Name: a plasma sample preparation for mass spectrometry using an automated workstation
Uploaded: 2020-04-24T13:30:00
Duration: 7 min 12 s
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	<li>Fu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+Reproducible+Automated+Proteomics+Sample+Preparation+Workflow+for+Quantitative+Mass+Spectrometry.">Highly Reproducible Automated Proteomics Sample Preparation Workflow for Quantitative Mass Spectrometry.</a> Journal of Proteome Research. 17 (1), 420-428 (2018).</li><li>Lehmann, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+mass+spectrometry+proteomics+(cMSP)+for+medical+laboratory:+What+does+the+future+hold?.">Clinical mass spectrometry proteomics (cMSP) for medical laboratory: What does the future hold?.</a> Clinica Chimica Acta. 467, 51-58 (2017).</li><li>Abbatiello, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-Scale+Interlaboratory+Study+to+Develop,+Analytically+Validate+and+Apply+Highly+Multiplexed,+Quantitative+Peptide+Assays+to+Measure+Cancer-Relevant+Proteins+in+Plasma.">Large-Scale Interlaboratory Study to Develop, Analytically Validate and Apply Highly Multiplexed, Quantitative Peptide Assays to Measure Cancer-Relevant Proteins in Plasma.</a> Molecular &amp; Cellular Proteomics. 14 (9), 2357-2374 (2015).</li><li>Kuster, B., Schirle, M., Mallick, P., Aebersold, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scoring+proteomes+with+proteotypic+peptide+probes.">Scoring proteomes with proteotypic peptide probes.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 6 (7), 577-583 (2005).</li><li>Carr, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+peptide+measurements+in+biology+and+medicine:+best+practices+for+mass+spectrometry-based+assay+development+using+a+fit-for-purpose+approach.">Targeted peptide measurements in biology and medicine: best practices for mass spectrometry-based assay development using a fit-for-purpose approach.</a> Molecular &amp; Cellular Proteomics. 13 (3), 907-917 (2014).</li><li>Yates, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pivotal+role+of+computers+and+software+in+mass+spectrometry+-+SEQUEST+and+20+years+of+tandem+MS+database+searching.">Pivotal role of computers and software in mass spectrometry - SEQUEST and 20 years of tandem MS database searching.</a> Journal of the American Society for Mass Spectrometry. 26 (11), 1804-1813 (2015).</li><li>Nilsson, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass+spectrometry+in+high-throughput+proteomics:+ready+for+the+big+time.">Mass spectrometry in high-throughput proteomics: ready for the big time.</a> Nature Methods. 7 (9), 681-685 (2010).</li><li>Van Eyk, J. E., Sobhani, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Precision+Medicine.">Precision Medicine.</a> Circulation. 138 (20), 2172-2174 (2018).</li><li>Hoofnagle, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recommendations+for+the+Generation,+Quantification,+Storage,+and+Handling+of+Peptides+Used+for+Mass+Spectrometry-Based+Assays.">Recommendations for the Generation, Quantification, Storage, and Handling of Peptides Used for Mass Spectrometry-Based Assays.</a> Clinical Chemistry. 62 (1), 48-69 (2016).</li><li>Wijayawardena, B., Fu, Q., Johnson, C., Van Eyk, J. E., Kowalski, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+Reproducible+Automated+Proteomics+Sample+Preparation+on+Biomek+i-Series.">Highly Reproducible Automated Proteomics Sample Preparation on Biomek i-Series.</a> Technical note, Beckman Coulter Life Science. Document # AAG-4890APP02. 19, (2019).</li></ol>

