Name: pan-myeloid differentiation of human cord blood derived cd34+ hematopoietic stem and progenitor cells
Uploaded: 2019-08-09T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Pan-myeloid Differentiation of Human Cord Blood Derived CD34+ Hematopoietic Stem and Progenitor Cells at JoVE.com

De auteurs bedanken Wendy Barrett, Rachel Caballero en Gabriella Ruiz van Maricopa Integrated Health Systems voor de geïdentificeerde en gedoneerde koord bloed eenheden, Mrinalini Kala voor hulp met Flow cytometrie, en homoseksuele boeven en Christopher Seet voor advies over ex vivo myeloïde differentiatie. Dit werk werd gesteund door fondsen aan S.S. van de National Institutes of Health (R21CA170786 en R01GM127464) en de American Cancer Society (het institutioneel onderzoek Grant 74-001-34-IRG). De inhoud is uitsluitend de verantwoordelijkheid van de auteurs en vertegenwoordigt niet noodzakelijkerwijs de officiële standpunten van de National Institutes of Health.

Menselijke navelstreng bloed voor experimenten werd geschonken door gezonde individuen na geïnformeerde toestemming voor Maricopa Integrated Health Systems (MIHS), Phoenix. De gedeidentificeerde eenheden werden verkregen door middel van een overeenkomst inzake materiaaloverdracht tussen de MIHS en de Universiteit van Arizona.
1. reagentia en buffers
Opmerking: Bereid alle reagentia en buffers onder steriele omstandigheden in een biologische veilighei...

