Name: pan-myeloid differentiation of human cord blood derived cd34+ hematopoietic stem and progenitor cells
Uploaded: 2019-08-09T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Pan-myeloid Differentiation of Human Cord Blood Derived CD34+ Hematopoietic Stem and Progenitor Cells at JoVE.com

המחברים רוצים להודות וונדי בארט, רחל Caballero, וגבריאלה רואיז מחקלאות מערכות בריאות משולבות ליחידות דם טבורי מזוהה ותרם, Mrinalini קאלה לסיוע עם הזרימה cy, ו נוכלים גיי וכריסטופר Seet עבור עצה על בידול vivo מיאלואידית לשעבר. עבודה זו היתה נתמכת על ידי כספים כדי אס מ המכונים הלאומיים לבריאות (R21CA170786 ו R01GM127464) והחברה האמריקנית לסרטן (מענק המחקר המוסדי 74-001-34-IRG). התוכן הינו באחריות המחברים בלבד ואינו מייצג בהכרח את ההשקפות הרשמיות של המכון הלאומי לבריאות.

דם טבורי אנושי לניסויים נתרם על-ידי אנשים בריאים לאחר הסכמה מושכלת לחקלאות משולבת מערכות בריאות (MIHS), פיניקס. היחידות המזוהות הושגו באמצעות הסכם העברת חומרים בין MIHS לבין אוניברסיטת אריזונה.
1. ריאגנטים ומאגרים
הערה: הכינו את כל הריאגנטים והמאגרים בתנא...