La lavorazione dei campioni per la spettrometria di massa richiede la denaturazione, la riduzione e l'alchilazione delle proteine per bloccare i cistein, e la digestione della metapsina per fendere le proteine nei peptidi. Ogni reazione chimica o ezimatica deve essere avviata in un momento designato ed eseguita a una temperatura controllata, e ogni fase del processo comporta più fasi di trasferimento di liquidi in cui può essere introdotta la variazione sperimentale. L'elaborazione automatizzata dei campioni fornisce una soluzione a questo dilemma. I sistemi di movimentazione dei liquidi attualmente disponibili hanno la capacità di trasferire i reagenti in piastre di 96 pozze con una precisione inferiore al 5%, a seconda della testa e del tipo di punta utilizzata, e di incubare i campioni, con agitazione se lo si desidera, a temperature controllate che vanno dai 14 ai 70 gradi centigradi. Abbiamo usato un gestore liquido automatizzato per elaborare il plasma per i saggi SRM in un formato di 96 pozze.
Ci sono molte migliaia di siti di scissione proteasi all'interno delle complesse miscele di proteine nel siero, nel plasma e in altri campioni biologici; e ognuna di queste proteine ha proprietà uniche che influenzano l'accessibilità del sito di scissione e la stabilità dei peptidi risultanti. È quindi impossibile progettare una procedura di elaborazione del campione ottimale per ogni proteina. L'alternativa migliore è quella di essere il più coerente possibile.
Per ottenere la coerenza, abbiamo ottimizzato ogni passo di pipettaggio eseguito dal gestore automatico del liquido. In primo luogo abbiamo considerato il volume richiesto e i vincoli imposti dal tipo di liquido (plasma, acquoso o organico) e dalle proprietà corrispondenti (viscosità, coesione e volatilità), hardware (testa di tubi di linea e bracci di cattura delle lastre) e labware. Abbiamo quindi variato la velocità e l'indagatore per l'aspirazione, la velocità e il volume di esplosione per l'erogazione, e la forza e la durata della miscelazione, incorporando un tocco di punta dopo l'aspirazione e/o l'erogazione, se necessario, per eliminare il liquido aderente all'esterno delle punte (Figura 13, Tabella supplementare 1). Un peptide SIL unico, pre-schermato per la stabilità, è stato a spillo in ogni reagente per rendere possibile monitorare la precisione di ogni fase di movimentazione dei liquidi. Dopo l'ottimizzazione, i CV di processo per la maggior parte delle transizioni erano inferiori al 10%, dimostrando una buona riproducibilità con la workstation automatizzata (Figura 9, Figura 10, Figura 11 e Figura 12).
Il flusso di lavoro automatizzato presentato qui fornisce una digestione ezimatica coerente con una migliore riproducibilità e velocità effettiva rispetto ai metodi manuali (Figura 9, Figura 10). Questo approccio promette di migliorare l'accuratezza e l'affidabilità della scoperta e della convalida dei biomarcatori mediante spettrometria di massa.

