Name: evaluation of photosynthetic behaviors by simultaneous measurements of leaf reflectance and chlorophyll fluorescence analyses
Uploaded: 2019-08-09T15:00:00
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Agradecemos ao Dr. Kouki Hikosaka (Universidade Tohoku) por estimular discussões, assistência com um espaço de trabalho e instrumentos para experimentos. O trabalho foi apoiado em parte por KAKENHI [Grant Numbers 18K05592, 18J40098] e Naito Foundation.

1. cultivo de plantas de Arabidopsis
<ol><li>Mergulhe sementes de Arabidopsis Arabidopsis thaliana em água desionizada esterilizada em um microtubo, e incubar por 2 dias a 4 ° c no escuro.</li>
	<li>Coloc aproximadamente quatro das sementes imbibed, frio-tratadas na superfície do solo usando uma micropipeta. Incubar os vasos plantados em uma câmara de crescimento com uma luz de 16 h (120 μmol fótons m– 2 s– 1) e 8 h de período escuro a 22 ° c e 20 ° c, respectivamente.</li>
	...

<ol>
	<li>Xue, J., Su, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Significant+remote+sensing+vegetation+indices:+A+review+of+developments+and+applications.">Significant remote sensing vegetation indices: A review of developments and applications.</a> Journal of Sensors. 1353691, (2017).</li><li>Cotrozzi, L., Townsend, P. A., Pellegrini, E., Nali, C., Couture, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reflectance+spectroscopy:+a+novel+approach+to+better+understand+and+monitor+the+impact+of+air+pollution+on+Mediterranean+plants.">Reflectance spectroscopy: a novel approach to better understand and monitor the impact of air pollution on Mediterranean plants.</a> Environmental Science and Pollution Research. 25 (9), 8249-8267 (2018).</li><li>Han, L., Yang, G., Yang, H., Xu, B., Li, Z., Yang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clustering+Field-Based+Maize+Phenotyping+of+Plant-Height+Growth+and+Canopy+Spectral+Dynamics+Using+a+UAV+Remote-Sensing+Approach.">Clustering Field-Based Maize Phenotyping of Plant-Height Growth and Canopy Spectral Dynamics Using a UAV Remote-Sensing Approach.</a> Frontiers in Plant Science. 9, 1638 (2018).</li><li>Baker, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chlorophyll+Fluorescence:+A+Probe+of+Photosynthesis+In.">Chlorophyll Fluorescence: A Probe of Photosynthesis In.</a> Vivo. Annual Review of Plant Biology. 59 (1), 89-113 (2008).</li><li>Cruz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+Environmental+Photosynthetic+Imaging+Reveals+Emergent+Phenotypes.">Dynamic Environmental Photosynthetic Imaging Reveals Emergent Phenotypes.</a> Cell Systems. 2 (6), 365-377 (2016).</li><li>Ruban, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+the+efficiency+of+photoprotection.">Quantifying the efficiency of photoprotection.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society B: Biological Sciences. 372 (1730), 20160393 (2017).</li><li>Gamon, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Remote+sensing+of+the+xanthophyll+cycle+and+chlorophyll+fluorescence+in+sunflower+leaves+and+canopies.">Remote sensing of the xanthophyll cycle and chlorophyll fluorescence in sunflower leaves and canopies.</a> Oecologia. 85 (1), 1-7 (1990).</li><li>Gamon, J. A., Pe&#241;uelas, J., Field, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+narrow-waveband+spectral+index+that+tracks+diurnal+changes+in+photosynthetic+efficiency.">A narrow-waveband spectral index that tracks diurnal changes in photosynthetic efficiency.</a> Remote Sensing of Environment. 41 (1), 35-44 (1992).</li><li>Rahimzadeh-Bajgiran, P., Munehiro, M., Omasa, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationships+between+the+photochemical+reflectance+index+(PRI)+and+chlorophyll+fluorescence+parameters+and+plant+pigment+indices+at+different+leaf+growth+stages.">Relationships between the photochemical reflectance index (PRI) and chlorophyll fluorescence parameters and plant pigment indices at different leaf growth stages.</a> Photosynthesis Research. 113 (1-3), 261-271 (2012).</li><li>Niyogi, K. K., Grossman, A. R., Bj&#246;rkman, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arabidopsis+mutants+define+a+central+role+for+the+xanthophyll+cycle+in+the+regulation+of+photosynthetic+energy+conversion.">Arabidopsis mutants define a central role for the xanthophyll cycle in the regulation of photosynthetic energy conversion.</a> Plant Cell. 10 (7), 1121-1134 (1998).