Name: evaluation of photosynthetic behaviors by simultaneous measurements of leaf reflectance and chlorophyll fluorescence analyses
Uploaded: 2019-08-09T15:00:00
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हम चर्चा उत्तेजक, एक काम अंतरिक्ष के साथ सहायता, और प्रयोगों के लिए उपकरणों के लिए डॉ Kouki Hikosaka (Tohoku विश्वविद्यालय) के आभारी हैं। काम KAKENHI [अनुदान संख्या 18K05592, 18J40098] और Naito फाउंडेशन द्वारा भाग में समर्थित किया गया था.

1. अरबिडोप्सिस पौधों की खेती
<ol><li>एक माइक्रोट्यूब में बाँझ deionized पानी में Arabidopsis thaliana बीज भिगो दें, और अंधेरे में 4 डिग्री सेल्सियस पर 2 दिनों के लिए इनक्यूबेट।</li>
	<li>एक माइक्रोपिपेट का उपयोग करके मिट्टी की सत?...

<ol>
	<li>Xue, J., Su, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Significant+remote+sensing+vegetation+indices:+A+review+of+developments+and+applications.">Significant remote sensing vegetation indices: A review of developments and applications.</a> Journal of Sensors. 1353691, (2017).</li><li>Cotrozzi, L., Townsend, P. A., Pellegrini, E., Nali, C., Couture, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reflectance+spectroscopy:+a+novel+approach+to+better+understand+and+monitor+the+impact+of+air+pollution+on+Mediterranean+plants.">Reflectance spectroscopy: a novel approach to better understand and monitor the impact of air pollution on Mediterranean plants.</a> Environmental Science and Pollution Research. 25 (9), 8249-8267 (2018).</li><li>Han, L., Yang, G., Yang, H., Xu, B., Li, Z., Yang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clustering+Field-Based+Maize+Phenotyping+of+Plant-Height+Growth+and+Canopy+Spectral+Dynamics+Using+a+UAV+Remote-Sensing+Approach.">Clustering Field-Based Maize Phenotyping of Plant-Height Growth and Canopy Spectral Dynamics Using a UAV Remote-Sensing Approach.</a> Frontiers in Plant Science. 9, 1638 (2018).</li><li>Baker, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chlorophyll+Fluorescence:+A+Probe+of+Photosynthesis+In.">Chlorophyll Fluorescence: A Probe of Photosynthesis In.</a> Vivo. Annual Review of Plant Biology. 59 (1), 89-113 (2008).</li><li>Cruz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+Environmental+Photosynthetic+Imaging+Reveals+Emergent+Phenotypes.">Dynamic Environmental Photosynthetic Imaging Reveals Emergent Phenotypes.</a> Cell Systems. 2 (6), 365-377 (2016).</li><li>Ruban, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+the+efficiency+of+photoprotection.">Quantifying the efficiency of photoprotection.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society B: Biological Sciences. 372 (1730), 20160393 (2017).</li><li>Gamon, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Remote+sensing+of+the+xanthophyll+cycle+and+chlorophyll+fluorescence+in+sunflower+leaves+and+canopies.">Remote sensing of the xanthophyll cycle and chlorophyll fluorescence in sunflower leaves and canopies.</a> Oecologia. 85 (1), 1-7 (1990).</li><li>Gamon, J. A., Pe&#241;uelas, J., Field, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+narrow-waveband+spectral+index+that+tracks+diurnal+changes+in+photosynthetic+efficiency.">A narrow-waveband spectral index that tracks diurnal changes in photosynthetic efficiency.</a> Remote Sensing of Environment. 41 (1), 35-44 (1992).</li><li>Rahimzadeh-Bajgiran, P., Munehiro, M., Omasa, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationships+between+the+photochemical+reflectance+index+(PRI)+and+chlorophyll+fluorescence+parameters+and+plant+pigment+indices+at+different+leaf+growth+stages.">Relationships between the photochemical reflectance index (PRI) and chlorophyll fluorescence parameters and plant pigment indices at different leaf growth stages.</a> Photosynthesis Research. 113 (1-3), 261-271 (2012).</li><li>Niyogi, K. K., Grossman, A. R., Bj&#246;rkman, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arabidopsis+mutants+define+a+central+role+for+the+xanthophyll+cycle+in+the+regulation+of+photosynthetic+energy+conversion.">Arabidopsis mutants define a central role for the xanthophyll cycle in the regulation of photosynthetic energy conversion.