La quantificazione di proteine e peptidi a base di spettrometria di massa (MS) viene sempre più applicata come strumento bioanalitico per l'analisi del plasma nella ricerca di base e nei laboratori clinici2,3. La strumentazione e l'informatica necessarie sono progredite rapidamente in quanto la SM è diventata il metodo di scelta per quantificare le proteine o le proteine modificate prendendo di mira specifiche sequenze di peptidi a causa della sua capacità di quantificare centinaia di peptidi in una singola corsa MS4. La preparazione del campione serve come base per qualsiasi analisi proteomica. Prima dell'analisi della SM, le proteine in un campione biologico sono tipicamente denaturate, ridotte, alchilate, digerite in peptidi a prova, e dissalate5. L'alchilizzazione blocca i cistein per prevenire modifiche incontrollate e garantire che tutti i cistein abbiano la stessa massa. Successivamente, la trypsina viene aggiunta per digerire le proteine nei peptidi. Ognuno di questi passaggi richiede l'ottimizzazione e l'intero processo viene tradizionalmente eseguito manualmente, consentendo l'introduzione di errori analitici.
La pipeline di sviluppo di biomarcatori tradizionale è costituita da due processi principali: la proteomica del fucile per la scoperta globale delle proteine per creare un inventario proteico approfondito6 e una proteomica mirata per la verifica e la convalida finalizzata alla quantitazione delle proteine ad alta precisione e ad alta velocità7 . Indipendentemente dall'approccio della SM, la preparazione del campione è la stessa e si concentra sulla scissione enzimatica delle proteine in una miscela di peptidi. Come proposto da Van Eyk e Sobhani8, avendo un metodo che permette un'analisi precisa, precisa e riproducibile sia per la scoperta che per i saggi mirati si desidera spostare efficacemente i biomarcatori di scoperta nei saggi clinici implementati. A tale scopo, l'automazione della preparazione dei campioni sarà utile e fornirà la possibilità di aumentare l'efficienza per l'analisi ad alta velocità effettiva. I metodi manuali introducono in genere errori analitici oltre i limiti accettabili specificati dalla Food and Drug Administration (FDA) nella revisione bioanalitica Method Validation Guidance, che include biomarcatori e diagnostica2,9. Lo sviluppo di un flusso di lavoro di preparazione dei campioni di proteine MS veloce, altamente accurato e vivavoce sarà necessario per facilitare la ricerca sui biomarcatori, che richiede la preparazione e l'analisi di migliaia di campioni biologici. La preparazione del campione MS prevede molti passaggi in cui è possibile introdurre errori e il processo è noioso e dispendioso in termini di tempo.
Nel nostro metodo migliorato, è stata programmata una workstation automatizzata per eseguire tutte le procedure necessarie di preparazione del campione di plasma in un totale di 6 passaggi (Figura 1) per garantire: 1) trasferimenti accurati di liquidi; 2) la reazione viene avviata e interrotta in un momento coerente; 3) la reazione viene eseguita a temperatura controllata (cioè incubatrice); e 4) la reazione ha una miscelazione uniforme per tutte le reazioni. Abbiamo inoltre implementato l'aggiunta di proteine di controllo qualità esogene e standard interni (standard di peptidi con etichetta isotopo stabile) per garantire una qualità e una produttività riproducibile della quantificazione di proteine e peptidi a base di LC-MS in un formato di 96 pozzi. Per la preparazione del reagente, l'orario di lavoro e un totale di 1.000.000 di fasi di pipettaggio sarebbero necessarie per elaborare 96 campioni in singoli tubi. L'automazione riduce il tempo pratico e il numero di interazioni umane coinvolte.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>A Pooled healthy human plasma</td>
			<td>Bioreclamation Inc.</td>
			<td></td>
			<td>human plasma tested in the manuscript</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile, HPLC Grade</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A998SK1</td>
			<td>LC MS/MS solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-Galactosidase Recombinant from E.Coli</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G3153-5MG</td>
			<td>exogenous control proteins.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biomek i7 Automated Workstation</td>
			<td>Beckman Coulter, Inc.</td>
			<td></td>
			<td>The proteomic sample preparation workstation: Biomek automated workstations are not intended or validated for use in the diagnosis of disease or other conditions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biomek i-Series Tips 230&#181;L Non-Sterile</td>
			<td>Beckman Coulter, Inc.</td>
			<td>B85903&#160;</td>
			<td>Tips, i7 consumable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biomek i-Series Tips 90&#181;L Non-Sterile</td>
			<td>Beckman Coulter, Inc.</td>
			<td>B85881&#160;</td>
			<td>Tips, i7 consumable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FG, Kit Trypsin TPCK</td>
			<td>Sciex</td>
			<td>4445250</td>
			<td>Trypsin used in digestion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hard-Shell 96-Well PCR Plates, low profile, thin wall, skirted, green/clear&#160;</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>#hsp9641</td>
			<td>Autosampler plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Octyl B-D-Glucopyranoside</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>O9882-5G</td>
			<td>detergent used in digestion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polypropylene, 96-Round Deep Well Plates Sterile</td>
			<td>Beckman Coulter, Inc.</td>
			<td>267007</td>
			<td>Reagent and digestion plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prominence UFLCXR HPLC system</td>
			<td>Shimadzu, Japan</td>
			<td></td>
			<td>High flow LC sytem</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QTRAP 6500</td>
			<td>SCIEX</td>
			<td></td>
			<td>Mass spectrometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water, HPLC Grade</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>W54</td>
			<td>LC MS/MS solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xbridge BEH30 C18 2.1mm x 100mm</td>
			<td>Waters</td>
			<td>186003564</td>
			<td>LC MSMS column</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a plasma sample preparation for mass spectrometry using an automated workstation

