Name: a plasma sample preparation for mass spectrometry using an automated workstation
Uploaded: 2020-04-24T13:30:00
Duration: 7 min 12 s
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	<li>Fu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+Reproducible+Automated+Proteomics+Sample+Preparation+Workflow+for+Quantitative+Mass+Spectrometry.">Highly Reproducible Automated Proteomics Sample Preparation Workflow for Quantitative Mass Spectrometry.</a> Journal of Proteome Research. 17 (1), 420-428 (2018).</li><li>Lehmann, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+mass+spectrometry+proteomics+(cMSP)+for+medical+laboratory:+What+does+the+future+hold?.">Clinical mass spectrometry proteomics (cMSP) for medical laboratory: What does the future hold?.</a> Clinica Chimica Acta. 467, 51-58 (2017).</li><li>Abbatiello, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-Scale+Interlaboratory+Study+to+Develop,+Analytically+Validate+and+Apply+Highly+Multiplexed,+Quantitative+Peptide+Assays+to+Measure+Cancer-Relevant+Proteins+in+Plasma.">Large-Scale Interlaboratory Study to Develop, Analytically Validate and Apply Highly Multiplexed, Quantitative Peptide Assays to Measure Cancer-Relevant Proteins in Plasma.</a> Molecular &amp; Cellular Proteomics. 14 (9), 2357-2374 (2015).</li><li>Kuster, B., Schirle, M., Mallick, P., Aebersold, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scoring+proteomes+with+proteotypic+peptide+probes.">Scoring proteomes with proteotypic peptide probes.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 6 (7), 577-583 (2005).</li><li>Carr, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+peptide+measurements+in+biology+and+medicine:+best+practices+for+mass+spectrometry-based+assay+development+using+a+fit-for-purpose+approach.">Targeted peptide measurements in biology and medicine: best practices for mass spectrometry-based assay development using a fit-for-purpose approach.</a> Molecular &amp; Cellular Proteomics. 13 (3), 907-917 (2014).</li><li>Yates, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pivotal+role+of+computers+and+software+in+mass+spectrometry+-+SEQUEST+and+20+years+of+tandem+MS+database+searching.">Pivotal role of computers and software in mass spectrometry - SEQUEST and 20 years of tandem MS database searching.</a> Journal of the American Society for Mass Spectrometry. 26 (11), 1804-1813 (2015).</li><li>Nilsson, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass+spectrometry+in+high-throughput+proteomics:+ready+for+the+big+time.">Mass spectrometry in high-throughput proteomics: ready for the big time.</a> Nature Methods. 7 (9), 681-685 (2010).</li><li>Van Eyk, J. E., Sobhani, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Precision+Medicine.">Precision Medicine.</a> Circulation. 138 (20), 2172-2174 (2018).</li><li>Hoofnagle, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recommendations+for+the+Generation,+Quantification,+Storage,+and+Handling+of+Peptides+Used+for+Mass+Spectrometry-Based+Assays.">Recommendations for the Generation, Quantification, Storage, and Handling of Peptides Used for Mass Spectrometry-Based Assays.</a> Clinical Chemistry. 62 (1), 48-69 (2016).</li><li>Wijayawardena, B., Fu, Q., Johnson, C., Van Eyk, J. E., Kowalski, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+Reproducible+Automated+Proteomics+Sample+Preparation+on+Biomek+i-Series.">Highly Reproducible Automated Proteomics Sample Preparation on Biomek i-Series.</a> Technical note, Beckman Coulter Life Science. Document # AAG-4890APP02. 19, (2019).</li></ol>