</li><li>Kohzuma, K., Hikosaka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+validation+of+photochemical+reflectance+index+(PRI)+as+a+photosynthetic+parameter+using+Arabidopsis+thaliana+mutants.">Physiological validation of photochemical reflectance index (PRI) as a photosynthetic parameter using Arabidopsis thaliana mutants.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 498, 52-57 (2018).</li><li>Hikosaka, K., Noda, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+leaf+CO2+assimilation+and+Photosystem+II+photochemistry+from+chlorophyll+fluorescence+and+the+photochemical+reflectance+index.">Modeling leaf CO2 assimilation and Photosystem II photochemistry from chlorophyll fluorescence and the photochemical reflectance index.</a> Plant, Cell and Environment. 42 (2), 730-739 (2019).</li><li>Brooks, M. D., Sylak-Glassman, E. J., Fleming, G. R., Niyogi, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+thioredoxin-like/&#946;-propeller+protein+maintains+the+efficiency+of+light+harvesting+in+Arabidopsis.">A thioredoxin-like/&#946;-propeller protein maintains the efficiency of light harvesting in Arabidopsis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (29), E2733-E2740 (2013).</li><li>Nilkens, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+slowly+inducible+zeaxanthin-dependent+component+of+non-photochemical+quenching+of+chlorophyll+fluorescence+generated+under+steady-state+conditions+in+Arabidopsis.">Identification of a slowly inducible zeaxanthin-dependent component of non-photochemical quenching of chlorophyll fluorescence generated under steady-state conditions in Arabidopsis.</a> Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Bioenergetics. 1797 (4), 466-475 (2010).</li><li>Davis, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limitations+to+photosynthesis+by+proton+motive+force-induced+photosystem+II+photodamage.">Limitations to photosynthesis by proton motive force-induced photosystem II photodamage.</a> Elife. 5, 16921 (2016).</li><li>Wong, C. Y. S., Gamon, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+photochemical+reflectance+index+provides+an+optical+indicator+of+spring+photosynthetic+activation+in+evergreen+conifers.">The photochemical reflectance index provides an optical indicator of spring photosynthetic activation in evergreen conifers.</a> New Phytologist. 206 (1), 196-208 (2015).</li><li>Miyake, C., Amako, K., Shiraishi, N., Sugimoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acclimation+of+Tobacco+Leaves+to+High+Light+Intensity+Drives+the+Plastoquinone+Oxidation+System&#8212;Relationship+Among+the+Fraction+of+Open+PSII+Centers,+Non-Photochemical+Quenching+of+Chl+Fluorescence+and+the+Maximum+Quantum+Yield+of+PSII+in+the+Dark.">Acclimation of Tobacco Leaves to High Light Intensity Drives the Plastoquinone Oxidation System&#8212;Relationship Among the Fraction of Open PSII Centers, Non-Photochemical Quenching of Chl Fluorescence and the Maximum Quantum Yield of PSII in the Dark.</a> Plant and Cell Physiology. 50 (4), 730-743 (2009).</li><li>Munekage, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclic+electron+flow+around+photosystem+I+is+essential+for+photosynthesis.">Cyclic electron flow around photosystem I is essential for photosynthesis.</a> Nature. 429 (6991), 579-582 (2004).</li><li>Tubuxin, B., Rahimzadeh-Bajgiran, P., Ginnan, Y., Hosoi, F., Omasa, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimating+chlorophyll+content+and+photochemical+yield+of+photosystem+II+(&#934;PSII)+using+solar-induced+chlorophyll+fluorescence+measurements+at+different+growing+stages+of+attached+leaves.">Estimating chlorophyll content and photochemical yield of photosystem II (&#934;PSII) using solar-induced chlorophyll fluorescence measurements at different growing stages of attached leaves.</a> Journal of Experimental Botany. 66 (18), 5595-5603 (2015).</li></ol>

Neste estudo, nós obtivemos a evidência adicional para mostrar que o PRI representa pigmentos do xantofila medindo simultaneamente a fluorescência da clorofila e a reflectância da folha.
Uma luz do halogênio, que tenha comprimentos de onda similares à luz solar, foi adaptada para o uso como uma fonte luminosa acóica para ativar a fotossíntese. Inicialmente, utilizamos uma fonte de luz LED branca para evitar danos térmicos da superfície foliar, mas isso produziu cinética lenta de rel...