La preparazione del campione per l'analisi della spettrometria di massa in proteomica richiede scissione enzimatica delle proteine in una miscela di peptidi. Questo processo comporta numerose fasi di incubazione e trasferimento liquido al fine di ottenere la denaturazione, riduzione, alchilazione, e scissione. L'adattamento di questo flusso di lavoro su una workstation automatizzata può aumentare l'efficienza e ridurre i coefficienti di varianza, fornendo così dati più affidabili per confronti statistici tra tipi di campione. In precedenza abbiamo descritto un flusso di lavoro di preparazione automatica del campione proteomico1. Qui, riportiamo lo sviluppo di un flusso di lavoro più efficiente e meglio controllato con i seguenti vantaggi: 1) Il numero di fasi di trasferimento liquido è ridotto da nove a sei combinando reagenti; 2) Il tempo di pipettaggio si riduce mediante il pipettaggio selettivo della punta utilizzando una testina di pipettaggio a 96 posizioni con più canali; 3) La produttività potenziale è aumentata dalla disponibilità di un massimo di 45 posizioni del ponte; 4) l'involucro completo del sistema fornisce una migliore temperatura e un controllo ambientale e riduce il potenziale di contaminazione di campioni o reagenti; e 5) L'aggiunta di peptidi stabili con etichettaisti isotopi, così come di proteine di galactosidasi, per ogni campione rende possibile il monitoraggio e il controllo della qualità durante l'intero processo. Questi miglioramenti hardware e di processo forniscono una buona riproducibilità e migliorano la precisione intra-analisi e inter-saggio (CV inferiore al 20%) per la quantificazione di proteine e peptidi a base di LC-MS. L'intero flusso di lavoro per la digestione di 96 campioni in una piastra di 96 pozzetto può essere completato in circa 5 ore.

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A Plasma Sample Preparation for Mass Spectrometry using an Automated Workstation

Qui, presentiamo un metodo automatizzato di digestione delle proteine plasmatiche per l'analisi proteomica quantitativa basata sulla spettrometria di massa. In questo protocollo, le fasi di trasferimento e incubazione di liquidi per la denaturazione delle proteine, la riduzione, l'alchilazione e le reazioni di digestione della cipina sono semplificate e automatizzate. Ci vogliono circa cinque ore per preparare una piastra da 96 pozze con la precisione desiderata.

Preparazione di un campione di plasma per la spettrometria di massa mediante una workstation automatizzata

Sample preparation for mass spectrometry analysis in proteomics requires enzymatic cleavage of proteins into a peptide mixture. This process involves ...