<ol>
	<li>Hao, Q. L., Shah, A. J., Thiemann, F. T., Smogorzewska, E. M., Crooks, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+functional+comparison+of+CD34+++CD38-+cells+in+cord+blood+and+bone+marrow.">A functional comparison of CD34 + CD38- cells in cord blood and bone marrow.</a> Blood. 86 (10), 3745-3753 (1995).</li><li>Manz, M. G., Miyamoto, T., Akashi, K., Weissman, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+isolation+of+human+clonogenic+common+myeloid+progenitors.">Prospective isolation of human clonogenic common myeloid progenitors.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 99 (18), 11872-11877 (2002).</li><li>Kondo, M., Weissman, I. L., Akashi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+clonogenic+common+lymphoid+progenitors+in+mouse+bone+marrow.">Identification of clonogenic common lymphoid progenitors in mouse bone marrow.</a> Cell. 91 (5), 661-672 (1997).</li><li>Seita, J., Weissman, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematopoietic+stem+cell:+self-renewal+versus+differentiation.">Hematopoietic stem cell: self-renewal versus differentiation.</a> Wiley Interdisciplinary Reviews: Systems Biology and Medicine. 2 (6), 640-653 (2010).</li><li>Haas, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation-Induced+Emergency+Megakaryopoiesis+Driven+by+Hematopoietic+Stem+Cell-like+Megakaryocyte+Progenitors.">Inflammation-Induced Emergency Megakaryopoiesis Driven by Hematopoietic Stem Cell-like Megakaryocyte Progenitors.</a> Cell Stem Cell. 17 (4), 422-434 (2015).</li><li>Sanjuan-Pla, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet-biased+stem+cells+reside+at+the+apex+of+the+haematopoietic+stem-cell+hierarchy.">Platelet-biased stem cells reside at the apex of the haematopoietic stem-cell hierarchy.</a> Nature. 502 (7470), 232-236 (2013).</li><li>Bender, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+analysis+and+characterization+of+CD34++cells+from+normal+human+bone+marrow,+cord+blood,+peripheral+blood,+and+mobilized+peripheral+blood+from+patients+undergoing+autologous+stem+cell+transplantation.">Phenotypic analysis and characterization of CD34+ cells from normal human bone marrow, cord blood, peripheral blood, and mobilized peripheral blood from patients undergoing autologous stem cell transplantation.</a> Clinical Immunology and Immunopathology. 70 (1), 10-18 (1994).</li><li>Fritsch, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+composition+of+CD34+subpopulations+differs+between+bone+marrow,+blood+and+cord+blood.">The composition of CD34 subpopulations differs between bone marrow, blood and cord blood.</a> Bone Marrow Transplantation. 17 (2), 169-178 (1996).</li><li>Nimgaonkar, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+unique+population+of+CD34++cells+in+cord+blood.">A unique population of CD34+ cells in cord blood.</a> Stem Cells. 13 (2), 158-166 (1995).</li><li>Hordyjewska, A., Popiolek, L., Horecka, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+hematopoietic+stem+cells+of+umbilical+cord+blood.">Characteristics of hematopoietic stem cells of umbilical cord blood.</a> Cytotechnology. 67 (3), 387-396 (2015).</li><li>Bapat, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myeloid+Disease+Mutations+of+Splicing+Factor+SRSF2+Cause+G2-M+Arrest+and+Skewed+Differentiation+of+Human+Hematopoietic+Stem+and+Progenitor+Cells.">Myeloid Disease Mutations of Splicing Factor SRSF2 Cause G2-M Arrest and Skewed Differentiation of Human Hematopoietic Stem and Progenitor Cells.</a> Stem Cells. 36, 1-13 (2018).</li><li>Yip, B. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+U2AF1S34F+mutation+induces+lineage-specific+splicing+alterations+in+myelodysplastic+syndromes.">The U2AF1S34F mutation induces lineage-specific splicing alterations in myelodysplastic syndromes.</a> Journal of Clinical Investigation. 127 (6), 2206-2221 (2017).</li><li>Yoo, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myeloid+differentiation+of+human+cord+blood+CD34++cells+during+ex+vivo+expansion+using+thrombopoietin,+flt3-ligand+and/or+granulocyte-colony+stimulating+factor.">Myeloid differentiation of human cord blood CD34+ cells during ex vivo expansion using thrombopoietin, flt3-ligand and/or granulocyte-colony stimulating factor.</a> British Journal of Haematology. 105 (4), 1034-1040 (1999).</li><li>Hao, Q. L., Smogorzewska, E. M., Barsky, L. W., Crooks, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+identification+of+single+CD34+CD38-+cells+with+both+lymphoid+and+myeloid+potential.">In vitro identification of single CD34+CD38- cells with both lymphoid and myeloid potential.</a> Blood. 91 (11), 4145-4151 (1998).</li><li>Moretta, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+generation+of+human+innate+lymphoid+cells+is+influenced+by+the+source+of+hematopoietic+stem+cells+and+by+the+use+of+G-CSF.">The generation of human innate lymphoid cells is influenced by the source of hematopoietic stem cells and by the use of G-CSF.</a> European Journal of Immunology. 46 (5), 1271-1278 (2016).</li><li>Sanz, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ordering+human+CD34+CD10-CD19++pre/pro-B-cell+and+CD19-+common+lymphoid+progenitor+stages+in+two+pro-B-cell+development+pathways.">Ordering human CD34+CD10-CD19+ pre/pro-B-cell and CD19- common lymphoid progenitor stages in two pro-B-cell development pathways.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (13), 5925-5930 (2010).</li><li>Egeland, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myeloid+differentiation+of+purified+CD34++cells+after+stimulation+with+recombinant+human+granulocyte-monocyte+colony-stimulating+factor+(CSF),+granulocyte-CSF,+and+interleukin-3.">Myeloid differentiation of purified CD34+ cells after stimulation with recombinant human granulocyte-monocyte colony-stimulating factor (CSF), granulocyte-CSF, and interleukin-3.</a> Blood. 78 (12), 3192-3199 (1991).</li><li>Ogawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+and+proliferation+of+hematopoietic+stem+cells.">Differentiation and proliferation of hematopoietic stem cells.</a> Blood. 81 (11), 2844-2853 (1993).</li><li>Perdomo, J., Yan, F., Leung, H. H. L., Chong, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Megakaryocyte+Differentiation+and+Platelet+Formation+from+Human+Cord+Blood-derived+CD34++Cells.">Megakaryocyte Differentiation and Platelet Formation from Human Cord Blood-derived CD34+ Cells.</a> Journal of Visualized Experiments. (130), e56420 (2017).</li><li>Palii, C. G., Pasha, R., Brand, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lentiviral-mediated+knockdown+during+ex+vivo+erythropoiesis+of+human+hematopoietic+stem+cells.">Lentiviral-mediated knockdown during ex vivo erythropoiesis of human hematopoietic stem cells.</a> Journal of Visualized Experiments. (53), e2813 (2011).</li><li>Davies, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silencing+of+ASXL1+impairs+the+granulomonocytic+lineage+potential+of+human+CD34(+)+progenitor+cells.">Silencing of ASXL1 impairs the granulomonocytic lineage potential of human CD34(+) progenitor cells.</a> British Journal of Haematology. 160 (6), 842-850 (2013).</li><li>Caceres, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TP53+suppression+promotes+erythropoiesis+in+del(5q)+MDS,+suggesting+a+targeted+therapeutic+strategy+in+lenalidomide-resistant+patients.">TP53 suppression promotes erythropoiesis in del(5q) MDS, suggesting a targeted therapeutic strategy in lenalidomide-resistant patients.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (40), 16127-16132 (2013).</li><li>Shi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ASXL1+plays+an+important+role+in+erythropoiesis.">ASXL1 plays an important role in erythropoiesis.</a> Scientific Reports. 6, 28789 (2016).</li><li>Mazumdar, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukemia-Associated+Cohesin+Mutants+Dominantly+Enforce+Stem+Cell+Programs+and+Impair+Human+Hematopoietic+Progenitor+Differentiation.">Leukemia-Associated Cohesin Mutants Dominantly Enforce Stem Cell Programs and Impair Human Hematopoietic Progenitor Differentiation.</a> Cell Stem Cell. 17 (6), 675-688 (2015).</li><li>Chung, K. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enforced+expression+of+an+Flt3+internal+tandem+duplication+in+human+CD34++cells+confers+properties+of+self-renewal+and+enhanced+erythropoiesis.">Enforced expression of an Flt3 internal tandem duplication in human CD34+ cells confers properties of self-renewal and enhanced erythropoiesis.</a> Blood. 105 (1), 77-84 (2005).</li><li>Ambrosini, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-1beta+inhibits+ILC3+while+favoring+NK-cell+maturation+of+umbilical+cord+blood+CD34(+)+precursors.">IL-1beta inhibits ILC3 while favoring NK-cell maturation of umbilical cord blood CD34(+) precursors.</a> European Journal of Immunology. 45 (7), 2061-2071 (2015).</li><li>Batard, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGF-(beta)1+maintains+hematopoietic+immaturity+by+a+reversible+negative+control+of+cell+cycle+and+induces+CD34+antigen+up-modulation.">TGF-(beta)1 maintains hematopoietic immaturity by a reversible negative control of cell cycle and induces CD34 antigen up-modulation.</a> Journal of Cell Science. 113, 383-390 (2000).</li><li>Huang, N., Lou, M., Liu, H., Avila, C., Ma, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+potent+small+molecule+capable+of+regulating+polyploidization,+megakaryocyte+maturation,+and+platelet+production.">Identification of a potent small molecule capable of regulating polyploidization, megakaryocyte maturation, and platelet production.</a> Journal of Hematology &amp; Oncology. 9 (1), 136 (2016).</li></ol>

