Name: pan-myeloid differentiation of human cord blood derived cd34+ hematopoietic stem and progenitor cells
Uploaded: 2019-08-09T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Pan-myeloid Differentiation of Human Cord Blood Derived CD34+ Hematopoietic Stem and Progenitor Cells at JoVE.com

يود المؤلفون أن يشكروا ويندي باريت، وراشيل كاباييرو، وغابرييلا رويز من ماريكوبا للأنظمة الصحية المتكاملة على وحدات دم الحبل السري التي تم تحديدها والتبرع بها، ومريناليني كالا للمساعدة في قياس التدفق، وغاي كروكس وكريستوفر ريت من أجل المشورة بشأن التمايز النخاعي السابق. وقد تم دعم هذا العمل بأموال إلى S.S. من المعاهد الوطنية للصحة (R21CA170786 و R01GM127464) والجمعية الأمريكية للسرطان (منحة البحوث المؤسسية 74-001-34-IRG). والمحتوى هو مسؤولية المؤلفين فقط ولا يمثل بالضرورة الآراء الرسمية للمعاهد الوطنية للصحة.

تم التبرع بدم الحبل السري البشري للتجريب من قبل الأفراد الأصحاء بعد الموافقة المستنيرة على ماريكوبا النظم الصحية المتكاملة (MIHS)، فينيكس. وتم الحصول على الوحدات التي تم تحديدها من خلال اتفاق لنقل المواد بين وزارة التعليم والشؤون الإنسانية وجامعة أريزونا.
1. الكواشف والمخازن ?...