O processamento amostral para espectrometria de massa requer desnaturação, redução e alquilação de proteínas para bloquear cisteínas, e digestão de tripsina para fixar proteínas em peptídeos. Cada reação química ou enzimática precisa ser iniciada em um horário designado e realizada a uma temperatura controlada, e cada etapa do processo envolve várias etapas de transferência de líquido onde a variação experimental pode ser introduzida. O processamento automatizado de amostras fornece uma solução para este dilema. Os sistemas de manuseio de líquidos atualmente disponíveis têm a capacidade de transferir reagentes para placas de 96 poços com precisão e precisão inferior a 5%, dependendo do tipo de cabeça e ponta utilizada, e de incubar amostras, com agitação, se desejar, sob temperaturas controladas variando de 14 °C a 70 °C. Usamos um manipulador de líquido automatizado para processar plasma para ensaios SRM em um formato de 96 poços.
Existem milhares de locais de decote sérica dentro das complexas misturas de proteínas em soro, plasma e outras amostras biológicas; e cada uma dessas proteínas tem propriedades únicas que afetam a acessibilidade do local do decote e a estabilidade dos peptídeos resultantes. É, portanto, impossível projetar um procedimento de processamento de amostra que seja ideal para cada proteína. A melhor alternativa é ser o mais consistente possível.
Para obter consistência, otimizamos cada etapa de pipetting realizada pelo manipulador líquido automatizado. Primeiro consideramos o volume necessário e as restrições impostas pelo tipo do líquido (plasma, aquoso ou orgânico) e propriedades correspondentes (viscosidade, coesão e volatilidade), hardware (braços pipetting-head e plate-grabbing da estação de trabalho) e labware. Em seguida, variou a velocidade e a abertura do ar para aspiração, a velocidade e o volume de sopro para dispensação, e a força e duração da mistura, ao mesmo tempo em que incorporamos um toque de ponta após aspiração e/ou dispensando, se necessário, para eliminar a adesão líquida à parte externa das pontas(Figura 13, Tabela Suplementar 1). Um peptídeo SIL único, pré-selecionado para estabilidade, foi cravado em cada reagente para permitir monitorar a precisão de cada etapa de manuseio de líquidos. Após a otimização, os CVs do processo para a maioria das transições foram inferiores a 10%, demonstrando boa reprodutibilidade com a estação de trabalho automatizada (Figura 9, Figura 10, Figura 11 e Figura 12).
O fluxo de trabalho automatizado aqui apresentado prevê uma digestão enzimática consistente com melhor reprodutibilidade e throughput em comparação com os métodos manuais(Figura 9, Figura 10). Esta abordagem promete melhorar a precisão e a confiabilidade da descoberta e validação de biomarcadores por espectrometria de massa.