</a> Plant Cell. 10 (7), 1121-1134 (1998).</li><li>Kohzuma, K., Hikosaka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+validation+of+photochemical+reflectance+index+(PRI)+as+a+photosynthetic+parameter+using+Arabidopsis+thaliana+mutants.">Physiological validation of photochemical reflectance index (PRI) as a photosynthetic parameter using Arabidopsis thaliana mutants.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 498, 52-57 (2018).</li><li>Hikosaka, K., Noda, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+leaf+CO2+assimilation+and+Photosystem+II+photochemistry+from+chlorophyll+fluorescence+and+the+photochemical+reflectance+index.">Modeling leaf CO2 assimilation and Photosystem II photochemistry from chlorophyll fluorescence and the photochemical reflectance index.</a> Plant, Cell and Environment. 42 (2), 730-739 (2019).</li><li>Brooks, M. D., Sylak-Glassman, E. J., Fleming, G. R., Niyogi, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+thioredoxin-like/&#946;-propeller+protein+maintains+the+efficiency+of+light+harvesting+in+Arabidopsis.">A thioredoxin-like/&#946;-propeller protein maintains the efficiency of light harvesting in Arabidopsis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (29), E2733-E2740 (2013).</li><li>Nilkens, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+slowly+inducible+zeaxanthin-dependent+component+of+non-photochemical+quenching+of+chlorophyll+fluorescence+generated+under+steady-state+conditions+in+Arabidopsis.">Identification of a slowly inducible zeaxanthin-dependent component of non-photochemical quenching of chlorophyll fluorescence generated under steady-state conditions in Arabidopsis.</a> Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Bioenergetics. 1797 (4), 466-475 (2010).</li><li>Davis, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limitations+to+photosynthesis+by+proton+motive+force-induced+photosystem+II+photodamage.">Limitations to photosynthesis by proton motive force-induced photosystem II photodamage.</a> Elife. 5, 16921 (2016).</li><li>Wong, C. Y. S., Gamon, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+photochemical+reflectance+index+provides+an+optical+indicator+of+spring+photosynthetic+activation+in+evergreen+conifers.">The photochemical reflectance index provides an optical indicator of spring photosynthetic activation in evergreen conifers.</a> New Phytologist. 206 (1), 196-208 (2015).</li><li>Miyake, C., Amako, K., Shiraishi, N., Sugimoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acclimation+of+Tobacco+Leaves+to+High+Light+Intensity+Drives+the+Plastoquinone+Oxidation+System&#8212;Relationship+Among+the+Fraction+of+Open+PSII+Centers,+Non-Photochemical+Quenching+of+Chl+Fluorescence+and+the+Maximum+Quantum+Yield+of+PSII+in+the+Dark.">Acclimation of Tobacco Leaves to High Light Intensity Drives the Plastoquinone Oxidation System&#8212;Relationship Among the Fraction of Open PSII Centers, Non-Photochemical Quenching of Chl Fluorescence and the Maximum Quantum Yield of PSII in the Dark.</a> Plant and Cell Physiology. 50 (4), 730-743 (2009).</li><li>Munekage, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclic+electron+flow+around+photosystem+I+is+essential+for+photosynthesis.">Cyclic electron flow around photosystem I is essential for photosynthesis.</a> Nature. 429 (6991), 579-582 (2004).</li><li>Tubuxin, B., Rahimzadeh-Bajgiran, P., Ginnan, Y., Hosoi, F., Omasa, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimating+chlorophyll+content+and+photochemical+yield+of+photosystem+II+(&#934;PSII)+using+solar-induced+chlorophyll+fluorescence+measurements+at+different+growing+stages+of+attached+leaves.">Estimating chlorophyll content and photochemical yield of photosystem II (&#934;PSII) using solar-induced chlorophyll fluorescence measurements at different growing stages of attached leaves.</a> Journal of Experimental Botany. 66 (18), 5595-5603 (2015).</li></ol>

इस अध्ययन में, हमने यह दिखाने के लिए अतिरिक्त साक्ष्य प्राप्त किए कि PRI एक साथ क्लोरोफिल फ्लोरोसेंट और पत्ती परावर्तकता को मापने के द्वारा जैन्थोफिल पिगमेंट का प्रतिनिधित्व करता है।
एक हैलो...