הפרוטוקול המתואר כאן מתאים הבידול vivo לשעבר של UCB נגזר CD34+ hspcs לארבע לינאיד מיאלואידית. הדגירה הראשונית עם תערובת cy, המורכב SCF, TPO, Flt3L ו IL3 מעוררת CD34+ תאים. לאחר מכן, הבידול מושגת עם קוקטייל של SCF, IL3, Flt3L, אריתרופואיטין ו TPO. בתמהיל זה, SCF, IL3, ו-Flt3L חשובים להישרדות והתפשטות של CD34+ HSCS. ?...

בידול רגיל של תאי גזע המטפאות (HSCs) הוא קריטי עבור תחזוקה של רמות פיזיולוגיות של כל תאי הדם הזמן. במהלך הבידול, בתגובה מתואמת כדי להביא רמזים מתוך כולל גורמי גדילה וציטוקינים, HSCs הראשון להצמיח לתאים רב-עוצמה (MPP) בתאי שיש להם פוטנציאל lympho-מיאלואידית1,2,3 ,4 (איור 1). MPPs להצמיח ושלתי מיאלואידית משותפת (CMPs) ו ושלתי הלימפה הנפוצות (CLPs) כי הם מוגבלים השושלת. CLPs להבדיל לתוך לתאי הלימפה המורכבת B, T, ואת התאים הטבעיים הרוצח. CMPs לייצר את לינאיד מיאלואידית באמצעות שתי אוכלוסיות מוגבלות יותר, מגקריוציט אריתרופואיד ושלתי (MEPs), ו גרנולוציט ושלתי (GMPs). MEPs להצמיח מגקריוציטים ו אריתרופוציטים, ואילו GMPs להצמיח גרנולוציטים ומונוציטים. בנוסף הנובעים דרך cmps, מגקריוציטים דווחו גם להתעורר ישירות מ HSCs או מוקדם mpps דרך שבילים לא קאנוניים5,6.
בתאי גזע ומחולל מצוי (HSPCs) מאופיינים על ידי סמן פני השטח CD34 וחוסר סמנים ספציפיים השושלת (לין-). סמנים פני השטח האחרים המועסקים בדרך כלל כדי להבחין בין אוכלוסיות HSCs ו מיאלואידית כוללות CD38, CD45RA, ו CD1232 (איור 1). HSCs ו-MPPs הם Lin-/cd34+/Cd38- ו-Lin-/cd34+/cd38+, בהתאמה. אוכלוסיית המייאלואיד המחויבת מאופיינת בנוכחות או היעדרות של CD45RA ו-CD123. Cmps הם lin-/cd34+/cd38+/cd45a-/cd123lo, gmps הם לין-/cd34+/cd38+/cd45a+/cd123lo, ו-meps הם לין-/cd34+ /Cd38+/cd45ra-/cd123-.
האוכלוסיה הכוללת של CD34+ גזע ותאים מחולל שיכול להיות מושגת בדם טבורי הטבורי דם (ucb), מח עצם, ו דם היקפי. CD34+ תאים מהווים 0.02% עד 1.46% של התאים הכולל של מונמונומנט (mncs) ב-ucb האנושיים, ואילו האחוזים שלהם משתנה בין 0.5% ל-5.3% במח העצם והוא נמוך בהרבה ב-~ 0.01% בדמו היקפי7,8,9 . היכולת ההתרבות והפוטנציאל לבידול של ucb נגזר CD34+ תאים הוא גבוה באופן משמעותי מזו של מח עצם או בתאי דם היקפיים1,10, ובכך מציע יתרון ייחודי להשגת חומר מספיק עבור ניתוחים מולקולריים בשילוב עם ביצוע האפיון אימונוopotypic ומורפולוגיים של התאים במהלך בידול.
Vivo הבדלה לשעבר של דם טבורי שנגזר CD34+ hspcs הוא מודל נרחב שהוחל לחקירת המטפיאה הרגילה ומנגנוני המחלה המטתית. כאשר מתורבתים עם ציטוקינים המתאים, ucb CD34+ hspcs יכול להיות המושרה להבדיל לאורך הלאואיד מיאלואידית או הלימפה11,12, 13,14,15 , 16. כאן, אנו מתארים פרוטוקולים לבידוד האפיון החיסונית של CD34+ hspcs מן האדם ucb, ועל הבידול שלהם לתאי השושלת המייאלואידית. מערכת זו של התרבות מבוססת על הבידול cy, המושרה על ידי HSPCs בנוכחות של התאים מסטרומה MS-5 לחקות את מיקרוסביבה במח העצם. תנאי התרבות לגרום התרחבות ראשונית של CD34+ תאים, ואחריו בידול שלהם לתאים המבטאים סמנים עבור ארבעה תאים השושלת מיאלואידית, כלומר גרנולוציטים (CD66b), מונוציטים (CD14), מגה קריוציטים (CD41), ו אריתרופוציטים (CD235a). יישומים של CD34+ תא בידול הפרוטוקול כוללים מחקרים על מנגנונים מולקולריים הוויסות המטטוזיס, וחקירות של ההשפעה של מחלות מיאלואידית הקשורים מוטציות ומולקולות קטנות על התחדשות עצמית ו בידול של HSPCs.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:785px;" width="786">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">0.4% Trypan blue solution</td>
			<td style="width:112px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">15250-061</td>
			<td style="width:339px;">Dilute working stock to 0.2% in sterile 1x PBS</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">0.5 M UltraPure Ethylene diamine tetra acetic acid, pH 8.0</td>
			<td style="width:112px;">Gibco&#160;</td>
			<td style="width:119px;">15575-038</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">10x Hanks Balanced Salt Solution (HBSS)</td>
			<td style="width:112px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">14185052</td>
			<td style="width:339px;">Dilute to 1x with sterile distilled water &#38; pH to 7.2</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">2.5% Trypsin, no phenol red</td>
			<td style="width:112px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">15090046</td>
			<td style="width:339px;">Dilute working stock to 1x with sterile 1x PBS</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">30 &#181;m Pre-separation filters</td>
			<td style="width:112px;">Miltenyi biotech</td>
			<td style="width:119px;">130-041-407</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">35% sterile Bovine serum albumin</td>
			<td style="width:112px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">A7979</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">7-AAD</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">420404</td>
			<td style="width:339px;">Used as a live/dead stain to eliminate dead cells from FACS analysis</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD10-FITC antibody (Clone HI10a)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">312207</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Anti-human CD11b-FITC (activated) antibody (Clone CBRM1/5)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">301403</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:5 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD123-APC antibody (Clone 6H6)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">306012</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD14-PE antibody (Clone M5E2)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">301806</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD19-FITC antibody (Clone 4G7)</td>
			<td style="width:112px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">347543</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:5 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD235a-APC antibody (Clone GA-R2 (HIR2))</td>
			<td style="width:112px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">551336</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD235a-FITC antibody (Clone HIR2)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">306609</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:50 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD34-APC-Cy7 antibody (Clone 581)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">343514</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD38-PE antibody (Clone HIT2)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">303506</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD3-FITC antibody (Clone UCHT1)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">300405</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD41a-PerCP-Cy5.5 antibody (Clone HIP8)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">303720</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD45Ra-PE-Cy7 antibody (Clone HI100)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">304126</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD66b-PE-Cy7 antibody (Clone G10F5)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">305116</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD7-FITC antibody (Clone CD7-6B7)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">343103</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td style="width:112px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">BP231-100</td>
