Name: a plasma sample preparation for mass spectrometry using an automated workstation
Uploaded: 2020-04-24T13:30:00
Duration: 7 min 12 s
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	<li>Fu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+Reproducible+Automated+Proteomics+Sample+Preparation+Workflow+for+Quantitative+Mass+Spectrometry.">Highly Reproducible Automated Proteomics Sample Preparation Workflow for Quantitative Mass Spectrometry.</a> Journal of Proteome Research. 17 (1), 420-428 (2018).</li><li>Lehmann, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+mass+spectrometry+proteomics+(cMSP)+for+medical+laboratory:+What+does+the+future+hold?.">Clinical mass spectrometry proteomics (cMSP) for medical laboratory: What does the future hold?.</a> Clinica Chimica Acta. 467, 51-58 (2017).</li><li>Abbatiello, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-Scale+Interlaboratory+Study+to+Develop,+Analytically+Validate+and+Apply+Highly+Multiplexed,+Quantitative+Peptide+Assays+to+Measure+Cancer-Relevant+Proteins+in+Plasma.">Large-Scale Interlaboratory Study to Develop, Analytically Validate and Apply Highly Multiplexed, Quantitative Peptide Assays to Measure Cancer-Relevant Proteins in Plasma.</a> Molecular &amp; Cellular Proteomics. 14 (9), 2357-2374 (2015).</li><li>Kuster, B., Schirle, M., Mallick, P., Aebersold, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scoring+proteomes+with+proteotypic+peptide+probes.">Scoring proteomes with proteotypic peptide probes.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 6 (7), 577-583 (2005).</li><li>Carr, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+peptide+measurements+in+biology+and+medicine:+best+practices+for+mass+spectrometry-based+assay+development+using+a+fit-for-purpose+approach.">Targeted peptide measurements in biology and medicine: best practices for mass spectrometry-based assay development using a fit-for-purpose approach.</a> Molecular &amp; Cellular Proteomics. 13 (3), 907-917 (2014).</li><li>Yates, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pivotal+role+of+computers+and+software+in+mass+spectrometry+-+SEQUEST+and+20+years+of+tandem+MS+database+searching.">Pivotal role of computers and software in mass spectrometry - SEQUEST and 20 years of tandem MS database searching.</a> Journal of the American Society for Mass Spectrometry. 26 (11), 1804-1813 (2015).</li><li>Nilsson, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass+spectrometry+in+high-throughput+proteomics:+ready+for+the+big+time.">Mass spectrometry in high-throughput proteomics: ready for the big time.</a> Nature Methods. 7 (9), 681-685 (2010).</li><li>Van Eyk, J. E., Sobhani, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Precision+Medicine.">Precision Medicine.</a> Circulation. 138 (20), 2172-2174 (2018).</li><li>Hoofnagle, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recommendations+for+the+Generation,+Quantification,+Storage,+and+Handling+of+Peptides+Used+for+Mass+Spectrometry-Based+Assays.">Recommendations for the Generation, Quantification, Storage, and Handling of Peptides Used for Mass Spectrometry-Based Assays.</a> Clinical Chemistry. 62 (1), 48-69 (2016).</li><li>Wijayawardena, B., Fu, Q., Johnson, C., Van Eyk, J. E., Kowalski, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+Reproducible+Automated+Proteomics+Sample+Preparation+on+Biomek+i-Series.">Highly Reproducible Automated Proteomics Sample Preparation on Biomek i-Series.</a> Technical note, Beckman Coulter Life Science. Document # AAG-4890APP02. 19, (2019).</li></ol>

