Name: pan-myeloid differentiation of human cord blood derived cd34+ hematopoietic stem and progenitor cells
Uploaded: 2019-08-09T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Pan-myeloid Differentiation of Human Cord Blood Derived CD34+ Hematopoietic Stem and Progenitor Cells at JoVE.com

Yazarlar Wendy Barrett, Rachel Caballero ve Gabriella Ruiz Maricopa Entegre Sağlık Sistemleri de-tespit ve bağışlanan kordon kan birimleri için, Mrinalini Kala akış sitometri ile yardım için teşekkür etmek istiyorum ve Gay Crooks ve Christopher Seet için ex vivo miyeloid farklılaşma tavsiye. Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüleri (R21CA170786 ve R01GM127464) ve Amerikan Kanser Derneği (Kurumsal Araştırma Hibe 74-001-34-IRG) S.S. fonları ile desteklenmiştir. İçerik sadece yazarların sorumluluğundadır ve Ulusal Sağlık Enstitüleri'nin resmi görüşlerini temsil etmek zorunda değildir.

Deney için insan göbek kordon kanı Maricopa Entegre Sağlık Sistemleri (MIHS), Phoenix bilgilendirilmiş onayı sonra sağlıklı bireyler tarafından bağışlandı. Deidentified birimleri MIHS ve Arizona Üniversitesi arasında bir Malzeme Transfer Anlaşması ile elde edilmiştir.
1. Reaktifler ve Tamponlar
NOT: Tüm reaktifleri ve tamponları steril koşullar altında biyolojik bir güvenlik kabininde hazırlayın.
<ol><li>Steril PBS-BSA-E...

