Name: a plasma sample preparation for mass spectrometry using an automated workstation
Uploaded: 2020-04-24T13:30:00
Duration: 7 min 12 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Plasma Sample Preparation for Mass Spectrometry using an Automated Workstation at JoVE.com

<ol>
	<li>Fu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+Reproducible+Automated+Proteomics+Sample+Preparation+Workflow+for+Quantitative+Mass+Spectrometry.">Highly Reproducible Automated Proteomics Sample Preparation Workflow for Quantitative Mass Spectrometry.</a> Journal of Proteome Research. 17 (1), 420-428 (2018).</li><li>Lehmann, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+mass+spectrometry+proteomics+(cMSP)+for+medical+laboratory:+What+does+the+future+hold?.">Clinical mass spectrometry proteomics (cMSP) for medical laboratory: What does the future hold?.</a> Clinica Chimica Acta. 467, 51-58 (2017).</li><li>Abbatiello, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-Scale+Interlaboratory+Study+to+Develop,+Analytically+Validate+and+Apply+Highly+Multiplexed,+Quantitative+Peptide+Assays+to+Measure+Cancer-Relevant+Proteins+in+Plasma.">Large-Scale Interlaboratory Study to Develop, Analytically Validate and Apply Highly Multiplexed, Quantitative Peptide Assays to Measure Cancer-Relevant Proteins in Plasma.</a> Molecular &amp; Cellular Proteomics. 14 (9), 2357-2374 (2015).</li><li>Kuster, B., Schirle, M., Mallick, P., Aebersold, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scoring+proteomes+with+proteotypic+peptide+probes.">Scoring proteomes with proteotypic peptide probes.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 6 (7), 577-583 (2005).</li><li>Carr, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+peptide+measurements+in+biology+and+medicine:+best+practices+for+mass+spectrometry-based+assay+development+using+a+fit-for-purpose+approach.">Targeted peptide measurements in biology and medicine: best practices for mass spectrometry-based assay development using a fit-for-purpose approach.</a> Molecular &amp; Cellular Proteomics. 13 (3), 907-917 (2014).</li><li>Yates, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pivotal+role+of+computers+and+software+in+mass+spectrometry+-+SEQUEST+and+20+years+of+tandem+MS+database+searching.">Pivotal role of computers and software in mass spectrometry - SEQUEST and 20 years of tandem MS database searching.</a> Journal of the American Society for Mass Spectrometry. 26 (11), 1804-1813 (2015).</li><li>Nilsson, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass+spectrometry+in+high-throughput+proteomics:+ready+for+the+big+time.">Mass spectrometry in high-throughput proteomics: ready for the big time.</a> Nature Methods. 7 (9), 681-685 (2010).</li><li>Van Eyk, J. E., Sobhani, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Precision+Medicine.">Precision Medicine.</a> Circulation. 138 (20), 2172-2174 (2018).</li><li>Hoofnagle, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recommendations+for+the+Generation,+Quantification,+Storage,+and+Handling+of+Peptides+Used+for+Mass+Spectrometry-Based+Assays.">Recommendations for the Generation, Quantification, Storage, and Handling of Peptides Used for Mass Spectrometry-Based Assays.</a> Clinical Chemistry. 62 (1), 48-69 (2016).</li><li>Wijayawardena, B., Fu, Q., Johnson, C., Van Eyk, J. E., Kowalski, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+Reproducible+Automated+Proteomics+Sample+Preparation+on+Biomek+i-Series.">Highly Reproducible Automated Proteomics Sample Preparation on Biomek i-Series.</a> Technical note, Beckman Coulter Life Science. Document # AAG-4890APP02. 19, (2019).</li></ol>