El procesamiento de muestras para espectrometría de masas requiere desnaturalización de proteínas, reducción y alquilación para bloquear las cisteínas, y la digestión de trippsina para dividir las proteínas en péptidos. Cada reacción química o enzimática debe iniciarse en un momento designado y realizarse a una temperatura controlada, y cada paso del proceso implica múltiples pasos de transferencia de líquido donde se puede introducir la variación experimental. El procesamiento automatizado de muestras proporciona una solución a este dilema. Los sistemas de manipulación de líquidos disponibles actualmente tienen la capacidad de transferir reactivos en placas de 96 pocillos con una precisión inferior al 5%, dependiendo del tipo de cabeza y punta utilizado, e incubar muestras, con temblores si se desea, bajo temperaturas controladas que oscilan entre 14 oC y 70 oC. Utilizamos un manipulador de líquidos automatizado para procesar plasma para ensayos SRM en un formato de 96 pozos.
Hay muchos miles de sitios de escote proteasa dentro de las complejas mezclas de proteínas en suero, plasma y otras muestras biológicas; y cada una de estas proteínas tiene propiedades únicas que afectan la accesibilidad del sitio de escote y la estabilidad de los péptidos resultantes. Por lo tanto, es imposible diseñar un procedimiento de procesamiento de muestras que sea óptimo para cada proteína. La mejor alternativa es ser lo más consistente posible.
Para lograr la consistencia, optimizamos cada paso de pipeteo realizado por el controlador de líquido automatizado. Primero consideramos el volumen requerido y las restricciones impuestas por el tipo de líquido (plasma, acuoso u orgánico) y las propiedades correspondientes (viscosidad, cohesión y volatilidad), hardware (cabezal de pipeteo de estación de trabajo y brazos de acaparamiento de placas) y material de laboratorio. Luego variamos la velocidad y la brecha de aire final para la aspiración, la velocidad y el volumen de soplado para la dosificación, y la fuerza y duración de la mezcla, al tiempo que incorporamos un toque de punta después de la aspiración y / o dispensación, si es necesario, para eliminar el líquido adhiriendo al exterior de las puntas (Figura 13, Tabla Suplementaria 1). Un péptido SIL único, pre-analizado para la estabilidad, fue introducido en cada reactivo para que sea posible monitorear la precisión de cada paso de manejo de líquidos. Después de la optimización, los CV de proceso para la mayoría de las transiciones fueron inferiores al 10%, lo que demuestra una buena reproducibilidad con la estación de trabajo automatizada(Figura 9, Figura 10, Figura 11 y Figura 12).
El flujo de trabajo automatizado que se presenta aquí proporciona una digestión enzimática coherente con una reproducibilidad y un rendimiento mejorados en comparación con los métodos manuales(Figura 9, Figura 10). Este enfoque promete mejorar la precisión y fiabilidad del descubrimiento y validación de biomarcadores mediante espectrometría de masas.

