Name: inducing and characterizing vesicular steatosis in differentiated heparg cells
Uploaded: 2019-07-18T13:30:00
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私たちは、HepaRG細胞を親切に提供してくれたクリスチャン・トレポ教授(INSERM U871、フランス、リヨン)に感謝します。私たちは、行政支援のためにリタ・アポディアに感謝しています。この研究は、MIUR-大臣デル・イストルツィオーネ、デルユニバーシタ・エ・デッラ・ライスカ(FIRB 2011-2016 RBAP10XKNC)、ローマのサピエンツァ大学(プロト)によってサポートされました。C26A13T8PS;Prot。C26A142MCH;Prot。C26A15LSXL)。

1. 培養培養剤・試薬の調製
<ol><li>増殖培地:グルタマックス、10%の胎児ウシ血清(FBS)、1%ペニシリン/ストレプトマイシン、5 μg/mLインスリンおよび0.5 μMヒドロコルチゾン半球シミネチン酸を含むウィリアムのE培地を補う。</li>
	<li>分化媒体:グルタマックス、10%FBS、1%ペニシリン/ストレプトマイシン、5μg/mLインスリン、50 μMヒドロコルチゾン半球シクチン酸塩および2%DMSOを含むウィリアムのE?...

<ol>
	<li>Starley, B. Q., Calcagno, C. J., Harrison, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonalcoholic+fatty+liver+disease+and+hepatocellular+carcinoma:+a+weighty+connection.">Nonalcoholic fatty liver disease and hepatocellular carcinoma: a weighty connection.</a> Hepatology. 51 (5), 1820-1832 (2010).</li><li>Byrne, C. D., Targher, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NAFLD:+a+multisystem+disease.">NAFLD: a multisystem disease.</a> Journal of Hepatology. 62 (1), 47-64 (2015).</li><li>Marra, F., Gastaldelli, A., Svegliati Baroni, G., Tell, G., Tiribelli, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+basis+and+mechanisms+of+progression+of+non-+alcoholic+steatohepatitis.">Molecular basis and mechanisms of progression of non- alcoholic steatohepatitis.</a> Trends in Molecular Medicine. 14, 72-81 (2008).</li><li>Chalasani, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+diagnosis+and+management+of+nonalcoholic+fatty+liver+disease:+Practice+guidance+from+the+American+Association+for+the+Study+of+Liver+Diseases.">The diagnosis and management of nonalcoholic fatty liver disease: Practice guidance from the American Association for the Study of Liver Diseases.</a> Hepatology. 67 (1), 328-357 (2018).</li><li>Banini, B. A., Sanyal, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+and+future+pharmacologic+treatment+of+nonalcoholic+steatohepatitis.">Current and future pharmacologic treatment of nonalcoholic steatohepatitis.</a> Current Opinion in Gastroenterology. 33 (3), 134-141 (2017).</li><li>Takahashi, Y., Sugimoto, K., Inui, H., Fukusato, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+pharmacological+therapies+for+nonalcoholic+fatty+liver+disease/nonalcoholic+steatohepatitis.">Current pharmacological therapies for nonalcoholic fatty liver disease/nonalcoholic steatohepatitis.</a> World Journal of Gastroenterology. 21 (13), 3777-3785 (2015).</li><li>Younossi, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+burden+of+NAFLD+and+NASH:+trends,+predictions,+risk+factors+and+prevention.">Global burden of NAFLD and NASH: trends, predictions, risk factors and prevention.</a> Nature Reviews Gastroenterology &amp; Hepatology. 15 (1), 11-20 (2018).</li><li>Santhekadur, P. K., Kumar, D. P., Sanyal, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+models+of+non-alcoholic+fatty+liver+disease.">Preclinical models of non-alcoholic fatty liver disease.</a> Journal of Hepatology. 68 (2), 230-237 (2018).</li><li>Nagarajan, P., Mahesh Kumar, M. J., Venkatesan, R., Majundar, S. S., Juyal, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+modified+mouse+models+for+the+study+of+nonalcoholic+fatty+liver+disease.">Genetically modified mouse models for the study of nonalcoholic fatty liver disease.</a> World Journal of. Gastroenterology. 18 (11), 1141-1153 (2012).</li><li>Oseini, A. M., Cole, B. K., Issa, D., Feaver, R. E., Sanyal, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translating+scientific+discovery:+the+need+for+preclinical+models+of+nonalcoholic+steatohepatitis.">Translating scientific discovery: the need for preclinical models of nonalcoholic steatohepatitis.</a> Hepatology International. 12 (1), 6-16 (2018).</li><li>Ramboer, E., Vanhaecke, T., Rogiers, V., Vinken, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immortalized+human+hepatic+cell+lines+for+in+vitro+testing+and+research+purposes.">Immortalized human hepatic cell lines for in vitro testing and research purposes.</a> Methods in Molecular Biology. 1250, 53-76 (2015).</li><li>G&#243;mez-Lech&#243;n, M. J., Donato, M. T., Castell, J. V., Jover, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+hepatocytes+in+primary+culture:+the+choice+to+investigate+drug+metabolism+in+man.">Human hepatocytes in primary culture: the choice to investigate drug metabolism in man.