A reflectância foliar é utilizada para sentir remotamente os índices de vegetação que refletem a fotossíntese ou traços nas plantas1,2. O índice de vegetação de diferença normalizada (NDVI), que é baseado em sinais de reflexão infravermelha, é um dos índices de vegetação mais conhecidos para a detecção de propriedades relacionadas à clorofila, e é usado nas ciências ecológicas e agrícolas como um indicador de respostas ambientais em árvores ou culturas3. Em estudos de campo, embora muitos parâmetros (por exemplo, índice de clorofila (IC), índice de água (WI), etc.) tenham sido desenvolvidos e utilizados, poucas verificações detalhadas do que esses parâmetros diretamente (ou indiretamente) detectam foram realizados usando mutantes.
A análise da modulação por amplitude de pulso (PAM) da fluorescência da clorofila é um método efetivo para mensurar as reações fotossintéticas e os processos envolvidos no fotosistema II (PSII)4. A fluorescência da clorofila pode ser detectada com uma câmera e usada para a triagem de mutantes de fotossíntese5. No entanto, a detecção de câmera de fluorescência de clorofila requer protocolos complexos, como o tratamento escuro ou pulsos de saturação de luz, que são difíceis de implementar em estudos de campo.
A energia de luz solar absorvida pela folha é consumida principalmente por reações fotossintéticas. Em contrapartida, a absorção de excesso de energia luminosa pode gerar espécies reactivas de oxigénio, o que provoca danos às moléculas fotossintéticas. O excesso de energia luminosa deve ser dissipado como calor através de mecanismos de têmpera não fotoquímica (NPQ)6. O índice de reflectância fotoquímica (PRI), que reflete mudanças dependentes da luz nos parâmetros de reflectância foliar, é derivado da reflectância de banda estreita em 531 e 570 nm (comprimento de onda de referência)7,8. É relatado para correlacionar com NPQ na análise da fluorescência da clorofila9. No entanto, como o NPQ é um parâmetro composto que inclui o ciclo da xantofilo, a tradição do estado e a Fotoinibição, é necessária uma validação detalhada para entender o que o parâmetro PRI mede. Nós focamos no ciclo de xantofila, um sistema de dissipação térmica que envolve o de-epoxidation de pigmentos do xantofila (Violaxanthin a antheraxanthin e o zeaxanthin) e um componente principal de npq porque as correlações entre o PRI e a conversão destes os pigmentos foram relatados em estudos precedentes8.
Muitos mutantes relacionados à fotossíntese foram isolados e identificados em Arabidopsis. O mutante npq1 não acumula o zeaxantina porque carreg uma mutação no de-epoxidase do violaxantina (VDE), que catalisa a conversão de violaxantina a zeaxantina10. Para estabelecer se o PRI detecta somente mudanças em pigmentos do xantofila, Nós medimos simultaneamente o PRI e a fluorescência da clorofila na mesma área de folha em npq1 e no selvagem-tipo e então no npq dissecado em escalas de tempo variando do abrandamento escuro para extrair componente relacionado com a xantofilo11. Essas medições simultâneas fornecem uma técnica valiosa para a atribuição de índices de vegetação. Além disso, desde que o PRI correlaciona com a produtividade preliminar bruta (GPP), a habilidade de atribuir o PRI precisamente a um componente tem aplicações importantes na ecologia12.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Halogen light source</td>
			<td>OptoSigma</td>
			<td>SHLA-150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light quantum meter</td>
			<td>LI-COR</td>
			<td>LI-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PAM chlorophyll fluorometer</td>
			<td>Walz</td>
			<td>JUNIOR-PAM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PAM controliing software</td>
			<td>Walz</td>
			<td>WinControl-3.27</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reflectance standard</td>
			<td>Labsphere, Inc.</td>
			<td>SRT-99-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectral radiometer</td>
			<td>ADS Inc.</td>
			<td>Field Spec3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectral radiometer controlling software</td>
			<td>ADS Inc.</td>
			<td>RS3</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

evaluation of photosynthetic behaviors by simultaneous measurements of leaf reflectance and chlorophyll fluorescence analyses