<ol>
	<li>Hao, Q. L., Shah, A. J., Thiemann, F. T., Smogorzewska, E. M., Crooks, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+functional+comparison+of+CD34+++CD38-+cells+in+cord+blood+and+bone+marrow.">A functional comparison of CD34 + CD38- cells in cord blood and bone marrow.</a> Blood. 86 (10), 3745-3753 (1995).</li><li>Manz, M. G., Miyamoto, T., Akashi, K., Weissman, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+isolation+of+human+clonogenic+common+myeloid+progenitors.">Prospective isolation of human clonogenic common myeloid progenitors.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 99 (18), 11872-11877 (2002).</li><li>Kondo, M., Weissman, I. L., Akashi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+clonogenic+common+lymphoid+progenitors+in+mouse+bone+marrow.">Identification of clonogenic common lymphoid progenitors in mouse bone marrow.</a> Cell. 91 (5), 661-672 (1997).</li><li>Seita, J., Weissman, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematopoietic+stem+cell:+self-renewal+versus+differentiation.">Hematopoietic stem cell: self-renewal versus differentiation.</a> Wiley Interdisciplinary Reviews: Systems Biology and Medicine. 2 (6), 640-653 (2010).</li><li>Haas, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation-Induced+Emergency+Megakaryopoiesis+Driven+by+Hematopoietic+Stem+Cell-like+Megakaryocyte+Progenitors.">Inflammation-Induced Emergency Megakaryopoiesis Driven by Hematopoietic Stem Cell-like Megakaryocyte Progenitors.</a> Cell Stem Cell. 17 (4), 422-434 (2015).</li><li>Sanjuan-Pla, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet-biased+stem+cells+reside+at+the+apex+of+the+haematopoietic+stem-cell+hierarchy.">Platelet-biased stem cells reside at the apex of the haematopoietic stem-cell hierarchy.</a> Nature. 502 (7470), 232-236 (2013).</li><li>Bender, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+analysis+and+characterization+of+CD34++cells+from+normal+human+bone+marrow,+cord+blood,+peripheral+blood,+and+mobilized+peripheral+blood+from+patients+undergoing+autologous+stem+cell+transplantation.">Phenotypic analysis and characterization of CD34+ cells from normal human bone marrow, cord blood, peripheral blood, and mobilized peripheral blood from patients undergoing autologous stem cell transplantation.</a> Clinical Immunology and Immunopathology. 70 (1), 10-18 (1994).</li><li>Fritsch, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+composition+of+CD34+subpopulations+differs+between+bone+marrow,+blood+and+cord+blood.">The composition of CD34 subpopulations differs between bone marrow, blood and cord blood.</a> Bone Marrow Transplantation. 17 (2), 169-178 (1996).</li><li>Nimgaonkar, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+unique+population+of+CD34++cells+in+cord+blood.">A unique population of CD34+ cells in cord blood.</a> Stem Cells. 13 (2), 158-166 (1995).</li><li>Hordyjewska, A., Popiolek, L., Horecka, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+hematopoietic+stem+cells+of+umbilical+cord+blood.">Characteristics of hematopoietic stem cells of umbilical cord blood.</a> Cytotechnology. 67 (3), 387-396 (2015).</li><li>Bapat, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myeloid+Disease+Mutations+of+Splicing+Factor+SRSF2+Cause+G2-M+Arrest+and+Skewed+Differentiation+of+Human+Hematopoietic+Stem+and+Progenitor+Cells.">Myeloid Disease Mutations of Splicing Factor SRSF2 Cause G2-M Arrest and Skewed Differentiation of Human Hematopoietic Stem and Progenitor Cells.</a> Stem Cells. 36, 1-13 (2018).</li><li>Yip, B. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+U2AF1S34F+mutation+induces+lineage-specific+splicing+alterations+in+myelodysplastic+syndromes.">The U2AF1S34F mutation induces lineage-specific splicing alterations in myelodysplastic syndromes.</a> Journal of Clinical Investigation. 127 (6), 2206-2221 (2017).</li><li>Yoo, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myeloid+differentiation+of+human+cord+blood+CD34++cells+during+ex+vivo+expansion+using+thrombopoietin,+flt3-ligand+and/or+granulocyte-colony+stimulating+factor.">Myeloid differentiation of human cord blood CD34+ cells during ex vivo expansion using thrombopoietin, flt3-ligand and/or granulocyte-colony stimulating factor.</a> British Journal of Haematology. 105 (4), 1034-1040 (1999).</li><li>Hao, Q. L., Smogorzewska, E. M., Barsky, L. W., Crooks, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+identification+of+single+CD34+CD38-+cells+with+both+lymphoid+and+myeloid+potential.">In vitro identification of single CD34+CD38- cells with both lymphoid and myeloid potential.</a> Blood. 91 (11), 4145-4151 (1998).</li><li>Moretta, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+generation+of+human+innate+lymphoid+cells+is+influenced+by+the+source+of+hematopoietic+stem+cells+and+by+the+use+of+G-CSF.">The generation of human innate lymphoid cells is influenced by the source of hematopoietic stem cells and by the use of G-CSF.