Questo flusso di lavoro automatizzato fornisce una digestione enzimatica proteica coerente con eccellente riproducibilità e produttività. Ciò migliora l'accuratezza e l'affidabilità della scoperta, della convalida e dell'applicazione clinica dei biomarcatori mediante spettrometria di massa. Il vantaggio di questa tecnologia è che l'intero flusso di lavoro può essere completato per 96 campioni in circa cinque ore con CV intra-test e inter-test inferiore al 20% per la maggior parte delle proteine.Questa accurata preparazione del campione ad alta produttività ci consente di studiare proteomi di malattie di tessuti o biofluidi su scala più ampia. Inoltre, il flusso di lavoro automatizzato di preparazione dei campioni proteomici fornisce una solida base per l'alto contenuto e un'analisi proteomica quantitativa. A dimostrare la procedura saranno il Dr.Qin Fu, Direttore dell'High Throughput Center del Cedar Sinai e il Signor Casey Johnson, un ricercatore associato del mio laboratorio.Prima di iniziare l'analisi, aggiungere cinque microlitri di plasma umano sano raggruppato in una piastra di propilene profonda 96 tondi. Una volta caricati tutti i campioni, aprire il software del dispositivo di gestione liquidi e nella scheda del metodo selezionare home tutti gli assi per orientare il gestore di liquidi automatizzato. Verificare che tutte le siringhe della workstation non contengano bolle d'aria visibili e aprire un nuovo metodo e fare clic su Esegui per avviare il metodo.Immettere true nell'immettere un valore da utilizzare per il prompt dell'autocampionatore per preparare una piastra di campionamento automatico alla fine del metodo e fare clic su OK. Immetterne uno nel immettere un valore da utilizzare per il prompt della prima colonna e fare clic su OK. Immettere 12 nel immettere un valore da utilizzare per l'ultima richiesta di colonna e fare clic su OK. Se si utilizza una piastra campione con volumi campione di almeno 20 microlitri, immettere true nel immettere un valore da utilizzare per il prompt della piastra campione e fare clic su OK. Seguire le istruzioni nella finestra Installazione labware guidata e fare clic su Continua. Caricare i reagenti appropriati nei pozzi appropriati e fare clic su Avanti. Fare di nuovo clic su Avanti per disporre il deck di gestione del liquido automatizzato come illustrato, tra cui le piastre di reagente, reazione, campione e autocampionatore, scatole di punta da 90 microliter a sei pozzetti, una scatola di punta vuota da 90 microliter e una scatola di punta completa da 230 microliter.Quindi fare clic su Fine per iniziare il metodo. Al prompt di proseguono dopo la centrifugazione, recuperare la piastra di reazione e posizionare la piastra nella centrifuga. Al termine della centrifugazione, riportare la piastra di reazione nella sua posizione all'interno del gestore di liquidi automatizzato e fare clic su Continua.Per la cromatografia liquida e l'analisi della spettrometria di massa tandem, risolvere i peptidi in una colonna di 3,5 micrometri C18 2.1 per 100 millimetri per cromatografia liquida ad alta pressione ad alto flusso con una portata di 250 microlitri al minuto e analizzati in linea su un triplo spettrometro di massa quadrupolo. Cinque minuti dopo il caricamento, equilibrare la colonna con la soluzione tampone B al 5% ed elutare i peptidi con un gradiente lineare del 5-35% del buffer B per 30 minuti. Al termine dell'eluizione, lavare la colonna con il 98%buffer B per 10 minuti seguita da un lavaggio di cinque minuti con 5%buffer B prima di caricare il campione successivo.Per la deviazione online, utilizzare una valvola di commutazione a due fasi per deviare l'eluente post-colonna in rifiuto prima che entri nella sorgente ioniche. Una volta che tutti i campioni sono stati eluitati, è possibile elaborare più dati di monitoraggio della reazione. In questa analisi rappresentativa, tre peptidi beta-gal e due peptidi di albumina sono stati monitorati da beta-gal spiked e proteine dell'albumina plasmatica elaborata.La precisione del flusso di lavoro automatizzato di preparazione del campione è stata calcolata come percentuale del coefficiente di varianza del flusso di lavoro totale di monitoraggio della reazione proteomica selezionata meno il coefficiente percentuale di varianza della spettrometria di massa tandem della cromatografia liquida. Come previsto, sono state osservate buone intensità di segnale sia per l'albumina del siero umano che per le proteine beta-gal. Per monitorare la precisione dei passaggi di trasferimento del liquido, è possibile ottenere standard peptidici stabili etichettati isotopici per l'albumina endogena del siero umano e la proteina beta-gal esogena in passaggi di trasferimento reagenti indipendenti.Per convalidare il flusso di lavoro automatizzato di preparazione del campione proteomico, il coefficiente intragiornale dei valori di varianza è stato calcolato da 21 pozzi preparati lo stesso giorno. Il coefficiente percentuale medio intraday di varianza per 40 proteine variava dal 4 al 20%Per valutare l'effetto bordo del flusso di lavoro automatizzato basato su lastre, il coefficiente percentuale di varianza può essere calcolato da pozzi specifici all'interno di colonne e righe designate. In questo esperimento rappresentativo, le intensità del segnale di monitoraggio della reazione multipla erano simili in tutte le configurazioni di colonna e riga con il coefficiente percentuale di varianza che variava dal 3 al 22%I passaggi più importanti sono l'aggiunta corretta di un campione in base alla mappa della piastra a 96 pozzetti desiderata e la corretta impostazione della piastra di reagente secondo le istruzioni del software.Questo metodo automatizzato di preparazione dei campioni proteomici consente ai ricercatori di raccogliere dati proteomici affidabili e quantitativi su larga scala.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Time-resolved ElectroSpray Ionization Hydrogen-deuterium Exchange Mass Spectrometry for Studying Protein Structure and Dynamics