			<td style="width:339px;">Filter sterilize before use</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Dulbecco&#8217;s Modified Eagle Medium (DMEM) powder with L-Glutamine&#160;</td>
			<td style="width:112px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">12100046</td>
			<td style="width:339px;">Reconstitute 1 packet to make 1 L of DMEM media&#160; with sodium bicarbonate, 10% FBS &#38; 1% penicillin &#38; streptomycin&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Fetal bovine serum, Australian source, heat inactivated</td>
			<td style="width:112px;">Omega Scientific</td>
			<td style="width:119px;">FB-22 Lot #609716</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Human CD34 microbead kit&#160;</td>
			<td style="width:112px;">Miltenyi biotech</td>
			<td style="width:119px;">130-046-702</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Human Thrombopoietin (TPO), research grade</td>
			<td style="width:112px;">Miltenyi biotech</td>
			<td style="width:119px;">130-094-011</td>
			<td style="width:339px;">Make a stock of 100 &#181;g/mL in 1x PBS + 0.1% BSA. Use 50 ng/mL for both myeloid differentiation &#38; stimulation medium</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">L-Glutamine</td>
			<td style="width:112px;">Omega Scientific</td>
			<td style="width:119px;">GS-60</td>
			<td style="width:339px;">2 mM concentration in stimulation medium</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">LS Columns</td>
			<td style="width:112px;">Miltenyi biotech</td>
			<td style="width:119px;">130-042-401</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">MACS Multi stand</td>
			<td style="width:112px;">Miltenyi biotech</td>
			<td style="width:119px;">130-042-303</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">MidiMACS magnetic separator</td>
			<td style="width:112px;">Miltenyi biotech</td>
			<td style="width:119px;">130-042-302</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">MNC fractionation media (Ficol-Paque PLUS)</td>
			<td style="width:112px;">GE Healthcare Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">17-1440-03</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">MS-5 cells</td>
			<td style="width:112px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:339px;">Gift from the laboratory of Gay Crooks, UCLA</td>
		</tr>
		<tr height="148">
			<td height="148" style="height:148px;width:216px;">Paraformaldehyde</td>
			<td style="width:112px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P6148</td>
			<td style="width:339px;">Heat 800 mL of 1x PBS in a glass beaker on a stir plate in a chemical hood to ~65 &#176;C. Add 10 g of paraformaldehyde powder. To completely dissolve the paraformaldehyde, raise the pH by adding 1 N NaOH. Cool and filter the solution and make up the volume to 1 L with 1x PBS. Adjust the pH to 7.2.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Penicillin &#38; Streptomycin</td>
			<td style="width:112px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P4458-100ml</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Poly-L lysine</td>
			<td style="width:112px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P2636</td>
			<td style="width:339px;">Make a 10 mg/mL stock in 1x PBS</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Recombinant human erythropoietin-alpha (rHu EPO-&#945;)</td>
			<td style="width:112px;">BioBasic</td>
			<td style="width:119px;">RC213-15</td>
			<td style="width:339px;">Make a stock of 2000 units/mL in 1x PBS + 0.1% BSA. Use 4 units/mL for myeloid differentiation</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Recombinant human fibronectin fragment (RetroNectin)</td>
			<td style="width:112px;">Takara&#160;</td>
			<td style="width:119px;">T100B</td>
			<td style="width:339px;">Use 20 &#181;g/mL diluted in sterile 1x PBS to coat wells prior to stimulation of CD34+ HSCs.</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Recombinant human Flt-3 ligand (rHu Flt-3L)</td>
			<td style="width:112px;">BioBasic</td>
			<td style="width:119px;">RC214-16</td>
			<td style="width:339px;">Make a stock of 100 &#181;g/mL in 1x PBS + 0.1% BSA. Use 5 ng/mL for myeloid differentiation &#38; 50 ng/mL in stimulation medium</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Recombinant human interleukin-3 (rHu IL-3)</td>
			<td style="width:112px;">BioBasic</td>
			<td style="width:119px;">RC212-14</td>
			<td style="width:339px;">Make a stock of 100 &#181;g/mL in 1x PBS + 0.1% BSA. Use 5 ng/mL for myeloid differentiation &#38; 20 ng/mL in stimulation medium</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Recombinant human stem cell factor (rHu SCF)</td>
			<td style="width:112px;">BioBasic</td>
			<td style="width:119px;">RC213-12</td>
			<td style="width:339px;">Make a stock of 100 &#181;g/mL in 1x PBS + 0.1% BSA. Use 5 ng/mL for myeloid differentiation &#38; 50 ng/mL in stimulation medium</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Serum free medium (X-Vivo-15)</td>
			<td style="width:112px;">Lonza&#160;</td>
			<td style="width:119px;">04-418Q</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Sodium bicarbonate</td>
			<td style="width:112px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">BP328-500</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Wright-Giemsa stain, modified</td>
			<td style="width:112px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">WG16-500</td>
			<td style="width:339px;">Use according to manufacturer&#39;s instructions</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Equipment&#160;</td>
			<td style="width:112px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">BD LSR II flow cytometer</td>
			<td style="width:112px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:112px;">Sorvall Legend RT</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Light microscope</td>
			<td style="width:112px;">Olympus</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