Prøvebehandling for massespektrometri krever proteindenaturering, reduksjon og alkylering for å blokkere cysteiner, og trypsin fordøyelse navle proteiner i peptider. Hver kjemiske eller enzymatiskreaksjon må initieres på et bestemt tidspunkt og utføres ved en kontrollert temperatur, og hvert trinn i prosessen innebærer flere flytende overføringstrinn der eksperimentell variasjon kan innføres. Automatisert prøvebehandling gir en løsning på dette dilemmaet. For tiden tilgjengelige væskehåndteringssystemer har evnen til å overføre reagenser til 96-brønnplater med en nøyaktighet og presisjon på mindre enn 5%, avhengig av hodet og tipstypen som brukes, og for å inkubere prøver, med risting om ønskelig, under kontrollerte temperaturer fra 14 °C til 70 °C. Vi brukte en automatisert væskebehandling til å behandle plasma for SRM-analyser i et 96-brønnformat.
Det er mange tusen protease cleavage steder innenfor de komplekse blandinger av proteiner i serum, plasma, og andre biologiske prøver; og hver av disse proteinene har unike egenskaper som påvirker tilgjengeligheten av spaltingsstedet og stabiliteten til de resulterende peptidene. Det er derfor umulig å designe en prøvebehandlingsprosedyre som er optimal for hvert protein. Det beste alternativet er å være så konsekvent som mulig.
For å oppnå konsistens optimaliserte vi hvert pipetteringstrinn utført av den automatiserte væskebehandleren. Vi vurderte først volumet som kreves og begrensninger pålagt av væskens type (plasma, vandige eller organiske) og tilsvarende egenskaper (viskositet, samhold og volatilitet), maskinvare (arbeidsstasjonsrør og plategripende armer) og labware. Vi varierte deretter hastigheten og etterfølgende luftgapet for aspirasjon, hastighet og utblåsningsvolum for dispensering, og kraften og varigheten av blanding, mens vi innlemmet en tip touch etter aspirasjon og / eller dispensering, om nødvendig, for å eliminere væskesomfølger til utsiden av tipsene (Figur 13, Tilleggstabell 1). Et unikt SIL-peptid, forhåndsscreenet for stabilitet, ble spiked inn i hver reagens for å gjøre det mulig å overvåke presisjonen til hvert væskehåndteringstrinn. Etter optimalisering var prosessen CVer for de fleste av overgangene mindre enn 10%, noe som viste god reproduserbarhet med den automatiserte arbeidsstasjonen (Figur 9, Figur 10, Figur 11 og Figur 12).
Den automatiserte arbeidsflyten som presenteres her gir konsekvent enzymatisk fordøyelse med forbedret reproduserbarhet og gjennomstrømning sammenlignet med manuelle metoder (Figur 9, Figur 10). Denne tilnærmingen lover å forbedre nøyaktigheten og påliteligheten til biomarkøroppdagelse og validering av massespektrometri.