</a> Current Drug Metabolism. 5 (5), 443-462 (2004).</li><li>Marion, M. J., Hantz, O., Durantel, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+HepaRG+cell+line:+biological+properties+and+relevance+as+a+tool+for+cell+biology,+drug+metabolism,+and+virology+studies.">The HepaRG cell line: biological properties and relevance as a tool for cell biology, drug metabolism, and virology studies.</a> Methods in Molecular Biology. 640, 261-272 (2010).</li><li>Gripon, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infection+of+a+human+hepatoma+cell+line+by+hepatitis+B+virus.">Infection of a human hepatoma cell line by hepatitis B virus.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 99 (24), 15655-15660 (2002).</li><li>Anth&#233;rieu, S., Rogue, A., Fromenty, B., Guillouzo, A., Robin, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+vesicular+steatosis+by+amiodarone+and+tetracycline+is+associated+with+up-regulation+of+lipogenic+genes+in+HepaRG+cells.">Induction of vesicular steatosis by amiodarone and tetracycline is associated with up-regulation of lipogenic genes in HepaRG cells.</a> Hepatology. 53 (6), 1895-1905 (2011).</li><li>Rouge, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PPAR+agonists+reduce+steatosis+in+oleic+acid-overloaded+HepaRG+cells.">PPAR agonists reduce steatosis in oleic acid-overloaded HepaRG cells.</a> Toxicology and Applied Pharmacology. 276 (1), 73-81 (2014).</li><li>Belloni, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+a+phospho-STAT3-miRNAs+pathway+improves+vesicular+hepatic+steatosis+in+an+in+vitro+and+in+vivo+model.">Targeting a phospho-STAT3-miRNAs pathway improves vesicular hepatic steatosis in an in vitro and in vivo model.</a> Scientific Reports. 8, 13638 (2018).</li><li>Nunn, A. D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+histone+deacetylase+inhibiting+drug+Entinostat+induces+lipid+accumulation+in+differentiated+HepaRG+cells.">The histone deacetylase inhibiting drug Entinostat induces lipid accumulation in differentiated HepaRG cells.</a> Scientific Reports. 6, 28025 (2016).</li><li>Donato, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytometric+analysis+for+drug-induced+steatosis+in+HepG2+cells.">Cytometric analysis for drug-induced steatosis in HepG2 cells.</a> Chemico-Biological Interactions. 181 (3), 417-423 (2009).</li><li>Hellerer, T., Ax&#228;ng, C., Brackmann, C., Hillertz, P., Pilon, M., Enejder, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+of+lipid+storage+in+Caenorhabditis+elegans+using+coherent+anti-Stokes+Raman+scattering+(CARS)+microscopy.">Monitoring of lipid storage in Caenorhabditis elegans using coherent anti-Stokes Raman scattering (CARS) microscopy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 104 (37), 14658-14663 (2007).</li><li>Le, T. T., Ziemba, A., Urasaki, Y., Brotman, S., Pizzorno, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-free+evaluation+of+hepatic+microvesicular+steatosis+with+multimodal+coherent+anti-Stokes+Raman+scattering+microscopy.">Label-free evaluation of hepatic microvesicular steatosis with multimodal coherent anti-Stokes Raman scattering microscopy.</a> PLoS One. 7 (11), 51092 (2012).</li><li>Guillouzo, A., Corlu, A., Aninat, C., Glaise, D., Morel, F., Guguen-Guillouzo, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+human+hepatoma+HepaRG+cells:+a+highly+differentiated+model+for+studies+of+liver+metabolism+and+toxicity+of+xenobiotics.">The human hepatoma HepaRG cells: a highly differentiated model for studies of liver metabolism and toxicity of xenobiotics.</a> Chemico-Biological Interactions. 168 (1), 66-73 (2007).</li><li>Nelson, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+hepatic+HepaRG+cells+maintain+an+organotypic+phenotype+with+high+intrinsic+CYP450+Activity/metabolism+and+significantly+outperform+standard+HepG2/C3A+cells+for+pharmaceutical+and+therapeutic+applications.">Human hepatic HepaRG cells maintain an organotypic phenotype with high intrinsic CYP450 Activity/metabolism and significantly outperform standard HepG2/C3A cells for pharmaceutical and therapeutic applications.</a> Basic &amp; Clinical Pharmacology &amp; Toxicology. 120 (1), 30-37 (2017).