pan-myeloid differentiation of human cord blood derived cd34+ hematopoietic stem and progenitor cells

הvivo לשעבר של תאי גזע אנושיים המטבטיים הוא מודל נפוץ לחקר המטפיאה. הפרוטוקול המתואר כאן הוא עבור ציטוקינים המושרה הבידול של CD34+ המטפאות גזע ובתאי מחולל לארבעה תאים השושלת המייאלואידית. CD34+ תאים מבודדים דם טבורי הטבור האנושי ושיתוף תרבותי עם התאים MS-5 סטרומה בנוכחות של ציטוקינים. האפיון האימונוophenic של התאים גזע ומחולל קדמון, ואת התאים הבדיל מיאלואידית היוחסין מתוארים. באמצעות פרוטוקול זה, CD34+ תאים עשויים להיות מודבטים עם מולקולות קטנות או התמרה עם וירוסים כדי לבטא מוטציות המחלה מיאלואידית לחקור את השפעתם על בידול מיאלואידית.

היישום של הפרוטוקולים הנ ל תשואות 5.6 (± 0.5) x 108 mncs ו 1 (± 0.3) x 106 CD34+ תאים מיחידת דם טבורי של ~ 100 mL. האחוז של סך CD34+ תאים נע בין 80-90% (איור 2א, ב). ניתוח אימונוophenic באמצעות הערכה המתוארת על ידי Manz ואח '5 ממחיש כי התאים CD34+ בדרך כלל מכילים...

Watch this Scientific Journal Video about Pan-myeloid Differentiation of Human Cord Blood Derived CD34+ Hematopoietic Stem and Progenitor Cells at JoVE.com

Pan-myeloid Differentiation of Human Cord Blood Derived CD34+ Hematopoietic Stem and Progenitor Cells

כאן, אנו מציגים פרוטוקול עבור האפיון האימונוophenic ו ציטוקינים המושרה בידול של דם טבורי הנגזר CD34+ המטפאות גזע ותאים מחולל לארבעה הלישנים מיאלואידים. היישומים של פרוטוקול זה כוללים חקירות על ההשפעה של מוטציות המחלה מיאלואידית או מולקולות קטנות על הבידול מיאלואיד של CD34+ תאים.

פאן-מיאלואיד הבידול של האדם כבל דם נגזר CD34+ המטפאות גזע ותאים מחולל

Ex vivo differentiation of human hematopoietic stem cells is a widely used model for studying hematopoiesis. The protocol described here is for cytokine ...