La cuantificación de proteínas y péptidos basada en espectrometría de masas (MS) se está aplicando cada vez más como herramienta bioanalítica para el análisis plasmático en laboratorios clínicos y de investigación básica2,,3. La instrumentación e informática necesarias han avanzado rápidamente a medida que la EP se ha convertido en el método de elección para cuantificar proteínas o proteínas modificadas mediante secuencias de péptidos específicos debido a su capacidad para cuantificar cientos de péptidos en una sola MS run4. La preparación de muestras sirve como base para cualquier análisis proteómico. Antes del análisis de la EM, las proteínas de una muestra biológica suelen desnaturalizarse, reducirse, alquilarse, digerirse en péptidos trípticos y desalar5.5 La alquilación bloquea las cisteínas para evitar modificaciones incontroladas y garantizar que todas las cisteínas tengan la misma masa. A continuación, la trippsina se añade para digerir las proteínas en péptidos. Cada uno de estos pasos requiere optimización, y todo el proceso se realiza tradicionalmente manualmente, lo que permite la introducción de errores analíticos.
La canalización de desarrollo de biomarcadores tradicional consta de dos procesos principales: proteómica de escopeta para el descubrimiento global de proteínas para crear un inventario de proteínas en profundidad6 y proteómica dirigida para la verificación y validación dirigida a la cuantificación de proteínas de alta precisión y alto rendimiento7. Independientemente del enfoque de la EM, la preparación de la muestra es la misma y se centra en la escisión enzimática de proteínas en una mezcla de péptidos. Como proponeN Van Eyk y Sobhani8,se desea contar con un método que permita un análisis preciso, preciso y reproducible tanto para el descubrimiento como para ensayos dirigidos para mover eficazmente biomarcadores de descubrimiento a ensayos clínicos implementados. Para ello, la automatización de la preparación de muestras será útil y proporcionará la capacidad de aumentar la eficiencia al análisis de alto rendimiento. Los métodos manuales suelen introducir errores analíticos más allá de los límites aceptables especificados por la Administración de Alimentos y Medicamentos (FDA) en la Guía de validación de métodos bioanalíticos revisada, que incluye biomarcadores y diagnósticos2,,9. El desarrollo de un flujo de trabajo de preparación de muestras de proteínas de MS rápido, altamente preciso y manos libres será necesario para facilitar la investigación de biomarcadores, lo que requiere preparar y analizar miles de muestras biológicas. La preparación de la muestra de MS tiene muchos pasos en los que se pueden introducir errores y el proceso es tedioso y requiere mucho tiempo.
En nuestro método mejorado, se programó una estación de trabajo automatizada para realizar todos los procedimientos de preparación de muestras de plasma necesarios en un total de 6 pasos(Figura 1) para garantizar: 1) transferencias de líquidos precisas; 2) la reacción se inicia y se detiene en un momento constante; 3) la reacción se realiza a temperatura controlada (es decir, incubadora); y 4) la reacción tiene una mezcla uniforme para todas las reacciones. También implementamos la adición de proteínas de control de calidad exógenas y estándares internos (estándares estables de péptidos etiquetados con isótopos) para garantizar una calidad y un rendimiento reproducible de la cuantificación de proteínas y péptidos basada en LC-MS en un formato de 96 polos. Incluyendo la preparación de reactivos, horas de tiempo de trabajo y un total de 1.000.000 pasos de pipeteo sería necesario para procesar 96 muestras en tubos individuales. La automatización reduce el tiempo práctico y el número de interacciones humanas implicadas.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>A Pooled healthy human plasma</td>
			<td>Bioreclamation Inc.</td>
			<td></td>
			<td>human plasma tested in the manuscript</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile, HPLC Grade</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A998SK1</td>
			<td>LC MS/MS solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-Galactosidase Recombinant from E.Coli</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G3153-5MG</td>
			<td>exogenous control proteins.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biomek i7 Automated Workstation</td>
			<td>Beckman Coulter, Inc.</td>
			<td></td>
			<td>The proteomic sample preparation workstation: Biomek automated workstations are not intended or validated for use in the diagnosis of disease or other conditions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biomek i-Series Tips 230&#181;L Non-Sterile</td>
			<td>Beckman Coulter, Inc.</td>
			<td>B85903&#160;</td>
			<td>Tips, i7 consumable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biomek i-Series Tips 90&#181;L Non-Sterile</td>
			<td>Beckman Coulter, Inc.</td>
			<td>B85881&#160;</td>
			<td>Tips, i7 consumable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FG, Kit Trypsin TPCK</td>
			<td>Sciex</td>
			<td>4445250</td>
			<td>Trypsin used in digestion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hard-Shell 96-Well PCR Plates, low profile, thin wall, skirted, green/clear&#160;</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>#hsp9641</td>
			<td>Autosampler plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Octyl B-D-Glucopyranoside</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>O9882-5G</td>
			<td>detergent used in digestion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polypropylene, 96-Round Deep Well Plates Sterile</td>
			<td>Beckman Coulter, Inc.</td>
			<td>267007</td>
			<td>Reagent and digestion plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prominence UFLCXR HPLC system</td>
			<td>Shimadzu, Japan</td>
			<td></td>
			<td>High flow LC sytem</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QTRAP 6500</td>
			<td>SCIEX</td>
			<td></td>
			<td>Mass spectrometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water, HPLC Grade</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>W54</td>
			<td>LC MS/MS solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xbridge BEH30 C18 2.1mm x 100mm</td>
			<td>Waters</td>
			<td>186003564</td>
			<td>LC MSMS column</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a plasma sample preparation for mass spectrometry using an automated workstation