<ol>
	<li>Hao, Q. L., Shah, A. J., Thiemann, F. T., Smogorzewska, E. M., Crooks, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+functional+comparison+of+CD34+++CD38-+cells+in+cord+blood+and+bone+marrow.">A functional comparison of CD34 + CD38- cells in cord blood and bone marrow.</a> Blood. 86 (10), 3745-3753 (1995).</li><li>Manz, M. G., Miyamoto, T., Akashi, K., Weissman, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+isolation+of+human+clonogenic+common+myeloid+progenitors.">Prospective isolation of human clonogenic common myeloid progenitors.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 99 (18), 11872-11877 (2002).</li><li>Kondo, M., Weissman, I. L., Akashi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+clonogenic+common+lymphoid+progenitors+in+mouse+bone+marrow.">Identification of clonogenic common lymphoid progenitors in mouse bone marrow.</a> Cell. 91 (5), 661-672 (1997).</li><li>Seita, J., Weissman, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematopoietic+stem+cell:+self-renewal+versus+differentiation.">Hematopoietic stem cell: self-renewal versus differentiation.</a> Wiley Interdisciplinary Reviews: Systems Biology and Medicine. 2 (6), 640-653 (2010).</li><li>Haas, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation-Induced+Emergency+Megakaryopoiesis+Driven+by+Hematopoietic+Stem+Cell-like+Megakaryocyte+Progenitors.">Inflammation-Induced Emergency Megakaryopoiesis Driven by Hematopoietic Stem Cell-like Megakaryocyte Progenitors.</a> Cell Stem Cell. 17 (4), 422-434 (2015).</li><li>Sanjuan-Pla, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet-biased+stem+cells+reside+at+the+apex+of+the+haematopoietic+stem-cell+hierarchy.">Platelet-biased stem cells reside at the apex of the haematopoietic stem-cell hierarchy.</a> Nature. 502 (7470), 232-236 (2013).</li><li>Bender, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+analysis+and+characterization+of+CD34++cells+from+normal+human+bone+marrow,+cord+blood,+peripheral+blood,+and+mobilized+peripheral+blood+from+patients+undergoing+autologous+stem+cell+transplantation.">Phenotypic analysis and characterization of CD34+ cells from normal human bone marrow, cord blood, peripheral blood, and mobilized peripheral blood from patients undergoing autologous stem cell transplantation.</a> Clinical Immunology and Immunopathology. 70 (1), 10-18 (1994).</li><li>Fritsch, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+composition+of+CD34+subpopulations+differs+between+bone+marrow,+blood+and+cord+blood.">The composition of CD34 subpopulations differs between bone marrow, blood and cord blood.</a> Bone Marrow Transplantation. 17 (2), 169-178 (1996).</li><li>Nimgaonkar, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+unique+population+of+CD34++cells+in+cord+blood.">A unique population of CD34+ cells in cord blood.</a> Stem Cells. 13 (2), 158-166 (1995).</li><li>Hordyjewska, A., Popiolek, L., Horecka, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+hematopoietic+stem+cells+of+umbilical+cord+blood.">Characteristics of hematopoietic stem cells of umbilical cord blood.</a> Cytotechnology. 67 (3), 387-396 (2015).</li><li>Bapat, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myeloid+Disease+Mutations+of+Splicing+Factor+SRSF2+Cause+G2-M+Arrest+and+Skewed+Differentiation+of+Human+Hematopoietic+Stem+and+Progenitor+Cells.">Myeloid Disease Mutations of Splicing Factor SRSF2 Cause G2-M Arrest and Skewed Differentiation of Human Hematopoietic Stem and Progenitor Cells.</a> Stem Cells. 36, 1-13 (2018).</li><li>Yip, B. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+U2AF1S34F+mutation+induces+lineage-specific+splicing+alterations+in+myelodysplastic+syndromes.">The U2AF1S34F mutation induces lineage-specific splicing alterations in myelodysplastic syndromes.</a> Journal of Clinical Investigation. 127 (6), 2206-2221 (2017).</li><li>Yoo, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myeloid+differentiation+of+human+cord+blood+CD34++cells+during+ex+vivo+expansion+using+thrombopoietin,+flt3-ligand+and/or+granulocyte-colony+stimulating+factor.">Myeloid differentiation of human cord blood CD34+ cells during ex vivo expansion using thrombopoietin, flt3-ligand and/or granulocyte-colony stimulating factor.</a> British Journal of Haematology. 105 (4), 1034-1040 (1999).</li><li>Hao, Q. L., Smogorzewska, E. M., Barsky, L. W., Crooks, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+identification+of+single+CD34+CD38-+cells+with+both+lymphoid+and+myeloid+potential.">In vitro identification of single CD34+CD38- cells with both lymphoid and myeloid potential.</a> Blood. 91 (11), 4145-4151 (1998).</li><li>Moretta, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+generation+of+human+innate+lymphoid+cells+is+influenced+by+the+source+of+hematopoietic+stem+cells+and+by+the+use+of+G-CSF.">The generation of human innate lymphoid cells is influenced by the source of hematopoietic stem cells and by the use of G-CSF.