</li><li>Gerets, H. H. J., Tilmant, K., Gerin, B., Chanteux, H., Depelchin, B. O., Dhalluin, S., Atienzar, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+primary+human+hepatocytes,+HepG2+cells,+and+HepaRG+cells+at+the+mRNA+level+and+CYP+activity+in+response+to+inducers+and+their+predictivity+for+the+detection+of+human+hepatotoxins.">Characterization of primary human hepatocytes, HepG2 cells, and HepaRG cells at the mRNA level and CYP activity in response to inducers and their predictivity for the detection of human hepatotoxins.</a> Cell Biology and Toxicology. 28 (2), 69-87 (2012).</li><li>Pusl, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free+fatty+acids+sensitize+hepatocytes+to+bile+acid-induced+apoptosis.">Free fatty acids sensitize hepatocytes to bile acid-induced apoptosis.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 371 (3), 441-445 (2008).</li><li>Gentile, C. L., Pagliassotti, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+fatty+acids+in+the+development+and+progression+of+nonalcoholic+fatty+liver+disease.">The role of fatty acids in the development and progression of nonalcoholic fatty liver disease.</a> The Journal of Nutritional Biochemistry. 19 (9), 567-576 (2008).</li><li>Mei, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+roles+of+unsaturated+and+saturated+fatty+acids+on+autophagy+and+apoptosis+in+hepatocytes.">Differential roles of unsaturated and saturated fatty acids on autophagy and apoptosis in hepatocytes.</a> Journal of Pharmacological Experimental Therapy. 339, 487-498 (2011).</li><li>Malhi, H., Bronk, S. F., Werneburg, N. W., Gores, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free+fatty+acids+induce+JNK-dependent+hepatocyte+lipoapoptosis.">Free fatty acids induce JNK-dependent hepatocyte lipoapoptosis.</a> Journal of Biological Chemistry. 281, 12093-12101 (2006).</li><li>Moravcov&#225;, A., &#268;ervinkov&#225;, Z., Ku&#269;era, O., Mezera, V., Rychtrmoc, D., Lotkov&#225;, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+oleic+and+palmitic+acid+on+induction+of+steatosis+and+cytotoxicity+on+rat+hepatocytes+in+primary+culture.">The effect of oleic and palmitic acid on induction of steatosis and cytotoxicity on rat hepatocytes in primary culture.</a> Physiological Research. 64, 627-636 (2015).</li><li>Ohsaki, Y., Shinohara, Y., Suzuki, M., Fujimoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pitfall+in+using+BODIPY+dyes+to+label+lipid+droplets+for+fluorescence+microscopy.">A pitfall in using BODIPY dyes to label lipid droplets for fluorescence microscopy.</a> Histochemistry and Cell Biology. 133 (4), 477-480 (2010).</li><li>Rinia, H. A., Burger, K. N., Bonn, M., M&#252;ller, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+label-free+imaging+of+lipid+composition+and+packing+of+individual+cellular+lipid+droplets+using+multiplex+CARS+microscopy.">Quantitative label-free imaging of lipid composition and packing of individual cellular lipid droplets using multiplex CARS microscopy.</a> Biophysical Journal. 95 (10), 4908-4914 (2008).</li><li>Waschatko, G., Billecke, N., Schwendy, S., Jaurich, H., Bonn, M., Vilgis, T. A., Parekh, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-free+in+situ+imaging+of+oil+body+dynamics+and+chemistry+in+germination.">Label-free in situ imaging of oil body dynamics and chemistry in germination.</a> Journal of The Royal Society Interface. 13 (123), (2016).</li><li>J&#252;ngst, C., Winterhalder, M. J., Zumbusch, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fast+and+long+term+lipid+droplet+tracking+with+CARS+microscopy.">Fast and long term lipid droplet tracking with CARS microscopy.</a> Journal of Biophotonics. 4 (6), 435-441 (2011).</li><li>Welte, M. A., Gould, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+droplet+functions+beyond+energy+storage.">Lipid droplet functions beyond energy storage.</a> Biochimica et Biophysica Acta - Molecular and Cell Biology of Lipids. 1862 (10), 1260-1272 (2017).</li><li>Cohen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+droplets+as+organelles.">Lipid droplets as organelles.</a> International Review of Cell and Molecular Biology. 337, 83-110 (2018).</li><li>Farese, R. V., Walther, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+droplets+finally+get+a+little+R-E-S-P-E-C-T.">Lipid droplets finally get a little R-E-S-P-E-C-T.</a> Cell. 139 (5), 855-860 (2009).</li></ol>