La preparación de muestras para el análisis de espectrometría de masas en proteómica requiere escisión enzimática de proteínas en una mezcla de péptidos. Este proceso implica numerosas etapas de incubación y transferencia de líquidos con el fin de lograr la desnaturalización, reducción, alquilación y escisión. La adaptación de este flujo de trabajo a una estación de trabajo automatizada puede aumentar la eficiencia y reducir los coeficientes de varianza, proporcionando así datos más fiables para las comparaciones estadísticas entre tipos de muestra. Anteriormente describimos un flujo de trabajo automatizado de preparación de muestras proteómicas1. Aquí, informamos del desarrollo de un flujo de trabajo más eficiente y mejor controlado con las siguientes ventajas: 1) El número de pasos de transferencia de líquido se reduce de nueve a seis mediante la combinación de reactivos; 2) El tiempo de pipeteo se reduce mediante pipeteo selectivo de punta utilizando un cabezal de pipeteo de 96 posiciones con múltiples canales; 3) El rendimiento potencial se incrementa por la disponibilidad de hasta 45 posiciones de cubierta; 4) La carcasa completa del sistema proporciona un mejor control de la temperatura y del medio ambiente y reduce el potencial de contaminación de muestras o reactivos; y 5) La adición de isótopos estables etiquetados como péptidos, así como proteína de galactosidasa, a cada muestra hace posible el monitoreo y control de calidad a lo largo de todo el proceso. Estas mejoras en el hardware y los procesos proporcionan una buena reproducibilidad y mejoran la precisión del análisis e interensayo (CV de menos del 20%) para la cuantificación de proteínas y péptidos basada en LC-MS. Todo el flujo de trabajo para digerir 96 muestras en una placa de 96 pocillos se puede completar en aproximadamente 5 horas.

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A Plasma Sample Preparation for Mass Spectrometry using an Automated Workstation

Aquí, presentamos un método automatizado de digestión de proteínas plasmáticas para el análisis proteómico cuantitativo basado en espectrometría de masas. En este protocolo, se simplifican y automatizan los pasos de transferencia e incubación de líquidos para la desnaturalización de proteínas, reducción, alquilación y digestión de trippsina. Se tarda aproximadamente cinco horas en preparar una placa de 96 pocillos con la precisión deseada.

Una preparación de muestra de plasma para espectrometría de masas utilizando una estación de trabajo automatizada

Sample preparation for mass spectrometry analysis in proteomics requires enzymatic cleavage of proteins into a peptide mixture. This process involves ...