</a> European Journal of Immunology. 46 (5), 1271-1278 (2016).</li><li>Sanz, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ordering+human+CD34+CD10-CD19++pre/pro-B-cell+and+CD19-+common+lymphoid+progenitor+stages+in+two+pro-B-cell+development+pathways.">Ordering human CD34+CD10-CD19+ pre/pro-B-cell and CD19- common lymphoid progenitor stages in two pro-B-cell development pathways.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (13), 5925-5930 (2010).</li><li>Egeland, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myeloid+differentiation+of+purified+CD34++cells+after+stimulation+with+recombinant+human+granulocyte-monocyte+colony-stimulating+factor+(CSF),+granulocyte-CSF,+and+interleukin-3.">Myeloid differentiation of purified CD34+ cells after stimulation with recombinant human granulocyte-monocyte colony-stimulating factor (CSF), granulocyte-CSF, and interleukin-3.</a> Blood. 78 (12), 3192-3199 (1991).</li><li>Ogawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+and+proliferation+of+hematopoietic+stem+cells.">Differentiation and proliferation of hematopoietic stem cells.</a> Blood. 81 (11), 2844-2853 (1993).</li><li>Perdomo, J., Yan, F., Leung, H. H. L., Chong, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Megakaryocyte+Differentiation+and+Platelet+Formation+from+Human+Cord+Blood-derived+CD34++Cells.">Megakaryocyte Differentiation and Platelet Formation from Human Cord Blood-derived CD34+ Cells.</a> Journal of Visualized Experiments. (130), e56420 (2017).</li><li>Palii, C. G., Pasha, R., Brand, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lentiviral-mediated+knockdown+during+ex+vivo+erythropoiesis+of+human+hematopoietic+stem+cells.">Lentiviral-mediated knockdown during ex vivo erythropoiesis of human hematopoietic stem cells.</a> Journal of Visualized Experiments. (53), e2813 (2011).</li><li>Davies, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silencing+of+ASXL1+impairs+the+granulomonocytic+lineage+potential+of+human+CD34(+)+progenitor+cells.">Silencing of ASXL1 impairs the granulomonocytic lineage potential of human CD34(+) progenitor cells.</a> British Journal of Haematology. 160 (6), 842-850 (2013).</li><li>Caceres, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TP53+suppression+promotes+erythropoiesis+in+del(5q)+MDS,+suggesting+a+targeted+therapeutic+strategy+in+lenalidomide-resistant+patients.">TP53 suppression promotes erythropoiesis in del(5q) MDS, suggesting a targeted therapeutic strategy in lenalidomide-resistant patients.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (40), 16127-16132 (2013).</li><li>Shi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ASXL1+plays+an+important+role+in+erythropoiesis.">ASXL1 plays an important role in erythropoiesis.</a> Scientific Reports. 6, 28789 (2016).</li><li>Mazumdar, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukemia-Associated+Cohesin+Mutants+Dominantly+Enforce+Stem+Cell+Programs+and+Impair+Human+Hematopoietic+Progenitor+Differentiation.">Leukemia-Associated Cohesin Mutants Dominantly Enforce Stem Cell Programs and Impair Human Hematopoietic Progenitor Differentiation.</a> Cell Stem Cell. 17 (6), 675-688 (2015).</li><li>Chung, K. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enforced+expression+of+an+Flt3+internal+tandem+duplication+in+human+CD34++cells+confers+properties+of+self-renewal+and+enhanced+erythropoiesis.">Enforced expression of an Flt3 internal tandem duplication in human CD34+ cells confers properties of self-renewal and enhanced erythropoiesis.</a> Blood. 105 (1), 77-84 (2005).</li><li>Ambrosini, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-1beta+inhibits+ILC3+while+favoring+NK-cell+maturation+of+umbilical+cord+blood+CD34(+)+precursors.">IL-1beta inhibits ILC3 while favoring NK-cell maturation of umbilical cord blood CD34(+) precursors.</a> European Journal of Immunology. 45 (7), 2061-2071 (2015).</li><li>Batard, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGF-(beta)1+maintains+hematopoietic+immaturity+by+a+reversible+negative+control+of+cell+cycle+and+induces+CD34+antigen+up-modulation.">TGF-(beta)1 maintains hematopoietic immaturity by a reversible negative control of cell cycle and induces CD34 antigen up-modulation.</a> Journal of Cell Science. 113, 383-390 (2000).</li><li>Huang, N., Lou, M., Liu, H., Avila, C., Ma, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+potent+small+molecule+capable+of+regulating+polyploidization,+megakaryocyte+maturation,+and+platelet+production.">Identification of a potent small molecule capable of regulating polyploidization, megakaryocyte maturation, and platelet production.</a> Journal of Hematology &amp; Oncology. 9 (1), 136 (2016).</li></ol>