A análise da fluorescência da clorofila a é amplamente utilizada para medir comportamentos fotossintéticos em plantas intactas, e resultou no desenvolvimento de muitos parâmetros que medem eficientemente a fotossíntese. A análise da reflectância foliar fornece diversos índices de vegetação em ecologia e agricultura, incluindo o índice de reflectância fotoquímico (PRI), que pode ser usado como um indicador de dissipação de energia térmica durante a fotossíntese, pois se correlaciona com têmpera não fotoquímica (NPQ). No entanto, como o NPQ é um parâmetro composto, sua validação é necessária para entender a natureza do parâmetro PRI. Para obter evidências fisiológicas para avaliação do parâmetro PRI, medimos simultaneamente a fluorescência de clorofila e a reflectância foliar no ciclo xantofilo mutante defeituoso (npq1) e no tipo selvagem de plantas de Arabidopsis. Adicionalmente, o parâmetro qZ, que provavelmente reflete o ciclo da xantofilo, foi extraído dos resultados da análise de fluorescência de clorofila, monitorando a cinética de relaxamento do NPQ após a comutação da luz. Essas medidas simultâneas foram realizadas por meio de um fluorômetro de clorofila de modulação de amplitude de pulso (PAM) e um radiômetro espectral. As sondas de fibra de ambos os instrumentos foram posicionadas próximas umas das outras para detectar sinais da mesma posição foliar. Uma fonte de luz externa foi usada para ativar a fotossíntese, e as luzes de medição e luz saturada foram fornecidas a partir do instrumento PAM. Este sistema experimental permitiu-nos de monitorar o PRI Light-dependent na planta intata e revelou que as mudanças luz-dependentes no PRI diferem significativamente entre o tipo selvagem e o mutante npq1 . Além disso, o PRI foi correlacionado fortemente com o QZ, significando que QZ reflete o ciclo do xantofila. Juntas, essas medidas demonstraram que a medida simultânea da reflectância foliar e da fluorescência da clorofila é uma abordagem válida para a avaliação dos parâmetros.

A Figura 1 apresenta um diagrama esquemático do conjunto experimental para medir simultaneamente a fluorescência da clorofila e a reflectância foliar. As sondas de fibra do PAM e do radiômetro espectral foram ajustadas perpendicularmente à superfície foliar no suporte foliar no estágio de amostra feito medida, e uma lâmpada halógena foi usada para irradiação acóica de luz de direções esquerda e direita sem fundição Sombras. Os sinais PAM e ref...

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Evaluation of Photosynthetic Behaviors by Simultaneous Measurements of Leaf Reflectance and Chlorophyll Fluorescence Analyses

Nós descrevemos uma aproximação técnica nova para estudar respostas fotossintética em umas plantas mais elevadas que envolvem medidas simultâneas da fluorescência da clorofila a e da reflectância da folha usando um Pam e um radiómetro espectral para a deteção dos sinais do mesma área foliar em Arabidopsis.

Avaliação de comportamentos fotossintéticos por medições simultâneas de reflectância foliar e análises de fluorescência de clorofila

Chlorophyll a fluorescence analysis is widely used to measure photosynthetic behaviors in intact plants, and has resulted in the development of many ...