このプロトコルは、HepaRG細胞を区別する方法と、オレイン酸ナトリウム処理による小胞性脂肪症を誘導する方法について説明する(図1A)。実際、他のヒト肝細胞癌(HCC)細胞株と比較して、HepaRG細胞株は成人ヒト肝細胞の特徴を示し、一次ヒト肝細胞を培養したex vivoに代わる貴重な代替手段を表す13,14 <sup clas...

肝脂肪症は、肝臓体重の少なくとも5%のトリグリセリド含有脂脂脂滴内の肝内脂肪蓄積として定義される。長期の肝脂質貯蔵は、潜在的に可逆的なプロセスであるが、それは肝臓代謝機能障害、炎症および非アルコール性脂肪性肝疾患(NAFLD)の高度な形態、多くの部分で慢性肝疾患の主な原因を引き起こす可能性がある世界1、2.NAFLDは、より積極的な非アルコール性脂肪性肝炎(NASH)に進化する多因子性疾患であり、肝硬変に進行し、患者のごく一部では肝細胞癌(HCC)1、3に進行する可能性がある。NAFLDの特定の治療法として承認された治療法は現在利用でき、食事とライフスタイルの変更の組み合わせは、NAFLDおよびNASH管理4、5、6の柱のままです。
NAFLDの病因における肝性テアトーシスの発症につながる分子機構は、依然として解明されるべきである7.この文脈において、ヒトのステアトーシス病の進行を研究するためにマウスモデルが開発された。無数の異なるモデルが存在し、それぞれが異なるアプローチを組み合わせた遺伝的、栄養的および化学的に誘導されたモデルを含む、その長所と短所を持っています。遺伝子組み換え(トランスジェニックまたはノックアウト)マウスは、自発的に肝疾患を発症する。しかしながら、これらの変異はヒトでは非常にまれであり、単一遺伝子の欠失または過剰発現(例えば、ob/obマウス)は、分子レベル8、9における多因子ヒト疾患の病因を模倣しないかもしれないことに留意されたい。同様に、食事または薬理学的操作後にマウスによって獲得された疾患は、ヒト8におけるNAFLDの発症に関連するヒト食の影響を模倣しないかもしれない。しかし、動物モデルは、NAFLDの理解の開発を容易にしており、このアプローチは現在、実験室研究で最も頻繁に使用される戦略です。それにもかかわらず、動物モデルで得られた結果のヒトにおける複製は繰り返し失敗し、診療所10への翻訳が不十分である。
従って、NAFLDのインビトロモデルは、NAFLD進行の分子機構を解明する上で基本的な役割を果たし、多数の化合物をスクリーニングする貴重なツールを表す。一次細胞培養、不死細胞株および肝生検は、研究目的11のために広く使用されている。原発性ヒト肝細胞はヒトの臨床状態によく似ていますが、ドナーの数は限られており、一次細胞培養は細胞の変動性に起因する再現性が低い。これらの観察は、倫理的およびロジスティックな問題と共に、ヒト原発性肝細胞の使用が12に制限される結果となった。したがって、肝細胞株は、肝細胞株が着実に成長し、ほぼ無制限の寿命を有し、安定した表現型を有するので、一次培養に対するいくつかの本質的な利点を有する便利な代替手段を表す。さらに、細胞株は容易にアクセス可能であり、肝細胞株の培養条件は原発肝細胞の培養条件よりも単純であり、異なる実験室間で標準化されている。
ここでは、脂肪酸オレイン酸オレイン酸で処理した肝分化HepaRG細胞に代表される肝小胞性脂肪症のインビトロ細胞ベースモデルを詳細に説明する。HepaRG細胞株は、C型肝炎感染の影響を受けた女性患者およびエドモンドソングレードIよく分化した肝腫瘍14から確立された。HepaRG細胞株は、2%ジメチルスルホキシド(DMSO)に曝露した際に、胆汁様および肝細胞様細胞の2つの異なる細胞型に対して分化することができるヒトの二分性前駆細胞株である。分化HepaRG細胞(dHepaRG)は、成人肝細胞といくつかの特徴と特性を共有し、アルブミン、アルドラセB、シトクロムP450 2E1(CYP2E1)、およびシトクロムP450 3A4(CYP3A4)13などの肝臓特異的遺伝子を安定的に発現する能力を有する。(ステップ 3)を使用します。脂肪酸塩オレイン酸ナトリウム(250μM)を用いたdHepaRG細胞の治療は、細胞質脂質液滴の生成につながり、脂肪肝14、15、17、18()ステップ 4)。脂質液滴の蓄積は、オイルレッドO染色(ステップ5)、中性トリグリセリドおよび脂質赤オレンジを染色するリソクロム脂肪溶解色素によって容易に検出することができる。脂肪dHepaRGの脂質を効率的に定量するために、ここでは4,4-ジフルオロ-1,3,5,7-テトラメチル-4-ボラ-3a-3a-3a-4a-diaza-s-インダシン(Bodipy 505/515)(ステップ6)で染色した後の細胞フルオロ分析を例示します。細胞内脂質体に、脂質液滴19を標識するために使用されている。また、ここでは、dHepaRG細胞における複数の代謝遺伝子の定量ポリメラーゼ連鎖反応(qPCR)(ステップ7)によるテアトーシスの評価方法を示す。オレイン酸ナトリウム処理後の脂質液滴の蓄積をさらに特徴付け、定量化するために、一貫性のあるアンチストークス・ラマン散乱(CARS)顕微鏡検査(ステップ8)を行い、視覚化と定量化を可能にする革新的な技術を行いました。20、21を標識せずに脂質液滴。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:799px;" width="797">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Hyclone HyClone Fetal Clone II&#160;</td>
			<td style="width:240px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:143px;">SH30066</td>
			<td style="width:177px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">William&#8217;s E medium with GlutaMAX&#160;</td>
			<td style="width:240px;">Thermofisher</td>
			<td>32551087</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Penicillin/streptomycin&#160;</td>
			<td style="width:240px;">SIGMA</td>
			<td>P4333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Insulin&#160;</td>
			<td style="width:240px;">SIGMA</td>
			<td>I9278</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">hydrocortisone hemisuccinate</td>
			<td style="width:240px;">SIGMA</td>
			<td>H2270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">DMSO, dimethyl sulfoxide</td>
			<td style="width:240px;">SIGMA</td>
			<td style="width:143px;">D2438&#160;&#160;&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Sodium Oleate</td>
			<td style="width:240px;">SIGMA</td>
			<td style="width:143px;">O7501&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Methanol</td>
			<td style="width:240px;">SIGMA</td>
			<td>179337</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Isopropanol</td>
			<td style="width:240px;">SIGMA</td>
			<td style="width:143px;">278475</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BODIPY 505/515</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>D3921</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">PBS</td>
			<td style="width:240px;">Thermofisher</td>
			<td>14190-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Formaldehyde solution</td>
			<td style="width:240px;">SIGMA</td>
			<td>252549</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">RNAse free DNAseI</td>
			<td style="width:240px;">Promega</td>