Burada açıklanan protokol, UCB'den türetilen CD34+ HSPC'lerin dört miyeloid soya ex vivo farklılaşması için uygundur. SCF, TPO, Flt3L ve IL3'ten oluşan bir sitokin karışımı ile ilk kuluçka CD34+ hücreleri uyarır. Daha sonra, farklılaşma SCF, IL3, Flt3L, EPO ve TPO bir kokteyl ile elde edilir. Bu karışımda, SCF, IL3 ve Flt3L CD34+ HSCs hayatta kalma ve çoğalması için önemlidir. EPO ve TPO eritrositler ve megakaryositler doğru farklılaşma teşvik, sırasıyla, v...

Hematopoetik kök hücrelerin (HSC) normal farklılaşması tüm kan hücresi soylarının fizyolojik düzeylerinin sürdürülmesi için önemlidir. Farklılaşma sırasında, büyüme faktörleri ve sitokinler de dahil olmak üzere hücre dışı ipuçlarına eşgüdümlü bir yanıt olarak, HSC'ler ilk lenfo-miyeloid potansiyele sahip çok güçlü progenitor (MPP) hücrelerine yol açar1,2,3 ,4 (Şekil 1). MPP'ler, soy kısıtlamalı yaygın miyeloid atalara (KP) ve yaygın lenfoid atalara (KPS) yol açar. CLP'ler B, T ve doğal öldürücü hücrelerden oluşan lenfoid soylara ayrılırlar. CMP'ler iki daha kısıtlı ata popülasyonu, megakaryosit eritroid ataları (MEP) ve granülosit monosit ataları (GDO) yoluyla miyeloid soyları oluştururlar. MEP'ler megakaryositve eritrositlere yol açarken, GDO'lar granülosit ve monositlere yol açar. CMPs ile kaynaklanan ek olarak, megakaryositler de doğrudan HSCs veya erken MPPs olmayan kanonik yollar üzerinden ortaya bildirilmiştir5,6.
Hematopoetik kök ve ata hücreleri (HSPCs) yüzey marker CD34 ve soy ait belirteçlerin eksikliği ile karakterizedir (Lin-). HSC'leri ve miyeloid ata popülasyonlarını ayırt etmek için yaygın olarak kullanılan diğer yüzey belirteçleri CD38, CD45RA ve CD123 2'dir (Şekil 1). HSC'ler ve MPP'ler Lin-/CD34+/CD38- ve Lin-/CD34+/CD38+, sırasıyla. Myeloid kararlı ata popülasyonları CD45RA ve CD123 varlığı veya yokluğu ile ayırt edilir. CMP'ler Lin-/CD34+/CD38+/CD45RA-/CD123lo, GMP'ler Lin-/CD34+/CD38+/CD45RA+/CD123lo, ve MEP'ler Lin-/CD34+ /CD38+/CD45RA-/CD123-.
CD34+ kök ve ata hücrelerinin toplam popülasyonu insan göbek kordon kanı (UCB), kemik iliği ve periferik kan elde edilebilir. CD34+ hücreler insan UCB'deki toplam mononükleer hücrelerin (MNC) %0,02 ila %1,46'sını oluştururken, bunların yüzdesi kemik iliğinde %0,5 ile %5,3 arasında değişir ve periferik kanda ~%0,01'de çok daha düşüktür7,8,9 . UCB türetilmiş CD34+ hücrelerin proliferatif kapasitesi ve farklılaşma potansiyeli önemli ölçüde kemik iliği veya periferik kanhücrelerinin1,10, elde etmek için ayrı bir avantaj sunan daha yüksektir farklılaşma sırasında hücrelerin immünophenotipik ve morfolojik karakterizasyonu ile birlikte moleküler analizler için yeterli malzeme.
Göbek kordon kanı kaynaklı CD34+ HSPCs ex vivo farklılaşma normal hematopoezis ve hematopoetik hastalık mekanizmaları araştırmak için yaygın olarak uygulanan bir modeldir. Uygun sitokinler ile kültürlü zaman, UCB CD34+ HSPCs miyeloid veya lenfoid soy11,12,13,14,15 boyunca ayırt etmek için indüklenebilir , 16- Burada, CD34+ HSPC'lerin insan UCB'sinden izolasyon ve immünophenotipik karakterizasyonu ve bunların miyeloid soy hücrelerine farklılaşması protokollerini açıklıyoruz. Bu kültür sistemi, kemik iliğindeki mikro ortamı taklit etmek için MS-5 stromal hücrelerinin varlığında HSP'lerin sitokin kaynaklı farklılaşmasına dayanır. Kültür koşulları CD34+ hücrelerin ilk genişlemesine neden olur, ardından dört miyeloid soy hücresi için belirteçleri ifade eden hücrelere farklılaşmaları, yani granülositler (CD66b), monositler (CD14), megakaryositler (CD41) ve eritrositler (CD235a). CD34+ hücre farklılaştırma protokolünün uygulamaları, hematopoeziyi düzenleyen moleküler mekanizmalar üzerine yapılan çalışmaları ve miyeloid hastalığı ile ilişkili mutasyonların ve küçük moleküllerin kendi kendini yenileme ve HSPC'lerin farklılaşması.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:785px;" width="786">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">0.4% Trypan blue solution</td>
			<td style="width:112px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">15250-061</td>
			<td style="width:339px;">Dilute working stock to 0.2% in sterile 1x PBS</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">0.5 M UltraPure Ethylene diamine tetra acetic acid, pH 8.0</td>
			<td style="width:112px;">Gibco&#160;</td>
			<td style="width:119px;">15575-038</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">10x Hanks Balanced Salt Solution (HBSS)</td>
			<td style="width:112px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">14185052</td>
			<td style="width:339px;">Dilute to 1x with sterile distilled water &#38; pH to 7.2</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">2.5% Trypsin, no phenol red</td>
			<td style="width:112px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">15090046</td>
			<td style="width:339px;">Dilute working stock to 1x with sterile 1x PBS</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">30 &#181;m Pre-separation filters</td>
			<td style="width:112px;">Miltenyi biotech</td>
			<td style="width:119px;">130-041-407</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">35% sterile Bovine serum albumin</td>
			<td style="width:112px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">A7979</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">7-AAD</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">420404</td>
			<td style="width:339px;">Used as a live/dead stain to eliminate dead cells from FACS analysis</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD10-FITC antibody (Clone HI10a)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">312207</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Anti-human CD11b-FITC (activated) antibody (Clone CBRM1/5)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">301403</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:5 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD123-APC antibody (Clone 6H6)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">306012</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD14-PE antibody (Clone M5E2)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">301806</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD19-FITC antibody (Clone 4G7)</td>
			<td style="width:112px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">347543</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:5 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD235a-APC antibody (Clone GA-R2 (HIR2))</td>