पर्ण परावर्तन का प्रयोग वनस्पति सूचकांकों को दूरस्थ रूप से संवेदन देने के लिए किया जाता है जो पादपों में प्रकाश संश्लेषण या लक्षणों को प्रतिबिंबित करते हैं. सामान्यीकृत अंतर वनस्पति सूचकांक (एनडीवी), जो अवरक्त प्रतिबिंब संकेतों पर आधारित है, क्लोरोफिल से संबंधित गुणों का पता लगाने के लिए सबसे व्यापक रूप से ज्ञात वनस्पति सूचकांकों में से एक है, और यह पारिस्थितिकी और कृषि विज्ञान में एक के रूप में प्रयोग किया जाता है पेड़ों या फसलों में पर्यावरण ीय प्रतिक्रियाओं का सूचक3| क्षेत्र अध्ययन में, हालांकि कई पैरामीटर (जैसे, क्लोरोफिल सूचकांक (सीआई), जल सूचकांक (WI), आदि) विकसित किया गया है और इस्तेमाल किया, क्या इन मापदंडों सीधे (या परोक्ष रूप से) का पता लगाने के कुछ विस्तृत सत्यापन म्यूटेंट का उपयोग कर प्रदर्शन किया गया है.
क्लोरोफिल फ्लोरोसेंट का पल्स-एम्प्लियम मॉडुलन (पीएएम) विश्लेषण प्रकाश संश् लेषी प्रतिक्रियाओं और फोटोसिस्टम II (पीएसII)4में शामिल प्रक्रियाओं को मापने के लिए एक प्रभावी तरीका है। क्लोरोफिल फ्लोरोसेंट एक कैमरे के साथ पता लगाया जा सकता है और प्रकाश संश्लेषण म्यूटेंट5स्क्रीनिंग के लिए इस्तेमाल किया. हालांकि, क्लोरोफिल फ्लोरोसेंट के कैमरे का पता लगाने के लिए जटिल प्रोटोकॉल जैसे अंधेरे उपचार या प्रकाश संतृप्ति दालों की आवश्यकता होती है, जिन्हें क्षेत्र अध्ययनों में लागू करना मुश्किल होता है।
पत्ता अवशोषित सौर प्रकाश ऊर्जा मुख्य रूप से प्रकाश संश्लेषी प्रतिक्रियाओं द्वारा भस्म हो जाता है। इसके विपरीत, अतिरिक्त प्रकाश ऊर्जा के अवशोषण प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों, जो प्रकाश संश्लेषण अणुओं को नुकसान का कारण बनता है उत्पन्न कर सकते हैं. अतिरिक्त प्रकाश ऊर्जा गैर फोटोकेमिकल शमन (एनपीक्यू) तंत्र6के माध्यम से गर्मी के रूप में नष्ट किया जाना चाहिए। फोटोकेमिकल परावर्तकता सूचकांक (पीआरआई), जो पत्ती परावर्तकता पैरामीटरों में प्रकाश-निर्भर परिवर्तनों को दर्शाता है,531 और 570 एनएम (संदर्भ तरंगदैर्ध्य) 7,8पर संकीर्ण बैंड परावर्तकता से व्युत्पन्न है। यह क्लोरोफिल फ्लोरोसेंट विश्लेषण9में एनपीक्यू के साथ सहसंबंधित होने की सूचना है। हालांकि, चूंकि NPQ एक समग्र पैरामीटर है जिसमें जैन्थोफिल चक्र, राज्य परंपरा, और photoinhibition शामिल है, इसलिए पंचायती राज पैरामीटर उपायों को समझने के लिए विस्तृत सत्यापन की आवश्यकता है। हमने जैन्थोफिल चक्र, एक थर्मल अपव्यय प्रणाली पर ध्यान केंद्रित किया है जिसमें जैन्थोफिल पिगमेंट (विओलाक्सैन्थिन से एंथेरेक्सान्थिन और ज़ेएक्सान्थिन) और एनपीक्यू का एक मुख्य घटक शामिल है क्योंकि पंचायती राज और इनके रूपांतरण के बीच सहसंबंध और रूपांतरण पिछले अध्ययनों में वर्णकों की सूचना दी गईहै 8.
कई प्रकाश संश्लेषण से संबंधित म्यूटेंट अलग किया गया है और Arabidopsis में पहचान की. npQ1 उत्परिवर्ती zeaxanthin जमा नहीं करता है क्योंकि यह violaxanthin de-epoxidase (VDE) में एक उत्परिवर्तन किया जाता है, जो violaxanthin के रूपांतरण zeaxanthin10को उत्प्रेरित करता है. यह स्थापित करने के लिए कि क्या PRI केवल जैन्थोफिल पिगमेंट्स में परिवर्तन का पता लगाता है, हम एक साथ NPQ1 और जंगली प्रकार में एक ही पत्ती क्षेत्र में PRI और क्लोरोफिल फ्लोरोसेंट मापा और फिर निकालने के लिए अंधेरे छूट के अलग समय तराजू पर NPQ विच्छेदन जैन्थोफिल से संबंधित घटक11| ये एक साथ माप वनस्पति सूचकांक के काम के लिए एक मूल्यवान तकनीक प्रदान करते हैं. इसके अलावा, चूंकि पंचायती राज सकल प्राथमिक उत्पादकता (जीपीपी) से संबंधित है, इसलिए एक घटक को पंचायती राज को ठीक से असाइन करने की क्षमता में पारिस्थितिकी12में महत्वपूर्ण अनुप्रयोग हैं।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Halogen light source</td>
			<td>OptoSigma</td>
			<td>SHLA-150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light quantum meter</td>
			<td>LI-COR</td>
			<td>LI-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PAM chlorophyll fluorometer</td>
			<td>Walz</td>
			<td>JUNIOR-PAM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PAM controliing software</td>
			<td>Walz</td>
			<td>WinControl-3.27</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reflectance standard</td>
			<td>Labsphere, Inc.</td>
			<td>SRT-99-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectral radiometer</td>
			<td>ADS Inc.</td>
			<td>Field Spec3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectral radiometer controlling software</td>
			<td>ADS Inc.</td>
			<td>RS3</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