Scambio risolta in tempo ionizzazione elettrospray idrogeno-deuterio Spettrometria di Massa per lo studio delle proteine ​​Struttura e dinamica

Intrinsically disordered proteins (IDPs) have long been a challenge to structural biologists due to their lack of stable secondary structure elements. ...

Ricerca

Biochimica

Resolving Affinity Purified Protein Complexes by Blue Native PAGE and Protein Correlation Profiling

Risoluzione purificato per affinità complessi proteici di Blue Native PAGE e proteine ​​correlazione Profiling

Most proteins act in association with others; hence, it is crucial to characterize these functional units in order to fully understand biological ...

Lipid Droplet Isolation for Quantitative Mass Spectrometry Analysis

Isolamento Droplet per l&#39;analisi quantitativa dei lipidi Spettrometria di Massa

Lipid droplets are vital to the replication of a variety of different pathogens, most prominently the Hepatitis C Virus (HCV), as the putative site of ...

Glycoproteomics of the Extracellular Matrix: A Method for Intact Glycopeptide Analysis Using Mass Spectrometry

Glycoproteomics della matrice extracellulare: Un metodo per l&#39;analisi Intact Glycopeptide Utilizzando la spettrometria di massa

Fibrosis is a hallmark of many cardiovascular diseases and is associated with the exacerbated secretion and deposition of the extracellular matrix (ECM). ...

Sample Preparation for Mass Spectrometry-based Identification of RNA-binding Regions

Preparazione dei campioni per l'identificazione basati sulla spettrometria di massa di RNA-binding Regions

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Optimal Preparation of Formalin Fixed Samples for Peptide Based Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization Mass Spectrometry Imaging Workflows

Preparazione ottimale di formalina riparata campioni per Peptide basati su matrice assistita spettrometria totale di desorbimento/ionizzazione Laser i flussi di lavoro di Imaging

The use of matrix-assisted laser desorption/ionization, mass spectrometry imaging (MALDI MSI) has rapidly expanded, since this technique analyzes a host ...

Detection of Protein Ubiquitination Sites by Peptide Enrichment and Mass Spectrometry

Rilevamento di siti di Ubiquitinazione proteica mediante arricchimento dei peptidi e spettrometria di massa

The posttranslational modification of proteins by the small protein ubiquitin is involved in many cellular events. After tryptic digestion of ...

An All-in-one Sample Holder for Macromolecular X-ray Crystallography with Minimal Background Scattering

Un portacampioni all-in-one per la cristallografia a raggi X macromolecolare con una dispersione minima dello sfondo

Macromolecular X-ray crystallography (MX) is the most prominent method to obtain high-resolution three-dimensional knowledge of biological macromolecules. ...

Sample Preparation for Probe Electrospray Ionization Mass Spectrometry

Preparazione del campione per la spettrometria di massa di ionizzazione elettrospray sonda

Mass spectrometry (MS) is a powerful tool in analytical chemistry because it provides very accurate information about molecules, such as mass-to-charge ...

Quantitative Analysis of the Cellular Lipidome of Saccharomyces Cerevisiae Using Liquid Chromatography Coupled with Tandem Mass Spectrometry

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Analisi quantitativa del Lipidome cellulare di Saccharomyces Cerevisiae Utilizzando la cromatografia Liquida Accoppiata con la Spettrometria di Massa Tandem

Lipids are structurally diverse amphipathic molecules that are insoluble in water. Lipids are essential contributors to the organization and function of ...