			<td style="width:112px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">551336</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD235a-FITC antibody (Clone HIR2)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">306609</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:50 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD34-APC-Cy7 antibody (Clone 581)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">343514</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD38-PE antibody (Clone HIT2)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">303506</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD3-FITC antibody (Clone UCHT1)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">300405</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD41a-PerCP-Cy5.5 antibody (Clone HIP8)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">303720</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD45Ra-PE-Cy7 antibody (Clone HI100)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">304126</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD66b-PE-Cy7 antibody (Clone G10F5)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">305116</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Anti-human CD7-FITC antibody (Clone CD7-6B7)</td>
			<td style="width:112px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">343103</td>
			<td style="width:339px;">Use 1:20 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td style="width:112px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">BP231-100</td>
			<td style="width:339px;">Filter sterilize before use</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Dulbecco&#8217;s Modified Eagle Medium (DMEM) powder with L-Glutamine&#160;</td>
			<td style="width:112px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">12100046</td>
			<td style="width:339px;">Reconstitute 1 packet to make 1 L of DMEM media&#160; with sodium bicarbonate, 10% FBS &#38; 1% penicillin &#38; streptomycin&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Fetal bovine serum, Australian source, heat inactivated</td>
			<td style="width:112px;">Omega Scientific</td>
			<td style="width:119px;">FB-22 Lot #609716</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Human CD34 microbead kit&#160;</td>
			<td style="width:112px;">Miltenyi biotech</td>
			<td style="width:119px;">130-046-702</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Human Thrombopoietin (TPO), research grade</td>
			<td style="width:112px;">Miltenyi biotech</td>
			<td style="width:119px;">130-094-011</td>
			<td style="width:339px;">Make a stock of 100 &#181;g/mL in 1x PBS + 0.1% BSA. Use 50 ng/mL for both myeloid differentiation &#38; stimulation medium</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">L-Glutamine</td>
			<td style="width:112px;">Omega Scientific</td>
			<td style="width:119px;">GS-60</td>
			<td style="width:339px;">2 mM concentration in stimulation medium</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">LS Columns</td>
			<td style="width:112px;">Miltenyi biotech</td>
			<td style="width:119px;">130-042-401</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">MACS Multi stand</td>
			<td style="width:112px;">Miltenyi biotech</td>
			<td style="width:119px;">130-042-303</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">MidiMACS magnetic separator</td>
			<td style="width:112px;">Miltenyi biotech</td>
			<td style="width:119px;">130-042-302</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">MNC fractionation media (Ficol-Paque PLUS)</td>
			<td style="width:112px;">GE Healthcare Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">17-1440-03</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">MS-5 cells</td>
			<td style="width:112px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:339px;">Gift from the laboratory of Gay Crooks, UCLA</td>
		</tr>
		<tr height="148">
			<td height="148" style="height:148px;width:216px;">Paraformaldehyde</td>
			<td style="width:112px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P6148</td>
			<td style="width:339px;">Heat 800 mL of 1x PBS in a glass beaker on a stir plate in a chemical hood to ~65 &#176;C. Add 10 g of paraformaldehyde powder. To completely dissolve the paraformaldehyde, raise the pH by adding 1 N NaOH. Cool and filter the solution and make up the volume to 1 L with 1x PBS. Adjust the pH to 7.2.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Penicillin &#38; Streptomycin</td>
			<td style="width:112px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P4458-100ml</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Poly-L lysine</td>
			<td style="width:112px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P2636</td>
			<td style="width:339px;">Make a 10 mg/mL stock in 1x PBS</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Recombinant human erythropoietin-alpha (rHu EPO-&#945;)</td>
			<td style="width:112px;">BioBasic</td>
			<td style="width:119px;">RC213-15</td>
			<td style="width:339px;">Make a stock of 2000 units/mL in 1x PBS + 0.1% BSA. Use 4 units/mL for myeloid differentiation</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Recombinant human fibronectin fragment (RetroNectin)</td>
			<td style="width:112px;">Takara&#160;</td>
			<td style="width:119px;">T100B</td>
			<td style="width:339px;">Use 20 &#181;g/mL diluted in sterile 1x PBS to coat wells prior to stimulation of CD34+ HSCs.</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Recombinant human Flt-3 ligand (rHu Flt-3L)</td>
			<td style="width:112px;">BioBasic</td>
			<td style="width:119px;">RC214-16</td>
			<td style="width:339px;">Make a stock of 100 &#181;g/mL in 1x PBS + 0.1% BSA. Use 5 ng/mL for myeloid differentiation &#38; 50 ng/mL in stimulation medium</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Recombinant human interleukin-3 (rHu IL-3)</td>
			<td style="width:112px;">BioBasic</td>
			<td style="width:119px;">RC212-14</td>
			<td style="width:339px;">Make a stock of 100 &#181;g/mL in 1x PBS + 0.1% BSA. Use 5 ng/mL for myeloid differentiation &#38; 20 ng/mL in stimulation medium</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Recombinant human stem cell factor (rHu SCF)</td>
			<td style="width:112px;">BioBasic</td>
			<td style="width:119px;">RC213-12</td>
			<td style="width:339px;">Make a stock of 100 &#181;g/mL in 1x PBS + 0.1% BSA. Use 5 ng/mL for myeloid differentiation &#38; 50 ng/mL in stimulation medium</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Serum free medium (X-Vivo-15)</td>
			<td style="width:112px;">Lonza&#160;</td>
			<td style="width:119px;">04-418Q</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Sodium bicarbonate</td>
			<td style="width:112px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">BP328-500</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Wright-Giemsa stain, modified</td>
			<td style="width:112px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">WG16-500</td>
			<td style="width:339px;">Use according to manufacturer&#39;s instructions</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Equipment&#160;</td>
			<td style="width:112px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">BD LSR II flow cytometer</td>
			<td style="width:112px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:112px;">Sorvall Legend RT</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Light microscope</td>
			<td style="width:112px;">Olympus</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