Massespektrometri (MS) -basert protein og peptid kvantifisering blir i økende grad brukt som et bioanalytisk verktøy for plasmaanalyse i grunnleggende forskning og kliniske laboratorier2,3. Den nødvendige instrumentering og informatikk har avansert raskt som MS har blitt metoden for valg for kvantifisere proteiner eller modifiserte proteiner ved å målrette spesifikke peptid sekvenser på grunn av sin evne til å kvantifisere hundrevis av peptider i en enkelt MS kjøre4. Prøveforberedelse fungerer som grunnlag for enhver proteomisk analyse. Før MS-analyse blir proteinene i en biologisk prøve vanligvis denaturert, redusert, alkylated, fordøyd til tryptiske peptider og desaltet5. Alkylation blokkerer cysteines for å hindre ukontrollerte modifikasjoner og sikre at alle cysteiner har samme masse. Deretter blir trypsin lagt til for å fordøye proteiner i peptider. Hver av disse trinnene krever optimalisering, og hele prosessen utføres tradisjonelt manuelt, noe som åpner for innføring av analytiske feil.
Den tradisjonelle biomarker utviklingsrørledningen består av to hovedprosesser: hagle proteomics for global protein oppdagelse for å skape en grundig protein inventar6 og målrettet proteomics for verifisering og validering rettet mot høy presisjon og høy gjennomstrømning protein kvantitet7. Uavhengig av MS-tilnærmingen er prøveforberedelse det samme og sentrerer seg om enzymatisk spalting av proteiner i en peptidblanding. Som foreslått av Van Eyk og Sobhani8, er det ønsket å effektivt flytte oppdagelsesbiomarkører til klinisk implementerte analyser. For å gjøre dette vil automatisering av prøveforberedelse være nyttig og gi muligheten til å øke effektiviteten til analyse med høy gjennomstrømning. Manuelle metoder introduserer vanligvis analytiske feil utover akseptable grenser spesifisert av Food and Drug Administration (FDA) i den reviderte Bioanalytical Method Validation Guidance, som inkluderer biomarkører og diagnostikk2,9. Utviklingen av en rask, svært nøyaktig og håndfri MS protein prøve forberedelse arbeidsflyt vil være nødvendig for å lette biomarker forskning, som krever utarbeidelse og analyse av tusenvis av biologiske prøver. MS prøveforberedelse har mange trinn der feil kan innføres, og prosessen er kjedelig og tidkrevende.
I vår forbedrede metode ble en automatisert arbeidsstasjon programmert til å utføre alle nødvendige plasmaprøveforberedelsesprosedyrer i totalt 6 trinn (figur 1) for å sikre: 1) nøyaktigvæskeoverføringer; 2) reaksjonen er initiert og stoppet på en konsekvent tid; 3) reaksjonen utføres ved en kontrollert temperatur (dvs. inkubator); og 4) reaksjonen har ensartet blanding for alle reaksjoner. Vi implementerte også å legge til eksogene kvalitetskontrollproteiner og interne standarder (stabile isotop-merkede peptidstandarder) for å sikre en kvalitet og reproduserbar gjennomstrømming av LC-MS-basert protein- og peptidkvantifisering i et 96-brønnformat. Inkludert reagensforberedelse, arbeidstid og totalt 1 000 000 pipetteringstrinn vil være nødvendig for å behandle 96 prøver i individuelle rør. Automatisering reduserer praktisk tid og antall menneskelige interaksjoner involvert.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>A Pooled healthy human plasma</td>
			<td>Bioreclamation Inc.</td>
			<td></td>
			<td>human plasma tested in the manuscript</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile, HPLC Grade</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A998SK1</td>
			<td>LC MS/MS solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-Galactosidase Recombinant from E.Coli</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G3153-5MG</td>
			<td>exogenous control proteins.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biomek i7 Automated Workstation</td>
			<td>Beckman Coulter, Inc.</td>
			<td></td>
			<td>The proteomic sample preparation workstation: Biomek automated workstations are not intended or validated for use in the diagnosis of disease or other conditions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biomek i-Series Tips 230&#181;L Non-Sterile</td>
			<td>Beckman Coulter, Inc.</td>
			<td>B85903&#160;</td>
			<td>Tips, i7 consumable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biomek i-Series Tips 90&#181;L Non-Sterile</td>
			<td>Beckman Coulter, Inc.</td>
			<td>B85881&#160;</td>
			<td>Tips, i7 consumable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FG, Kit Trypsin TPCK</td>
			<td>Sciex</td>
			<td>4445250</td>
			<td>Trypsin used in digestion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hard-Shell 96-Well PCR Plates, low profile, thin wall, skirted, green/clear&#160;</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>#hsp9641</td>
			<td>Autosampler plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Octyl B-D-Glucopyranoside</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>O9882-5G</td>
			<td>detergent used in digestion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polypropylene, 96-Round Deep Well Plates Sterile</td>
			<td>Beckman Coulter, Inc.</td>
			<td>267007</td>
			<td>Reagent and digestion plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prominence UFLCXR HPLC system</td>
			<td>Shimadzu, Japan</td>
			<td></td>
			<td>High flow LC sytem</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QTRAP 6500</td>
			<td>SCIEX</td>
			<td></td>
			<td>Mass spectrometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water, HPLC Grade</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>W54</td>
			<td>LC MS/MS solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xbridge BEH30 C18 2.1mm x 100mm</td>
			<td>Waters</td>
			<td>186003564</td>
			<td>LC MSMS column</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a plasma sample preparation for mass spectrometry using an automated workstation