<ol>
	<li>Hao, Q. L., Shah, A. J., Thiemann, F. T., Smogorzewska, E. M., Crooks, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+functional+comparison+of+CD34+++CD38-+cells+in+cord+blood+and+bone+marrow.">A functional comparison of CD34 + CD38- cells in cord blood and bone marrow.</a> Blood. 86 (10), 3745-3753 (1995).</li><li>Manz, M. G., Miyamoto, T., Akashi, K., Weissman, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+isolation+of+human+clonogenic+common+myeloid+progenitors.">Prospective isolation of human clonogenic common myeloid progenitors.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 99 (18), 11872-11877 (2002).</li><li>Kondo, M., Weissman, I. L., Akashi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+clonogenic+common+lymphoid+progenitors+in+mouse+bone+marrow.">Identification of clonogenic common lymphoid progenitors in mouse bone marrow.</a> Cell. 91 (5), 661-672 (1997).</li><li>Seita, J., Weissman, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematopoietic+stem+cell:+self-renewal+versus+differentiation.">Hematopoietic stem cell: self-renewal versus differentiation.</a> Wiley Interdisciplinary Reviews: Systems Biology and Medicine. 2 (6), 640-653 (2010).</li><li>Haas, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation-Induced+Emergency+Megakaryopoiesis+Driven+by+Hematopoietic+Stem+Cell-like+Megakaryocyte+Progenitors.">Inflammation-Induced Emergency Megakaryopoiesis Driven by Hematopoietic Stem Cell-like Megakaryocyte Progenitors.</a> Cell Stem Cell. 17 (4), 422-434 (2015).</li><li>Sanjuan-Pla, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet-biased+stem+cells+reside+at+the+apex+of+the+haematopoietic+stem-cell+hierarchy.">Platelet-biased stem cells reside at the apex of the haematopoietic stem-cell hierarchy.</a> Nature. 502 (7470), 232-236 (2013).</li><li>Bender, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+analysis+and+characterization+of+CD34++cells+from+normal+human+bone+marrow,+cord+blood,+peripheral+blood,+and+mobilized+peripheral+blood+from+patients+undergoing+autologous+stem+cell+transplantation.">Phenotypic analysis and characterization of CD34+ cells from normal human bone marrow, cord blood, peripheral blood, and mobilized peripheral blood from patients undergoing autologous stem cell transplantation.</a> Clinical Immunology and Immunopathology. 70 (1), 10-18 (1994).</li><li>Fritsch, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+composition+of+CD34+subpopulations+differs+between+bone+marrow,+blood+and+cord+blood.">The composition of CD34 subpopulations differs between bone marrow, blood and cord blood.</a> Bone Marrow Transplantation. 17 (2), 169-178 (1996).</li><li>Nimgaonkar, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+unique+population+of+CD34++cells+in+cord+blood.">A unique population of CD34+ cells in cord blood.</a> Stem Cells. 13 (2), 158-166 (1995).</li><li>Hordyjewska, A., Popiolek, L., Horecka, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+hematopoietic+stem+cells+of+umbilical+cord+blood.">Characteristics of hematopoietic stem cells of umbilical cord blood.</a> Cytotechnology. 67 (3), 387-396 (2015).</li><li>Bapat, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myeloid+Disease+Mutations+of+Splicing+Factor+SRSF2+Cause+G2-M+Arrest+and+Skewed+Differentiation+of+Human+Hematopoietic+Stem+and+Progenitor+Cells.">Myeloid Disease Mutations of Splicing Factor SRSF2 Cause G2-M Arrest and Skewed Differentiation of Human Hematopoietic Stem and Progenitor Cells.</a> Stem Cells. 36, 1-13 (2018).</li><li>Yip, B. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+U2AF1S34F+mutation+induces+lineage-specific+splicing+alterations+in+myelodysplastic+syndromes.">The U2AF1S34F mutation induces lineage-specific splicing alterations in myelodysplastic syndromes.</a> Journal of Clinical Investigation. 127 (6), 2206-2221 (2017).</li><li>Yoo, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myeloid+differentiation+of+human+cord+blood+CD34++cells+during+ex+vivo+expansion+using+thrombopoietin,+flt3-ligand+and/or+granulocyte-colony+stimulating+factor.">Myeloid differentiation of human cord blood CD34+ cells during ex vivo expansion using thrombopoietin, flt3-ligand and/or granulocyte-colony stimulating factor.</a> British Journal of Haematology. 105 (4), 1034-1040 (1999).</li><li>Hao, Q. L., Smogorzewska, E. M., Barsky, L. W., Crooks, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+identification+of+single+CD34+CD38-+cells+with+both+lymphoid+and+myeloid+potential.">In vitro identification of single CD34+CD38- cells with both lymphoid and myeloid potential.</a> Blood. 91 (11), 4145-4151 (1998).</li><li>Moretta, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+generation+of+human+innate+lymphoid+cells+is+influenced+by+the+source+of+hematopoietic+stem+cells+and+by+the+use+of+G-CSF.">The generation of human innate lymphoid cells is influenced by the source of hematopoietic stem cells and by the use of G-CSF.</a> European Journal of Immunology. 46 (5), 1271-1278 (2016).</li><li>Sanz, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ordering+human+CD34+CD10-CD19++pre/pro-B-cell+and+CD19-+common+lymphoid+progenitor+stages+in+two+pro-B-cell+development+pathways.">Ordering human CD34+CD10-CD19+ pre/pro-B-cell and CD19- common lymphoid progenitor stages in two pro-B-cell development pathways.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (13), 5925-5930 (2010).</li><li>Egeland, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myeloid+differentiation+of+purified+CD34++cells+after+stimulation+with+recombinant+human+granulocyte-monocyte+colony-stimulating+factor+(CSF),+granulocyte-CSF,+and+interleukin-3.">Myeloid differentiation of purified CD34+ cells after stimulation with recombinant human granulocyte-monocyte colony-stimulating factor (CSF), granulocyte-CSF, and interleukin-3.</a> Blood. 78 (12), 3192-3199 (1991).</li><li>Ogawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+and+proliferation+of+hematopoietic+stem+cells.">Differentiation and proliferation of hematopoietic stem cells.</a> Blood. 81 (11), 2844-2853 (1993).</li><li>Perdomo, J., Yan, F., Leung, H. H. L., Chong, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Megakaryocyte+Differentiation+and+Platelet+Formation+from+Human+Cord+Blood-derived+CD34++Cells.">Megakaryocyte Differentiation and Platelet Formation from Human Cord Blood-derived CD34+ Cells.</a> Journal of Visualized Experiments. (130), e56420 (2017).</li><li>Palii, C. G., Pasha, R., Brand, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lentiviral-mediated+knockdown+during+ex+vivo+erythropoiesis+of+human+hematopoietic+stem+cells.">Lentiviral-mediated knockdown during ex vivo erythropoiesis of human hematopoietic stem cells.</a> Journal of Visualized Experiments. (53), e2813 (2011).</li><li>Davies, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silencing+of+ASXL1+impairs+the+granulomonocytic+lineage+potential+of+human+CD34(+)+progenitor+cells.">Silencing of ASXL1 impairs the granulomonocytic lineage potential of human CD34(+) progenitor cells.</a> British Journal of Haematology. 160 (6), 842-850 (2013).</li><li>Caceres, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TP53+suppression+promotes+erythropoiesis+in+del(5q)+MDS,+suggesting+a+targeted+therapeutic+strategy+in+lenalidomide-resistant+patients.">TP53 suppression promotes erythropoiesis in del(5q) MDS, suggesting a targeted therapeutic strategy in lenalidomide-resistant patients.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (40), 16127-16132 (2013).</li><li>Shi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ASXL1+plays+an+important+role+in+erythropoiesis.">ASXL1 plays an important role in erythropoiesis.</a> Scientific Reports. 6, 28789 (2016).</li><li>Mazumdar, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukemia-Associated+Cohesin+Mutants+Dominantly+Enforce+Stem+Cell+Programs+and+Impair+Human+Hematopoietic+Progenitor+Differentiation.">Leukemia-Associated Cohesin Mutants Dominantly Enforce Stem Cell Programs and Impair Human Hematopoietic Progenitor Differentiation.</a> Cell Stem Cell. 17 (6), 675-688 (2015).</li><li>Chung, K. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enforced+expression+of+an+Flt3+internal+tandem+duplication+in+human+CD34++cells+confers+properties+of+self-renewal+and+enhanced+erythropoiesis.">Enforced expression of an Flt3 internal tandem duplication in human CD34+ cells confers properties of self-renewal and enhanced erythropoiesis.</a> Blood. 105 (1), 77-84 (2005).</li><li>Ambrosini, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-1beta+inhibits+ILC3+while+favoring+NK-cell+maturation+of+umbilical+cord+blood+CD34(+)+precursors.">IL-1beta inhibits ILC3 while favoring NK-cell maturation of umbilical cord blood CD34(+) precursors.</a> European Journal of Immunology. 45 (7), 2061-2071 (2015).</li><li>Batard, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGF-(beta)1+maintains+hematopoietic+immaturity+by+a+reversible+negative+control+of+cell+cycle+and+induces+CD34+antigen+up-modulation.">TGF-(beta)1 maintains hematopoietic immaturity by a reversible negative control of cell cycle and induces CD34 antigen up-modulation.</a> Journal of Cell Science. 113, 383-390 (2000).</li><li>Huang, N., Lou, M., Liu, H., Avila, C., Ma, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+potent+small+molecule+capable+of+regulating+polyploidization,+megakaryocyte+maturation,+and+platelet+production.">Identification of a potent small molecule capable of regulating polyploidization, megakaryocyte maturation, and platelet production.</a> Journal of Hematology &amp; Oncology. 9 (1), 136 (2016).</li></ol>