			<td>M198A&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glass-bottomed dishes</td>
			<td style="width:240px;">Willco Wells</td>
			<td style="width:143px;">GWST-5040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Oil Red solution</td>
			<td style="width:240px;">SIGMA</td>
			<td style="width:143px;">O625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">CellTiter 96 AQueous One Solution</td>
			<td style="width:240px;">Promega&#160;</td>
			<td style="width:143px;">G3582</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">q-PCR oligo name</td>
			<td>Sequence</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ACACB FOR</td>
			<td>CAAGCCGATCACCAAGAGTAAA</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">ACACB REV</td>
			<td>CCCTGAGTTATCAGAGGCTGG</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:239px;">b-actin FOR</td>
			<td style="width:240px;">GCACTCTTCCAGCCTTCCT</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:239px;">b-actin REV</td>
			<td style="width:240px;">AGGTCTTTGCGGATGTCCAC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ALBUMIN FOR</td>
			<td>TGCTTGAATGTGCTGATGACAGG</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ALBUMIN REV</td>
			<td>AAGGCAAGTCAGCAGGCATCTCATC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ALDOB FOR</td>
			<td>GCATCTGTCAGCAGAATGGA&#160;</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ALDOB REV</td>
			<td>TAGACAGCAGCCAGGACCTT</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">APOB FOR</td>
			<td>CCTCCGTTTTGGTGGTAGAG</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">APOB REV</td>
			<td>&#160;CCTAAAAGCTGGGAAGCTGA</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">APOC3 FOR</td>
			<td>CTCAGCTTCATGCAGGGTTA</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">APOC3 REV</td>
			<td>GGTGCTCCAGTAGTCTTTCAG</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CPT1A FOR</td>
			<td>TCATCAAGAAATGTCGCACG</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CPT1A REV</td>
			<td>GCCTCGTATGTGAGGCAAAA</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CYP2E1 FOR</td>
			<td>TTGAAGCCTCTCGTTGACCC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CYP2E1 REV</td>
			<td>CGTGGTGGGATACAGCCAA</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CYP3A4 FOR</td>
			<td>CTTCATCCAATGGACTGCATAAAT</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CYP3A4 REV</td>
			<td>TCCCAAGTATAACACTCTACACAGACAA</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">GAPDH FOR</td>
			<td>TGACAACTTTGGTATCGTGGAAGG</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">GAPDH REV</td>
			<td>AGGGATGATGTTCTGGAGAGCC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">GPAM FOR</td>
			<td>TCTTTGGGTTTGCGGAATGTT</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">GPAM REV</td>
			<td>ATGCACATCTCGCTCTTGAATAA</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">IL6 FOR</td>
			<td>CCTGAACCTTCCAAAGATGGC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">IL6 REV</td>
			<td>ACCTCAAACTCCAAAAGACCAGTG</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PDK4 FOR</td>
			<td>ACAGACAGGAAACCCAAGCCAC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PDK4 REV</td>
			<td>TGGAGGTGAGAAGGAACATACACG</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PLIN2 FOR</td>
			<td>TTGCAGTTGCCAATACCTATGC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PLIN2 REV</td>
			<td>CCAGTCACAGTAGTCGTCACA</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PLIN4 FOR</td>
			<td>AATGAGTTGGAGGGGCTGGGGGACATC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PLIN4 REV</td>
			<td>GGTCACCTAAACGAACGAAGTAGC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SCD FOR</td>
			<td>TCTAGCTCCTATACCACCACCA</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SCD REV</td>
			<td>TCGTCTCCAACTTATCTCCTCC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SLC2A1 FOR</td>
			<td>TGCTCATCAACCGCAACGAG</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SLC2A1 REV</td>
			<td>CCGACTCTCTTCCTTCATCTCCTG</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">18S FOR</td>
			<td>CGCCGCTAGAGGTGAAATTC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">18S REV</td>
			<td>TTGGCAAATGCTTTCGCTC</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