Este flujo de trabajo automatizado proporciona una digestión enzimática de proteínas consistente con excelente reproducibilidad y rendimiento. Esto mejora la precisión y fiabilidad del descubrimiento, validación y aplicación clínica de biomarcadores por espectrometría de masas. La ventaja de esta tecnología es que todo el flujo de trabajo se puede completar para 96 muestras en aproximadamente cinco horas con CV intra-ensayo e inter-ensayo de menos del 20% para la mayoría de las proteínas.Esta preparación precisa de muestras de alto rendimiento nos permite investigar proteomas de tejido o biofluidos de enfermedad a mayor escala. Además, el flujo de trabajo automatizado de preparación de muestras proteómicas proporciona una base sólida para un alto contenido y un análisis proteómico cuantitativo. Demostrando el procedimiento estará el Dr.Qin Fu, Director del Centro de Alto Rendimiento de Cedar Sinai y el Sr. Casey Johnson, un investigador asociado de mi laboratorio.Antes de comenzar el análisis, añadir cinco microlitros de plasma humano sano agrupado en una placa redonda de propileno de pozo profundo. Una vez cargadas todas las muestras, abra el software del dispositivo de manipulación de líquidos y, en la pestaña método, seleccione el hogar de todos los ejes para orientar el controlador de líquido automatizado. Confirme que todas las jeringas de la estación de trabajo no contienen burbujas de aire visibles y abra un nuevo método y haga clic en Ejecutar para iniciar el método.Escriba true en el valor introdúzpelo que se utilizará para que la solicitud de muestreador automático tenga una placa de muestreador automático preparada al final del método y haga clic en Aceptar. Escriba uno en la solicitud de primera columna y haga clic en Aceptar. Escriba 12 en la solicitud De la última columna y haga clic en Aceptar. Si se utiliza una placa de muestra con volúmenes de muestra de al menos 20 microlitros, introduzca true en la solicitud de placa de muestra y haga clic en Aceptar. Siga las instrucciones de la ventana Configuración de Labware guiado y haga clic en Continuar. Cargue los reactivos apropiados en los pozos adecuados y haga clic en Siguiente. Haga clic en Siguiente de nuevo para establecer la cubierta automatizada del manipulador de líquidos como se ilustra, incluyendo las placas de reactivo, reacción, muestra y autoamplor, cajas de punta de seis microlitros de 90, una caja de punta vacía de 90 microlitros y una caja de punta de 230 microlitros completa.A continuación, haga clic en Finalizar para iniciar el método. En el indicador continuar después de la centrifugación, recupere la placa de reacción y coloque la placa en la centrífuga. Al final de la centrifugación, devuelva la placa de reacción a su posición dentro del manipulador de líquido automatizado y haga clic en Continuar.Para el análisis de cromatografía líquida y espectrometría de masas en tándem, resuelva los péptidos en una columna C18 2.1 por 100 milímetros de 3,5 micrómetros mediante cromatografía líquida de alta presión de alto flujo con un caudal de 250 microlitros por minuto y analizada en línea con un espectrometro de masa triple cuadrúpedo. Cinco minutos después de la carga, equilibre la columna con una solución de 5%buffer B y eluda los péptidos con un gradiente lineal de 5-35% de buffer B durante 30 minutos. Al final de la elución, lave la columna con un 98% de búfer B durante 10 minutos seguido de un lavado de cinco minutos con un búfer B del 5% antes de cargar la siguiente muestra.Para el desvío en línea, utilice una válvula de conmutación de dos fases para desviar el eluyente posterior a la columna al residuo antes de que entre en la fuente de iones. Cuando se han eluido todas las muestras, se pueden procesar varios datos de monitoreo de reacciones. En este análisis representativo, tres péptidos beta-gal y dos péptidos de albúmina fueron monitoreados a partir de proteínas de albúmina de plasma procesadas con picos.La precisión del flujo de trabajo automatizado de preparación de muestras se calculó como el porcentaje del coeficiente de varianza del flujo de trabajo de monitoreo de reacción seleccionado proteómico total menos el coeficiente porcentual de varianza de la espectrometría de masas en tándem de cromatografía líquida. Como era de esperar, se observaron buenas intensidades de señal tanto para la albúmina sérica humana como para las proteínas beta-gal. Para controlar la precisión de los pasos de transferencia de líquidos, se pueden aumentar los estándares de péptidos con etiqueta de isótopo estables para la albúmina sérica humana endógena y la proteína beta-gal exógena en pasos de transferencia de reactivos independientes.Para validar el flujo de trabajo automatizado de preparación de muestras proteómicas, el coeficiente intradía de valores de varianza se calculó a partir de 21 pozos preparados el mismo día. El coeficiente de porcentaje intradía medio de varianza para 40 proteínas osciló entre 4-20%Para evaluar el efecto de borde del flujo de trabajo automatizado basado en placas, el coeficiente porcentual de varianza se puede calcular a partir de pozos específicos dentro de columnas y filas designadas. En este experimento representativo, las intensidades de la señal de monitoreo de reacción múltiple fueron similares en todas las configuraciones de columna y fila con el coeficiente porcentual de varianza que oscila entre 3-22%Los pasos más importantes son agregar una muestra correctamente de acuerdo con el mapa de placas de 96 pozos deseado y configurar correctamente la placa de reactivo de acuerdo con las instrucciones del software.Este método automatizado de preparación de muestras proteómicas permite a los investigadores recopilar datos proteómicos fiables y cuantitativos a gran escala.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Time-resolved ElectroSpray Ionization Hydrogen-deuterium Exchange Mass Spectrometry for Studying Protein Structure and Dynamics