البروتوكول الموضح هنا مناسب للتمايز في الجسم الحي السابق من UCB المستمدة CD34+ HSPCs إلى السلالات النخاعية الأربعة. الحضانة الأولية مع مزيج السيتوكين تتكون من SCF، TPO، Flt3L وIL3 يحفز CD34+ الخلايا. في وقت لاحق، يتم تحقيق التمايز مع كوكتيل من SCF، IL3، Flt3L، EPO، وTPO. في هذا المزيج، SCF، IL3، وFlt3L مهمة ل...

التمايز الطبيعي للخلايا الجذعية المكونة للدم (HSCs) أمر بالغ الأهمية للحفاظ على المستويات الفسيولوجية لجميع سلالات خلايا الدم. خلال التمايز، في استجابة منسقة للإشارات خارج الخلية بما في ذلك عوامل النمو والسيتوكينات، HSCs تؤدي أولا إلى خلاياذرية متعددة القوى (MPP) التي لديها إمكانية اللمفاوية النخاعية 1،2،3 ،4 (الشكل1). وتنشأ عن هذه التسميات سلالات النخاعية الشائعة (CMPs) والذرية اللمفاوية الشائعة (CLPs) المقيدة النسب. تُميّز CLPs في السلالات اللمفاوية المكونة من B وT والخلايا القاتلة الطبيعية. وتولد الـ CMPs سلالات النخاع من خلال اثنين من السكان السلف الأكثر تقييداً، وذرية الكريات الحمر ية الضخمة (MEPs)، وذرية الخلايا الأحادية الحبيبية (GMPs). وتنشأ عن هذه الـ MEPs خلايا عملاقة وكريات الدم الحمراء، في حين أن هذه الخلايا تؤدي إلى ظهور المحببات والخلايا الأحادية. بالإضافة إلى أن تنشأ من خلال CMPs، وقد أفيد أن الخلايا الضخمة تنشأ أيضا مباشرة من HSCs أو MPPs في وقت مبكر عن طريق مسارات غير الكنسية5،6.
تتميز الخلايا الجذعية المكونة للدم والخلايا السلف (HSPCs) بعلامة السطح CD34 وعدم وجود علامات محددة النسب (لين-). وتشمل العلامات السطحية الأخرى التي تستخدم عادة للتمييز بين HSCs وتجمعات ذرية النخاع CD38 وCD45RA وCD1232 (الشكل1). HSCs وMPPs هي لين-/ CD34+/ CD38- ولين-/CD34+/CD38+، على التوالي. تتميز مجموعات الذرية الملتزمة النخاعية بوجود أو غياب CD45RA وCD123. CMPs هي لين-/ CD34+/ CD38+/ CD45RA-/CD123لو،GMPs هي لين-/CD34+/CD38+/CD45RA+/CD123لو، وأعضاء البرلمان من البمعة لين-/CD34 ++ /CD38+/CD45RA-/CD123-.
يمكن الحصول على إجمالي عدد السكان من CD34+ الخلايا الجذعية والسلف من دم الحبل السري البشري (UCB)، نخاع العظام، والدم المحيطي. CD34+ الخلايا تشكل 0.02٪ إلى 1.46٪ من مجموع الخلايا أحادية النووية (MNCs) في UCB الإنسان، في حين أن نسبتهم تتراوح بين 0.5٪ و 5.3٪ في نخاع العظام وأقل بكثير في ~ 0.01٪ في الدم المحيطي7،8،9 . القدرة التكاثرية وإمكانات التمايز من UCB المستمدة CD34+ الخلايا هي أعلى بكثير من نخاع العظام أو خلايا الدم الطرفية1،10، مما يوفر ميزة متميزة للحصول على مادة كافية للتحليلات الجزيئية في تركيبة مع أداء توصيف المناعية والمورفولوجية للخلايا أثناء التمايز.
التمايز السابق للدم السري المستمد من دم الحبل السري CD34+ HSPCs هو نموذج تطبيقي على نطاق واسع للتحقيق في حالات الدم الطبيعية وآليات أمراض الدم. عندما يتم استزراعها مع السيتوكينات المناسبة، يمكن حث UCB CD34+ HSPCs على التمييز على طول السلالات النخاعية أو اللمفاوية11،12،13،14،15 , 16.هنا، ونحن نصف بروتوكولات للعزل وتوصيف المناعية من CD34+ HSPCs من UCB الإنسان، وللتمايز إلى خلايا النسب النخاعي. ويستند هذا النظام الثقافي على التمايز الناجم عن السيتوكين من HSPCs في وجود الخلايا سترومال MS-5 لتقليد البيئة الدقيقة في نخاع العظام. تتسبب ظروف الثقافة في توسع أولي في الخلايا CD34+ ، يليها تمايزها إلى الخلايا التي تعبر عن علامات لخلايا النسب النخاعية الأربعة ، وهي الخلايا الحبيبية (CD66b) ، والخلايا الأحادية (CD14) ، والخلايا الضخمة (CD41) ، و كريات الدم الحمراء (CD235a). وتشمل تطبيقات بروتوكول تمايز الخلايا CD34+ دراسات عن الآليات الجزيئية التي تنظم داء الهيماتوبوي، والتحقيقات في تأثير الطفرات المرتبطة بمرض النخاع والجزيئات الصغيرة على التجديد الذاتي و تمايز HSPCs.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:785px;" width="786">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">0.4% Trypan blue solution</td>
			<td style="width:112px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">15250-061</td>
			<td style="width:339px;">Dilute working stock to 0.2% in sterile 1x PBS</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">0.5 M UltraPure Ethylene diamine tetra acetic acid, pH 8.0</td>
			<td style="width:112px;">Gibco&#160;</td>
			<td style="width:119px;">15575-038</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">10x Hanks Balanced Salt Solution (HBSS)</td>
			<td style="width:112px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">14185052</td>
			<td style="width:339px;">Dilute to 1x with sterile distilled water &#38; pH to 7.2</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">2.5% Trypsin, no phenol red</td>
			<td style="width:112px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">15090046</td>
			<td style="width:339px;">Dilute working stock to 1x with sterile 1x PBS</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">30 &#181;m Pre-separation filters</td>
			<td style="width:112px;">Miltenyi biotech</td>
			<td style="width:119px;">130-041-407</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">35% sterile Bovine serum albumin</td>
			<td style="width:112px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">A7979</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">7-AAD</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">420404</td>
			<td style="width:339px;">Used as a live/dead stain to eliminate dead cells from FACS analysis</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD10-FITC antibody (Clone HI10a)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">312207</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Anti-human CD11b-FITC (activated) antibody (Clone CBRM1/5)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">301403</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:5 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD123-APC antibody (Clone 6H6)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">306012</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD14-PE antibody (Clone M5E2)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">301806</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD19-FITC antibody (Clone 4G7)</td>
			<td style="width:112px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">347543</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:5 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD235a-APC antibody (Clone GA-R2 (HIR2))</td>
			<td style="width:112px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">551336</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD235a-FITC antibody (Clone HIR2)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">306609</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:50 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD34-APC-Cy7 antibody (Clone 581)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">343514</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD38-PE antibody (Clone HIT2)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">303506</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD3-FITC antibody (Clone UCHT1)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">300405</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD41a-PerCP-Cy5.5 antibody (Clone HIP8)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">303720</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD45Ra-PE-Cy7 antibody (Clone HI100)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">304126</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD66b-PE-Cy7 antibody (Clone G10F5)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">305116</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD7-FITC antibody (Clone CD7-6B7)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">343103</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td style="width:112px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">BP231-100</td>