pan-myeloid differentiation of human cord blood derived cd34+ hematopoietic stem and progenitor cells

İnsan hematopoetik kök hücrelerinin ex vivo farklılaşması hematopoezisi incelemek için yaygın olarak kullanılan bir modeldir. Burada açıklanan protokol CD34+ hematopoetik kök ve ata hücrelerinin dört miyeloid soy hücresine sitokin kaynaklı farklılaşması içindir. CD34+ hücreler insan göbek kordon kanIzole ve sitokinler varlığında MS-5 stromal hücreleri ile birlikte kültürlü. Kök ve progenitor hücrelerinin immünonotitipik karakterizasyonu ve diferansiye miyeloid soy hücreleri tanımlanmıştır. Bu protokolü kullanarak, CD34+ hücreleri küçük moleküller ile kuluçkaya ya da miyeloid hastalık mutasyonları miyeloid farklılaşma üzerindeki etkilerini araştırmak için lentivirüsler ile transduced olabilir.

Yukarıdaki protokollerin uygulanması 5.6 (± 0.5) x 108 MNC ve 1 (± 0.3) x 106 CD34+ ~100 mL'lik bir kordon kan ünitesinden hücreler verir. Toplam CD34+ hücrelerin yüzdesi %80-90 arasında değişmektedir (Şekil2A,B). Manz ve ark.5 tarafından açıklanan şema tarafından immünopnotik analiz CD34+ hücreleri genellikle ~ 20% HSCs ve Lin olan ~ % 72 MPPs oluşur gösterir-/CD34...

Watch this Scientific Journal Video about Pan-myeloid Differentiation of Human Cord Blood Derived CD34+ Hematopoietic Stem and Progenitor Cells at JoVE.com

Pan-myeloid Differentiation of Human Cord Blood Derived CD34+ Hematopoietic Stem and Progenitor Cells

Burada, dört miyeloid soya immünotipik karakterizasyon ve sitokin kaynaklı cd34+ hematopoetik kök ve ataat hücrelerinin farklılaşması için bir protokol sıyoruz. Bu protokolün uygulamaları cd34+ hücrelerin miyeloid farklılaşması üzerinde miyeloid hastalık mutasyonları veya küçük moleküllerin etkisi üzerine araştırmalar içerir.

İnsan Kordon Kanı Kaynaklı CD34 Pan-miyeloid Farklılaşması+ Hematopoetik Kök ve Progenitor Hücreleri

Ex vivo differentiation of human hematopoietic stem cells is a widely used model for studying hematopoiesis. The protocol described here is for cytokine ...