Prøveforberedelse for massespektrometrianalyse i proteomikk krever enzymatisk spalting av proteiner i en peptidblanding. Denne prosessen innebærer mange inkubasjons- og væskeoverføringstrinn for å oppnå avnaturering, reduksjon, alkylering og spalting. Tilpasning av denne arbeidsflyten til en automatisert arbeidsstasjon kan øke effektiviteten og redusere kombitrene i varians, og dermed gi mer pålitelige data for statistiske sammenligninger mellom utvalgstyper. Vi har tidligere beskrevet en automatisert proteomisk prøveforberedelsearbeidsflyt1. Her rapporterer vi utviklingen av en mer effektiv og bedre kontrollert arbeidsflyt med følgende fordeler: 1) Antall væskeoverføringstrinn reduseres fra ni til seks ved å kombinere reagenser; 2) Pipetteringstiden reduseres ved selektiv tupppipettering ved hjelp av et 96-posisjons pipetteringshode med flere kanaler; 3) Potensiell gjennomstrømning økes med tilgjengeligheten av opptil 45 dekksposisjoner; 4) Fullstendig kabinett av systemet gir forbedret temperatur og miljøkontroll og reduserer potensialet for forurensning av prøver eller reagenser; og 5) Tilsetning av stabile isotop merkede peptider, samt β-galaktosidase protein, til hver prøve gjør overvåking og kvalitetskontroll mulig gjennom hele prosessen. Disse maskinvare- og prosessforbedringene gir god reproduserbarhet og forbedrer intraanalyse- og interanalysepresisjon (CV på mindre enn 20 %) for LC-MS-basert protein- og peptidkvantifisering. Hele arbeidsflyten for å fordøye 96 prøver i en 96-brønnplate kan fullføres på ca. 5 timer.

Watch this Scientific Journal Video about A Plasma Sample Preparation for Mass Spectrometry using an Automated Workstation at JoVE.com

A Plasma Sample Preparation for Mass Spectrometry using an Automated Workstation

Her presenterer vi en automatisert plasmaproteinfordøyelsesmetode for massespektrometribasert kvantitativ proteomisk analyse. I denne protokollen er væskeoverførings- og inkubasjonstrinnene for proteindenaturering, reduksjon, alkylering og trypsinfordøyelsesreaksjoner strømlinjeformet og automatisert. Det tar omtrent fem timer å lage en 96-brønnplate med ønsket presisjon.

En plasmaprøve forberedelse for massespektrometri ved hjelp av en automatisert arbeidsstasjon

Sample preparation for mass spectrometry analysis in proteomics requires enzymatic cleavage of proteins into a peptide mixture. This process involves ...