			<td style="width:339px;">Filter sterilize before use</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Dulbecco&#8217;s Modified Eagle Medium (DMEM) powder with L-Glutamine&#160;</td>
			<td style="width:112px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">12100046</td>
			<td style="width:339px;">Reconstitute 1 packet to make 1 L of DMEM media&#160; with sodium bicarbonate, 10% FBS &#38; 1% penicillin &#38; streptomycin&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Fetal bovine serum, Australian source, heat inactivated</td>
			<td style="width:112px;">Omega Scientific</td>
			<td style="width:119px;">FB-22 Lot #609716</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Human CD34 microbead kit&#160;</td>
			<td style="width:112px;">Miltenyi biotech</td>
			<td style="width:119px;">130-046-702</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Human Thrombopoietin (TPO), research grade</td>
			<td style="width:112px;">Miltenyi biotech</td>
			<td style="width:119px;">130-094-011</td>
			<td style="width:339px;">Make a stock of 100 &#181;g/mL in 1x PBS + 0.1% BSA. Use 50 ng/mL for both myeloid differentiation &#38; stimulation medium</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">L-Glutamine</td>
			<td style="width:112px;">Omega Scientific</td>
			<td style="width:119px;">GS-60</td>
			<td style="width:339px;">2 mM concentration in stimulation medium</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">LS Columns</td>
			<td style="width:112px;">Miltenyi biotech</td>
			<td style="width:119px;">130-042-401</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">MACS Multi stand</td>
			<td style="width:112px;">Miltenyi biotech</td>
			<td style="width:119px;">130-042-303</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">MidiMACS magnetic separator</td>
			<td style="width:112px;">Miltenyi biotech</td>
			<td style="width:119px;">130-042-302</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">MNC fractionation media (Ficol-Paque PLUS)</td>
			<td style="width:112px;">GE Healthcare Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">17-1440-03</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">MS-5 cells</td>
			<td style="width:112px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:339px;">Gift from the laboratory of Gay Crooks, UCLA</td>
		</tr>
		<tr height="148">
			<td height="148" style="height:148px;width:216px;">Paraformaldehyde</td>
			<td style="width:112px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P6148</td>
			<td style="width:339px;">Heat 800 mL of 1x PBS in a glass beaker on a stir plate in a chemical hood to ~65 &#176;C. Add 10 g of paraformaldehyde powder. To completely dissolve the paraformaldehyde, raise the pH by adding 1 N NaOH. Cool and filter the solution and make up the volume to 1 L with 1x PBS. Adjust the pH to 7.2.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Penicillin &#38; Streptomycin</td>
			<td style="width:112px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P4458-100ml</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Poly-L lysine</td>
			<td style="width:112px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P2636</td>
			<td style="width:339px;">Make a 10 mg/mL stock in 1x PBS</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Recombinant human erythropoietin-alpha (rHu EPO-&#945;)</td>
			<td style="width:112px;">BioBasic</td>
			<td style="width:119px;">RC213-15</td>
			<td style="width:339px;">Make a stock of 2000 units/mL in 1x PBS + 0.1% BSA. Use 4 units/mL for myeloid differentiation</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Recombinant human fibronectin fragment (RetroNectin)</td>
			<td style="width:112px;">Takara&#160;</td>
			<td style="width:119px;">T100B</td>
			<td style="width:339px;">Use 20 &#181;g/mL diluted in sterile 1x PBS to coat wells prior to stimulation of CD34+ HSCs.</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Recombinant human Flt-3 ligand (rHu Flt-3L)</td>
			<td style="width:112px;">BioBasic</td>
			<td style="width:119px;">RC214-16</td>
			<td style="width:339px;">Make a stock of 100 &#181;g/mL in 1x PBS + 0.1% BSA. Use 5 ng/mL for myeloid differentiation &#38; 50 ng/mL in stimulation medium</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Recombinant human interleukin-3 (rHu IL-3)</td>
			<td style="width:112px;">BioBasic</td>
			<td style="width:119px;">RC212-14</td>
			<td style="width:339px;">Make a stock of 100 &#181;g/mL in 1x PBS + 0.1% BSA. Use 5 ng/mL for myeloid differentiation &#38; 20 ng/mL in stimulation medium</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Recombinant human stem cell factor (rHu SCF)</td>
			<td style="width:112px;">BioBasic</td>
			<td style="width:119px;">RC213-12</td>
			<td style="width:339px;">Make a stock of 100 &#181;g/mL in 1x PBS + 0.1% BSA. Use 5 ng/mL for myeloid differentiation &#38; 50 ng/mL in stimulation medium</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Serum free medium (X-Vivo-15)</td>
			<td style="width:112px;">Lonza&#160;</td>
			<td style="width:119px;">04-418Q</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Sodium bicarbonate</td>
			<td style="width:112px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">BP328-500</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Wright-Giemsa stain, modified</td>
			<td style="width:112px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">WG16-500</td>
			<td style="width:339px;">Use according to manufacturer&#39;s instructions</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Equipment&#160;</td>
			<td style="width:112px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">BD LSR II flow cytometer</td>
			<td style="width:112px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:112px;">Sorvall Legend RT</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Light microscope</td>
			<td style="width:112px;">Olympus</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