פרוטוקול זה יכול לשמש כדי ללמוד את השינויים המולקולריים והתאיים המתרחשים במהלך הבידול המיאלואידי הרגיל של גזע hematopoietic חיובי CD34 ותאי אבי המין. היתרון העיקרי של פרוטוקול זה הוא שהוא מאפשר התביור של תאים חיוביים CD34 לאורך כל ארבעת שושלת מיאלואידים כולל megakaryocytes, אריתרוציטים, גרנולוציטים, מונוציטים. הדגימה של ההליך תהיה אדיטי באפט, פוסט-דוקטורט מהמעבדה שלי.לבידוד תאי מונונוקלארי מדגם דם טבור אנושי, יש לעקר את המשטח החיצוני של שקית דם טבור עם 70% אתנול לפני העברת תכולת השקית לבקבוק פלסטיק סטרילי של 250 מיליליטר בתוך ארון בטיחות ביולוגי. לדלל את הדם עם נפח שווה של טמפרטורת החדר תמיסת מלח במאגר של האנק, ולהוסיף 15 מיליליטר של שבר תאים חד גרעיניים בינוני לכל אחד מחמשת צינורות חרוט סטרילי 50 מיליליטר. לאחר ערבוב עדין, בזהירות לשפוך 30 מיליליטר של דם חבל הטבור מדולל על מדיום שבר mononuclear בכל צינור, מחזיק את צינורות 50 מיליליטר בזווית כדי לסייע במניעת ערבוב השכבות.להפריד את התאים על ידי צנטריפוגה הדרגתית צפיפות, ולהסיר את העליון 15 כדי 20 מיליליטר של פלזמה מעל שכבת התא mononuclear. השתמש פיפטה להעביר בזהירות את שכבת התא mononuclear חשוף לתוך צינור חדש 50 מיליליטר, צנרת התאים mononuclear משניים עד שלושה צינורות יחד, ולהביא את הנפח הסופי בכל צינור עד 50 מיליליטר עם חיץ PBE קר. גלולה דגימות תא mononuclear על ידי צנטריפוגה, ושואפים את supernatants.הקש על כל צינור בעדינות כדי לשחרר את כדורי התא, ולדלל את כדורי בחמישה מיליליטר של חיץ PBE קר כקרח. לשלב את התאים משלושה עד ארבעה צינורות לתוך צינור חרוט אחד 50 מיליליטר, ולשטוף את כל הצינורות עם חמישה מיליליטר של חיץ PBE טרי כדי לאסוף את כל התאים הנותרים. לאחר הספירה, להביא את הנפח הסופי בצינור עד 50 מיליליטר עם חיץ PBE קר קרח טרי, ולאסוף את התאים על ידי צנטריפוגה.כדי לבודד את התאים mononuclear חיובי CD34, להשעות מחדש את גלולה ב 50 מיליליטר של מאגר PBE טרי לפני איסוף התאים עם צנטריפוגה אחרת. לאחר השלכת supernatant, הקש בעדינות כדי לשחרר את גלולה, ולהשעות מחדש את התאים באחת פעמים 10 לשמונה תאים mononuclear לכל 300 microliters של ריכוז חיץ PBE קר כקרח. חסום כל כריכה לא ספציפית עם 100 מיקרוליטרים של קולטן Fc החוסם את הריאגנט, ערבב בעדינות ולאחר מכן הוסף 100 מיקרוליטרים של חיידקי CD34 מערכת מיקרוביאד אנושית למיון תאים מגנטיים ל- CD34 לכל אחד פעמים 10 לשמונה התאים עם ערבוב עדין, ודגירה של התאים במשך 30 דקות בארבע מעלות צלזיוס.בזמן שהתאים דגירה, מקם עמודת LS ומסנן טרום הפרדת צבע בשדה מגנטי מפריד MACS. לצייד את העמודה עם שני מיליליטר של חיץ PBE קר כקרח ואת המסנן לפני ההפרדה עם מיליליטר אחד של חיץ. אפשר לעמודה להתרוקן לתוך צינור חרוט 15 מיליליטר ולהשליך את הזרימה דרך.בסוף הדגירה, להביא את הנפח הסופי של דגימת תא mononuclear עד 15 מיליליטר עם חיץ PBE קר קרח טרי ומעים את התאים על ידי צנטריפוגה. להשעות מחדש את גלולה במיליליטר אחד של חיץ PBE קר כקרח טען את התאים על המסנן לפני ההפרדה על העמודה. שוטפים את הצינור בשלושה מיליליטר של חיץ PBE קר כקרח ומוסיפים את המאגר למסנן שלפני ההפרדה.לשטוף את העמוד ארבע פעמים עם שלושה מיליליטר נוספים של חיץ PBE קר כקרח לכל לשטוף ללא המסנן, המאפשר את העמודה לנקז באופן מלא בין כל לשטוף. לאחר הכביסה הסופית, להעביר את העמוד לתוך צינור חדש 15 מיליליטר, לצלול חמישה מיליליטר של PBE קר קרח טרי דרך העמוד לתוך הצינור. כדי לקבוע את שברי אוכלוסיות גזע וצאצאים בגזע cd34 חיובי מבודד ותאי ההמגניטור החיוביים, לאסוף את התאים על ידי צנטריפוגה מחדש להשעות את גלולה באחת פעמים 10 לשישה תאים לכל 50 microliters של ריכוז חיץ ציטומטריה זרימה.