리미터에 이르는 성장률이 관찰되었습니다. Doliolids의 재배는 성공적으로 해양 조건을 복제하고 복잡한 수명 주기 동안 동물의 요구를 수용에 달려 있습니다. 따라서 포획, 격리 및 축산 중에 동물을 부드럽게 다루어야 합니다.음식 농도를 자주 모니터링하고 조정해야 합니다. 이것은 개발 애벌레와 oozooid 생활 단계 동안 특히 사실이다. 이 방법은 특별히 해양 식품 웹의 기지에서 작은 동물 플랑크톤 종의 사육을 위해 설계되었습니다.이 방법은 예를 들어 기후 변화에 대한 동물 플랑크톤 반응을 조사하는 데 유용할 것입니다. 개발 이후, 이 기술은 동물 플랑크톤 생태학자들이 Doliolids의 실험실 기반 공급, 성장 및 재생 률을 결정할 수 있는 길을 열었습니다. 또한이 방법은 자연에서 Doliolid 규정식의 혁신적인 분자 기지를 둔 조사를 위한 도로를 포장했습니다.나는 유리 청소 프로토콜이 호흡기 자극제이며 통풍이 잘되는 지역에서 사용되어야하는 시약을 포함한다는 것을 상기시키고 싶습니다. 바다에서 일하는 것도 위험할 수 있으므로 선박 안전 규칙을 따르십시오.

Research

JoVE Journal

Environment

Cultivation of the Marine Pelagic Tunicate Dolioletta gegenbauri (Uljanin 1884) for Experimental Studies

A Noninvasive Method For In situ Determination of Mating Success in Female American Lobsters (Homarus americanus)

A Noninvasive Method For In situ Determination of Mating Success in Female American Lobsters Homarus americanus

에 대한 비 침습적 방법<em&gt; 현장에서</em&gt; 여성 미국의 바닷가에 연결 성공 (의 결정<em&gt; Homarus의 americanus</em&gt;)

Despite being one of the most productive fisheries in the Northwest Atlantic, much remains unknown about the natural reproductive dynamics of American ...

연구

환경과학

A Fish-feeding Laboratory Bioassay to Assess the Antipredatory Activity of Secondary Metabolites from the Tissues of Marine Organisms

물고기 먹이 실험 생물 검정은 해양 생물의 조직에서 이차 대사 산물의 Antipredatory 활동을 평가하기 위해

Marine chemical ecology is a young discipline, having emerged from the collaboration of natural products chemists and marine ecologists in the 1980s with ...

Clean Sampling and Analysis of River and Estuarine Waters for Trace Metal Studies

클린 샘플링 및 추적 금속 연구 강 하구 바다의 분석

Most of the trace metal concentrations in ambient waters obtained a few decades ago have been considered unreliable owing to the lack of contamination ...

Experimental Protocol for Biodiesel Production with Isolation of Alkenones as Coproducts from Commercial Isochrysis Algal Biomass

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상업에서 로서도으로 Alkenones의 분리와 바이오 디젤 생산을위한 실험 프로토콜<em&gt; 이소 크리 시스 속</em&gt; 해조 바이오 매스

The need to replace petroleum fuels with alternatives from renewable and more environmentally sustainable sources is of growing importance. ...

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해양 박테리아와 생태 독성 학적 방법<em&gt; 비브리오 앵 귈라 룸</em&gt; 환경 오염 물질의 급성 독성 평가

Bacteria are an important component of the ecosystem, and microbial community alterations can have a significant effect on biogeochemical cycling and food ...

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농업과 도시 유출수의 지표수 독성과 관련된 오염 물질 제거를위한 식물 처리 시스템

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Extraction of Organochlorine Pesticides from Plastic Pellets and Plastic Type Analysis

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Development of New Methods for Quantifying Fish Density Using Underwater Stereo-video Tools

수 중 스테레오 비디오 도구를 사용 하 여 물고기 밀도 측정을 위한 새로운 방법의 개발

The use of video camera systems in ecological studies of fish continues to gain traction as a viable, non-extractive method of measuring fish lengths and ...

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생물이 Macroinvertebrates 그리고 대서양 바다 가리비에 대 한 드롭 카메라 조사에 의해 Exemplified 그들의 서식 지의 이미지 기반 설문 조사 방법

Underwater imaging has long been used in the field of marine ecology but decreasing costs of high-resolution cameras and data storage have made the ...