pan-myeloid differentiation of human cord blood derived cd34+ hematopoietic stem and progenitor cells

التمايز السابق للخلايا الجذعية المكونة للدم هو نموذج يستخدم على نطاق واسع لدراسة الهيماتوبويز. البروتوكول الموصوف هنا هو للتفرقة الناجمة عن السيتوكين من CD34+ الجذعية المكونة للدم والخلايا السلف إلى الخلايا السلالية النخاعية الأربعة. يتم عزل CD34+ الخلايا من دم الحبل السري البشري ومشتركة مع الخلايا سترومال MS-5 في وجود السيتوكينات. يتم وصف التوصيف المناعي للخلايا الجذعية والسلف، وخلايا النسب النخاعية المتمايزة. باستخدام هذا البروتوكول، CD34+ الخلايا قد تكون حاضنة مع جزيئات صغيرة أو تنتقل مع الفيروسات اللينة للتعبير عن طفرات مرض النخاع للتحقيق في تأثيرها على تمايز النخاع.

تطبيق البروتوكولات المذكورة أعلاه ينتج 5.6 (± 0.5) × 108 MNCs و 1 (± 0.3) × 106 CD34+ خلايا من وحدة دم الحبل السري من ~ 100 مل. وتتراوح النسبة المئوية لمجموع CD34+ الخلايا بين 80-90٪ (الشكل2A،B). التحليل المناعي من قبل المخطط الذي وصفه Manz وآخرون5 يدل على ...

Watch this Scientific Journal Video about Pan-myeloid Differentiation of Human Cord Blood Derived CD34+ Hematopoietic Stem and Progenitor Cells at JoVE.com

Pan-myeloid Differentiation of Human Cord Blood Derived CD34+ Hematopoietic Stem and Progenitor Cells

هنا، نقدم بروتوكول توصيف الفينومينتيك والسيتوكين الناجم عن التمايز من دم الحبل السري المستمدة CD34+ الجذعية المكونة للدم والخلايا السلف إلى السلالات النقويالأربعة. وتشمل تطبيقات هذا البروتوكول التحقيقات على تأثير طفرات مرض النخاع أو جزيئات صغيرة على تمايز النخاع من CD34+ الخلايا.

Pan-النخاع التمايز من الدم الحبل البشري المستمدة CD34+ الجذعية المكونة للدم وخلايا السلف

Ex vivo differentiation of human hematopoietic stem cells is a widely used model for studying hematopoiesis. The protocol described here is for cytokine ...