Denne automatiserte arbeidsflyten gir en konsekvent protein enzymatisk fordøyelse med utmerket reproduserbarhet og gjennomstrømning. Dette forbedrer nøyaktigheten og påliteligheten til biomarkøroppdagelse, validering og klinisk anvendelse ved massespektrometri. Fordelen med denne teknologien er at hele arbeidsflyten kan fullføres for 96 prøver på omtrent fem timer med intraanalyse og interanalyse-CV på mindre enn 20%for de fleste proteiner.Dette nøyaktige høygjennomstrømningsprøvepreparatet gjør oss i stand til å undersøke sykdomsproteomer av vev eller biofluider i større skala. I tillegg gir den automatiserte proteomiske prøveklargjøringsarbeidsflyten et solid grunnlag for høyt innhold og en kvantitativ proteomisk analyse. Å demonstrere prosedyren vil være Dr.Qin Fu, direktør for High Throughput Center ved Cedar Sinai og Mr.Casey Johnson, en forskningsmedarbeider fra laboratoriet mitt.Før du begynner analysen, tilsett fem mikroliter av samlet sunt humant plasma i en 96 runde dyp brønnpropylenplate. Når alle prøvene er lastet inn, åpner du programvaren for væskebehandlingsenheten, og under metodefanen velger du hjem alle akser for å orientere den automatiserte væskebehandlingen. Bekreft at alle arbeidsstasjonssprøytene ikke inneholder synlige luftbobler og åpner en ny metode, og klikk Kjør for å starte metoden.Skriv inn true i angi en verdi som skal brukes for autosampler ledeteksten for å få en autosampler plate forberedt på slutten av metoden og klikk OK. Skriv inn en i angi en verdi som skal brukes for første kolonnemelding, og klikk OK. Skriv inn 12 i angi en verdi som skal brukes for siste kolonnemelding, og klikk OK. Hvis en prøveplate brukes med prøvevolumer på minst 20 mikroliter, angir du sann i angir en verdi som skal brukes til prøveplatemelding og klikker OK. Følg instruksjonene i vinduet Oppsett av veiledet labware, og klikk på Fortsett. Legg de riktige reagensene inn i de aktuelle brønnene, og klikk Neste. Klikk Neste igjen for å legge ut det automatiserte væskebehandlerdekket som illustrert, inkludert reagens, reaksjon, prøve og autosamplerplater, seksbrønns 90 mikroliters spissbokser, en tom 90 mikroliterstspissboks og en full 230 mikroliters tipsboks.Klikk deretter Fullfør for å starte metoden. Ved fortsett etter sentrifugeringsmeldingen, hent reaksjonsplaten og plasser platen i sentrifugen. På slutten av sentrifugeringen, returner reaksjonsplaten til sin posisjon i den automatiserte væskebehandlingen og klikker fortsett.For flytende kromatografi og tandemmassespektrometrianalyse, løs peptidene i en C18 2,1 x 100 millimeter 3,5 mikrometerkolonne med høystrøms høytrykks flytende kromatografi med en strømningshastighet på 250 mikroliter per minutt og analysert i kø på et trippel quadrupole massespektrometer. Fem minutter etter lasting, likevekt kolonnen med 5% buffer B løsning og elute peptider med en lineær 5-35% gradient av buffer B over 30 minutter. På slutten av elution, vask kolonnen med 98% buffer B i 10 minutter etterfulgt av en fem minutters vask med 5% buffer B før du laster neste prøve.For online spill, bruk en to-faset koblingsventil for å avlede post-kolonne eluent til avfall før den kommer inn i i ionkilden. Når alle prøvene er eluted, kan flere reaksjonsovervåkingsdata behandles. I denne representative analysen ble tre beta-gal peptider og to albumin peptider overvåket fra piggete beta-gal og bearbeidet plasmaalbuminproteiner.Presisjonen til den automatiserte arbeidsflyten for prøveklargjøring ble beregnet som prosent av koeffisienten til variansen til den totale proteomiske valgte reaksjonsovervåkingsarbeidsflyten minus prosentskoeffisienten for variansen til den flytende kromatografien tandemmassespektrometri. Som forventet ble det observert gode signalintensiteter for både humant serumalbumin og beta-gal proteiner. For å overvåke presisjonen til væskeoverføringstrinnene, kan stabile isotopmerkede peptidstandarder økes for det endogene humane serumalbumin og eksogene beta-gal-proteinet i uavhengige overføringstrinn for reagens.For å validere den automatiserte proteomiske prøveklargjøringsarbeidsflyten ble intradagkoeffisient av variansverdier beregnet fra 21 brønner utarbeidet samme dag. Gjennomsnittlig intradag prosent koeffisient av varians for 40 proteiner varierte fra 4-20%For å evaluere kanteffekten av platebasert automatisert arbeidsflyt, kan prosentskoeffisienten av varians beregnes fra bestemte brønner i utpekte kolonner og rader. I dette representative eksperimentet var flere reaksjonsovervåkingssignalintensiteter like i alle kolonne- og radkonfigurasjonene med prosentvis vareffisient av varians fra 3-22%De viktigste trinnene er å legge til en prøve riktig i henhold til ønsket 96-brønns platekart og riktig sette opp reagensplaten i henhold til instruksjonen fra programvaren.Denne automatiserte proteomiske prøveforberedelsesmetoden gjør det mulig for forskere å samle inn pålitelige og kvantitative proteomikkdata i stor skala.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Time-resolved ElectroSpray Ionization Hydrogen-deuterium Exchange Mass Spectrometry for Studying Protein Structure and Dynamics