A quantificação de proteínas e peptídeos à base de espectrometria de massa (MS) está sendo cada vez mais aplicada como ferramenta bioanalítica para análise plasmática em pesquisas básicas e laboratórios clínicos2,3. A instrumentação e a informática necessárias avançaram rapidamente à medida que a ESM tornou-se o método de escolha para quantificar proteínas ou proteínas modificadas, visando seqüências específicas de peptídeos devido à sua capacidade de quantificar centenas de peptídeos em uma única corrida de MS4. A preparação da amostra serve como base para qualquer análise proteômica. Antes da análise de MS, as proteínas de uma amostra biológica são tipicamente desnaturadas, reduzidas, alquiladas, digeridas em peptídeos tépticos e dessalgadas5. Alquilation bloqueia cisteínas para evitar modificações descontroladas e garantir que todas as cisteínas tenham a mesma massa. Em seguida, a tripsina é adicionada para digerir proteínas em peptídeos. Cada uma dessas etapas requer otimização, e todo o processo é tradicionalmente realizado manualmente, permitindo a introdução de erros analíticos.
O pipeline tradicional de desenvolvimento de biomarcadores consiste em dois processos principais: proteômica de espingarda para descoberta global de proteínas para criar um inventário de proteínas em profundidade6 e proteômica direcionada para verificação e validação visando a quantitação de proteína de alta precisão e alto nível7. Independentemente da abordagem da ESM, a preparação da amostra é a mesma e centra-se no decote enzimático de proteínas em uma mistura de peptídeos. Como proposto por Van Eyk e Sobhani8, ter um método que permita uma análise precisa, precisa e reprodutível tanto para a descoberta quanto para ensaios direcionados é desejado para mover efetivamente os biomarcadores de descoberta para ensaios clínicos implementados. Para isso, a automação da preparação da amostra será útil e fornecerá a capacidade de aumentar a eficiência para análises de alto throughput. Os métodos manuais normalmente introduzem erros analíticos além dos limites aceitáveis especificados pela Food and Drug Administration (FDA) na orientação revisada de validação do método bioanalítico, que inclui biomarcadores e diagnósticos2,9. O desenvolvimento de um fluxo de trabalho de preparação de amostras de proteína sem d.S. rápido, altamente preciso e mãos-livres será necessário para facilitar a pesquisa de biomarcadores, o que requer a preparação e análise de milhares de amostras biológicas. A preparação da amostra de MS tem muitas etapas onde erros podem ser introduzidos, e o processo é tedioso e demorado.
Em nosso método aprimorado, foi programado um workstation automatizado para realizar todos os procedimentos necessários de preparação da amostra de plasma em um total de 6 etapas (Figura 1) para garantir: 1) transferências líquidas precisas; 2) a reação é iniciada e interrompida em um momento consistente; 3) a reação é realizada a uma temperatura controlada (ou seja, incubadora); e 4) a reação tem mistura uniforme para todas as reações. Também implementamos a adição de proteínas exógenas de controle de qualidade e padrões internos (padrões estáveis de peptídeos rotulados por isótopos) para garantir uma qualidade e uma produção reprodutível de proteína baseada em LC-MS e quantificação de peptídeos em um formato de 96 poços. Incluindo preparação de reagente, horas de trabalho e um total de 1.000.000 etapas de pipetting seriam necessárias para processar 96 amostras em tubos individuais. A automação reduz o tempo prático e o número de interações humanas envolvidas.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>A Pooled healthy human plasma</td>
			<td>Bioreclamation Inc.</td>
			<td></td>
			<td>human plasma tested in the manuscript</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile, HPLC Grade</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A998SK1</td>
			<td>LC MS/MS solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-Galactosidase Recombinant from E.Coli</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G3153-5MG</td>
			<td>exogenous control proteins.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biomek i7 Automated Workstation</td>
			<td>Beckman Coulter, Inc.</td>
			<td></td>
			<td>The proteomic sample preparation workstation: Biomek automated workstations are not intended or validated for use in the diagnosis of disease or other conditions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biomek i-Series Tips 230&#181;L Non-Sterile</td>
			<td>Beckman Coulter, Inc.</td>
			<td>B85903&#160;</td>
			<td>Tips, i7 consumable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biomek i-Series Tips 90&#181;L Non-Sterile</td>
			<td>Beckman Coulter, Inc.</td>
			<td>B85881&#160;</td>
			<td>Tips, i7 consumable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FG, Kit Trypsin TPCK</td>
			<td>Sciex</td>
			<td>4445250</td>
			<td>Trypsin used in digestion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hard-Shell 96-Well PCR Plates, low profile, thin wall, skirted, green/clear&#160;</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>#hsp9641</td>
			<td>Autosampler plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Octyl B-D-Glucopyranoside</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>O9882-5G</td>
			<td>detergent used in digestion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polypropylene, 96-Round Deep Well Plates Sterile</td>
			<td>Beckman Coulter, Inc.</td>
			<td>267007</td>
			<td>Reagent and digestion plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prominence UFLCXR HPLC system</td>
			<td>Shimadzu, Japan</td>
			<td></td>
			<td>High flow LC sytem</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QTRAP 6500</td>
			<td>SCIEX</td>
			<td></td>
			<td>Mass spectrometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water, HPLC Grade</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>W54</td>
			<td>LC MS/MS solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xbridge BEH30 C18 2.1mm x 100mm</td>
			<td>Waters</td>
			<td>186003564</td>
			<td>LC MSMS column</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a plasma sample preparation for mass spectrometry using an automated workstation