</a> European Journal of Immunology. 46 (5), 1271-1278 (2016).</li><li>Sanz, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ordering+human+CD34+CD10-CD19++pre/pro-B-cell+and+CD19-+common+lymphoid+progenitor+stages+in+two+pro-B-cell+development+pathways.">Ordering human CD34+CD10-CD19+ pre/pro-B-cell and CD19- common lymphoid progenitor stages in two pro-B-cell development pathways.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (13), 5925-5930 (2010).</li><li>Egeland, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myeloid+differentiation+of+purified+CD34++cells+after+stimulation+with+recombinant+human+granulocyte-monocyte+colony-stimulating+factor+(CSF),+granulocyte-CSF,+and+interleukin-3.">Myeloid differentiation of purified CD34+ cells after stimulation with recombinant human granulocyte-monocyte colony-stimulating factor (CSF), granulocyte-CSF, and interleukin-3.</a> Blood. 78 (12), 3192-3199 (1991).</li><li>Ogawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+and+proliferation+of+hematopoietic+stem+cells.">Differentiation and proliferation of hematopoietic stem cells.</a> Blood. 81 (11), 2844-2853 (1993).</li><li>Perdomo, J., Yan, F., Leung, H. H. L., Chong, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Megakaryocyte+Differentiation+and+Platelet+Formation+from+Human+Cord+Blood-derived+CD34++Cells.">Megakaryocyte Differentiation and Platelet Formation from Human Cord Blood-derived CD34+ Cells.</a> Journal of Visualized Experiments. (130), e56420 (2017).</li><li>Palii, C. G., Pasha, R., Brand, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lentiviral-mediated+knockdown+during+ex+vivo+erythropoiesis+of+human+hematopoietic+stem+cells.">Lentiviral-mediated knockdown during ex vivo erythropoiesis of human hematopoietic stem cells.</a> Journal of Visualized Experiments. (53), e2813 (2011).</li><li>Davies, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silencing+of+ASXL1+impairs+the+granulomonocytic+lineage+potential+of+human+CD34(+)+progenitor+cells.">Silencing of ASXL1 impairs the granulomonocytic lineage potential of human CD34(+) progenitor cells.</a> British Journal of Haematology. 160 (6), 842-850 (2013).</li><li>Caceres, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TP53+suppression+promotes+erythropoiesis+in+del(5q)+MDS,+suggesting+a+targeted+therapeutic+strategy+in+lenalidomide-resistant+patients.">TP53 suppression promotes erythropoiesis in del(5q) MDS, suggesting a targeted therapeutic strategy in lenalidomide-resistant patients.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (40), 16127-16132 (2013).</li><li>Shi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ASXL1+plays+an+important+role+in+erythropoiesis.">ASXL1 plays an important role in erythropoiesis.</a> Scientific Reports. 6, 28789 (2016).</li><li>Mazumdar, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukemia-Associated+Cohesin+Mutants+Dominantly+Enforce+Stem+Cell+Programs+and+Impair+Human+Hematopoietic+Progenitor+Differentiation.">Leukemia-Associated Cohesin Mutants Dominantly Enforce Stem Cell Programs and Impair Human Hematopoietic Progenitor Differentiation.</a> Cell Stem Cell. 17 (6), 675-688 (2015).</li><li>Chung, K. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enforced+expression+of+an+Flt3+internal+tandem+duplication+in+human+CD34++cells+confers+properties+of+self-renewal+and+enhanced+erythropoiesis.">Enforced expression of an Flt3 internal tandem duplication in human CD34+ cells confers properties of self-renewal and enhanced erythropoiesis.</a> Blood. 105 (1), 77-84 (2005).</li><li>Ambrosini, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-1beta+inhibits+ILC3+while+favoring+NK-cell+maturation+of+umbilical+cord+blood+CD34(+)+precursors.">IL-1beta inhibits ILC3 while favoring NK-cell maturation of umbilical cord blood CD34(+) precursors.</a> European Journal of Immunology. 45 (7), 2061-2071 (2015).</li><li>Batard, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGF-(beta)1+maintains+hematopoietic+immaturity+by+a+reversible+negative+control+of+cell+cycle+and+induces+CD34+antigen+up-modulation.">TGF-(beta)1 maintains hematopoietic immaturity by a reversible negative control of cell cycle and induces CD34 antigen up-modulation.</a> Journal of Cell Science. 113, 383-390 (2000).</li><li>Huang, N., Lou, M., Liu, H., Avila, C., Ma, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+potent+small+molecule+capable+of+regulating+polyploidization,+megakaryocyte+maturation,+and+platelet+production.">Identification of a potent small molecule capable of regulating polyploidization, megakaryocyte maturation, and platelet production.</a> Journal of Hematology &amp; Oncology. 9 (1), 136 (2016).</li></ol>