Time-løst elektrospray-ionisering Hydrogen-deuterium Veksling massespektrometri for å studere Protein struktur og dynamikk

Intrinsically disordered proteins (IDPs) have long been a challenge to structural biologists due to their lack of stable secondary structure elements. ...

Resolving Affinity Purified Protein Complexes by Blue Native PAGE and Protein Correlation Profiling

Løse affinitetsrenset protein komplekser av Blå Native PAGE og Protein korrelasjon Profiling

Most proteins act in association with others; hence, it is crucial to characterize these functional units in order to fully understand biological ...

Lipid Droplet Isolation for Quantitative Mass Spectrometry Analysis

Lipid Droplet Isolasjon for Quantitative massespektrometri analyse

Lipid droplets are vital to the replication of a variety of different pathogens, most prominently the Hepatitis C Virus (HCV), as the putative site of ...

Glycoproteomics of the Extracellular Matrix: A Method for Intact Glycopeptide Analysis Using Mass Spectrometry

Glycoproteomics av ​​den ekstracellulære matrise: En metode for Intakt glykopeptidreagens analyse ved hjelp av massespektrometri

Fibrosis is a hallmark of many cardiovascular diseases and is associated with the exacerbated secretion and deposition of the extracellular matrix (ECM). ...

Sample Preparation for Mass Spectrometry-based Identification of RNA-binding Regions

Eksempel forberedelse til masse massespektrometri-baserte identifikasjon av RNA-bindende områder

Noncoding RNAs play important roles in several nuclear processes, including regulating gene expression, chromatin structure, and DNA repair. In most ...

Optimal Preparation of Formalin Fixed Samples for Peptide Based Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization Mass Spectrometry Imaging Workflows

Optimal utarbeidelse av Formalin fast prøver for peptid basert Matrix assistert Laser desorpsjon/ionisering massespektrometri Imaging arbeidsflyter

The use of matrix-assisted laser desorption/ionization, mass spectrometry imaging (MALDI MSI) has rapidly expanded, since this technique analyzes a host ...

Detection of Protein Ubiquitination Sites by Peptide Enrichment and Mass Spectrometry

Påvisning av protein ubiquitination nettsteder av peptid berikelse og masse spektrometri

The posttranslational modification of proteins by the small protein ubiquitin is involved in many cellular events. After tryptic digestion of ...

An All-in-one Sample Holder for Macromolecular X-ray Crystallography with Minimal Background Scattering

En alt-i-ett sample holder for makro molekylære X-ray Crystallography med minimal bakgrunn spredning

Macromolecular X-ray crystallography (MX) is the most prominent method to obtain high-resolution three-dimensional knowledge of biological macromolecules. ...

Sample Preparation for Probe Electrospray Ionization Mass Spectrometry

Prøve forberedelse til sonde elektrospray ionisering massespektrometri

Mass spectrometry (MS) is a powerful tool in analytical chemistry because it provides very accurate information about molecules, such as mass-to-charge ...

Quantitative Analysis of the Cellular Lipidome of Saccharomyces Cerevisiae Using Liquid Chromatography Coupled with Tandem Mass Spectrometry

Quantitative Analysis of the Cellular Lipidome of Saccharomyces Cerevisiae Using Liquid Chromatography Coupled with Tandem Mass Spectrometry

Kvantitativ analyse av cellulær lipidom eav saccharomyces cerevisiae ved hjelp av flytende kromatografi kombinert med tandem massespektrometri

Lipids are structurally diverse amphipathic molecules that are insoluble in water. Lipids are essential contributors to the organization and function of ...