A preparação da amostra para análise de espectrometria de massa em proteômica requer decote enzimático de proteínas em uma mistura de peptídeos. Este processo envolve inúmeras etapas de incubação e transferência de líquidos a fim de alcançar a desnaturação, redução, alquilação e decote. A adaptação desse fluxo de trabalho em uma estação de trabalho automatizada pode aumentar a eficiência e reduzir os coeficientes de variância, fornecendo dados mais confiáveis para comparações estatísticas entre os tipos de amostra. Descrevemos anteriormente um fluxo de trabalho de preparação de amostras proteômicas automatizada1. Aqui, relatamos o desenvolvimento de um fluxo de trabalho mais eficiente e melhor controlado com as seguintes vantagens: 1) O número de etapas de transferência de líquidos é reduzido de nove para seis por meio da combinação de reagentes; 2) O tempo de pipetting é reduzido por pipetting de ponta seletiva usando uma cabeça pipetting de 96 posições com múltiplos canais; 3) O potencial de throughput é aumentado pela disponibilidade de até 45 posições no convés; 4) O gabinete completo do sistema proporciona melhor temperatura e controle ambiental e reduz o potencial de contaminação de amostras ou reagentes; e 5) A adição de peptídeos rotulados de isótopos estáveis, bem como proteína β-galactosidase, a cada amostra torna possível o monitoramento e o controle de qualidade durante todo o processo. Essas melhorias de hardware e processos proporcionam boa reprodutibilidade e melhoram a precisão intra-ensaio e interensaio (CV de menos de 20%) para quantificação de proteína soro baseada em LC-MS e peptídeos. Todo o fluxo de trabalho para digerir 96 amostras em uma placa de 96 poços pode ser concluído em aproximadamente 5 horas.

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A Plasma Sample Preparation for Mass Spectrometry using an Automated Workstation

Aqui, apresentamos um método automatizado de digestão de proteínas plasmáticas para análise proteômica quantitativa baseada em espectrometria de massa. Neste protocolo, as etapas de transferência e incubação de líquidos para desnaturação, redução, alquilação e reações de digestão de tripsina são simplificadas e automatizadas. Leva aproximadamente cinco horas para preparar uma placa de 96 poços com precisão desejada.

Uma preparação de amostra de plasma para espectrometria de massa usando uma estação de trabalho automatizada

Sample preparation for mass spectrometry analysis in proteomics requires enzymatic cleavage of proteins into a peptide mixture. This process involves ...