يمكن استخدام هذا البروتوكول لدراسة التغيرات الجزيئية والخلوية التي تحدث أثناء التمايز النخاعي العادي للخلايا الجذعية والنسلية الإيجابية لدمية CD34 البشرية. الميزة الرئيسية لهذا البروتوكول هو أنه يسمح للتمايز من الخلايا الإيجابية CD34 على طول جميع الأراضي النخاعية الأربعة بما في ذلك megakaryocytes, كريات الدم الحمراء, الحبيبات, ومونودات. إثبات الإجراء سيكون (أديتي بابات) ، طبيبة ما بعد الدكتوراه من مختبريلعزل الخلية أحادية النواة من عينة دم الحبل السري البشري، تعقيم السطح الخارجي لحقيبة من دم الحبل السري مع 70٪ الإيثانول قبل نقل محتويات الحقيبة إلى زجاجة بلاستيكية معقمة 250 ملليلتر داخل خزانة السلامة البيولوجية. تخفيف الدم مع حجم متساو من درجة حرارة الغرفة هانك محلول ملحي المخزنة، وإضافة 15 ملليلتر من تجزئة خلية أحادية النواة المتوسطة إلى كل من خمسة أنابيب مخروطية معقم 50 ملليلتر. بعد خلط لطيف، صب بعناية 30 ملليلتر من دم الحبل السري المخفف على المتوسطة تجزئة أحادية النوى في كل أنبوب، وعقد أنابيب 50 ملليلتر في زاوية للمساعدة في تجنب خلط الطبقات.فصل الخلايا بواسطة الطاردة المركزية للتدرج الكثافة، وإزالة أعلى 15 إلى 20 ملليلتر من البلازما فوق طبقة الخلية أحادية النوى. استخدم ماصة لنقل طبقة الخلية أحادية النوى المكشوفة بعناية إلى أنبوب جديد 50 ملليلتر، وتجميع الخلايا أحادية النوى من أنبوبين إلى ثلاثة أنابيب معًا، وجلب الحجم النهائي في كل أنبوب يصل إلى 50 ملليلترًا مع عازل PBE البارد. بيليه عينات الخلية أحادية النوى عن طريق الطرد المركزي، وpirate المناذرات.اضغط على كل أنبوب بلطف لتخفيف الكريات الخلية، وتمييع الكريات في خمسة ملليلتر من الجليد الباردة PBE العازلة. الجمع بين الخلايا من ثلاثة إلى أربعة أنابيب في أنبوب واحد مخروطي 50 ملليلتر، وغسل جميع الأنابيب مع خمسة ملليلتر من عازلة PBE جديدة لجمع أي الخلايا المتبقية. بعد العد، وجلب حجم النهائي في أنبوب تصل إلى 50 ملليلتر مع الجليد الطازج الباردة PBE العازلة، وجمع الخلايا عن طريق الطرد المركزي.لعزل الخلايا أحادية النوى الإيجابية CD34، إعادة تعليق بيليه في 50 ملليلتر من العازلة PBE جديدة قبل جمع الخلايا مع طرد مركز آخر. بعد التخلص من الفائق، انقر بلطف لتخفيف بيليه، وإعادة تعليق الخلايا في مرة واحدة 10 إلى الخلايا أحادية النوى ثمانية لكل 300 ميكرولترات من الجليد الباردة PBE تركيز العازلة. كتلة أي ربط غير محدد مع 100 ميكرولتررس من مستقبلات Fc عرقلة الكاشف، مزيج بلطف، ومن ثم إضافة 100 ميكرولترات من الميكروبات CD34 من الخلايا تنشيط مغناطيسية الخلايا تنشيط CD34 مجموعة الميكروبات في واحد مرات 10 إلى الخلايا الثماني مع خلط لطيف، واحتضان الخلايا لمدة 30 دقيقة في أربع درجات مئوية.أثناء احتضان الخلايا، ضع عمود LS وتصفية ما قبل الفصل في مجال مغناطيسي فاصل MACS. اكويبير العمود مع ميليلترين من الجليد الباردة PBE العازلة ومرشح ما قبل الفصل مع ملليلتر واحد من العازلة. السماح للعمود لإفراغ في أنبوب مخروطي 15 ملليلتر وتجاهل تدفق من خلال.في نهاية الحضانة، وجلب الحجم النهائي لعينة الخلية أحادية النواة تصل إلى 15 ملليلتر مع الجليد الطازج الباردة PBE العازلة ورواسب الخلايا عن طريق الطرد المركزي. إعادة تعليق بيليه في ملليلتر واحد من الجليد الباردة PBE العازلة وتحميل الخلايا على مرشح ما قبل الفصل على العمود. شطف الأنبوب مع ثلاثة ملليلتر من الجليد الطازج الباردة PBE العازلة وإضافة العازلة إلى مرشح ما قبل الانفصال.اغسل العمود أربع مرات مع ثلاثة ملليلترات إضافية من الجليد البارد PBE العازلة لكل غسل دون مرشح، مما يسمح للعمود استنزاف كامل بين كل غسل. بعد الغسيل النهائي، قم بتحريك العمود إلى أنبوب جديد 15 ملليلتر، واغرق خمسة ملليلترات من الجليد الطازج البارد PBE من خلال العمود إلى الأنبوب. لتحديد كسور من الجذعية والنسل في مجموعات معزولة حديثا CD34 الجذعية الإيجابية والخلايا السلف، وجمع الخلايا عن طريق الطرد المركزي وإعادة تعليق بيليه في مرة واحدة 10 إلى الخلايا الست لكل 50 ميكرولترات من تركيز تدفق الخلايا العازلة.