Het hier beschreven protocol is geschikt voor ex-vivo-differentiatie van UCB afgeleide CD34+ hspc's tot de vier myeloïde lijn afstanden. De initiële incubatie met een cytokine mix bestaande uit SCF, TPO, Flt3L en IL3 stimuleert de CD34+ cellen. Vervolgens wordt differentiatie gerealiseerd met een cocktail van SCF, IL3, Flt3L, EPO en TPO. In deze mix zijn SCF, IL3 en Flt3L belangrijk voor overleving en proliferatie van CD34+ hscs. EPO en TPO bevorderen differentiatie ten opzichte van ery...

Normale differentiatie van hematopoietische stamcellen (HSCs) is van cruciaal belang voor het behoud van fysiologische niveaus van alle bloedcellen. Tijdens de differentiatie, in een gecoördineerde reactie op extracellulaire signalen, waaronder groeifactoren en cytokines, geven hscs eerst aanleiding tot multipotente voorlopercellen (MPP) die LYMPHO-myeloïde potentiaal hebben1,2,3 ,4 (Figuur 1). Mpp's geven aanleiding tot gemeenschappelijke myeloïde voorlopercellen (CMPs) en gemeenschappelijke lymfoïde voorlopercellen (Clp's) die afstamming-beperkt zijn. CLPs differentiëren in de lymfoïde lijn afstanden die bestaan uit B, T en Natural killer cellen. CMPs genereren de myeloïde lijn door twee beperktere voorlopercellen, Megakaryocyt erytroïde voorlopercellen (EP-leden) en granulocyt monocyt-voor ouders (GMPs). Europarlementsleden geven aanleiding tot megakaryocyten en erytrocyten, terwijl Gmp's aanleiding geven tot granulocyten en monoytes. Naast het ontstaan via CMPS, zijn er ook megakaryocyten gemeld om zich rechtstreeks te voordoen bij hscs of vroege mpp's via niet-canonieke trajecten5,6.
Hematopoietische stam en voorlopercellen (Hspc's) worden gekenmerkt door de oppervlakte marker CD34 en het ontbreken van Lineage specifieke markers (Lin-). Andere oppervlakte markeringen die vaak worden gebruikt om HSCs-en myeloïde voorlopercellen te onderscheiden, zijn onder andere CD38, CD45RA en CD1232 (Figuur 1). HSCs en MPPs zijn respectievelijk Lin-/Cd34+/cd38- en Lin-/cd34+/cd38+. Myeloïde gepleegde voorlopercellen worden gekenmerkt door de aanwezigheid of afwezigheid van CD45RA en CD123. CMPS zijn Lin-/cd34+/cd38+/cd45ra-/cd123lo, gmps zijn Lin-/cd34+/cd38+/cd45ra+/cd123lo, en Europarlementsleden zijn Lin-/cd34+ /Cd38+/Cd45ra-/cd123-.
De totale populatie van CD34+ stam-en voorlopercellen kan worden verkregen uit humaan navelstreng bloed (UCB), beenmerg en perifeer bloed. CD34+ cellen vormen 0,02% tot 1,46% van de totale mononucleaire cellen (mnc's) in menselijke UCB, terwijl hun percentage tussen 0,5% en 5,3% in het beenmerg varieert en veel lager is bij ~ 0,01% in perifeer bloed7,8,9 . Het proliferatieve vermogen en het differentiatie potentieel van CD34+ cellen van UCB is significant hoger dan die van het beenmerg of perifere bloedcellen1,10, waardoor een duidelijk voordeel wordt verkregen voor het verkrijgen van voldoende materiaal voor moleculaire analysen in combinatie met het uitvoeren van immunophenotypische en morfologische karakterisering van de cellen tijdens differentiatie.
Ex vivo differentiatie van navelstreng bloed afgeleid CD34+ hspcs is een breed toegepast model voor het onderzoeken van normale hematopoiese en hematopoietische ziekte mechanismen. Wanneer gekweekt met de juiste cytokines, kunnen de UCB CD34+ hspc's worden geïnduceerd om te differentiëren langs de myeloïde of lymfoïde lijn11,12,13,14,15 , 16. hier beschrijven we protocollen voor isolatie en immunophenotypische karakterisering van de CD34+ hspc's van menselijke UCB, en voor hun differentiatie aan myeloïde Lineage cellen. Dit cultuur systeem is gebaseerd op cytokine-geïnduceerde differentiatie van Hspc's in de aanwezigheid van MS-5 stromale cellen om de micro-omgeving in beenmerg na te bootsen. De cultuuromstandigheden veroorzaken een initiële expansie van de CD34+ cellen, gevolgd door hun differentiatie naar cellen die de markers voor de vier myeloïde Lineage cellen uitdrukken, namelijk granulocyten (CD66b), MONOCYTEN (CD14), megakaryocyten (CD41), en erytrocyten (CD235a). Toepassingen van de CD34+ Cell differentiatie protocol omvatten studies over moleculaire mechanismen reguleren van hematopoiese, en onderzoeken van de gevolgen van de myeloïde ziekte geassocieerde mutaties en kleine moleculen op zelf vernieuwing en differentiatie van Hspc's.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:785px;" width="786">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">0.4% Trypan blue solution</td>
			<td style="width:112px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">15250-061</td>
			<td style="width:339px;">Dilute working stock to 0.2% in sterile 1x PBS</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">0.5 M UltraPure Ethylene diamine tetra acetic acid, pH 8.0</td>
			<td style="width:112px;">Gibco&#160;</td>
			<td style="width:119px;">15575-038</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">10x Hanks Balanced Salt Solution (HBSS)</td>
			<td style="width:112px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">14185052</td>
			<td style="width:339px;">Dilute to 1x with sterile distilled water &#38; pH to 7.2</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">2.5% Trypsin, no phenol red</td>
			<td style="width:112px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">15090046</td>
			<td style="width:339px;">Dilute working stock to 1x with sterile 1x PBS</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">30 &#181;m Pre-separation filters</td>
			<td style="width:112px;">Miltenyi biotech</td>
			<td style="width:119px;">130-041-407</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">35% sterile Bovine serum albumin</td>
			<td style="width:112px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">A7979</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">7-AAD</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">420404</td>
			<td style="width:339px;">Used as a live/dead stain to eliminate dead cells from FACS analysis</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD10-FITC antibody (Clone HI10a)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">312207</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Anti-human CD11b-FITC (activated) antibody (Clone CBRM1/5)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">301403</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:5 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD123-APC antibody (Clone 6H6)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">306012</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD14-PE antibody (Clone M5E2)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">301806</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD19-FITC antibody (Clone 4G7)</td>
			<td style="width:112px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">347543</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:5 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD235a-APC antibody (Clone GA-R2 (HIR2))</td>