inducing and characterizing vesicular steatosis in differentiated heparg cells

肝脂肪症は、肝細胞におけるトリグリセリド含有脂脂脂小滴の蓄積から生じた代謝機能障害を表す。過剰な脂肪の蓄積は、非アルコール性脂肪性肝疾患(NAFLD)につながり、潜在的に可逆的であり、非アルコール性脂肪性肝炎(NASH)、最終的には肝硬変および肝細胞癌(HCC)に進化する可能性がある。肝細胞の脂質蓄積とNASHへの進行、不可逆的な肝臓損傷、線維症、肝硬変、さらにはHCCを結びつける分子機構は依然として不明である。この目的のために、いくつかのインビトロおよびインビボモデルは、NAFLDを引き起こす病理学的プロセスを解明するために開発された。本研究では、脂肪酸塩オレイン酸オレイン酸で処理したDMSO分化ヒト肝肝肝細胞細胞からなる肝小胞性脂肪症の誘導に関する細胞モデルについて述べた。実際、オレイン酸ナトリウム処理HepaRG細胞は細胞質中の脂質液滴を蓄積し、脂肪症の典型的な特徴を示す。このインビトロヒトモデルは、生体内マウスモデルならびに一次ヒト肝細胞に対する貴重な代替手段を表す。また、オイルレッドO染色、細胞フルオロメトリックボディピー測定、qPCRによる代謝遺伝子発現解析、コヒーレントアンチストークなど、HepaRG細胞における脂肪蓄積の定量と評価のためのいくつかの方法の比較も提示します。ラマン散乱(CARS)顕微鏡。CARSイメージングは、材料科学アプリケーションでよく知られている化学分析技術であるラマン分光法の化学的特異性と、高速かつ高解像度の非線形光学顕微鏡の利点を組み合わせることで、正確な精度を可能にします。脂質蓄積および脂質液滴ダイナミクスの定量化。小胞性脂肪症の誘導のための効率的なインビトロモデルの確立は、脂質蓄積の定量化および特性評価のための正確な方法と共に、NAFLDの早期診断の開発につながる可能性がある。分子マーカーの同定、および新しい治療戦略の生成に。

このプロトコルは、オレイン酸ナトリウム処理によるDMSO分化HepaRG細胞における小胞性脂肪症を誘導し、特徴付ける効率的な方法を説明する(図1A)。
HepaRG細胞の分化 分化を効率的に誘導するには、増殖細胞を低密度(2.5 x 104細胞/cm2)で増殖培地に播種する必要があります。低密度で播種すると、細胞は積極的...

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Inducing and Characterizing Vesicular Steatosis in Differentiated HepaRG Cells

本研究では、脂肪酸塩オレイン酸オレイン酸を用いた分化HepaRG細胞における肝小胞性脂肪症を誘導するための詳細なプロトコルを説明し、一貫性のある抗ストークスを含む脂質蓄積の検出と定量のための方法を採用する。ラマン散乱(CARS)顕微鏡、細胞フルオロメトリクス分析、オイルレッドO染色、およびqPCR。

分化HepaRG細胞における大胞性脂肪症の誘導と特徴付け

Hepatic steatosis represents a metabolic dysfunction that results from an accumulation of triglyceride-containing lipid droplets in hepatocytes. Excessive ...