Este fluxo de trabalho automatizado fornece uma digestão enzimática proteica consistente com excelente reprodutibilidade e throughput. Isso melhora a precisão e a confiabilidade da descoberta, validação e aplicação clínica do biomarcador por espectrometria de massa. A vantagem dessa tecnologia é que todo o fluxo de trabalho pode ser concluído para 96 amostras em aproximadamente cinco horas com intra-ensaio e cv de ensaio inter-ensaio inferior a 20% para a maioria das proteínas.Esta preparação precisa de amostras de alto rendimento nos permite investigar doenças proteomas de tecido ou biofluidos em uma escala maior. Além disso, o fluxo de trabalho automatizado de preparação de amostras proteômicas fornece uma base sólida para alto conteúdo e uma análise proteômica quantitativa. Demonstrando o procedimento estarão o Dr.Qin Fu, Diretor do Centro de Altos Rendimentos do Cedar Sinai e o Sr. Casey Johnson, um pesquisador associado do meu laboratório.Antes de iniciar a análise, adicione cinco microliters de plasma humano saudável em uma placa de propileno de 96 balas. Quando todas as amostras tiverem sido carregadas, abra o software do dispositivo de manipuladora de líquido e sob a guia do método, selecione em casa todos os eixos para orientar o manipulador líquido automatizado. Confirme que todas as seringas da estação de trabalho não contêm bolhas de ar visíveis e abram um novo método e clique em Executar para iniciar o método.Digite verdadeiro no enter um valor a ser usado para solicitar o autosampler para ter uma placa autosampler preparada no final do método e clique em OK. Digite um no enterr um valor a ser usado para o prompt da primeira coluna e clique em OK. Digite 12 no digite um valor a ser usado para o prompt da última coluna e clique em OK. Se uma placa de amostra estiver sendo usada com volumes amostrais de pelo menos 20 microliters, digite verdadeiro no digite um valor a ser usado para o prompt da placa de amostra e clique em OK. Siga as instruções na janela Configuração do Labware Guiado e clique em Continuar. Carregue os reagentes apropriados nos poços apropriados e clique em Next. Clique novamente no Next para definir o deck automático do manipulador líquido como ilustrado, incluindo as placas de reagente, reação, amostra e autosampler, caixas de ponta de 90 microliter de seis poços, uma caixa de ponta vazia de 90 microliter e uma caixa de ponta de 230 microliter completa.Em seguida, clique em Concluir para iniciar o método. No prompt de continuação após centrifugação, recupere a placa de reação e coloque a placa na centrífuga. No final da centrifugação, retorne a placa de reação à sua posição dentro do manipulador líquido automatizado e clique em Continuar.Para a cromatografia líquida e a análise da espectrometria de massa tandem, resolva os peptídeos em uma coluna C18 2.1 por 100 milímetros de 3,5 micrômetros por cromatografia líquida de alta pressão com uma taxa de fluxo de 250 microliters por minuto e analisada em linha em um espectrômetro de massa quádrupla triplo. Cinco minutos após o carregamento, equilibre a coluna com solução B de 5% tampão e elute os peptídeos com um gradiente linear de 5-35% de tampão B ao longo de 30 minutos. No final da eluição, lave a coluna com 98% de tampão B por 10 minutos seguido de uma lavagem de cinco minutos com 5% de tampão B antes de carregar a próxima amostra.Para o desvio on-line, use uma válvula de comutação em duas fases para desviar o eluente pós-coluna para resíduos antes de entrar na fonte de íons. Quando todas as amostras foram elucidadas, vários dados de monitoramento de reação podem ser processados. Nesta análise representativa, três peptídeos beta-gal e dois peptídeos de albumina foram monitorados a partir de proteínas beta-gal e plasma processado.A precisão do fluxo de trabalho de preparação automatizada da amostra foi calculada como a porcentagem do coeficiente de variância do fluxo de trabalho de monitoramento de reação selecionado proteômico total menos o coeficiente percentual de variância da espectrometria de massa da cromatografia líquida tandem. Como esperado, foram observadas boas intensidades de sinal tanto para a albumina de soro humano quanto para as proteínas beta-gal. Para monitorar a precisão das etapas de transferência de líquido, padrões de peptídeos marcados por isótopos estáveis podem ser cravados para a albumina de soro humano endógeno e proteína beta-gal exógena em etapas independentes de transferência de reagentes.Para validar o fluxo de trabalho automatizado de preparação da amostra proteômica, o coeficiente intradiário de valores de variância foi calculado a partir de 21 poços preparados no mesmo dia. O coeficiente percentual médio intradia de variância para 40 proteínas variou de 4 a 20% Para avaliar o efeito de borda do fluxo de trabalho automatizado baseado em placas, o coeficiente percentual de variância pode ser calculado a partir de poços específicos dentro de colunas e linhas designadas. Neste experimento representativo, as intensidades de sinal de monitoramento de múltiplas reações foram semelhantes em todas as configurações de coluna e linha com o coeficiente percentual de variância variando de 3 a 22%Os passos mais importantes são adicionar uma amostra corretamente de acordo com o mapa de placas desejada de 96 poços e configurar corretamente a placa de reagente de acordo com a instrução do software.Este método automatizado de preparação de amostras proteômicas permite que os pesquisadores coletem dados de proteômica confiável e quantitativa em larga escala.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Time-resolved ElectroSpray Ionization Hydrogen-deuterium Exchange Mass Spectrometry for Studying Protein Structure and Dynamics

resolvida no tempo com ionização por electrospray Hidrogénio-deutério troca Espectrometria de Massa para estudar a estrutura e dinâmica das proteínas

Intrinsically disordered proteins (IDPs) have long been a challenge to structural biologists due to their lack of stable secondary structure elements. ...