			<td style="width:112px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">551336</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD235a-FITC antibody (Clone HIR2)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">306609</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:50 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD34-APC-Cy7 antibody (Clone 581)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">343514</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD38-PE antibody (Clone HIT2)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">303506</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD3-FITC antibody (Clone UCHT1)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">300405</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD41a-PerCP-Cy5.5 antibody (Clone HIP8)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">303720</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD45Ra-PE-Cy7 antibody (Clone HI100)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">304126</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD66b-PE-Cy7 antibody (Clone G10F5)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">305116</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD7-FITC antibody (Clone CD7-6B7)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">343103</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td style="width:112px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">BP231-100</td>
			<td style="width:339px;">Filter sterilize before use</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Dulbecco&#8217;s Modified Eagle Medium (DMEM) powder with L-Glutamine&#160;</td>
			<td style="width:112px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">12100046</td>
			<td style="width:339px;">Reconstitute 1 packet to make 1 L of DMEM media&#160; with sodium bicarbonate, 10% FBS &#38; 1% penicillin &#38; streptomycin&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Fetal bovine serum, Australian source, heat inactivated</td>
			<td style="width:112px;">Omega Scientific</td>
			<td style="width:119px;">FB-22 Lot #609716</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Human CD34 microbead kit&#160;</td>
			<td style="width:112px;">Miltenyi biotech</td>
			<td style="width:119px;">130-046-702</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Human Thrombopoietin (TPO), research grade</td>
			<td style="width:112px;">Miltenyi biotech</td>
			<td style="width:119px;">130-094-011</td>
			<td style="width:339px;">Make a stock of 100 &#181;g/mL in 1x PBS + 0.1% BSA. Use 50 ng/mL for both myeloid differentiation &#38; stimulation medium</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">L-Glutamine</td>
			<td style="width:112px;">Omega Scientific</td>
			<td style="width:119px;">GS-60</td>
			<td style="width:339px;">2 mM concentration in stimulation medium</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">LS Columns</td>
			<td style="width:112px;">Miltenyi biotech</td>
			<td style="width:119px;">130-042-401</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">MACS Multi stand</td>
			<td style="width:112px;">Miltenyi biotech</td>
			<td style="width:119px;">130-042-303</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">MidiMACS magnetic separator</td>
			<td style="width:112px;">Miltenyi biotech</td>
			<td style="width:119px;">130-042-302</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">MNC fractionation media (Ficol-Paque PLUS)</td>
			<td style="width:112px;">GE Healthcare Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">17-1440-03</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">MS-5 cells</td>
			<td style="width:112px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:339px;">Gift from the laboratory of Gay Crooks, UCLA</td>
		</tr>
		<tr height="148">
			<td height="148" style="height:148px;width:216px;">Paraformaldehyde</td>
			<td style="width:112px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P6148</td>
			<td style="width:339px;">Heat 800 mL of 1x PBS in a glass beaker on a stir plate in a chemical hood to ~65 &#176;C. Add 10 g of paraformaldehyde powder. To completely dissolve the paraformaldehyde, raise the pH by adding 1 N NaOH. Cool and filter the solution and make up the volume to 1 L with 1x PBS. Adjust the pH to 7.2.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Penicillin &#38; Streptomycin</td>
			<td style="width:112px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P4458-100ml</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Poly-L lysine</td>
			<td style="width:112px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P2636</td>
			<td style="width:339px;">Make a 10 mg/mL stock in 1x PBS</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Recombinant human erythropoietin-alpha (rHu EPO-&#945;)</td>
			<td style="width:112px;">BioBasic</td>
			<td style="width:119px;">RC213-15</td>
			<td style="width:339px;">Make a stock of 2000 units/mL in 1x PBS + 0.1% BSA. Use 4 units/mL for myeloid differentiation</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Recombinant human fibronectin fragment (RetroNectin)</td>
			<td style="width:112px;">Takara&#160;</td>
			<td style="width:119px;">T100B</td>
			<td style="width:339px;">Use 20 &#181;g/mL diluted in sterile 1x PBS to coat wells prior to stimulation of CD34+ HSCs.</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Recombinant human Flt-3 ligand (rHu Flt-3L)</td>
			<td style="width:112px;">BioBasic</td>
			<td style="width:119px;">RC214-16</td>
			<td style="width:339px;">Make a stock of 100 &#181;g/mL in 1x PBS + 0.1% BSA. Use 5 ng/mL for myeloid differentiation &#38; 50 ng/mL in stimulation medium</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Recombinant human interleukin-3 (rHu IL-3)</td>
			<td style="width:112px;">BioBasic</td>
			<td style="width:119px;">RC212-14</td>
			<td style="width:339px;">Make a stock of 100 &#181;g/mL in 1x PBS + 0.1% BSA. Use 5 ng/mL for myeloid differentiation &#38; 20 ng/mL in stimulation medium</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Recombinant human stem cell factor (rHu SCF)</td>
			<td style="width:112px;">BioBasic</td>
			<td style="width:119px;">RC213-12</td>
			<td style="width:339px;">Make a stock of 100 &#181;g/mL in 1x PBS + 0.1% BSA. Use 5 ng/mL for myeloid differentiation &#38; 50 ng/mL in stimulation medium</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Serum free medium (X-Vivo-15)</td>
			<td style="width:112px;">Lonza&#160;</td>
			<td style="width:119px;">04-418Q</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Sodium bicarbonate</td>
			<td style="width:112px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">BP328-500</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Wright-Giemsa stain, modified</td>
			<td style="width:112px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">WG16-500</td>
			<td style="width:339px;">Use according to manufacturer&#39;s instructions</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Equipment&#160;</td>
			<td style="width:112px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">BD LSR II flow cytometer</td>
			<td style="width:112px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:112px;">Sorvall Legend RT</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Light microscope</td>
			<td style="width:112px;">Olympus</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