evaluation of photosynthetic behaviors by simultaneous measurements of leaf reflectance and chlorophyll fluorescence analyses

क्लोरोफिल एक फ्लोरोसेंट विश्लेषण व्यापक रूप से बरकरार पौधों में प्रकाश संश्लेषण व्यवहार को मापने के लिए प्रयोग किया जाता है, और कुशलता से प्रकाश संश्लेषण को मापने कि कई मापदंडों के विकास में हुई है। पत्ता परावर्तक विश्लेषण पारिस्थितिकी और कृषि में कई वनस्पति सूचकांक प्रदान करता है, फोटोकेमिकल परावर्तक सूचकांक (पीआरआई) सहित, जिसे प्रकाश संश्लेषण के दौरान थर्मल ऊर्जा क्षय के सूचक के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है क्योंकि यह के साथ संबंधित है गैर-फोटोकेमिकल शमन (एनपीक्यू)। तथापि, चूंकि एनपीक्यू एक समग्र पैरामीटर है, इसलिए PRI पैरामीटर की प्रकृति को समझने के लिए इसके सत्यापन की आवश्यकता होती है। PRI पैरामीटर के मूल्यांकन के लिए शारीरिक साक्ष्य प्राप्त करने के लिए, हम एक साथ एक साथ xanthophyll चक्र दोषपूर्ण उत्परिवर्ती (npQ1) और जंगली प्रकार Arabidopsis पौधों में क्लोरोफिल फ्लोरोसेंट और पत्ती परावर्तकता मापा. इसके अतिरिक्त, क्यूजेड पैरामीटर, जो संभावित रूप से जैन्थोफिल चक्र को दर्शाता है, प्रकाश को बंद करने के बाद एनपीक्यू की छूट गतिज की निगरानी करके क्लोरोफिल फ्लोरोसेंट विश्लेषण के परिणामों से निकाला गया था। ये एक साथ माप एक पल्स-एम्पलेंडल ममॉडुलन (पीएएम) क्लोरोफिल फ्लोरोमीटर और एक वर्णक्रमीय रेडियोमीटर का उपयोग कर के लिए किया गया। दोनों उपकरणों से फाइबर जांच एक ही पत्ती की स्थिति से संकेतों का पता लगाने के लिए एक दूसरे के करीब तैनात थे. प्रकाश संश्लेषण को सक्रिय करने के लिए एक बाहरी प्रकाश स्रोत का उपयोग किया गया था, और मापने रोशनी और संतृप्त प्रकाश पीएएम साधन से प्रदान किए गए थे। इस प्रयोगात्मक प्रणाली ने हमें बरकरार संयंत्र में प्रकाश पर निर्भर PRI पर नजर रखने के लिए सक्षम है और पता चला कि PRI में प्रकाश पर निर्भर परिवर्तन जंगली प्रकार और npQ1 उत्परिवर्ती के बीच काफी अलग हैं. इसके अलावा, PRI ु के साथ दृढ़ता से सहसंबद्ध था, जिसका अर्थ है कि ु] जैन्थोफिल चक्र को दर्शाता है। एक साथ, इन माप का प्रदर्शन किया है कि पत्ती reflectance और क्लोरोफिल फ्लोरोसेंट के एक साथ माप पैरामीटर मूल्यांकन के लिए एक वैध दृष्टिकोण है.