לאחר מכן, להעביר את התאים ב 50 aliquots microliter לכל צינור פלואורסצנטיות מיליליטר מופעל תאים על פי פרוטוקול תיעוב ציטומטריה זרימה ניסיונית. מוסיפים את קוקטייל הנוגדנים המתאים וכתמים חיים/מתים לתאים, וכוונו את הנפח ל-100 מיקרוליטרים בסך הכל. לאחר 20 דקות בחושך מוגן מפני אור, לשטוף את התאים עם מיליליטר אחד של חיץ cytometry זרימה טרייה לכל צינור, ולהשעות מחדש את התאים ב 500 microliters של חיץ cytometry זרימה טרייה לכל צינור.לאחר מכן לנתח את התאים על ציטומטר זרימה על פי פרוטוקולים ציטומטריים זרימה סטנדרטיים. כדי להבדיל בין תאי גזע חיוביים של CD34 מבודד microbead ותאי אב לתאי שושלת מיאלואידים, יש לציפוי ראשון של בארות של צלחת סטרילית ולא מצופה של 48 בארות עם 200 מיקרוליטרים לבאגם של פתרון פיברונקין אנושי רקומביננטי ב-PBS לשעתיים בטמפרטורת החדר. בסוף הדגירה, להשליך את פתרון fibronectin מכל באר ולחסום את הבארים עם 200 microliters של אלבומין סרום 2%bovine.לאחר 30 דקות בטמפרטורת החדר, לשטוף את בארות פעמיים עם 500 microliters של PBS סטרילי לכל לשטוף. להשעות מחדש את התאים החיוביים CD34 מבודד טרי בחמש פעמים 10 חמשת התאים למיליליטר של ריכוז בינוני גירוי חם. לאחר מכן, זרע 200 microliters של תאים לתוך כל באר של צלחת מצופה שבר fibronectin ולה מניחים את הצלחת באינקובטור תרבות התא במשך 48 שעות.בסוף הדגירה, לאסוף את התאים עם צינורות עדינים, ולשטוף את הבארים עם 500 microliters של מדיום הנשר מחומם של Dulbecco שונה, איגום לשטוף עם ההשעיה התא. לאחר הספירה, להשעות מחדש את התאים ב 2.5 פעמים 10 לארבעת התאים לכל מיליליטר אחד של ריכוז בינוני מיאלואיד. שכבה 200 microliters של תאים חיוביים CD34 ל הבאר בתא MS-5 סטרומה זרע 48 גם צלחת רקמות.לאחר מכן מניחים את הצלחת באינקובטור תרבות התאים, מחליפים בעדינות 100 מיקרוליטרים של העל-טבעי בכל באר עם 100 מיקרוליטרים של מדיום מיאלואידי טרי פי 2 כל שלושה עד ארבעה ימים. ביום 21, לקצור את התאים לניתוח של ביטוי סמן שושלת מיאלואיד על ידי cytometry זרימה כפי שהוכח רק. האחוז האופייני של תאים חיוביים CD34 הכולל מבודד מדם טבור על ידי הפרדת microbead כפי שהוכח נע בין 80 ל 90%ניתוח Immunophenotypic מגלה כי אלה CD34 תאים חיוביים בדרך כלל מורכב כ 20%שושלת שלילי CD34 חיובי CD38 שלילי אוכלוסיית תאי גזע hematopoietic ו 72%שושלת שלילי CD34 חיובי CD38 חיובי רב עוצמה אוכלוסיית תאי progenitor.בתוך אוכלוסיית תאי הצאצא הרב-עוצמה, כ-25% מהתאים מבטאים סמני אבי מיאלואידים נפוצים, כ-15% מסמני מונוגניטור גרנולוציטים, וכ-56%אקספרס סמני אריתרואיטור מגה-קרויטים. Immunophenotyping גם מדגים כי אחוז תאים חיוביים CD34 מפחית מכ 90% בבידוד פחות מ 25% ביום 21. ניתוח האוכלוסייה השלילית CD34 מדגים עלייה במקביל באחוז התאים המבטאים סמני שושלת מיאלואידיים בוגרים.יתר על כן, תאים מוכתמים רייט-Giemsa להפגין מאפיינים מורפולוגיים ברורים בימים 1 ו -21 עם תרבויות מובחן המציגים גרעינים גדולים, עגולים, ציטופלסמה קטנה מאוד ואת התרבויות המובחנות המציגות מאפיינים מורפולוגיים של תאי שושלת כולל שהם מונוציטים, גרנולוציטים, אריתרובלסטים. זכור לשפוך את הדם הטבור מדולל על מדיום שבר התא mononuclear מבלי לערבב את השכבות, ולא להפריע MS-5 ו CD34 תאים חיוביים בעת שינוי המדיום. בעקבות פרוטוקול ההידול הזה, ניתן לנתח את תרבות התאים החיוביות של CD34 לשינויים מורפולוגיים, אפקטים אפופטיים, שינויים בדפוסי מחזור התאים ודרגת ההידול.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Pan-myeloid Differentiation of Human Cord Blood Derived CD34+ Hematopoietic Stem and Progenitor Cells