pan-myeloid differentiation of human cord blood derived cd34+ hematopoietic stem and progenitor cells

Ex vivo differentiatie van menselijke hematopoietische stamcellen is een veel gebruikt model voor het bestuderen van hematopoiese. Het protocol dat hier wordt beschreven, is voor cytokine geïnduceerde differentiatie van CD34+ hematopoietische stam en voorlopercellen tot de vier myeloïde Lineage cellen. CD34+ cellen zijn geïsoleerd van humaan navelstreng bloed en co-gekweekt met MS-5 stromale cellen in de aanwezigheid van cytokines. Immunophenotypische karakterisering van de stam-en voorlopercellen, en de gedifferentieerde myeloïde Lineage cellen worden beschreven. Met behulp van dit protocol, kunnen CD34+ cellen worden geïnineerd met kleine moleculen of met lentivirussen worden weergegeven om myeloïde mutaties uit te drukken om hun impact op myeloïde differentiatie te onderzoeken.

Toepassing van de bovenstaande protocollen levert 5,6 (± 0,5) x 108 mncs en 1 (± 0,3) x 106 CD34+ cellen uit een snoer bloed eenheid van ~ 100 ml. Het percentage van de totale CD34+ cellen varieert tussen 80-90% (afbeelding 2A, B). Immunophenotypic analyse door de door Manz et al.5 beschreven regeling toont aan dat de CD34+ cellen doorgaans bestaan uit ~ 20% hscs en ~ 72% MPPs die Lin-</sup...

Watch this Scientific Journal Video about Pan-myeloid Differentiation of Human Cord Blood Derived CD34+ Hematopoietic Stem and Progenitor Cells at JoVE.com

Pan-myeloid Differentiation of Human Cord Blood Derived CD34+ Hematopoietic Stem and Progenitor Cells

Hier presenteren we een protocol voor immunophenotypic karakterisering en cytokine geïnduceerde differentiatie van snoer bloed afgeleide CD34+ hematopoietische stam en voorlopercellen tot de vier myeloïde lijn. De toepassingen van dit protocol omvatten onderzoeken naar het effect van myeloïde ziekte mutaties of kleine moleculen op myeloïde differentiatie van de CD34+ cellen.

Pan-myeloïde differentiatie van menselijk snoer bloed afgeleid CD34+ hematopoietische stam en voorlopercellen

Ex vivo differentiation of human hematopoietic stem cells is a widely used model for studying hematopoiesis. The protocol described here is for cytokine ...