このプロトコルは、脂質蓄積の検出と定量のための方法と分化 HepaRG 細胞で肝臓の小胞性脂肪症を誘導する方法を記述します。.このインビトロヒト細胞モデルは、生体内マウスモデルおよび原発性ヒト肝細胞に代わる貴重な代替手段となる。脱霜するまで37度摂氏バスに浸漬することにより、HepaRG細胞の窒素凍結保存低通過バッチを解凍する。増殖培地の10ミリリットルを含む15ミリリットルのチューブに急速に細胞を移す。5分間遠心した後、上清を捨て、増殖培地の5ミリリットルで細胞を再懸濁する。細胞を数え、1平方センチメートルあたり250,000個の細胞をプレートするために希釈する。100ミリメートルの細胞培養皿に細胞をプレートし、2〜3日ごとに培地を更新します。細胞は約24時間の倍加時間で増殖する。HepaRG細胞が80%の合流度に達したら、0.05%トリプシン溶液で3〜5分間のインキュベーションを経て取り外します。増殖培地と遠心分離機で細胞を5分間収集します。上清を捨て、増殖培地の5ミリリットルで細胞を再懸濁する。繰り返しますが、細胞を数え、1平方センチメートルあたり250,000個の細胞をプレートするために希釈する。この段階では、これらのステップを繰り返して細胞を増幅し、実験を開始する適切な数の細胞に到達する。HepaRG細胞を凍結保存するには、0.05%トリプシン溶液で3〜5分間のインキュベーションを通してめっきした24時間後に細胞を取り外します。増殖培地と遠心分離機で細胞を5分間収集します。上清を捨て、凍結培地の1バッチあたり1ミリリットルで細胞を再懸濁し、液体窒素中のバッチを凍結保存する。ゼロ日目に、HepaRG細胞を250,000平方センチメートルで播種し、適切な量の増殖培地を有する培養処理された料理に入る。2つの皿は、各アッセイのために、コントロール細胞用とオレエード処理細胞用に1つ、メッキする必要があります。2日目と4日目に、適切な量の増殖培地で培地を交換し、合流するまで細胞を増殖させます。7日目には、細胞は100%コンフルエントでなければなりません。1X PBSで細胞を1回洗います。その後、1X PBSを取り出し、適切な分化媒体のボリュームを追加します。8日目、9日目、12日目、15日目、18日目に、細胞を1X PBSで1回洗浄してから、適切な分化培地を添加します。21日目に、HepaRG細胞を顕微鏡で観察し、細胞がコンフルエント分化培養であることを確認する。コントロールとして、1つの対照皿を収穫し、分化マーカー遺伝子の遺伝子発現解析を行う。21日目において、分化したHepaRG細胞は液体窒素中で凍結保存することができる。21日目に、オレイン酸ナトリウムを、完全な分化培地の適切な量で希釈し、最終濃度の250マイクロモルにする。99%メタノールを1~400の割合で分化媒体の別のアリコートに加え、車両制御処理を行います。1X PBSで細胞を1回洗浄し、車両またはオレイン酸ナトリウム培地を添加します。23日目および25日目に、調製した培地の適切な量で培地を交換する。26日目に、光学顕微鏡で細胞を観察する。脂質滴は、オレイン酸ナトリウム処理細胞に蓄積し、細胞質中の半透明の液滴として容易に見える。オイルレッドO染色を行うために、まず1X PBSで細胞を1回洗浄し、1X PBSを完全に除去します。4%パラホルムアルデヒドを加え、室温で15分間インキュベートします。パラホルムアルデヒドを取り出し、1X PBSで細胞を2回洗浄します。PBSを取り除いた後、室温で5分間60%イソプロパノールで細胞をインキュベートする。イソプロパノールを取り出し、細胞を室温で完全に乾燥させます。オイルレッドOの働き溶液を細胞に加え、室温で30分間インキュベートします。各サンプルに必要な作業溶液の量は、細胞の培養に使用されるメディアの量に対応します。オイルレッドO溶液を取り外し、すぐに二重蒸留水を加えます。二重蒸留水で細胞を4回洗浄した後、顕微鏡下で画像を取得して分析します。オイルレッドO染料を溶かすために、すべての水を取り除き、乾燥させます。その後、100%イソプロパノールの1ミリリットルを加え、室温で穏やかな揺れをして10分間インキュベートします。イソプロパノールを溶出したオイルレッドO染料を数回上下にピペットし、すべてのオイルレッドOが溶液中であることを保証します。溶液をキュヴェットに移します。分光光度計で500ナノメートルの光学濃度を測定し、ブランクとして100%イソプロパノールを使用します。1X PBSで細胞を1回洗います。その後、100ナノモルのボディーを暗闇の中で1X PBSで37°Cで40分間希釈してインキュベートする。未染色のコントロールは、フローサイトメトリー測定に含まれるべきです。染色液を取り出し、1X PBSで細胞を1回洗います。その後、再度細胞を洗浄し、PBSを完全に除去します。4%パラホルムアルデヒドを加え、室温で15分間インキュベートします。パラホルムアルデヒドを取り出し、PBSでサンプルを5分間3回洗浄します。細胞は摂氏4度で1X PBSに保つか、すぐに画像化することができる。保管の場合は、パラフィルムで包み、アルミニウム箔で覆い、細胞が乾燥するのを防ぎます。ステアトーシスの効率的な誘導を検証するために、油性処理およびコントロールHepaRG細胞をオイルレッドO色素で染色した。染色後、脂質滴は赤い液滴として容易に見える。染色は、イソプロパノールで溶出した油性RO色素の分光光度測定により定量することができる。細胞から溶出したオイルレッドOの吸光度は、細胞質脂質滴集積に直接比例する。オレイン酸ナトリウム濃度および曝露時間は、MTTの着色細胞生存率測定法によって決定した。Formosan製品は、490ナノメートルの吸光度によって定量化され、培養中の生細胞の数に直接比例します。オレイン酸ナトリウム処理をパルミテナトリウム処理と比較した。アポトーシス薬ドキソルビシンをコントロールとして使用した。オレイン酸ナトリウム処理後の細胞脂質含有量の増加を定量化するために、ボディー色素による染色を使用して脂質滴を標識した。細胞フルオロメトリック分析を用いて、コントロール細胞と比較してオレイン酸処理細胞において高い蛍光強度を意味するBodipy平均によるトリグリセリド含有量を定量化することができる。これは、オレエード処理後の効率的な脂肪蓄積を示す。実際、Bodipy染色された細胞の画像は、コントロール細胞に見えないオレア酸処理細胞の明るい緑色の蛍光脂質液滴を示す。オレイン酸ナトリウム処理後の脂質滴の蓄積をさらに特徴付けるために、CARS顕微鏡法は、標識を行わずに脂質滴定量を可能にするテキストプロトコルに記載されているように行うことができる。この細胞ベースのモデルは、非発性脂肪性肝疾患に関与する分子メカニズムに関する知識を高め、早期診断と新しい治療戦略のための新しいマーカーの開発につながる可能性があります。