بعد ذلك، نقل الخلايا في 50 ميكرولتر aliquots لكل خمسة ملليلتر فلورية تنشيط أنبوب فرز الخلايا وفقا لبروتوكول التلطخ الخلوي تدفق التجريبية. إضافة كوكتيل الأجسام المضادة المناسبة وتلطيخ حية / ميتة إلى الخلايا، وضبط حجم إلى 100 ميكرولترات الكلي. بعد 20 دقيقة في الظلام المحمية من الضوء، وغسل الخلايا مع ملليلتر واحد من تدفق جديد العازلة قياس الخلايا في الأنبوب الواحد، وإعادة تعليق الخلايا في 500 ميكرولترات من تدفق جديد عازلة قياس الخلايا في الأنبوب الواحد.ثم تحليل الخلايا على تدفق مقياس الخلايا وفقا للبروتوكولات السيتوميترية تدفق القياسية. للتمييز الميكروبية المعزولة CD34 الجذعية الإيجابية والخلايا السلف في خلايا النسب النخاعي، معطف أولا آبار لوحة عقيمة، غير المصقول 48 جيدا مع 200 ميكرولتر في بئر من محلول الليفية الإنسان المؤتلف في برنامج تلفزيوني لمدة ساعتين في درجة حرارة الغرفة. في نهاية الحضانة، والتخلص من محلول فيبرومينكتين من كل بئر ومنع الآبار مع 200 ميكرولترات من 2٪ من الألبومين المصل البقري.بعد 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة، وغسل الآبار مرتين مع 500 ميكرولترات من برنامج تلفزيوني معقمة في غسل. إعادة تعليق الخلايا الإيجابية CD34 المعزولة حديثا في خمس مرات 10 الخلايا الخمس لكل ملليلتر من التركيز المتوسط التحفيز الدافئ. بعد ذلك ، بذور 200 ميكرولترات من الخلايا في كل بئر من لوحة مغلفة جزء من الليفية ووضع لوحة في حاضنة ثقافة الخلية لمدة 48 ساعة.في نهاية الحضانة، وجمع الخلايا مع الأنابيب لطيف، وغسل الآبار مع 500 ميكرولترات من مدفئ Dulbecco معدلة النسر المتوسطة، تجمع يغسل مع تعليق الخلية. بعد العد، وإعادة تعليق الخلايا في 2.5 مرات 10 إلى الخلايا الأربع لكل ملليلتر واحد من تركيز التمايز النخاعي المتوسطة. طبقة 200 ميكرولتررس من الخلايا الإيجابية CD34 في بئر في خلية سترومال MS-5 بذر 48 جيدا لوحة الأنسجة ثقافة.ثم ضع اللوحة في حاضنة ثقافة الخلية ، واستبدال 100 ميكرولترات من المابير في كل بئر مع 100 ميكرولترات من 2X تمايز 2X جديد المتوسطة كل ثلاثة إلى أربعة أيام. في اليوم 21، حصاد الخلايا لتحليل التعبير علامة النسب النخاعي عن طريق تدفق cytometry كما أظهرت للتو. النسبة المئوية النموذجية من مجموع الخلايا الإيجابية CD34 معزولة عن دم الحبل السري عن طريق فصل الميكروبات كما يدل على أن يتراوح بين 80 إلى 90٪ تحليل المناعة المناعة يكشف أن هذه الخلايا الإيجابية CD34 تتكون عادة من ما يقرب من 20٪ نسب سالب CD34 إيجابية CD38 إيجابية CD38 السليفة السلبية السكان الخلايا الجذعية و72٪ نسب السلبية CD34 إيجابية CD38 إيجابية متعددة قوية الخلية السلف.داخل السكان الخلية السلف متعددة قوية, حوالي 25٪ من الخلايا التعبير عن علامات سلف النخاعية المشتركة, حوالي 15٪ أعرب عن المحببة monocyte علامات السلف, وحوالي 56٪ أعرب megakaryocyte علامات سلف رليرويد. يوضح النادونينفينيبلينغ المناعي أيضًا أن النسبة المئوية للخلايا الإيجابية CD34 تقلل من حوالي 90٪ في العزلة إلى أقل من 25٪ في اليوم 21. تحليل السكان السلبي CD34 يدل على ارتفاع يصاحب ذلك في النسبة المئوية للخلايا التعبير عن علامات النسب النخاعي ناضجة.علاوة على ذلك ، تظهر الخلايا الملطخة رايت غيمسا خصائص مورفولوجية متميزة في الأيام الأولى و 21 مع الثقافات غير المتمايزة التي تعرض نواة كبيرة ومستديرة والقليل جدًا من السيتوبلازم والثقافات المتمايزة التي تعرض خصائص المورفولوجية لخلايا النسب بما في ذلك التي هي أحادية اللون ، والمجلدات الحبيبية ، والريثروبلاستس. تذكر أن تصب دم الحبل السري المخفف على وسط تجزئة الخلية أحادية النوى دون خلط الطبقات، ولا تزعج الخلايا الإيجابية MS-5 و CD34 عند تغيير الوسط. بعد هذا البروتوكول التمايز، يمكن تحليل الخلايا الإيجابية CD34 الثقافات للتغيرات المورفولوجية، والآثار المبرمج، والتغيرات في أنماط دورة الخلية، ودرجة التمايز.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Pan-myeloid Differentiation of Human Cord Blood Derived CD34+ Hematopoietic Stem and Progenitor Cells