Dit protocol kan worden gebruikt om de moleculaire en cellulaire veranderingen te bestuderen die optreden tijdens de normale myeloïde differentiatie van menselijke CD34 positieve aambeienstam en voorlopercellen. Het belangrijkste voordeel van dit protocol is dat het de differentiatie van CD34 positieve cellen langs alle vier myeloïde afstammingen met inbegrip van megakaryocyten, erythrocyten, granulocyten, en monocyten toestaat. Het aantonen van de procedure zal Aditi Bapat zijn, een post-doc van mijn laboratorium.Voor mononucleaire celisolatie van een menselijk navelstrengbloedmonster steriliseert u het buitenoppervlak van een zak navelstrengbloed met 70% ethanol voordat de inhoud van de zak wordt overgebracht naar een steriele plastic fles van 250 milliliter in een biologische veiligheidskast. Verdun het bloed met een gelijk volume van kamertemperatuur Hank's gebufferde zoutoplossing, en voeg 15 milliliter mononucleaire celfractionmedium toe aan elk van de vijf steriele 50 milliliter conische buizen. Na het zachte mengen, voorzichtig giet 30 milliliter van de verdunde navelstrengbloed op de mononucleaire fractionering medium in elke buis, waarbij de 50 milliliter buizen onder een hoek om te voorkomen dat het mengen van de lagen.Scheid de cellen door dichtheidsgradiëntcentrifugatie en verwijder de top 15 tot 20 milliliter plasma boven de mononucleaire cellaag. Gebruik een pipet om de blootgestelde mononucleaire cellaag zorgvuldig over te brengen in een nieuwe buis van 50 milliliter, de mononucleaire cellen van twee tot drie buizen samen te voegen en het uiteindelijke volume in elke buis tot 50 milliliter met koude PBE-buffer te brengen. Pellet de mononucleaire celmonsters door centrifugatie, en aspirate de supernatants.Tik op elke buis voorzichtig om de celpellets los te maken, en verdun de pellets in vijf milliliter van ijskoude PBE buffer. Combineer de cellen van drie tot vier buizen in een 50 milliliter conische buis, en was alle buizen met vijf milliliter verse PBE buffer om eventuele resterende cellen te verzamelen. Breng na het tellen het uiteindelijke volume in de buis tot 50 milliliter met verse ijskoude PBE-buffer en verzamel de cellen door centrifugatie.Om de cd34 positieve mononucleaire cellen te isoleren, schort u de pellet opnieuw op in 50 milliliter verse PBE-buffer voordat u de cellen met een andere centrifugatie verzamelt. Na het weggooien van de supernatant, tik voorzichtig om de pellet los te maken, en opnieuw op te schorten de cellen op een een keer 10 tot de acht mononucleaire cellen per 300 microliters van ijskoude PBE buffer concentratie. Blokkeer een niet-specifieke binding met 100 microliters van Fc receptor blokkeren reagens, meng zachtjes, en voeg vervolgens 100 microliters van CD34 microbeads van een magnetische geactiveerde cel-sorterende menselijke CD34 microbead kit per een keer 10 aan de acht cellen met zachte mengen, en broeden de cellen gedurende 30 minuten op vier graden Celsius.Terwijl de cellen uitbroeden, plaatst u een LS-kolom en voorscheidingsfilter in een magnetisch veld van MACS-separator. Equilibrate de kolom met twee milliliter ijskoude PBE buffer en de pre-scheiding filter met een milliliter buffer. Laat de kolom legen in een conische buis van 15 milliliter en gooi de doorstroom weg.Breng aan het einde van de incubatie het uiteindelijke volume van het mononucleaire celmonster tot 15 milliliter met verse ijskoude PBE-buffer en sediment de cellen door middel van centrifugatie. Hang de pellet opnieuw op in een milliliter ijskoude PBE-buffer en laad de cellen op het voorscheidingsfilter op de kolom. Spoel de buis met drie milliliter verse ijskoude PBE buffer en voeg de buffer toe aan het voorscheidingsfilter.Was de kolom vier keer met nog eens drie milliliter ijskoude PBE-buffer per wasbeurt zonder filter, waardoor de kolom volledig kan uitlekken tussen elke wasbeurt. Na de laatste wasbeurt, zet de kolom in een nieuwe 15 milliliter buis, en duik vijf milliliter verse ijskoude PBE door de kolom in de buis. Om de fracties van stam en voorloperpopulaties in de vers geïsoleerde CD34 positieve hematopoietische stam- en voorlopercellen te bepalen, verzamelt u de cellen door centrifugatie en schorten u de pellet één keer 10 tot de zes cellen per 50 microliter stroom cytometriebufferconcentratie op.Breng vervolgens de cellen over in 50 microliter aliquots per vijf milliliter fluorescentie geactiveerde celsorling buis volgens de experimentele stroom cytometrie kleuring protocol. Voeg de juiste antilichaamcocktail en levende/dode vlekken toe aan de cellen, waarbij het volume wordt aangepast aan 100 totale microliter. Na 20 minuten in het donker beschermd tegen licht, was de cellen met een milliliter verse stroom cytometrie buffer per buis, en opnieuw op te schorten de cellen in 500 microliters van verse stroom cytometrie buffer per buis.Analyseer vervolgens de cellen op een stroomcytometer volgens standaardstroomcytometrische protocollen. Om de microbead geïsoleerde CD34 positieve stam en voorloper cellen te onderscheiden in myeloïde lijncellen, eerst de vacht van de putten van een steriele, ongecoate 48-put plaat met 200 microliters per put van recombinant menselijke fibronectine oplossing in PBS gedurende twee uur bij kamertemperatuur. Gooi aan het einde van de incubatie de fibronectine-oplossing uit elke put en blokkeer de putten met 200 microliters van 2%runderserum albumine.Na 30 minuten op kamertemperatuur, was de putten twee keer met 500 microliter steriele PBS per wasbeurt. Stel de vers geïsoleerde CD34-positieve cellen opnieuw op met een vijf keer 10 van de vijf cellen per milliliter warme stimulatiemediumconcentratie. Vervolgens zaad 200 microliter cellen in elke put van de fibronectine fragment gecoate plaat en plaats de plaat in de celcultuur incubator voor 48 uur.Aan het einde van de incubatie, verzamel de cellen met zachte pipetting, en was de putten met 500 microliters van opgewarmde Dulbecco's gemodificeerde Eagle medium, het bundelen van de wasbeurt met de cel suspensie. Na het tellen, opnieuw schorsen van de cellen op een 2,5 keer 10 tot de vier cellen per een milliliter van myeloïde differentiatie gemiddelde concentratie. Laag 200 microliter van CD34 positieve cellen per put in een MS-5 stromal cel gezaaid 48 goed weefsel kweekplaat.Plaats vervolgens de plaat in de celcultuur incubator, voorzichtig vervangen van 100 microliter van de supernatant in elke put met 100 microliters van verse 2X myeloïde differentiatie medium om de drie tot vier dagen. Oogst op dag 21 de cellen voor analyse van de myeloïde lijnmarkeringsmarkeringsexpressie door stromingscytometrie zoals zojuist is aangetoond. Het typische percentage van de totale CD34 positieve cellen geïsoleerd uit navelstrengbloed door microbead scheiding zoals aangetoond varieert tussen 80 tot 90%Immunophenotypic analyse blijkt dat deze CD34 positieve cellen meestal bestaan uit een ongeveer 20%lijn negatieve CD34 positieve CD38 negatieve hematopoietische stamcel populatie en een 72% afstamming negatieve CD34 positieve CD38 multi-potente progenitor cel populatie.Binnen de multi-potente voorloper celpopulatie, ongeveer 25% van de cellen uitdrukken gemeenschappelijke myeloïde voorloper markers, ongeveer 15% express granulocyte monocyten voorloper markers, en ongeveer 56% express megakaryocyte erythroroid voorvader markers. Immunophenotypering toont ook aan dat het percentage cd34-positieve cellen vermindert van ongeveer 90% bij isolatie tot minder dan 25% op dag 21. Analyse van de CD34 negatieve populatie toont een gelijktijdige stijging van het percentage cellen uitdrukken volwassen myeloïde afstamming markers.Verder, Wright-Giemsa gekleurde cellen vertonen verschillende morfologische kenmerken op dag een en 21 met de ongedifferentieerde culturen vertonen grote, ronde kernen en zeer weinig cytoplasma en de gedifferentieerde culturen met morfologische kenmerken van afstamming cellen waaronder die monocyten, granulocyten, en erythroblasten. Vergeet niet om het verdunde navelstrengbloed op het mononucleaire celfractionmedium te gieten zonder de lagen te mengen en verstoor de ms-5- en CD34-positieve cellen niet bij het veranderen van het medium. Na dit differentiatieprotocol kunnen de CD34-positieve celculturen worden geanalyseerd op morfologische veranderingen, apoptotische effecten, veranderingen in celcycluspatronen en de mate van differentiatie.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Pan-myeloid Differentiation of Human Cord Blood Derived CD34+ Hematopoietic Stem and Progenitor Cells