Research

JoVE Journal

Medicine

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

単離、特徴付けと二つの異なる方法を使用して永久歯に由来するヒト歯髄幹細胞の分化の比較

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Inducing Myointimal Hyperplasia Versus Atherosclerosis in Mice: An Introduction of Two Valid Models

マウスにおけるアテローム性動脈硬化症に対する筋内膜過形成を誘発する。つの有効なモデルの導入

Various in vivo laboratory rodent models for the induction of artery stenosis have been established to mimic diseases that include arterial plaque ...

Minimal Invasive Surgical Procedure of Inducing Myocardial Infarction in Mice

マウスにおける心筋梗塞を誘発する低侵襲手術手順

Myocardial infarction still remains the main cause of death in western countries, despite considerable progress in the stent development area in the last ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

新しい治療戦略を開発するための膵臓癌幹細胞特性を研究

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Glaucoma-inducing Procedure in an In Vivo Rat Model and Whole-mount Retina Preparation

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緑内障誘導の手順<em&gt;インビボ</em&gt;ラットモデルと全体のマウント網膜準備

Glaucoma is a disease of the central nervous system affecting retinal ganglion cells (RGCs). RGC axons making up the optic nerve carry visual input to the ...

Inducing Ischemia-reperfusion Injury in the Mouse Ear Skin for Intravital Multiphoton Imaging of Immune Responses

免疫応答の生体内多光子イメージングのためのマウスの耳の皮膚に虚血再灌流傷害を誘導します

Ischemia-reperfusion injury (IRI) occurs when there is transient hypoxia due to the obstruction of blood flow (ischemia) followed by a subsequent ...

Forskolin-induced Swelling in Intestinal Organoids: An In Vitro Assay for Assessing Drug Response in Cystic Fibrosis Patients

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フォルスコリン誘発性腸オルガノイドに腫れ：<em&gt;インビトロ</em&gt;アッセイ嚢胞性線維症患者における薬物反応を評価するための

Recently-developed cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR)-modulating drugs correct surface expression and/or function of the mutant ...

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

の最適化分析<em&gt;インビボ</em&gt;と<em&gt;インビトロ</em&gt;脂肪肝

Establishing a system of procedures to qualitatively and quantitatively characterize in vivo and in vitro hepatic steatosis is important for metabolic ...

Inducing Acute Lung Injury in Mice by Direct Intratracheal Lipopolysaccharide Instillation

直接気管内リポ多糖刺激によるマウスの急性肺損傷の誘導

Airway administration of lipopolysaccharide (LPS) is a common way to study pulmonary inflammation and acute lung injury (ALI) in small animal models. ...

A Revised Method for Inducing Secondary Lymphedema in the Hindlimb of Mice

マウスの後肢における二次リンパ浮腫を誘導する改訂方法

Animal models are of paramount importance in the research of lymphedema in order to understand the pathophysiology of the disease but also to explore ...