Direct Induction of Human Neural Stem Cells from Peripheral Blood Hematopoietic Progenitor Cells

אינדוקציה ישירה של תאי גזע עצביים אדם מתאי הדם היקפי Hematopoietic אב

Human disease specific neuronal cultures are essential for generating in vitro models for human neurological diseases. However, the lack of access to ...

Isolation of Neural Stem/Progenitor Cells from the Periventricular Region of the Adult Rat and Human Spinal Cord

בידוד של תאי גזע / עצביים מהאזור סביב חדרי המוח של העכברוש למבוגרים וחוט השדרה אנושי

Adult rat and human spinal cord neural stem/progenitor cells (NSPCs) cultured in growth factor-enriched medium allows for the proliferation of ...

Isolation and Differentiation of Adipose-Derived Stem Cells from Porcine Subcutaneous Adipose Tissues

בידוד ובידול של תאי גזע נגזר שומן מרקמות שומן תת עורי בשר חזירים

Obesity is an unconstrained worldwide epidemic. Unraveling molecular controls in adipose tissue development holds promise to treat obesity or diabetes. ...

Chondrogenic Differentiation Induction of Adipose-derived Stem Cells by Centrifugal Gravity

Chondrogenic בידול האינדוקציה של תאי גזע שמקורם שומן על ידי הכביד צנטריפוגלי

Impaired cartilage cannot heal naturally. Currently, the most advanced therapy for defects in cartilage is the transplantation of chondrocytes ...

Directed Differentiation of Primitive and Definitive Hematopoietic Progenitors from Human Pluripotent Stem Cells

ביים הבידול של אבות Hematopoietic פרימיטיבי, מהווים הסופית מתאי גזע Pluripotent אנושי

One of the major goals for regenerative medicine is the generation and maintenance of hematopoietic stem cells (HSCs) derived from human pluripotent stem ...

Differentiating Chondrocytes from Peripheral Blood-derived Human Induced Pluripotent Stem Cells

הבדל Chondrocytes מ היקפי דם הנגזרות האדם תאים Pluripotent Pluripotent Induced

In this study, we used peripheral blood cells (PBCs) as seed cells to produce chondrocytes via induced pluripotent stem cells (iPSCs) in an ...

Chondrogenic Pellet Formation from Cord Blood-derived Induced Pluripotent Stem Cells

Chondrogenic גלולה היווצרות דם טבורי הנגזרות Pluripotent תאים גזעיים

Human articular cartilage lacks the ability to repair itself. Cartilage degeneration is thus treated not by curative but by conservative treatments. ...