चित्र 1 क्लोरोफिल फ्लोरोसेंट और पत्ती परावर्तकता को एक साथ मापने के लिए स्थापित प्रायोगिक का एक योजनाबद्ध आरेख प्रस्तुत करता है। PAM और वर्णक्रमीय विकिरणमापी के फाइबर जांच कस्ट?...

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Evaluation of Photosynthetic Behaviors by Simultaneous Measurements of Leaf Reflectance and Chlorophyll Fluorescence Analyses

हम उच्च पौधों में प्रकाश संश्लेषण प्रतिक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए एक नए तकनीकी दृष्टिकोण का वर्णन करते हैं जिसमें क्लोरोफिल फ्लोरोसेंट और पत्ती परावर्तकता के साथ-साथ माप शामिल हैं, जिसमें पीएएम और एक वर्णक्रमीय रेडियोमीटर का उपयोग करके संकेतों का पता लगाने के लिए Arabidopsis में एक ही पत्ती क्षेत्र.

पत्ता परावर्तकता और क्लोरोफिल फ्लोरेसेंस विश्लेषण के एक साथ माप द्वारा फोटोसिंथेटिक व्यवहार का मूल्यांकन

Chlorophyll a fluorescence analysis is widely used to measure photosynthetic behaviors in intact plants, and has resulted in the development of many ...