Direct Induction of Human Neural Stem Cells from Peripheral Blood Hematopoietic Progenitor Cells

Direct Inductie van Human neurale stamcellen uit perifeer bloed hematopoïetische voorlopercellen

Human disease specific neuronal cultures are essential for generating in vitro models for human neurological diseases. However, the lack of access to ...

Isolation of Neural Stem/Progenitor Cells from the Periventricular Region of the Adult Rat and Human Spinal Cord

Isolatie van neurale stamcellen / stamcellen uit de periventriculaire regio van de volwassen rat en Human Spinal Cord

Adult rat and human spinal cord neural stem/progenitor cells (NSPCs) cultured in growth factor-enriched medium allows for the proliferation of ...

Isolation and Differentiation of Adipose-Derived Stem Cells from Porcine Subcutaneous Adipose Tissues

Isolatie en differentiatie van vetcellen afgeleide stamcellen uit Porcine Onderhuids vetweefsel

Obesity is an unconstrained worldwide epidemic. Unraveling molecular controls in adipose tissue development holds promise to treat obesity or diabetes. ...

Chondrogenic Differentiation Induction of Adipose-derived Stem Cells by Centrifugal Gravity

Chondrogene differentiatie Inductie van vetcellen afgeleide stamcellen door Centrifugaal Zwaartekracht

Impaired cartilage cannot heal naturally. Currently, the most advanced therapy for defects in cartilage is the transplantation of chondrocytes ...

Directed Differentiation of Primitive and Definitive Hematopoietic Progenitors from Human Pluripotent Stem Cells

Regie van differentiatie van primitieve en definitieve hematopoietische progenitorcellen van menselijke pluripotente stamcellen

One of the major goals for regenerative medicine is the generation and maintenance of hematopoietic stem cells (HSCs) derived from human pluripotent stem ...

Differentiating Chondrocytes from Peripheral Blood-derived Human Induced Pluripotent Stem Cells

Differentiatie van chondrocyten van perifere bloed afgeleide humane geïnduceerde pluripotente stamcellen

In this study, we used peripheral blood cells (PBCs) as seed cells to produce chondrocytes via induced pluripotent stem cells (iPSCs) in an ...

Chondrogenic Pellet Formation from Cord Blood-derived Induced Pluripotent Stem Cells

Chondrogenische Pelletvorming van Koord Bloed afgeleide geïnduceerde Pluripotente Stamcellen

Human articular cartilage lacks the ability to repair itself. Cartilage degeneration is thus treated not by curative but by conservative treatments. ...