Resuelta en el tiempo de ionización por electrospray de hidrógeno-deuterio Espectrometría de Masas de cambio para el estudio de la estructura proteica y Dinámica

Intrinsically disordered proteins (IDPs) have long been a challenge to structural biologists due to their lack of stable secondary structure elements. ...

Investigación

Bioquímica

Resolving Affinity Purified Protein Complexes by Blue Native PAGE and Protein Correlation Profiling

Resolver purificado por afinidad Complejos de Proteína de Blue nativo PAGE y de proteínas de perfiles de correlación

Most proteins act in association with others; hence, it is crucial to characterize these functional units in order to fully understand biological ...

Lipid Droplet Isolation for Quantitative Mass Spectrometry Analysis

Aislamiento gotas de lípidos para el análisis cuantitativo de Espectrometría de Masas

Lipid droplets are vital to the replication of a variety of different pathogens, most prominently the Hepatitis C Virus (HCV), as the putative site of ...

Glycoproteomics of the Extracellular Matrix: A Method for Intact Glycopeptide Analysis Using Mass Spectrometry

Glycoproteomics de la matriz extracelular: Un método para el análisis glucopéptidos Intacto El uso de la espectrometría de masas

Fibrosis is a hallmark of many cardiovascular diseases and is associated with the exacerbated secretion and deposition of the extracellular matrix (ECM). ...

Sample Preparation for Mass Spectrometry-based Identification of RNA-binding Regions

Preparación de muestras para identificación basada en espectrometría de masa de regiones de unión de ARN

Noncoding RNAs play important roles in several nuclear processes, including regulating gene expression, chromatin structure, and DNA repair. In most ...

Optimal Preparation of Formalin Fixed Samples for Peptide Based Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization Mass Spectrometry Imaging Workflows

Óptima preparación de formol fijada muestras para péptidos basados en matriz asistida por láser de desorción/ionización espectrometría de masas de flujos de trabajo

The use of matrix-assisted laser desorption/ionization, mass spectrometry imaging (MALDI MSI) has rapidly expanded, since this technique analyzes a host ...

Detection of Protein Ubiquitination Sites by Peptide Enrichment and Mass Spectrometry

Detección de sitios de ubiquitinación de proteínas por enriquecimiento de péptidos y espectrometría de masas

The posttranslational modification of proteins by the small protein ubiquitin is involved in many cellular events. After tryptic digestion of ...

An All-in-one Sample Holder for Macromolecular X-ray Crystallography with Minimal Background Scattering

Un soporte de muestra todo en uno para cristalografía de rayos X macromolecular con dispersión mínima de fondo

Macromolecular X-ray crystallography (MX) is the most prominent method to obtain high-resolution three-dimensional knowledge of biological macromolecules. ...

Sample Preparation for Probe Electrospray Ionization Mass Spectrometry

Preparación de muestras para espectrometría de masas de ionización por electrospray de sonda

Mass spectrometry (MS) is a powerful tool in analytical chemistry because it provides very accurate information about molecules, such as mass-to-charge ...

Quantitative Analysis of the Cellular Lipidome of Saccharomyces Cerevisiae Using Liquid Chromatography Coupled with Tandem Mass Spectrometry

Quantitative Analysis of the Cellular Lipidome of Saccharomyces Cerevisiae Using Liquid Chromatography Coupled with Tandem Mass Spectrometry

Análisis cuantitativo del lipidomo celular de Saccharomyces Cerevisiae utilizando cromatografía líquida junto con espectrometría de masas en tándem

Lipids are structurally diverse amphipathic molecules that are insoluble in water. Lipids are essential contributors to the organization and function of ...