A medição simultânea da reflexão da folha com a análise de fluorescência de clorofila utilizando o já conhecido modelo de planta mutante facilita o estabelecimento de novos parâmetros de reflexão. A construção de novos parâmetros de reflectância de folhas pelo nosso método permite o monitoramento em tempo real das mudanças de comportamentos das plantas em condições ambientais naturais. Antes de iniciar, um experimento configurou um sistema de medição como mostrado neste esquema.Com um estágio amostral, fonte de luz, fluorômetro PAM e radiômetro espectral. Em seguida, conecte uma placa de aço quadrada de 10 cm com um orifício de um cm de diâmetro ao estágio de amostra feito sob medida. E coloque duas sondas de fibra finas bem juntas.Enrole as sondas com fita plástica. Em seguida, use um suporte para prender as sondas gravadas no estágio da amostra. Posicione as sondas verticalmente ao estágio da amostra.E anexar um guia de luz biforked feito de fibras de vidro à fonte de luz halógena. Em seguida, apaguei o estágio amostral de ambas as direções em ângulos de aproximadamente 45 graus. Ajustando a fonte de luz para que a luz ilumine uniformemente o estágio da amostra sem lançar sombras.Para medição simultânea da reflexão esquerda e da análise de floresnce de clorofila montada, em uma sala escura com luz de celofane verde coloque uma planta de teste no suporte da folha do estágio da amostra e toque a folha contra o orifício da placa de aço no palco. Depois de desligar a luz verde fraca, ligue o fluorômetro PAM e apague a amostra da folha com uma luz de medição. Mova o ajustador para que a intensidade de floresnce mede aproximadamente 100 e meça a distância entre a sonda e a folha.Corrija o ajustador no lugar e regise o valor da distância no ajustador. Em seguida, desligue a luz de medição e remova a planta de teste. Para medição da intensidade da luz actínica coloque um quantímetro leve na posição onde a folha de amostra será colocada.E irradiar luz da fonte de luz halógena para medir a intensidade da fonte de luz. Determinar quais posições do mostrador de fonte de luz geram intensidade de 30, 60, 120, 240 e 480 prótons micromolar por metro quadrado por segundo. Coloque uma placa branca como padrão refletidor na posição da amostra da folha.E ligue um radiômetro espectral. Ajuste a reflectância espectral entre 350 e 850 nanômetros. Não há dados espectrais neste momento, pois não há luz irradiante.Ligue a lâmpada halógena para irradiar com 480 fótons micromolar por metro quadrado por segundo. A maior intensidade de irradiação neste teste e ajustar a força de detecção do radiômetro para evitar a saturação. Em seguida, registosete a espectroral sob iluminação com 30, 60, 120, 240 e 480 fótons micromolar por metro quadrado por segundo.Para medição simultânea da reflexão da folha e análise de floresnce de clorofila, transfira a planta da câmara de crescimento para a sala escura com a mesma temperatura e umidade. Depois de uma hora coloque uma planta arabidopsis na posição da amostra de folhas. E fixar a folha de amostra na folha de modo que a superfície da folha seja perpendicular às sondas de detecção.Ligue o fluorômetro PAM e inicie a gravação da curva. Esse valor é chamado de zero. Ligue a luz de medição e espere aproximadamente 30 segundos para que a curva responda.Este valor foi chamado de F zero. Entregue um pulso saturado de 4.000 fótons micromolar por metro quadrado por segundo durante 0,8 segundos do PAM e obtenha o maior valor do pico na curva com maior intensidade de fluorescência. Este valor é chamado fm.Em seguida, use a fórmula para calcular o rendimento quântico máximo do sistema fotográfico dois no escuro.Para medir comportamentos fotossintéticos em estado estável, após o registro de Fm irradie a amostra da folha com os 30 fótons micromolar por metro quadrado por segundo. Ao ligar o radiômetro espectral para monitorar a reflexão da folha. Espere pelo menos 20 minutos para que a reação fotossintética chegue a um estado estável.Durante este período de reação, o pulso de saturação será fornecido em intervalos de um minuto. A intensidade florescente do estado estável é chamada Fs.O valor máximo de floresnce alcançado após 20 minutos de luz pulsada é chamado fm prime. Regisso-lo neste momento.Para calcular a atividade da fotossíntese no estado estável calcule os rendimentos quânticos do sistema fotográfico dois que podem ser estimados irradiando com pulsos saturados sob luz actínica. Estime o fluxo de elétrons lineares do sistema fotográfico dois centro de reação. Em seguida, calcule a saciedação não fotoquímica e calcule o índice de reflectância fotoquímica de 531 e 570 nanômetros.Depois de adquirir Fs e a reflexão da folha desligue a luz actínica e forneça um pulso saturado em intervalos de um minuto durante o relaxamento escuro. O valor máximo de floresnce induzido pelo pulso de saturação sob a escuridão é chamado fm duplo prime. E salve os dados primos duplos da Fm em dois e 10 minutos depois de desligar a luz actínica.Para calcular os parâmetros da extinção não fotoquímica dos conectores de relaxamento, estime o qE com os dados primos duplos de adaptação escura de dois minutos. Calcule a saciedade dependente zanthoxylum, qZ, com a adaptação escura de 10 minutos Fm dados primos duplos. Então calcule o estado inibidor da foto.Como próxima medição ligue a luz actínica a 60 fótons micromolar por metro quadrado por segundo e repita a mesma medição. Neste experimento representativo, foram comparadas plantas de arabidopsis selvagens e mutantes. A mudança no índice de reflectância fotoquímica, PRI, calculada a partir da reflexão da folha, foi plotada contra o fluxo de elétrons lineares dependentes da luz do sistema fotográfico dois, conforme estimado pelo fluorômetro PAM.Neste experimento, a mudança no PRI foi negativamente correlacionada com o fluxo de elétrons lineares em plantas do tipo selvagem, mas não em plantas mutantes. qZ que representa o ciclo xanthophyll foi fracionado a partir do relaxamento escuro connectics de saciamento não fotoquímico e também foi plotado contra a mudança no PRI. Nesta análise, o qZ também foi fortemente correlacionado com a mudança no PRI para ambas as cepas de plantas, implicando que o PRI reflete o ciclo xanthophyll.Para medição simultânea da mesma área da folha usando a mesma fonte ou intensidade de luz use a mesma fibra de detecção no dispositivo de fixação para posicionar a folha verticalmente. A espectroscopia de reflectância tem potencial para ser usada na análise de uma variedade de fenótipos, em plantas selvagens e mutantes para elucidar mecanismos moleculares vegetais.

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