Direct Induction of Human Neural Stem Cells from Peripheral Blood Hematopoietic Progenitor Cells

الحث المباشر من العصبية الإنسان الخلايا الجذعية من خلايا الدم المحيطي المكونة للدم السلف

Human disease specific neuronal cultures are essential for generating in vitro models for human neurological diseases. However, the lack of access to ...

Isolation of Neural Stem/Progenitor Cells from the Periventricular Region of the Adult Rat and Human Spinal Cord

عزل الخلايا الجذعية العصبية / السلف من المنطقة المحيطة بالبطين في الجرذان الكبار والحبل الشوكي البشري

Adult rat and human spinal cord neural stem/progenitor cells (NSPCs) cultured in growth factor-enriched medium allows for the proliferation of ...

Isolation and Differentiation of Adipose-Derived Stem Cells from Porcine Subcutaneous Adipose Tissues

العزلة وتمايز الخلايا الجذعية الدهنية المشتقة من الخنزير تحت الجلد الدهنية الأنسجة

Obesity is an unconstrained worldwide epidemic. Unraveling molecular controls in adipose tissue development holds promise to treat obesity or diabetes. ...

Chondrogenic Differentiation Induction of Adipose-derived Stem Cells by Centrifugal Gravity

مكون للغضروف التمايز تحريض الخلايا الجذعية الدهنية المشتقة من الجاذبية الطرد المركزي

Impaired cartilage cannot heal naturally. Currently, the most advanced therapy for defects in cartilage is the transplantation of chondrocytes ...

Directed Differentiation of Primitive and Definitive Hematopoietic Progenitors from Human Pluripotent Stem Cells

وجه التفريق بين فروعه المكونة للدم البدائي والنهائي من الخلايا الجذعية Pluripotent البشرية

One of the major goals for regenerative medicine is the generation and maintenance of hematopoietic stem cells (HSCs) derived from human pluripotent stem ...

Differentiating Chondrocytes from Peripheral Blood-derived Human Induced Pluripotent Stem Cells

تشوندروسيتيس التفريق من الخلايا الجذعية المحفزة المستحثة البشرية المستحثة من الدم

In this study, we used peripheral blood cells (PBCs) as seed cells to produce chondrocytes via induced pluripotent stem cells (iPSCs) in an ...

Chondrogenic Pellet Formation from Cord Blood-derived Induced Pluripotent Stem Cells

تشكيل بيليه غضروفي من الخلايا الجذعية المحفزة المستمدة من الدم الحبلية

Human articular cartilage lacks the ability to repair itself. Cartilage degeneration is thus treated not by curative but by conservative treatments. ...