पहले से ज्ञात उत्परिवर्ती संयंत्र मॉडल का उपयोग करके क्लोरोफिल फ्लोरेसेंस विश्लेषण के साथ पत्ती को प्रतिबिंबित करने का एक साथ माप नए परावर्तन मापदंडों की स्थापना की सुविधा प्रदान करता है। हमारी विधि द्वारा नए पत्ते परावर्तन मापदंडों का निर्माण प्राकृतिक पर्यावरणीय परिस्थितियों में पौधों के व्यवहार को बदलने की वास्तविक समय की निगरानी की अनुमति देता है। एक प्रयोग शुरू करने से पहले एक माप प्रणाली की स्थापना के रूप में इस योजनाबद्ध में दिखाया गया है ।एक नमूना चरण, प्रकाश स्रोत, पाम फ्लोरोमीटर, और स्पेक्ट्रल रेडियोमीटर के साथ। इसके बाद कस्टम मेड सैंपल स्टेज पर एक सेमी व्यास के छेद के साथ 10 सेमी चुकता स्टील प्लेट संलग्न करें। और दो पतली फाइबर जांच कसकर एक साथ फिट ।प्लास्टिक टेप के साथ जांच लपेटें। फिर नमूना चरण पर टेप जांच क्लिप करने के लिए एक धारक का उपयोग करें। जांच को नमूना चरण में ऊर्ध्वाधर स्थिति में रखें।और हैलोजन प्रकाश स्रोत के लिए कांच के फाइबर से बना एक द्विक्त प्रकाश गाइड संलग्न करें। फिर लगभग 45 डिग्री कोणों पर दोनों दिशाओं से नमूना चरण को मिटा दें। प्रकाश स्रोत को समायोजित करना ताकि प्रकाश समान रूप से छाया कास्टिंग के बिना नमूना चरण को रोशन करे।बाएं परावर्तन और क्लोरोफिल फ्लोरेसेंस विश्लेषण के एक साथ माप के लिए, हरे सेलोफेन प्रकाश के साथ एक अंधेरे कमरे में नमूना चरण के पत्ते धारक पर एक परीक्षण संयंत्र रखें और मंच पर स्टील प्लेट के छेद के खिलाफ पत्ती को स्पर्श करें। पाम फ्लोरोमीटर पर कमजोर हरी बत्ती बंद करने के बाद और एक मापने प्रकाश के साथ पत्ती के नमूने को eradiate । समायोजक को स्थानांतरित करें ताकि फ्लोरेसेंस तीव्रता लगभग 100 मापें और जांच और पत्ती के बीच की दूरी को मापें।समायोजक को जगह में ठीक करें और समायोजक पर दूरी के मूल्य को रिकॉर्ड करें। इसके बाद मापक प्रकाश को बंद कर दें और परीक्षण संयंत्र को हटा दें। ऐक्टिक लाइट तीव्रता माप के लिए उस स्थिति पर एक हल्का क्वांटिटाइमर रखें जहां नमूना पत्ती रखी जाएगी।और प्रकाश स्रोत तीव्रता को मापने के लिए हैलोजन प्रकाश स्रोत से प्रकाश को विकिरणित करें। निर्धारित करें कि प्रकाश स्रोत डायल की कौन सी स्थिति प्रति सेकंड 40 मीटर 40 30, 60, 120, 240 और 480 माइक्रोमोलर प्रोटॉन की तीव्रता उत्पन्न करती है। पत्ती के नमूने की स्थिति में एक परावर्तक मानक के रूप में एक सफेद प्लेट रखें।और एक स्पेक्ट्रल रेडियोमीटर चालू करें। 350 और 850 नैनोमीटर के बीच स्पेक्ट्रल परावर्तन को समायोजित करें। इस समय कोई स्पेक्ट्रल डेटा नहीं है क्योंकि कोई विकिरण प्रकाश नहीं है।हैलोजन लैंप को प्रति सेकंड 480 माइक्रोमोलर फोटॉन प्रति मीटर चुकता के साथ विकिरणित करने के लिए चालू करें। इस परीक्षण में सबसे अधिक विकिरण तीव्रता और संतृप्ति से बचने के लिए रेडियोमीटर का पता लगाने की ताकत को समायोजित करें। फिर प्रति सेकंड चुकता प्रति मीटर 30, 60, 120, 240 और 480 माइक्रोमोलर फोटॉन के साथ रोशनी के तहत स्पेक्ट्रल परावर्तन रिकॉर्ड करें।पत्ती परावर्तन और क्लोरोफिल फ्लोरेसेंस विश्लेषण के एक साथ माप के लिए पौधे को विकास कक्ष से एक ही तापमान और आर्द्रता के साथ डार्करूम में स्थानांतरित करें। एक घंटे के बाद पत्ती के नमूने की स्थिति में एक अरबीडोप्सिस संयंत्र रखें। और पत्ती के लिए नमूना पत्ती को ठीक करें ताकि पत्ती की सतह पता लगाने की जांच के लिए लंबवत हो।पाम फ्लोरोमीटर चालू करें और वक्र रिकॉर्डिंग शुरू करें। इस मान को शून्य कहा जाता है। मापने वाले प्रकाश को चालू करें और वक्र का जवाब देने के लिए लगभग 30 सेकंड इंतजार करें।