Bu protokol, insan CD34 pozitif hematopoetik kök ve atajen hücrelerinin normal miyeloid farklılaşması sırasında meydana gelen moleküler ve hücresel değişiklikleri incelemek için kullanılabilir. Bu protokolün en büyük avantajı megakaryositler, eritrositler, granülositler ve monositler de dahil olmak üzere dört miyeloid soy boyunca CD34 pozitif hücrelerin farklılaşmasını sağlamasıdır. Prosedürü gösteren Aditi Bapat, benim laboratuvar bir post-doc olacaktır.Bir insan göbek kordonkan kan örneğinden mononükleer hücre izolasyonu için, biyolojik bir güvenlik kabini içinde steril bir 250 mililitre plastik şişe içine çanta içeriğini aktarmadan önce% 70 etanol ile göbek kordon kanı bir çanta dış yüzeyi sterilize. Oda sıcaklığında Hank'in tamponlu tuzlu çözeltieşit hacimli kan seyreltmek ve beş steril 50 mililitre konik tüpler her biri için mononükleer hücre fraksiyonu orta 15 mililitre ekleyin. Nazik karıştırma sonra, dikkatle her tüp mononükleer fraksiyonlama orta üzerine seyreltilmiş göbek kordon kanı 30 mililitre dökün, katmanları karıştırma önlemek için bir açıda 50 mililitre tüpler tutarak.Yoğunluk gradyan santrifüj ile hücreleri ayırın ve mononükleer hücre tabakasıüzerinde plazma üst 15 ila 20 mililitre kaldırın. Maruz kalan mononükleer hücre tabakasını yeni bir 50 mililitrelik tüpe dikkatlice aktarmak, mononükleer hücreleri iki ila üç tüpten bir araya getirmek ve her tüpteki son hacmi soğuk PBE tamponuyla 50 mililitreye kadar getirmek için bir pipet kullanın. Mononükleer hücre örneklerini santrifüj ile peletleyin ve süpernatantları aspire edin.Hücre peletlerini gevşetmek için her tüpe hafifçe dokunun ve peletleri beş mililitre lik buz gibi PBE tamponu yla seyreltin. Bir 50 mililitrekonik tüp içine üç ila dört tüpler hücreleri birleştirin ve kalan hücreleri toplamak için taze PBE tampon beş mililitre ile tüm tüpleri yıkayın. Sayma sonra, taze buz soğuk PBE tampon ile 50 mililitreye kadar tüp son hacmi getirmek ve santrifüj ile hücreleri toplamak.CD34 pozitif mononükleer hücreleri izole etmek için, başka bir santrifüj ile hücreleri toplamadan önce taze PBE tampon 50 mililitre pelet yeniden askıya. Supernatant attıktan sonra, pelet gevşetmek için yavaşça dokunun ve buz soğuk PBE tampon konsantrasyonu 300 mikrolitre başına sekiz mononükleer hücrelere bir kez 10 hücreleri yeniden askıya. Fc reseptör bloke reaktif 100 mikrolitre ile herhangi bir nonspesifik bağlama blok, yavaşça karıştırın, ve sonra bir manyetik aktif hücre sıralama insan CD34 mikroboncuk kiti 100 mikrolitre ekleyin 10 nazik karıştırma ile sekiz hücreye 10, ve dört derece santigrat hücreleri kuluçka.Hücreler kuluçkaya yatarken, BIR MACS ayırıcı manyetik alana bir LS sütunu ve ön ayırma filtresi yerleştirin. Kolonu iki mililitre buz gibi PBE tamponu ve bir mililitre arabellek ile ön ayırma filtresi ile dengeleyin. Sütunun 15 mililitrelik konik bir tüpe boşalmasına izin verin ve akışı atın.Kuluçka sonunda, taze buz soğuk PBE tampon ve santrifüj ile hücreleri tortu ile 15 mililitreye kadar mononükleer hücre örneğinin son hacmini getirmek. Bir mililitrelik buz gibi PBE tamponunda peleti yeniden askıya alın ve hücreleri sütundaki ön ayırma filtresine yükleyin. Tüpü üç mililitre taze buz gibi pbe tamponuyla durulayın ve arabelleği ön ayırma filtresine ekleyin.Kolon, filtre olmadan yıkama başına üç mililitre daha buz gibi PBE tamponuyla dört kez yıkayın ve kolon her yıkama arasında tamamen boşalmasını sağlar. Son yıkamadan sonra, sütunu 15 mililitrelik yeni bir tüpe taşıyın ve beş mililitre taze buz gibi pBE'yi kolondan tüpe daldırın. Taze izole CD34 pozitif hematopoetik kök ve progenitor hücrelerinde kök ve progenitor popülasyonlarının fraksiyonlarını belirlemek için, santrifüj ile hücreleri toplamak ve bir kez 10 de altı hücre ye akış sitometri tampon konsantrasyonu.Daha sonra, hücreleri 50 mikrolitre aliquots beş mililitre floresan aktif hücre sıralama tüpü deneysel akış sitometri boyama protokolüne göre transfer. Hacim 100 toplam mikrolitreye ayarlayarak hücrelere uygun antikor kokteyli ve canlı/ölü boyamaekleyin. Karanlıkta ışıktan korunan 20 dakika sonra, tüpler başına taze akış sitometri tampon bir mililitre ile hücreleri yıkayın ve tüp başına taze akış sitometri tampon 500 mikrolitre hücreleri yeniden askıya.Daha sonra standart akış sitometrik protokollerine göre bir akış sitometre hücreleri analiz. Myeloid soy hücrelerine mikrobead izole CD34 pozitif kök ve progenitor hücreleri ayırt etmek için, ilk kat steril, kaplamasız 48-iyi plaka ile 200 mikrolitre pbs rekombinant insan fibronectin çözeltisi başına oda sıcaklığında iki saat boyunca. Kuluçka sonunda, her kuyudan fibronektin çözeltisini atın ve %2'lik büyükbaş serum albuminin 200 mikrolitresi ile kuyuları kapatın.Oda sıcaklığında 30 dakika sonra, kuyuları yıkama başına 500 mikrolitre steril PBS ile iki kez yıkayın. Yeniden beş kez taze izole CD34 pozitif hücreleri askıya 10 sıcak stimülasyon orta konsantrasyon mililitre başına beş hücre. Daha sonra, fibronektin parçası kaplı plakanın her kuyuya 200 mikrolitre hücre tohumu koyun ve plakayı 48 saat boyunca hücre kültürü kuluçka makinesine yerleştirin.Kuluçka sonunda, nazik pipetleme ile hücreleri toplamak ve hücre süspansiyon ile yıkar havuz, Dulbecco modifiye Kartal orta ısıtılmış 500 mikrolitre ile kuyuları yıkayın. Sayma sonra, miyeloid diferansiyasyon orta konsantrasyon bir mililitre başına dört hücre için 2,5 kez 10 hücreleri yeniden askıya. Bir MS-5 stromal hücrede iyi başına CD34 pozitif hücrelerin Katman 200 mikrolitre 48 iyi doku kültürü plaka tohumlu.Daha sonra plakayı hücre kültürü kuluçka makinesine yerleştirin, her kuyudaki 100 mikrolitre lik süpernatantı her üç ila dört günde bir 100 mikrolitre taze 2X miyeloid farklılaştırma ortamıyla nazikçe değiştirin. 21. günde, akış sitometrisi tarafından miyeloid soy belirteci ekspresyonunun analizi için hücreleri hasat edin. Toplam CD34 pozitif hücrelerin tipik yüzdesi mikrop ayrımı ile kordon kanından izole edildi ve bu CD34 pozitif hücrelerin tipik olarak yaklaşık %20'lik bir soy negatif CD34 pozitif CD34 pozitif CD38 negatif hematopoetik kök hücre popülasyonu ve %72 soyun negatif CD344 pozitif CD38 pozitif multi-güçlü progenitor hücre popülasyonundan oluştuğunu ortaya koymaktadır.Çok güçlü progenitor hücre popülasyonu içinde, hücrelerin yaklaşık% 25 ortak miyeloid ata belirteçleri ifade, yaklaşık% 15 ekspres granülosit monosit atabelirteci, ve yaklaşık 56% ekspres megakaryosit eritrosit atori belirteçleri. İmmünofetamin, CD34 pozitif hücrelerinin yüzdesinin izolasyonda yaklaşık %90'dan 21. CD34 negatif popülasyonanalizi olgun miyeloid soy belirteçleri ifade hücrelerin yüzdesi eşlik eden bir artış göstermektedir.Ayrıca, Wright-Giemsa lekeli hücreler büyük, yuvarlak çekirdekler ve çok az sitoplazma sergileyen farklılaşmamış kültürler ve monositler, granülositler ve eritrositler de dahil olmak üzere soy hücrelerinin morfolojik özelliklerini gösteren farklılaşmış kültürler ile birinci ve 21 günlerde farklı morfolojik özellikler gösterirler. Seyreltilmiş kordon kanını katmanları karıştırmadan mononükleer hücre fraksiyonu ortamına dökmeyi unutmayın ve ortamı değiştirirken MS-5 ve CD34 pozitif hücreleri rahatsız etmeyin. Bu farklılaşma protokolünden sonra, CD34 pozitif hücre kültürleri morfolojik değişiklikler, apoptotik etkiler, hücre döngüsü paternlerinde ki değişiklikler ve farklılaşma derecesi açısından analiz edilebilir.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Pan-myeloid Differentiation of Human Cord Blood Derived CD34+ Hematopoietic Stem and Progenitor Cells