Bioquímica

Resolving Affinity Purified Protein Complexes by Blue Native PAGE and Protein Correlation Profiling

Resolver purificada por afinidade complexos de proteínas por Azul Native PAGE e Proteína Correlação Profiling

Most proteins act in association with others; hence, it is crucial to characterize these functional units in order to fully understand biological ...

Lipid Droplet Isolation for Quantitative Mass Spectrometry Analysis

Isolamento de gotículas de gordura para análise quantitativa Espectrometria de Massa

Lipid droplets are vital to the replication of a variety of different pathogens, most prominently the Hepatitis C Virus (HCV), as the putative site of ...

Glycoproteomics of the Extracellular Matrix: A Method for Intact Glycopeptide Analysis Using Mass Spectrometry

Glicoproteômica da matriz extracelular: um método de análise GLICOPï¿½TIDOS Intact Usando Espectrometria de Massa

Fibrosis is a hallmark of many cardiovascular diseases and is associated with the exacerbated secretion and deposition of the extracellular matrix (ECM). ...

Sample Preparation for Mass Spectrometry-based Identification of RNA-binding Regions

Preparação da amostra para identificação de espectrometria de massa-baseada das regiões de ligação de RNA

Noncoding RNAs play important roles in several nuclear processes, including regulating gene expression, chromatin structure, and DNA repair. In most ...

Optimal Preparation of Formalin Fixed Samples for Peptide Based Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization Mass Spectrometry Imaging Workflows

Preparação ideal de formol fixada amostras para peptídeo baseado Matrix assistida por espectrometria de massa de ionização/dessorção Laser Imaging fluxos de trabalho

The use of matrix-assisted laser desorption/ionization, mass spectrometry imaging (MALDI MSI) has rapidly expanded, since this technique analyzes a host ...

Detection of Protein Ubiquitination Sites by Peptide Enrichment and Mass Spectrometry

Detecção de locais de ubiquitinação de proteínas por enriquecimento de peptídeos e espectrometria de massa

The posttranslational modification of proteins by the small protein ubiquitin is involved in many cellular events. After tryptic digestion of ...

An All-in-one Sample Holder for Macromolecular X-ray Crystallography with Minimal Background Scattering

Um suporte de amostra tudo-em-um para a cristalografia macromolecular do raio X com espalhamento mínimo do fundo

Macromolecular X-ray crystallography (MX) is the most prominent method to obtain high-resolution three-dimensional knowledge of biological macromolecules. ...

Sample Preparation for Probe Electrospray Ionization Mass Spectrometry

Preparação de amostras para espectrometria de ionização de eletrospray de sonda

Mass spectrometry (MS) is a powerful tool in analytical chemistry because it provides very accurate information about molecules, such as mass-to-charge ...

Quantitative Analysis of the Cellular Lipidome of Saccharomyces Cerevisiae Using Liquid Chromatography Coupled with Tandem Mass Spectrometry

Quantitative Analysis of the Cellular Lipidome of Saccharomyces Cerevisiae Using Liquid Chromatography Coupled with Tandem Mass Spectrometry

Análise Quantitativa do Lipidome Celular de Saccharomyces Cerevisiae Usando Cromatografia Líquida Juntamente com Espectrometria de Massa de Tandem

Lipids are structurally diverse amphipathic molecules that are insoluble in water. Lipids are essential contributors to the organization and function of ...