इस मान को एफ जीरो कहा जाता था। पाम से 0.8 सेकंड के लिए प्रति सेकंड चुकता प्रति मीटर 4, 000 माइक्रोमोलर फोटॉन की एक संतृप्त नाड़ी वितरित करें और बढ़ी हुई फ्लोरेसेंस तीव्रता के साथ वक्र में स्पाइक का उच्चतम मूल्य प्राप्त करें। इस मान को Fm.तो अंधेरे में फोटो सिस्टम दो की अधिकतम क्वांटम उपज की गणना करने के लिए सूत्र का उपयोग करें कहा जाता है ।स्थिर स्थिति में फोटोसिंथेटिक व्यवहार को मापने के लिए, रिकॉर्डिंग के बाद एफएम प्रति सेकंड 30 माइक्रोमोलर फोटॉन प्रति मीटर के साथ पत्ती के नमूने को विकिरणित करता है। जबकि पत्ती परावर्तन की निगरानी के लिए स्पेक्ट्रल रेडियोमीटर चालू करें। एक स्थिर स्थिति तक पहुंचने के लिए फोटोसिंथेटिक प्रतिक्रिया के लिए कम से कम 20 मिनट प्रतीक्षा करें।इस प्रतिक्रिया अवधि के दौरान, संतृप्ति नाड़ी एक मिनट के अंतराल पर आपूर्ति की जाएगी। स्थिर राज्य की फ्लोरेसेंस तीव्रता को एफएस कहा जाता है । स्पंदित प्रकाश के 20 मिनट के बाद प्राप्त अधिकतम फ्लोरेसेंस मूल्य को एफएम प्राइम कहा जाता है । इस बिंदु पर स्पेक्ट्रल परावर्तन रिकॉर्ड करें।स्थिर अवस्था में प्रकाश संश्लेषण गतिविधि की गणना करने के लिए फोटो सिस्टम दो की क्वांटम पैदावार की गणना करें जिसका अनुमान ऐक्टिनिक प्रकाश के तहत संतृप्त दालों के साथ विकिरण द्वारा लगाया जा सकता है। फोटो सिस्टम दो रिएक्शन सेंटर से रैखिक इलेक्ट्रॉन प्रवाह का अनुमान लगाएं। फिर गैर फोटोकेमिकल शमन की गणना करें और 531 और 570 नैनोमीटर से फोटोकेमिकल रिफ्लेक्स इंडेक्स की गणना करें।एफएस और पत्ती परावर्तन प्राप्त करने के बाद ऐक्टिविक प्रकाश को बंद कर दें और अंधेरे विश्राम के दौरान एक मिनट के अंतराल पर संतृप्त नाड़ी प्रदान करें। अंधेरे के नीचे संतृप्ति नाड़ी द्वारा प्रेरित अधिकतम फ्लोरेसेंस मूल्य को एफएम डबल प्राइम कहा जाता है। और ऐक्टिव लाइट बंद करने के बाद दो और 10 मिनट पर एफएम डबल प्राइम डेटा को सेव करें ।विश्राम कनेक्टेंट से गैर फोटोकेमिकल शमन के मापदंडों की गणना करने के लिए, दो मिनट के डार्क अडॉप्शन एफएम डबल प्राइम डेटा के साथ क्यूई का अनुमान लगाएं। 10 मिनट डार्क अडॉप्शन एफएम डबल प्राइम डेटा के साथ जंथॉक्सीलम डिपेंडेंट शमन, क्यूजेड की गणना करें। फिर फोटो निरोधात्मक स्थिति की गणना करें।अगले माप के रूप में प्रति मीटर 60 माइक्रोमोलर फोटॉनों पर ऐक्टिनिक लाइट चालू करें और उसी माप को दोहराएं। इस प्रतिनिधि प्रयोग में, जंगली प्रकार और उत्परिवर्ती अरबीडोप्सिस पौधों की तुलना की गई थी। फोटोकेमिकल रिफ्लेक्स इंडेक्स में बदलाव, पीआरआई, जिसकी गणना लीफ रिफ्लेक्स से की जाती है, को पीएएम फ्लोरोमीटर द्वारा अनुमानित फोटो सिस्टम दो से प्रकाश निर्भर रैखिक इलेक्ट्रॉन प्रवाह के खिलाफ प्लॉट किया गया था।इस प्रयोग में पीआरआई में परिवर्तन नकारात्मक रूप से जंगली प्रकार के पौधों में रैखिक इलेक्ट्रॉन प्रवाह के साथ सहसंबद्ध था, लेकिन उत्परिवर्ती पौधों में नहीं। क्यूजेड जो xanthophyll चक्र का प्रतिनिधित्व करता है गैर फोटोकेमिकल शमन के अंधेरे विश्राम कनेक्टिक्स से आंशिक था और यह भी पंचायती राज में परिवर्तन के खिलाफ साजिश रची गई थी । इस विश्लेषण में क्यूजेड को दोनों संयंत्र उपभेदों के लिए पीआरआई में परिवर्तन के साथ दृढ़ता से सहसंबद्ध भी किया गया था, जिसका अर्थ है कि पीआरआई xanthophyll चक्र को दर्शाता है।एक ही प्रकाश स्रोत या तीव्रता का उपयोग करके एक ही पत्ती क्षेत्र के एक साथ माप के लिए पत्ती को खड़ी स्थिति में रखने के लिए फिक्सिंग डिवाइस में एक ही पहचान फाइबर का उपयोग करें। परावर्तन स्पेक्ट्रोस्कोपी में विभिन्न प्रकार के फेनोटाइप के विश्लेषण में, जंगली प्रकार और उत्परिवर्ती पौधों में पौधे आणविक तंत्र को स्पष्ट करने के लिए उपयोग करने की क्षमता होती है।

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