Direct Induction of Human Neural Stem Cells from Peripheral Blood Hematopoietic Progenitor Cells

Periferik kan Hematopoetik Progenitör Hücreleri İnsan Sinir Kök Hücre Doğrudan İndüksiyon

Human disease specific neuronal cultures are essential for generating in vitro models for human neurological diseases. However, the lack of access to ...

Isolation of Neural Stem/Progenitor Cells from the Periventricular Region of the Adult Rat and Human Spinal Cord

Periventriküler Yetişkin Rat Bölgesinde ve İnsan Omurilik gelen Nöral Kök / Progenitör Hücreler izolasyonu

Adult rat and human spinal cord neural stem/progenitor cells (NSPCs) cultured in growth factor-enriched medium allows for the proliferation of ...

Isolation and Differentiation of Adipose-Derived Stem Cells from Porcine Subcutaneous Adipose Tissues

Domuz Subkutan yağ dokularındaki İzolasyonu ve Yağ-Türetilmiş Kök Hücre Farklılaşması

Obesity is an unconstrained worldwide epidemic. Unraveling molecular controls in adipose tissue development holds promise to treat obesity or diabetes. ...

Chondrogenic Differentiation Induction of Adipose-derived Stem Cells by Centrifugal Gravity

Santrifüj Yerçekimi ile adipoz kaynaklı Kök Hücrelerin kondrojenik Farklılaşma İndüksiyon

Impaired cartilage cannot heal naturally. Currently, the most advanced therapy for defects in cartilage is the transplantation of chondrocytes ...

Directed Differentiation of Primitive and Definitive Hematopoietic Progenitors from Human Pluripotent Stem Cells

İlkel ve kesin hematopoetik ataları insan Pluripotent kök hücrelerden farklılaşma yönetmen

One of the major goals for regenerative medicine is the generation and maintenance of hematopoietic stem cells (HSCs) derived from human pluripotent stem ...

Differentiating Chondrocytes from Peripheral Blood-derived Human Induced Pluripotent Stem Cells

Periferal Kan Türevi İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücrelerden Kondrositlerin Farklılaşması

In this study, we used peripheral blood cells (PBCs) as seed cells to produce chondrocytes via induced pluripotent stem cells (iPSCs) in an ...

Chondrogenic Pellet Formation from Cord Blood-derived Induced Pluripotent Stem Cells

Kordon Kanından Oluşan İndüklü Pluripotent Kök Hücrelerden Kondrojenik Pellet Oluşumu

Human articular cartilage lacks the ability to repair itself. Cartilage degeneration is thus treated not by curative but by conservative treatments. ...